氟伐他汀对糖尿病大鼠肾脏CTGF表达的影响

目的：研究氟伐他汀对糖尿病大鼠肾组织CTGF表达的影响,探讨氟伐他汀肾脏保护作用的机制。方法：SD雄性大鼠54只,随机分为：正常对照组（N组）、糖尿病对照组（D组）、糖尿病氟伐他汀治疗组（4 mg.kg-1.d-1）（F组）。由大鼠尾静脉单次注射链脲佐菌素（60 mg/kg）,造成糖尿病大鼠模型。经氟伐他汀治疗糖尿病大鼠2、4、8周后,分别观察其对大鼠血糖、血胆固醇、血肌酐、24 h尿蛋白定量和肾皮质CTGF表达的影响。结果：与正常对照组相比,糖尿病大鼠24 h尿蛋白定量、血胆固醇及肾组织CTGF表达显著增加;经氟伐他汀治疗后,糖尿病大鼠的24 h尿蛋白定量、胆固醇和CTGF表达下降。结论：糖尿病大鼠肾组织CTGF表达增加,氟伐他汀可能通过下调糖尿病大鼠肾脏CTGF表达而达到部分肾脏保护作用。     

氟伐他汀对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠肾小管上皮细胞核因子κB活性的影响

目的 观察氟伐他汀对血管紧张素（Ang）Ⅱ诱导的大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）内核因子（NF）κB活性的影响。 方法 将NRK-52E细胞分为（1）对照组;（2）不同浓度及时间AngⅡ组;（3）AngⅡ（10-6 mol/L）+SB203580（10 μmol/L）组;（4）AngⅡ（10-6 mol/L）+不同浓度氟伐他汀（10-7、10-6、10-5 mol/L）组;(5)AngⅡ（10-6 mol/L）+氟伐他汀（10-5 mol/L）+甲羟戊酸（10-4 mol/L）组。电泳迁移率变动分析法（EMSA）检测NF-κB活性变化。Western印迹方法检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)磷酸化水平。RT-PCR方法检测单核细胞趋化因子（MCP-1）mRNA表达。 结果 AngⅡ呈剂量依赖性上调NF-κB DNA结合活性、p38MAPK的磷酸化水平以及MCP-1 mRNA表达（P < 0.01）。AngⅡ(10-6 mol/L) 刺激5 min即可增加p38MAPK蛋白磷酸化水平（P < 0.01）。AngⅡ刺激30 min后NF-κB活性显著升高（P < 0.01）,2 h达高峰（P < 0.01）。p38MAPK 特异性抑制剂SB203580可阻断AngⅡ对NF-κB的激活作用（P < 0.01）。氟伐他汀可呈剂量依赖性下调AngⅡ诱导的NRK-52E细胞内p38MAPK磷酸化和NF-κB活化,以及其下游趋化因子MCP-1表达（P < 0.05）。甲羟戊酸（10-4 mol/L）可逆转氟伐他汀的作用（P < 0.05）。 结论 氟伐他汀可能通过抑制p38MAPK信号转导通路,下调AngⅡ诱导的NRK-52E细胞内NF-κB的活化。甲羟戊酸可部分逆转氟伐他汀的作用。     

氟伐他汀对早期糖尿病肾病的影响

我院自2000年5月～2002年5月用氟伐他汀治疗早期糖尿病肾病(DN)伴高脂血症的56例，观察其在降血脂同时对肾功能的影响。     

氯沙坦对血管紧张素Ⅱ诱导人足细胞分泌VEGF的影响

目的：研究血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对人足细胞分泌血管内皮细胞生长因子（VEGF）的影响及氯沙坦的保护作用。方法：将人足细胞与干预药物共培养。（1）按AngⅡ浓度梯度0、1、10、100nm和时间梯度0、3、6、12、24h分组培养,用RT-PCR检测VEGF的mRNA表达水平;（2）用100nm AngⅡ刺激足细胞,并按不同浓度氯沙坦干预分组培养,用RT-PCR检测VEGF的mRNA表达水平。结果：AngⅡ可以剂量和时间依赖性的诱导足细胞表达VEGF增高,而氯沙坦可以剂量依赖性的阻断VEGF表达增高。结论：AngⅡ对VEGF基因表达的增高呈剂量和时间依赖性,氯沙坦可拮抗AngⅡ诱导人足细胞表达VEGF增高。     

