Smad3对高糖环境下足细胞凋亡的影响

目的探讨果蝇Mad基因3哺乳动物类似基因(Smad3)对高糖环境下足细胞凋亡的影响。方法足细胞分为对照组、高糖组、干扰组,对照组、高糖组在实验开始前转染siRNA control,干扰组转染Smad3 siRNA。高糖组、干扰组用含有25 mmol/L的D葡萄糖细胞培养液培养,对照组用含有5 mmol/L的D葡萄糖细胞培养液培养。Western印迹检测Smad3、磷酸化的Smad3(p-Smad3)、酶切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2相关X蛋白(Bax)、Bcl/白血病-x基因长片段(Bcl-xl)水平,流式细胞术检测细胞凋亡。结果高糖组细胞中Smad3水平与对照组相比无明显差异(P>0.05),而p-Smad3水平明显高于对照组(P<0.05)。干扰组细胞中Smad3、p-Smad3水平均明显低于高糖组(P<0.05)。高糖组细胞凋亡率明显高于对照组,干扰组明显低于高糖组(均P<0.05)。高糖组Cleaved Caspase-3、Bax水平明显高于对照组,Bcl-xl水平明显低于对照组(均P<0.05),干扰组Cleaved Caspase-3、Bax水平均明显低于高糖组,Bcl-xl水平明显高于高糖组(均P<0.05)。结论高糖环境下,足细胞中Smad3磷酸化水平升高,细胞凋亡增多,而下调Smad3可以抑制高糖诱导的足细胞凋亡,抑制Cleaved Caspase-3、Bax表达,促进Bcl-xl表达。     

高糖对胰岛β细胞功能影响研究进展

诸多研究表明长期而持续的高血糖是导致β细胞功能缺陷的重要因素,包括早期减少葡萄糖刺激的胰岛素分泌和最终不可避免地减少胰岛素基因转录和β细胞数量,本文就近几年来有关高血糖对胰岛β细胞功能影响的研究进展作简要归纳,深入认识糖尿病的发病机制和致病过程,将更好地防治2型糖尿病具有重要意义。     

胰腺星状细胞对高糖诱导的胰岛β细胞凋亡的影响

目的 观察胰腺星状细胞对高糖诱导的大鼠胰岛β细胞株Ins-1细胞活力及凋亡的影响,探索胰腺星状细胞在糖尿病胰岛功能衰竭进程中的作用.方法 构建Ins-1及胰腺星状细胞共培养系统,细胞分为Ins-1对照组、Ins-1高糖组(25 mmol/L葡萄糖)、Ins-1高渗组(25 mmol/L甘露醇)、共培养对照组、共培养高糖组(25 mmol/L葡萄糖)、共培养高渗组(25 mmol/L甘露醇).24 h后采用流式细胞法分析Ins-1细胞早期凋亡水平,48 h后分别采用嚷唑蓝(MTT)法和4,6-二氨基-2-苯基吲哚(DAPI)染色法检测细胞活力及凋亡细胞形态.使用单因素方差分析进行数据统计.结果 Ins-1高糖组与Ins-1对照组比较,Ins-1细胞凋亡率显著增加(分别为7.93%±0.41%、3.73%±0.35%,F=55.68,P<0.05);共培养高糖组与共培养对照组比较,Ins-1细胞凋亡率显著增加(分别为11.73%±1.20%、5.03%±0.41%,F=55.68,P<0.05).Ins-1高糖组与Ins-1对照组比较,细胞活力明显下降(分别为2.28±0.13、2.85±0.31,F=97.75,P<0.05);共培养高糖组与共培养对照组比较,细胞活力明显下降(分别为0.62±0.06、1.29±0.19,F=97.75,P<0.05).共培养对照组、共培养高糖组、共培养高渗组与Ins-1对照组、Ins-1高糖组、Ins-1高渗组比较,Ins-1细胞凋亡率显著增加(分别为5.03%±0.41%、3.73%±0.35%;11.73%±1.20%、7.93%±0.41%;7.60%±0.72%、5.60%±0.40%;F=55.68,P<0.05),细胞活力明显下降(分别为1.29±0.19、2.85±0.31;0.62±0.06、2.28±0.13;0.65±0.07、2.35±0.12;F=97.75,P<0.05),并可见凋亡细胞典型形态特征.结论 高糖、胰腺星状细胞可致大鼠胰岛β细胞Ins-1活力下降,凋亡增加;胰腺星状细胞可促进高糖诱导的胰岛β细胞凋亡.     

