Bcl-2反义寡核苷酸对肾癌细胞株的生长抑制作用

目的：研究bcl-2反义寡核苷酸对肾细胞癌细胞的生长抑制作用及剂量一效应关系。方法：设计、合成与已知人类基因无同源性的bcl-2反义寡核苷酸(AS1翻译起始端，AS2编码区)，以阳离子脂质体Lipofectin转染不同的肾癌细胞株，MTS比色实验测定细胞活率。结果：单纯Lipofectin、反义寡核苷酸及正义寡核苷酸处理，对肾癌细胞ACHN生长无抑制作用，而转染入细胞内的反义寡核苷酸可抑制多种肾癌细胞的生长(ACHN、RCW和OSRC-2)，且抑制作用与剂量呈正相关。结论：bcl-2反义寡核苷酸可剂量依赖性抑制多种肾癌细胞的生长。     

反义寡核苷酸对肝癌细胞生长抑制作用的研究

目的：探讨互补于HBV X基因的翻译起始区（as-Xp)、ENⅡ（as-ENⅡ）区的反义寡核苷酸抑制HepG2.2.15细胞生长及抗病毒作用。方法：合成as-Xp、as-ENⅡ，体外作用于HBV DNA转染的HepG2.2.15利用，利用ELISA法检测反义核酸作用前后细胞上清中HBsAg和HBeAg的含量，以HepG2.2.15细胞接种裸鼠制备人肝癌模型，瘤内给予反义寡核苷酸100μg，连续给药5d，取瘤组织采用流式细胞仪（FCM）分析反义核酸诱导瘤细胞凋亡作用，并检测反义核酸作用裸鼠血清中病毒抗原表达情况。结果：as-Xp、as-ENⅡ作用72h的细胞凋亡峰值分别为24％和27．7％，对照为10．89％、7．92％；对荷瘤鼠体内HBsAg和HBeAg的抑制率分别为35％、34％和43％、49％，在体外分别为57％、52％和56％、56％。无关对照序列体内，外无明显的抑制瘤细胞生长和抗病毒作用。结论：as-Xp、as-ENⅡ体内应用可诱导瘤细胞凋亡，并可有效抑制体内，外HBV抗原表达。     

Bcl-2反义寡核苷酸对放射治疗诱导肺癌细胞凋亡的促进作用

目的通过体外试验,研究Bcl-2反义寡核苷酸对放射治疗诱导肺癌细胞凋亡的促进作用。方法NCI-H446肺癌细胞株分5组,分别为空白对照、单纯照射组、脂质体加照射组、无义序列加照射组、反义寡核苷酸加照射组。培养至6h、12h、24h、48h和72h,分别收集各组细胞,瑞吉染色做细胞形态学分析,应用RT-PCR半定量测定p53、Bcl-2和PTEN基因的mRNA表达,流式细胞仪检测各组细胞DNA倍体,分析细胞凋亡指数。结果Bcl-2反义寡核苷酸联合照射后p53和PTEN表达明显增加,Bcl-2mRNA表达则明显降低。流式细胞仪检测照射后72h空白对照组、照射组、脂质体加照射组、无义序列加照射组、反义寡核苷酸加照射组凋亡率分别为0.14±0.09,13.17±2.47,11.84±1.76,13.72±1.4,21.26±2.97,反义寡核苷酸加照射组与其余4组比较差别有显著性意义(P<0.01)。结论Bcl-2反义寡核苷酸对放射治疗诱导肺癌细胞凋亡有促进作用;细胞凋亡受p53和Bcl-2基因调控,p53基因的表达促进了细胞的凋亡,而Bcl-2基因的高表达抑制细胞的凋亡,PETN的表达与凋亡也有相关性。     