氯沙坦对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠肾小管上皮细胞氧化应激反应的作用

目的 探讨血管紧张素I型受体阻断剂氯沙坦对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的大鼠肾小管上皮细胞氧化应激反应及转化生长因子β1(TGF-β1)产生的影响。 方法 以大鼠肾小管上皮细胞株（NRK-52E）为研究对象,分别给予氯沙坦（10-5 mol/L）和（或）NADPH氧化酶抑制剂联二亚苯碘锚（DPI,10-5 mol/L）预处理1 h后再加入AngⅡ（10-7 mol/L）刺激24 h,同时设立空白培养基作为对照组。实时定量PCR和Western印迹法分别检测4组细胞NADPH 氧化酶p22phox、p47phox、Nox-4 mRNA和蛋白水平及TGF-β1 mRNA水平。用2,7- 二氯荧光素双乙酸盐（H2DCF-DA）作为荧光探针,采用荧光分光光度仪检测细胞内活性氧（ROS）的水平。应用比色法测定细胞上清液中超氧化物歧化酶（SOD）水平。 结果 AngⅡ（10-7 mol/L）刺激细胞15 min后开始产生大量的ROS,至60 min达平台期。单纯AngⅡ刺激1 h后,NRK-52E细胞上清液中SOD水平显著低于对照组（27.31 μU/L 比48.29 μU/L,P < 0.01）;经氯沙坦预处理1 h后再加入AngⅡ刺激1 h细胞上清液中SOD水平升高至36.37 μU/L,与AngⅡ组差异有统计学意义（P < 0.01）。单纯AngⅡ刺激NRK-52E细胞24 h可显著上调NADPH氧化酶p22phox、p47phox和Nox-4 mRNA和蛋白水平,其mRNA水平分别为对照组的5.57倍、5.55倍和9.41倍（均P < 0.01）,蛋白水平分别为对照组的4.53倍、4.17倍和6.50倍（均P < 0.01）。经氯沙坦干预后,p22phox、p47phox和Nox-4 mRNA水平分别为对照组的2.71倍、2.18倍和5.23倍（均P < 0.01）,蛋白水平分别为对照组的3.20倍、2.30倍和4.30倍（均P < 0.01）。AngⅡ刺激细胞24 h后TGF-β1 mRNA表达也显著增多,为对照组的4.36倍（P < 0.01）,氯沙坦处理细胞后TGF-β1 mRNA水平为对照组的1.57倍。 结论 氯沙坦通过抑制NADPH氧化酶的表达和增加SOD的表达减少ROS的产生,并能通过减少ROS产生,抑制AngⅡ诱导的TGF-β1 mRNA水平增高。     

氯沙坦和氟伐他汀联合治疗早期糖尿病肾病的临床观察

目的探讨氯沙坦和氟伐他汀联合治疗早期糖尿病肾病（DN）的疗效及其机制。方法40例早期DN患者随机分为4组,每组各10例：糖尿病对照组、氯沙坦治疗组、氟伐他汀治疗组、氯沙坦＋氟伐他汀治疗组;另选10例非糖尿病者为正常对照组。糖尿病对照组给予控制血糖等治疗至正常范围,各治疗组在常规治疗的基础上每日分别加服氯沙坦50mg、氟伐代汀40mg和两药联合应用,观察疗程2个月。比较各组尿白蛋白排泄率（UAER）、尿白蛋白（Alb）、血肌酐（SCr）、肌酐清除率（Ccr）、血压、血脂和尿细胞转化生长因子β1（TGF-β1）、尿单核细胞趋化蛋白（MCP-1）等指标的变化。结果各治疗组与糖尿病对照组比较UAER、Alb、尿TGF-β1、MCP-1明显下降（P〈0．05,P〈0．01）;两药联用治疗组上述指标更明显;血脂、血压比较各组无统计学差异（P〉0．05）。结论早期DN患者尿中TGF-β1、MCP-1增加,氯沙坦、氟伐代汀因降低TGF-β1、MCP-1等而减轻微量白蛋白尿及改善肾功能,该作用不依赖于降血压、降血脂效应,两药联用效果更好。     

血管紧张素Ⅱ及氟伐他汀对肾小管上皮细胞分泌纤连蛋白的影响

近年的研究显示肾小管间质损害和纤维化与慢性肾衰竭进展的关系密切。同时认识到肾素-血管紧张素系统（RAS）不仅引起肾脏局部血流动力学改变，还可通过非血流动力学作用参与肾脏纤维化的过程。而对他汀类药物的研究，发现其具有降血脂以外的肾保护作用。     