NF-κB及JNK通路与高糖下内皮细胞凋亡

高糖在内皮细胞功能异常尤其是凋亡中起重要作用,高糖诱导的活性氧簇增加参与NF-κB和JNK通路激活,经半胱天冬酶-3促进细胞凋亡的发生。NF-κB与JNK通路间存在密切联系,NF-κB使JNK磷酸化激活从而形成如下凋亡通路:高糖-活性氧簇-NF-κB-JNK-半胱天冬酶-3-凋亡,但NF-κB和JNK通路引起高糖下内皮细胞凋亡的机制还不完全清楚,两通路间的确切联系也有待进一步阐明。     

NF-κB及JNK通路与高糖下内皮细胞凋亡

高糖在内皮细胞功能异常尤其是凋亡中起重要作用,高糖诱导的活性氧簇增加参与NF-κB和JNK通路激活,经半胱天冬酶-3促进细胞凋亡的发生.NF-κB与JNK通路间存在密切联系,NF-κB使JNK磷酸化激活从而形成如下凋亡通路:高糖-活性氧簇-NF-κB-JNK-半胱天冬酶-3-凋亡,但NF-κB和JNK通路引起高糖下内皮细胞凋亡的机制还不完全清楚,两通路间的确切联系也有待进一步阐明.     

美罗华治疗B细胞性非霍奇金淋巴瘤的临床观察

目的:比较美罗华单药或联合化疗和单用CHOP方案治疗初治的B细胞性非霍奇金淋巴瘤的临床疗效及不良反应。方法:采用同期非随机对照的前瞻性研究方法,将51例初治B细胞淋巴瘤患者分为美罗华组和CHOP组,前组24例,采用美罗华单药或联合化疗;后组27例,单用CHOP方案化疗。3～6疗程后比较2组的疗效及不良反应。结果:美罗华组完全缓解(CR)率83.3%(20/24),总有效率(OR)95.8%(23/24);CHOP组CR率55.6%(15/27),OR率66.7%(18/27),2组疗效差异有统计学意义(P<0.05)。美罗华组2年的总生存率为70.8%,CHOP组为40.7%,美罗华组优于CHOP组(P<0.05)。结论:美罗华治疗初治B细胞淋巴瘤可取得较好疗效,2年生存率高,不良反应能耐受。     

波动性高糖对INS-1细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的探讨波动性高糖对INS-1细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响及其分子机制。方法将INS-1细胞随机分为三组。正常对照组(NG):含5.5 mmol/L葡萄糖;持续高糖组(SHG):含33.3 mmol/L葡萄糖;波动性高糖组(IHG):含5.5 mmol/L或33.3 mmol/L葡萄糖,每24 h交替换液1次,均培养3 d。3 d后检测各组INS-1细胞活性及凋亡百分率,胰岛素分泌量,Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素C(CytC)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平以及胰岛素(insulin)和胰岛十二指肠同源盒-1(PDX-1)mRNA表达水平。结果与NG组相比,SHG组与IHG组凋亡率均明显升高,细胞活性明显降低,Bax、CytC及Caspase-3表达明显增强,胰岛素分泌量及insulin、PDX-1 mRNA表达水平均明显降低(P均<0.01);与SHG组相比,IHG组细胞活性及胰岛素分泌量明显降低,凋亡率及Caspase-3明显增加(P均<0.01),Bax、CytC表达水平与insulin及PDX-1 mRNA表达水平均未见统计学差异。结论波动性高糖能导致胰岛细胞凋亡增加和功能障碍,其机制可能与上调Bax、CytC、Caspase-3及降低insulin与PDX-1基因表达等相关。     