C-myc反义寡核苷酸对肺癌细胞生长增殖及其端粒酶活性抑制作用的观察

目的：探讨硫代磷酸修饰型反义核酸封阻C-myc基因，抑制癌细胞代谢、生长的作用。方法：培养端粒酶高活性的人肺癌细胞系LTEP-a-2，合成针对C-myc基因的硫代反义寡核苷酸封条和随机序列寡核苷酸片断，导入LTEP-a-2细胞系，作用72h，分析反义封条对细胞端粒酶，琥珀酸氧化脱氢酶(SDH)，DNA合成和细胞增殖的作用。结果：C-myc反义封条PS-ODN12 5μmol／L抑制LTEP-a-2细胞34．87％的端粒酶活性；10μmol／L抑制62．71％端粒酶活性；20μmol／L抑制89．18％端粒酶活性。反义封条PS-ODN9 20μmol/L仅抑制LTEP-a-2增殖(39．22％～85．29％)和SDH活性(42％～80％)作用。其对DNA合成亦有抑制作用(71．49％～87．35％)。随机序列硫代修饰寡核苷酸PS-ODN9 20μmol／L仅抑制LTEP-a-2细胞2．37％端粒酶活性，抑制4．5％的细胞增殖和4％SDH活性。结论：C-myc反义封条对肺癌细胞LTEP-a-2的增殖、端粒酶活性有特异性抑制作用，并呈剂量依赖关系。     

联合转染Survivin和Bcl-2反义寡核苷酸对裸鼠胆囊癌生长的抑制作用

目的探讨联合转染Survivin和Bcl-2反义寡核苷酸（AsODN）对裸鼠胆囊癌生长抑制作用。方法建立裸鼠胆囊癌皮下移植瘤模型,选择36只裸鼠随机分为3组：对照组、正义寡核苷酸（sODN）组和AsODN组,裸鼠瘤体内分别注射PBS、Survivin和Bcl-2sODN、Survivin和Bcl-2AsODN,12d后处死裸鼠,测量瘤体体积及质量,计算抑瘤率;苏木精-伊红染色观察瘤体组织学变化;免疫组织化学方法检测Survivin及Bcl-2蛋白的表达。结果AsODN组裸鼠瘤体平均体积显著低于对照组、sODN组（F=24.469,q=8.802、7.569,P〈0.01）,其体积抑瘤率为55.53%,sODN组为9.90%;AsODN组裸鼠瘤体平均质量显著低于对照组、sODN组（F=25.376,q=3.168、20.737,P〈0.01）,其质量抑瘤率为56.24%,sODN组为8.47%。AsODN组瘤体中可见大量的凋亡细胞。免疫组化证实AsODN组Survivin表达明显降低,同sODN组相比差异有显著意义（F=15.103,q=5.883、7.191,P〈0.01）;Bcl-2表达亦明显降低,同sODN组相比差异有显著性（F=6.632,q=4.793、4.030,P〈0.05）。结论联合转染Survivin和Bcl-2AsODN可下调Survivin和Bcl-2表达,诱发细胞凋亡,从而抑制裸鼠胆囊癌种植瘤的生长。     

端粒酶反义寡核苷酸对肝癌细胞生长抑制作用

目的本研究将互补于hTR模板区的全硫代修饰型反义寡核苷酸（PS-ASODN）经lipotap脂质体转染作用于肝癌细胞系BEL-7402,观察其对肝癌细胞端粒酶活性的影响,同时检测其对癌细胞的生长抑制作用,旨在探讨PS-ASODN对肝癌的治疗价值,为临床治疗肝癌提供一定的试验数据。方法分别采用MTT法、流式细胞术、酶联免疫吸附（ELISA）法检测不同浓度PS-ASODN对bel-7402的细胞增殖、细胞凋亡和端粒酶活性的作用。结果PS-ASODN能抑制BEL-7402细胞的生长,降低其端粒酶活性并诱导细胞凋亡。结论端粒酶与BEL-7402增殖活性有关,抑制端粒酶活性可能成为肝癌基因治疗的新靶点。     