氟伐他汀对骨质疏松大鼠骨折愈合过程中血管内皮生长因子的影响

目的探讨氟伐他汀对骨质疏松大鼠骨折愈合过程中血管内皮生长因子（VEGF）的影响。方法卵巢切除后3个月已经出现骨质疏松的SD大鼠72只,于股骨中段制造骨折模型,再随机分为给药组和对照组,每组36只,给药组手术次日给予10mg/kg.d氟伐他汀灌胃,疗程为6w,对照组给予安慰剂。利用免疫组化及原位杂交检测骨折愈合过程中给药组和对照组骨折后3、7、14、21、28和42d骨痂中VEGF、VEGF mRNA的表达,并用真彩色图像分析仪作图像分析。结果给药组和对照组在骨折愈合过程中VEGF及VEGF mRNA基因表达的细胞定位无差别,且表达模式基本相似。术后14d,阳性细胞的阳性程度给药组比对照组显著性强（P〈0.05）。结论氟伐他汀对骨质疏松大鼠骨折愈合过程中VEGF的合成分泌有一定促进作用。     

反义基因转染对人膀胱癌细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的观察以腺相关病毒为载体(rAAV)的血管内皮细胞生长因子(VEGF)反义基因对人膀胱癌细胞中VEGF表达的影响。方法通过用不同量(0、20、100μl)的以腺相关病毒为基因载体的反义VEGF基因转染人膀胱癌细胞T24,采用免疫组织化学和Western blot方法,检测转染前后人膀胱癌T24细胞中VEGF的表达变化。结果免疫组织化学图像分析VEGF平均灰度值分别为364．40±30．31、460．25±36．34、494．18±38．82,Western blot蛋白条带灰度分别为 65 800±13 824、52 470±10 589、31 069±8 642。结果均表明随着转染的反义VEGF基因量的增多, T24细胞中VEGF的表达显著减少。结论反义VEGF基因的转染能显著抑制人膀胱癌T24细胞中VEGF的表达,有望成为膀胱肿瘤基因治疗的一种新方法。     

血管紧张素Ⅱ对骨髓基质干细胞源性成骨细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的 探讨血管紧张素Ⅱ对人骨髓基质干细胞( BMSCs)源性成骨细胞血管内皮生长因子(VEGF)基因表达及蛋白分泌的影响. 方法 分离、培养人BMSCs,并向成骨细胞方向诱导,用碱性磷酸酶(ALP)染色鉴定成骨细胞.取诱导14d的人BMSCs,分成5组(n=3),分别用0、50、100、150、200 nmol/L血管紧张素Ⅱ处理细胞,以确定最佳作用浓度.取诱导21d的人BMSCs,分成5组(n=6),分别用最佳作用浓度血管紧张素Ⅱ处理细胞0、6、12、24、48 h,采用实时定量逆转录-聚合酶链反应( RT-PCR)检测不同时间组VEGF mRNA的表达,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测不同时间组VEGF蛋白的表达. 结果 人BMSCs经诱导后ALP染色大部分呈阳性反应.0、50、100、150、200nmol/L血管紧张素Ⅱ处理的BMSCs VEGF mRNA表达平均分别为1.000±0.000、2.304±0.315、4.336±0.400、5.573±0.608、5.492±0.460,其中0、50 nmol/L浓度组分别与100、150、200 nmol/L浓度组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).选取150 nmol/L为血管紧张素Ⅱ的最佳作用浓度.0、6、12、24、48 h组细胞VEGF mRNA表达平均分别为1.000±0.000、1.984±0.160、4.372±0.378、5.573±0.586、4.994±0.445,其中0、6h组分别与12、24、48 h组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).0、6、12、24、48 h组细胞VEGF蛋白分泌量逐渐增加,且呈时间依赖性. 结论 用血管紧张素Ⅱ处理人BMSCs源性成骨细胞能够使VEGF mRNA表达量和蛋白分泌量快速增加.     

氟伐他汀对糖尿病肾病中脂蛋白(a)水平的影响

目的：探讨氟伐他汀对糖尿病肾病中脂蛋白（a)水平的影响及其肾脏保护作用。方法：分别以糖尿病大鼠模型和2型糖尿病肾病患为研究对象，观察氟伐他汀治疗6周后血浆中脂蛋白（a)水平，组织型纤溶酶原激活物及其抑制剂活性，大鼠肾脏病理学改变。结果：与对照组比较，氟伐他汀治疗6周后糖尿病肾病患和大鼠体内脂蛋白（a)，尿白蛋白水平均降低，患纤溶酶原激活物抑制剂活性下降，纤溶酶原激活物活性上升，大鼠肾脏组织光镜及电镜下病变明显减轻。结论：氟伐他汀能下调脂蛋白（a)，减轻肾脏肥大，具有肾脏保护作用。     