高糖诱导血管内皮细胞凋亡及其调控机制研究进展

凋亡是一系列因素发生变化最终导致细胞程序性死亡,在维持组织稳态中起重要的作用。一大群物理、化学以及生物的因素能通过激活复杂却又严格控制的细胞内信号传导通路来激发凋亡。高糖或糖尿病在心血管疾病中起重要作用,其对内环境的改变能够直接或间接的导致细胞凋亡,尤其是在心血管疾病中占有重要地位的血管内皮细胞所发生的凋亡,更是受高糖环境的影响。本文对高糖环境下,内皮细胞发生凋亡的信号通路机制的近期研究进展作一综述。     

高糖诱导血管内皮细胞凋亡及其调控机制研究进展

凋亡是一系列因素发生变化最终导致细胞程序性死亡,在维持组织稳态中起重要的作用。一大群物理、化学以及生物的因素能通过激活复杂却又严格控制的细胞内信号传导通路来激发凋亡。高糖或糖尿病在心血管疾病中起重要作用,其对内环境的改变能够直接或间接的导致细胞凋亡,尤其是在心血管疾病中占有重要地位的血管内皮细胞所发生的凋亡,更是受高糖环境的影响。本文对高糖环境下,内皮细胞发生凋亡的信号通路机制的近期研究进展作一综述。     

特发性血小板减少性紫癜患者B淋巴细胞凋亡研究

目的探讨B淋巴细胞在特发性血小板减少性紫癜(ITP)发病机制中的作用。方法用流式细胞术检测ITP患者外周血B淋巴细胞表面Fas蛋白、FasL蛋白以及胞浆内抗凋亡蛋白bcl2的表达水平。结果ITP患者外周血中B淋巴细胞表面Fas和FasL蛋白表达与对照组相比无统计学意义,B淋巴细胞胞浆内bcl2的表达水平高于正常人(P<0.05)。结论B淋巴细胞凋亡受抑可能参与ITP自身免疫的发病机制。     

高糖对大鼠胰星状细胞增殖和细胞外基质合成的影响

目的 探讨高糖刺激对大鼠胰星状细胞(pancreatic stellate cell,PSC)增殖和细胞外基质(extracellular matrix,ECM)合成的影响。方法 分离培养大鼠PSC,取传第3～5代细胞,分别用正常葡萄糖(5.6mmol/L葡萄糖)(正常对照)、高葡萄糖(25mmol/L葡萄糖)(高糖组)和甘露醇(5.6mmol/L葡萄糖+19.4mmol/L甘露醇)(等渗对照组)处理5天后,用MTT法、~3H-Thymidine掺入和~3H-Proline掺入法分别检测细胞增殖、DNA合成和总胶原合成,同时用放免法检测细胞培养上清中Ⅲ型前胶原氨基末端多肽(amino-terminal propeptide of type Ⅲ procollagen,P Ⅲ NP)和透明质酸(hyaluronic acid,HA)含量。结果 与等渗对照组比较,高糖组PSC增殖、DNA合成、总胶原合成和细胞上清HA含量均显著增加(P<0.05),但细胞上清P Ⅲ NP含量无显著性差异(P>0.05)。结论 高糖可刺激PSC增殖与胶原合成,参与PSC活化。体内高糖血症可能是PSC活化的机制之一。     

G-CSF enhances the immunoglobulin generation rather than the proliferation of human B lymphocytes