hsa-miR-518b反义寡核苷酸对胃癌细胞生长抑制作用的研究

目的:探讨hsa-miR-518b反义寡核苷酸(Antisense oligonucleotide,ASODN)对胃癌细胞生长和细胞周期的影响,以分析其在胃癌中的作用机制.方法:设计合成全硫代磷酸化修饰的hsa-miR-518b ASODN,将其转染于胃癌细胞株SGC7901.用Real time RT-PCR分析hsa-miR-518b在胃癌细胞转染前后的表达情况,MTT检测胃癌细胞转染后的生长情况,流式细胞仪分析细胞周期.结果:转染hsa-miR-518b ASODN后,胃癌细胞hsa-miR-518b表达显著降低(P=0.000),生长受到抑制(P=0.000),大量胃癌细胞阻滞于G1期(P=0.000).结论:hsa-miR-518b ASODN能使胃癌细胞阻滞于G1期,抑制胃癌细胞的生长.提示hsa-miR-518b可能通过促进细胞周期G1/S期转换而促进胃癌细胞生长.     

Livin反义寡核苷酸对肺腺癌A549细胞增殖的影响

目的：探讨Livin基因反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotides,ASODN）对肺腺癌A549细胞增殖的影响。方法：用阳离子脂质体介导Livin ASODN转染至A549细胞,反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测Livin基因mRNA的表达;MTT法检测转染细胞的生长抑制情况。结果：转染ASODN后A549细胞的Livin基因mRNA的表达明显减少,Livin基因ASODN显著抑制A549细胞增殖,并呈剂量依赖性,与对照的错义寡核苷酸（missense oligodeoxynucleotides,MSODN）比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：Livin反义寡核苷酸能明显抑制A549细胞Livin基因mRNA的表达,抑制细胞增殖,Livin基因有望成为肺癌基因治疗的新靶点。     

RNA干扰沉默bcl-2基因对人黑素瘤细胞生长抑制研究

目的：探讨应用RNAi技术下调bel-2基因表达后对人黑素瘤M14细胞株生长的影响。方法：采用人黑素瘤川4细胞株,利用人工合成的bcl-2靶向小分子干扰RNA（small interference RNA,siRNA）转染细胞,MTT法测细胞增殖情况。结果：免疫组化可见25例实验组细胞爬片均表达bcl-2,表达强度弱阳性,25例空白对照组和阴性对照均表达bel-2,表达强度强阳性,实验组细胞与空白对照组和阴性对照组相比bcl-2表达明显减低,差异有统计学意义（P〈0．05）,空白对照组和阴性对照组bcl-2表达差异无统计学意义（P〉0．05）,MTT法测定显示：转染48h后,实验组7组细胞平均吸光度OD值0．384±0．026,空白对照组7组细胞平均吸光度OD值0．590±0．032,阴性对照组7组细胞平均吸光度OD值0．541±0．034,实验组细胞吸光度降低,与空白对照组及阴性对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）,而空白对照组和阴性对照组两组间差异无统计学意义（P〉0．05）,实验组细胞增殖抑制率34．9l％,阴性对照组细胞增殖抑制率8．30％,差异有统计学意义（P〈0．05）,显示实验细胞增殖减慢。结论：Bcl-2RNAi能显著降低人黑素瘤M14细胞株的bcl-2蛋白表达,有效押制癌细胞的生长,为黑素瘤的治疗提供了一种新的治疗策略。     