绿茶对乳腺癌细胞血管内皮生长因子表达的影响及机制

目的 研究绿茶对人乳腺癌细胞株血管内皮生长因子(VEGF)表达的效应及其机制。方法 VEGF蛋白的测定采用酶联免疫吸附法；Northern印迹杂交法检测mRNA表达，含VEGF启动子的报告基因来检测VEGF转录活性。结果 绿茶有效成分在48h时分别抑制89．71％乳腺癌细胞细胞分泌的及33．93％细胞内合成的VEGF蛋白，48h抑制55．57％的VEGF转录活性，在24、48h绿茶成分可明显抑制VEGF的mRNA表达，激活蛋白—l(AP—1)的抑制剂抑制了VEGF的mRNA表达，绿茶有效成分可进一步增强这种抑制作用。结论 绿茶能够抑制乳腺癌细胞株VEGF水平的表达，这种抑制可能通过包括AP—l在内的多途径实现。     

血管紧张素Ⅱ诱导VEGF mRNA在人肝癌细胞中的表达

目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人肝癌HepG2细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响。方法体外培养人肝癌HepG2细胞,采用不同浓度的AngⅡ进行处理,收集处理后不同时点的细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量法,分别检测AngⅡ处理前后HepG2细胞VEGFmRNA的表达;同时利用MTT法检测AngⅡ对HepG2细胞增殖的影响。结果AngⅡ能刺激HepG2细胞增殖,并增强VEGFmRNA的表达(P0.05)。这种作用呈浓度-时间依赖效应,当AngⅡ浓度为10-7mol/L,时间为60h时,这种作用达到最高值,且此作用可被AngⅡ1型受体(AT1R)拮抗剂所阻断。结论AngⅡ可以通过AT1R诱导人肝癌细胞VEGFmRNA的表达,对肝癌的生长及转移可能起到一定的促进作用。     

氯沙坦对糖尿病大鼠肾小管间质血管内皮生长因子和CD68表达的影响

目的：研究血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂（AT1RA）－氯沙坦对链脲佐菌素（STZ）大鼠肾小管间质血管内皮生长因子（VEGF）和CD68表达的影响。方法：用Wistar大鼠建立STZ诱导的糖尿病（DM）模型，设正常对照组（C）、糖尿病组（D）和糖尿病＋氯沙坦治疗组（DA）。用免疫组化方法观察肾小管间质VEGF和CD68的变化。结果：VEGF及CD68在DM大鼠肾小管间质部位较对照组显著升高（P＜0．01）。DA组给予氯沙坦治疗可使VEGF及CD68在肾小管间质表达降低。VEGF与CD68在肾小管间质表达呈显著正相关。结论：氯沙坦可降低糖尿病大鼠肾小管间质VEGF和CD68表达，减轻肾小管间质损害。     

血管内皮生长因子及其受体对糖尿病肾病大鼠微血管病变的作用

目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（VEGFR2）在糖尿病肾病（DN）大鼠肾微血管病变发病中的作用。方法：将正常Wistar大鼠12只随机分为正常对照组、糖尿病肾病组。糖尿病肾病组用STZ诱导建立DN模型,大鼠自由进食、饮水。于第4周和第8周各组分别处死大鼠6只。测定血生化及24h尿蛋白定量,以正常肾小球为对照,采用特异性抗体和免疫组织化学方法,观察大鼠肾小球VEGF、VEGFR2、TM-1的分布及其强度变化,并结合肾脏病理进行分析。应用RT-PCR技术测定VEGF和VEGFR2mRNA的表达。结果：（1）糖尿病肾病组第4周,8周时,尿白蛋白排泄率,血糖,血脂升高,均高于正常对照组（P〈0.01）,肾组织光镜,出现早期糖尿病肾病典型的病理改变过程。（2）免疫组化显示糖尿病组4周、8周时肾脏VEGF、VEGFR2及TM-1表达均较正常对照组上调（P〈0.01）,VEGF与TM-1呈正相关（4周时r=0.947,P〈0.001;8周时r=0.923,P〈0.001）;RT-PCR检测结果显示糖尿病肾病组第8周时VEGF-mRNA和VEGFR2-mRNA表达均较正常对照组升高（P〈0.05）,第8周时VEGF-mRNA和VEGFR2-mRNA表达较第4周时增高（P〈0.05）。结论：糖尿病肾病大鼠肾小球VEGF、VEGFR2、TM-1表达增强,与糖尿病肾脏新生血管生成有关。     