Abstract: The effect of granulocyte-colony stimulating factor (G-CSF) on human B-cell function was studied in in vitro cultures. G-CSF alone had no effect on the proliferative response of resting B cells, but it slightly enhanced the proliferative response of these cells in the presence of polyclonal B-cell mitogen, Staphylococcus aureus Cowan strain I (SAC) at concentrations of 0.2 to 25 μg/ml (1.5-fold increase in the DNA synthesis). In contrast, immunoglobulin (Ig) secretion of activated B cells was increased approximately three-fold to four-fold by adding G-CSF to the cultures. The neutralization of G-CSF bioactivity with anti-G-CSF antibody abrogated this effect. Though cytoplasmic Ig-positive cells or plasma cell marker-positive cells did not change, the expression of IgM mRNA in antibody-producing B cells increased in the presence of G-CSF in the cultures. Interestingly, human B lymphocytes are shown to express the binding to biotin-conjugated G-CSF preparation, but not to biotin-conjugated GM-CSF preparation when examined by flow cytometry. These data suggest that G-CSF may influence B-cell function in special circumstances.     

艾塞那肽抑制高糖诱导内皮细胞凋亡的作用机制

在正常糖浓度(5.5 mmol/L)和高糖(33 mmol/L)培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分别加入不同浓度的艾塞那肽并干预不同时间后,噻唑蓝(MTF)法检测细胞活力,应用流式细胞仪检测细胞早期凋亡率,Western印迹法检测蛋白激酶B(Akt)磷酸化、Bcl-2和Bax蛋白表达水平.结果显示,HUVECs经高糖培养48和72 h后,细胞活力明显下降(P＜0.01).经1、10和100 nmol/L艾塞那肽干预48 h后,细胞活力明显增加,并呈浓度依赖性(P＜0.01).与正常糖浓度组比较,高糖组细胞凋亡率升高,Akt磷酸化和Bcl-2蛋白表达水平下降,Bax蛋白表达增加,Bcl-2/Bax比值降低(P＜0.01).艾塞那肽干预后,细胞凋亡率下降,Akt磷酸化和Bcl-2蛋白表达增加,Bax蛋白表达下降,Bcl-2/Bax比值升高(P＜0.01),而艾塞那肽的作用可被磷酸肌醇3激酶(PI3K)抑制剂LY294002所对抗(P＜0.01).提示艾塞那肽可通过PI3 k/Akt信号通路调节Bcl-2/Bax蛋白表达来抑制高糖诱导的内皮细胞凋亡,起到保护内皮细胞的作用.     

钾通道阻断剂四乙胺对胰岛β细胞凋亡的作用机制研究

目的 研究钾通道阻断剂四乙铵（TEA）对诱导胰岛β细胞凋亡的作用及机制。方法 以STZ诱导小鼠胰岛细胞株（NIT）细胞凋亡，同时加入TEA，通过AnnexinV检测、PI染色、Rhodaminel23染色，使用流式细胞术检测TEA对NIT细胞凋亡的影响；测定培养上清中NO和氧自由基含量，以及细胞裂解物中过氧化物歧化酶（SOD）活性。结果 STZ可显著诱导NIT细胞凋亡，并可降低SOD的活性，显著增加培养上清中氧自由基及NO的含量；1mmol／L TEA能显著抑制STZ的作用。结论 钾通道在胰岛β细胞的凋亡中可能起重要作用；TEA可显著抑制STZ诱导的胰岛β细胞凋亡，其机制可能与上调NIT细胞SOD活性，增强其清除氧自由基的能力及减少NO的产生有关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对高糖环境下内皮细胞氧化应激的影响

目的研究不同剂型表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对高糖诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）氧化应激损伤所引起凋亡的抑制作用及人核因子-κB P65（NF-κB P65）表达的影响。方法从新鲜脐带中分离培养HUVEC。用高糖诱导HUVEC表达NF-κB P65,实验组加入不同浓度的EGCG（12．5、25、50、100、200μmol／L）进行干预,PCR检测NF-κB P65mRNA的表达,AV-PI法检测凋亡细胞。结果高糖可诱导HUVEC凋亡,NF-κB P65表达增高;EGCG可抑制NF-κB P65的表达,降低凋亡指数,具有一定的时效关系、剂量关系。结论EGCG可在一定程度上抑制高糖诱导的氧化应激损伤所致的细胞凋亡。EGCG可能是通过抑制高糖所致的NF-κB增高,从而调控HUVEC细胞凋亡过程,发挥对HUVEC的保护作用。     