抑凋亡基因Bcl-2在正常子宫内膜和子宫内膜癌中的表达及意义

为探讨抑凋亡基因Ｂｃｌ－２与子宫内膜癌发生发展及预后的关系,用ＡＢＣ免疫组化法对４０例正常子宫内膜和６０例子宫内膜癌Ｂｃｌ－２蛋白表达状况进行检测。结果发现Ｂｃｌ－２表达在正常子宫内膜中呈周期性变化,其表达由增生早期开始逐渐增强,到增生晚期表达最强,进入分泌期则减弱乃至消失。子宫内膜癌中Ｂｃｌ－２表达水平远远低于增生期内膜Ｂｃｌ－２表达水平,且表达于预后较好的腺棘癌、乳头状腺癌、单纯腺癌组织,而浆液性腺癌和鳞癌组织中则无表达;分化程度低、期别晚者,Ｂｃｌ－２表达弱（Ｐ＜０．０１）;在５例伴有内膜增生过长的内膜癌中,增生过长内膜的表达明显强于癌组织和增生期内膜的表达。由此推测Ｂｃｌ－２高表达可能在子宫内膜增生过长的发生中起着重要作用,而内膜癌中Ｂｃｌ－２表达明显减弱,其作用仍待深入研究。Ｂｃｌ－２的高表达可提示预后较好,但尚需进一步随访证实     

Bcl-2反义硫代寡核苷酸规模化化学合成

目的 建立规模化合成Bcl-2反义硫代寡核苷酸合成工艺。方法 合成采用亚磷酰胺法，泵驱动，流过式反应；紫外分光光度计测其D260nm值；通过DNAPacPA-100分析柱对合成粗产品进行分析。结果 合成周期5h左右，平均合成效率98．4％，总产率76．2％，186μmol合成柱获得粗产品0．75g，色谱柱分析显示各组分都获得分离，最强峰保留时间32．247min，相对峰面积57．68％。结论 本所研究开发规模化合成工艺可获得高产率的反义寡核苷酸，为反义药物开发奠定基础。     

VEGF和Bcl-2在非小细胞肺癌中的表达

目的探讨Bcl-2和血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor,VEGF）在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及与临床病理参数的关系。方法应用免疫组化染色方法检测80例NSCLC和20例正常肺组织中Bcl一2和VEGF的表达。结果NSCLC组织中VEGF和Bcl-2阳性表达率显著高于正常肺组织（P〈0.01）;VEGF和Bcl-2的表达在高、中和低分化肺癌组间比较,差异有显著性（P〈0．05）;与肺癌TNM分期组间比较差异亦有显著性（P〈0．05）;VEGF的表达在有淋巴结转移组显著高于无淋巴结转移组,差异有显著性（P．〈0．os）;而Bcl-2在有淋巴结转移组和无淋巴结转移组间的表达无差异性（P〉0．05）。VEGF、Bcl-2的表达与患者的年龄、性别、组织学类型差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论VEGF和Bcl-2的高表达可能与NSCLC的发生发展有关,两种基因蛋白产物的检测对肺癌患者的诊治和预后评估有积极意义,     

浅蓝菌素在诱导骨肉瘤细胞株U2-OS凋亡过程中对Bcl-2和Bax的影响

目的研究凋亡蛋白Bcl-2、Bax是否参与浅蓝菌素（Cerulenin）诱发骨肉瘤细胞株U2-OS凋亡信号传导。方法采用Western—blotting检测Cerulenin作用前、后骨肉瘤细胞株U2—OS中凋亡蛋白Bcl-2和Bax表达变化情况,了解不同的Cerulenin剂量和作用时间骨肉瘤细胞株U2-OS中凋亡蛋白Bcl-2和Bax表达变化情况。结果骨肉瘤细胞株U2-OS中Bcl-2和Bax呈阳性表达,Cerulenin作用细胞株后Bcl-2表达量随着浓度增加和作用时间延长而递减,Bax表达量随着浓度增加和作用时间延长而递增。结论Cerulenin可能通过下调Bcl-2的表达和上调Bax的表达而诱导骨肉瘤细胞凋亡。     