血管内皮生长因子和内抑素在STZ大鼠肾脏中的表达及意义

目的：研究血管内皮生长因子（VEGF）和内抑素（ENS）在2型糖尿病大鼠肾脏中的表达状况、比值变化及与肾脏微血管病变的关系。方法：将Wister大鼠设正常对照组和模型组，使用STZ诱导形成2型糖尿大鼠肾病模型，分别于2、4、8、12周，采用RT-PCR的方法观察大鼠肾脏VEGF和ENSmRNA的表达，并观察其比值变化，同时采用免疫组化观察VEGF蛋白的表达变化。结果：（1）糖尿病组2周时肾脏中VEGFmRNA开始上调（P〈0．05），4、8、12周时较正常对照组明显上调（P〈0．01）。（2）糖尿病组2周时肾脏中ENSmRNA的表达开始上调（P〈0，05），8、12周时表达明显上调（P〈0．01）。（3）糖尿病组2周时肾脏的VEGFmRNA／ENSmRNA值未见变化（P〉0．05），4周时升高（P〈0．05），12周时明显升高（P〈0．01）。（4）免疫组化显示糖尿病肾病组2周时VEGF升高，12周时升高更明显。结论：VEGF和ENS同时参与了糖尿病肾病的血管生成调控，两者表达水平的失衡是其新生血管形成的关键。     

血管内皮生长因子基因多态性与糖尿病肾病的相关性研究

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)-634G／C基因多态性与糖尿病肾病(DN)的关系。方法 运用PCR-限制性多态性片段长度(RFLP)技术检测98例健康对照者和216例2型糖尿病患者[其中DN患者104例，单纯2型糖尿病(DM)患者112例]的基因型，比较各组的基因型和等位基因频率。结果 (1)CC基因型者血清VEGFT水平高于CG及GG型者；(2)DN组CC基因型和C等位基因频率显著高于DM组和正常对照组；(3)与GG型和CG型组相比，CC型组DN的发生率明显上升；(4)Logistic回归分析显示VEGF、VEGF基因多态性、收缩压(SBP)、HbA1c、LDL-C、体重指数(BMI)是DN的危险因素。结论 VEGF-63gG／C多态性与2型DM伴发肾病的发生有关，C等位基因可能是DN的易感基因。     

氟伐他汀对蛋白尿的影响

目的：研究3-甲基-3-羟基戊二酰辅酶A（HMG-COA）还原酶抑制剂氟伐他汀对蛋白尿的影响。方法：选择非糖尿病肾病的蛋白尿患者90例。随机分为3组，每组30例。苯那普利组：给予血管紧张素转换酶抑制剂苯那普利10mg，1次／d；氟伐他汀组：给予HMG-COA还原酶抑制剂氟伐他汀40mg，每晚1次；联合用药组：给予苯那普利（10mg，1次／d）及氟伐他汀（40mg，每晚1次）联合用药。分别在治疗前，治疗3个月和6个月检测患者24h尿蛋白定量（UPr）、血尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）、白蛋白（Alb）、肾小球滤过率（GFR）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、血压等。结果：与治疗前比较，各组蛋白尿均有下降，其中联合用药组蛋白尿下降最明显（P〈0．05）。氟伐他汀组、联合用药组总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇明显下降；苯那普利组无明显改变。结论：氟伐他汀除有降脂作用外，还可以减少蛋白尿，发挥非依赖降脂的肾脏保护作用。     

斯伐他汀对糖尿病肾病大鼠肾小球系膜细胞p38信号通路的影响

目的研究糖尿病肾病大鼠肾小球系膜细胞p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）的表达及斯伐他汀对其的影响。方法分别以高糖、糖基化终产物（AGE）及过氧化氢孵育糖尿病大鼠肾小球系膜细胞（RMC），Western印迹法检测RMC的p38MAPK和TGF—β蛋白表达，p38MAPK特异性抑制剂SB203580及斯伐他汀预处理对其影响。结果高糖、AGE及过氧化氢均可单独激活p38MAPK，增加RMC的磷酸化（P）p38MAPK和TGF—β的蛋白表达；SB203580显著抑制TGF—β的蛋白表达（P〈0．05）；斯伐他汀抑制p38MAPK的活化并减少TGF—β的蛋白表达（P〈0．05）。结论p38MAPK可能是糖尿病肾病发生的始动信号之一。斯伐他汀可能通过抑制p38MAPK磷酸化而减少TGF—β的蛋白表达。