Effect of pseudolaric acid B on gastric cancer cells： Inhibition of proliferation and induction of apoptosis

AIM: To examine the effect of pseudolaric acid B on the growth of human gastric cancer cell line, AGS, and its possible mechanism of action. METHODS: Growth inhibition by pseudolaric acid B was analyzed using MTT assay. Apoptotic cells were detected using Hoechst 33258 staining, and confirmed by DNA fragmentation analysis. Western blot was used to detect the expression of apoptosis-regulated gene Bcl-2, caspase 3, and cleavage of poly (ADP-ribose) polymerase-1 (PARP-1). RESULTS: Pseudolaric acid B inhibited the growth of AGS cells in a time- and dose-dependent manner by arresting the cells at G2/M phase, which was accompanied with a decrease in the levels of cdc2. AGS cells treated with pseudolaric acid B showed typical characteristics of apoptosis including chromatin condensation and DNA fragmentation. Moreover, treatment of AGS cells with pseudolaric acid B was also associated with decreased levels of the anti-apoptotic protein Bcl-2, activation of caspase-3, and proteolytic cleavage of PARP-1. CONCLUSION: Pseudolaric acid B can dramatically suppress the AGS cell growth by inducing apoptosis after G2/M phase arrest. These findings are consistent with the possibility that G2/M phase arrest is mediated by the down-regulation of cdc2 levels. The data also suggest that pseudolaric acid B can trigger apoptosis by decreasing Bcl-2 levels and activating caspase-3 protease.     

慢性乙型肝炎患者外周血NK细胞和T淋巴细胞计数变化及其临床意义

目的观察慢性乙型肝炎患者外周血NK细胞和T淋巴细胞数量的变化。方法在56例乙型肝炎肝衰竭、49例HBeAg阳性慢性乙型肝炎和41例乙型肝炎病毒携带者使用流式细胞仪检测外周血CD3+T细胞、CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞和NK(CD3-CD16+CD56+)细胞占淋巴细胞的比率(%)。结果肝衰竭患者CD3+T细胞和CD3-CD16+CD56+NK细胞计数比慢性乙型肝炎患者和乙型肝炎病毒携带者显著性降低(P0.05);慢性乙型肝炎患者CD3-CD16+CD56+NK细胞计数比乙型肝炎病毒携带者显著性升高(P0.05)。结论乙型肝炎肝衰竭患者外周血T细胞和NK细胞数量减少,而HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者外周血T细胞数量增多。     

不同糖耐量人群服糖前与服糖后2小时血清游离脂肪酸浓度的变化及其影响因素

研究32例DM，35例IGT，45例NGT伴BMI正常，42例NGT伴BMI≥23，发现空腹血游离脂肪酸升高的次序是DM＞IGT〉NGT伴BMI升高〉NGT伴BMI正常。还发现OGTT2小时FFA水平升高仅见于IGT与DM组，不见于NGT组。     

自由基清除剂MCI-186对高糖环境中内皮细胞凋亡的干预作用

观察内皮细胞在高糖环境及经肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导后的细胞凋亡情况，并加入自由基清除剂MCI-186予以干扰。检测细胞DNA裂解片段及凋亡信号蛋白(caspase)的表达量，以期探讨MCI-186对高糖环境中血管内皮细胞凋亡的干预作用及凋亡机制。发现高糖环境可增加内皮细胞凋亡率，并上调TNF-α诱导的调亡。MCI-186可抑制高糖诱导的细胞凋亡。但无法干预高糖环境中TNF—a诱导的凋亡。