Bcl-2、Bag-1在结肠癌组织中的表达及相互关系

目的探讨Bcl-2、Bag-1在结肠癌组织中的表达及其与结肠癌临床病理学特征的关系。方法利用免疫组织化学染色方法检测55例结肠癌组织及15例正常结肠癌组织中Bcl-2、Bag-1蛋白的表达情况,结合临床病理特征对其进行分析。结果 Bcl-2、Bag-1在结肠癌组织中的表达率显著高于正常结肠组织中的表达率(P<0.05);Bcl-2及Bag-1的表达与肿瘤有无淋巴结转移、肿瘤分化程度及临床分期有关(P<0.05);与患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤浸润深度及癌胚抗原等无关。Bcl-2、Bag-1的表达呈高度一致性(P<0.05)。结论 Bcl-2和Bag-1与结肠癌的生物学行为密切相关。     

慢性粒细胞白血病患者骨髓细胞中Cox-2与Bcl-2的表达

目的探讨慢性粒细胞白血病（CML）患者骨髓细胞中Cox-2与Bcl-2的表达与意义。方法应用免疫组化SP法检测42例CML患者（CML组）和30例健康体检者（正常对照组）骨髓细胞中Cox-2与Bcl-2的表达。结果CML组患者骨髓细胞中Cox-2与Bcl-2的表达水平和积分明显高于正常对照组（P〈0.05）;骨髓细胞中Cox-2与Bcl-2的表达呈正相关（r=0.675,P〈0.05）。结论Cox-2和Bcl-2可能与CML的发生、发展有一定的关系。     

Survivin、Bcl-2在I期NSCLC中的表达及其临床意义

目的 手术后I期非小细胞肺癌的预后情况与众多因素有关,凋亡相关基因在肿瘤的发生发展过程中发挥重要的作用.本研究通过检测凋亡相关基因Survivin及Bcl-2在I期非小细胞肺癌中的表达情况,探讨其在I期非小细胞肺癌的临床意义和预后价值.方法 利用免疫组化学技术检测85例I期非小细胞肺癌(NSCLC)及20例肺良性肺组织中Survivin和Bcl-2的表达,统计分析这两者在I期非小细胞肺癌的作用.结果 85例I期非小细胞肺癌组织中Survivin和Bcl-2的表达率分别为64.7% (55/85) 和52.9%(45/85)与正常肺组织中的表达差异显著(P<0.05);多因素分析显示 PTNM分期与Survivin蛋白的阳性表达是I期非小细胞肺癌患者独立预后因素(P<0.01),Survivin、Bcl-2蛋白的表达与临床、病理各因数无相关.结论 在I期非小细胞肺癌中,凋亡相关基因Survivin及Bcl-2可能对肿瘤的发展与预后产生一定的作用与影响;PTNM分期与Survivin蛋白的阳性表达是此Ⅰ期非小细胞肺癌术后患者的独立预后因素.     

Bcl-2和Bag-1在结肠癌组织中的表达及其意义

目的 探讨Bcl-2、Bag-1在结肠癌组织中的表达及其与结肠癌临床病理学特征及预后的关系.方法 利用免疫组织化学染色方法检测55例结肠癌组织、33例癌旁结肠组织及15例正常结肠组织中Bcl-2、Bag-1蛋白的表达情况,结合临床病理特征及预后对其进行分析.结果 Bcl-2、Bag-1在结肠癌组织中的表达阳性率(80.2%和72.7%)均显著高于癌旁结肠组织(60.6%和48.5%)及正常结肠组织(均为0),差异有统计学意义(P＜0.05).Bcl-2及Bag-1的表达与肿瘤有无淋巴结转移、肿瘤分化程度及临床分期有关(P＜0.05);而与患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤浸润深度、癌胚抗原(CEA)等无关.Bcl-2、Bag-1的表达呈高度一致性(P＜0.01).Bcl-2阳性结肠癌患者及Bag-1阳性结肠癌患者的5年、10年累积生存率均显著低于阴性者(P＜0.05).结论 Bcl-2、Bag-1与结肠癌的生物学行为密切相关,并可作为结肠癌患者预后的预测因素.