和厚朴酚可体外减轻阿霉素诱导的心肌毒性：基于激活 AMPK/Nrf2 信号通路抑制细胞焦亡

目的 探讨和厚朴酚（HKL）改善阿霉素（DOX）诱导的H9c2心肌细胞毒性的作用及机制。方法 采用DOX处理H9c2细胞心肌毒性模型,随机分为4组：正常对照组、DOX处理组（DOX）、HKL和DOX共处理组（DOX+HKL）以及HKL、腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）抑制剂和DOX共处理组（DOX+HKL+AMPK抑制剂）。24 h后观察细胞形态变化,用CCK-8法检测细胞活力,RT-PCR检测炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)的mRNA水平,Western blot检测裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、细胞色素c和细胞焦亡分子NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）以及p-AMPK、红系衍生核因子相关因子2(Nrf2)的表达,免疫荧光染色观察NLRP3和p-AMPK的表达。结果 和正常对照组相比,DOX组H9c2细胞变得肿胀且细胞活力明显降低（P<0.05）,TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA水平显著增加（...     

垂体中叶素抑制内质网应激拮抗阿霉素诱导的H9c2心肌细胞损伤机制研究

目的 利用阿霉素(doxorubicin,DOX)诱导的H9c2心肌细胞损伤模型研究垂体中叶素(intermedin,IMD)拮抗DOX心脏损伤的药理学作用和机制.方法 建立H9c2细胞的DOX心脏损伤模型,设空白对照组、DOX(2 μmol/L)模型组、IMD受体拮抗剂IMD17-47(1 μmol/L)组和IMD8-47(10-8、10-6和10-5mol/L)3个剂量处理组,采用CCK-8法检测心肌细胞活性,丙二醛(MDA)含量测定评价H9c2细胞的氧化应激水平,Western法检测caspase-3活化片段和内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GPR78)的表达水平,并采用Real-time PCR法检测内源性IMD及其受体系统的mRNA表达水平.结果 与对照细胞相比较,DOX处理显著降低细胞存活率、增加细胞内MDA含量、caspase-3活性片段和内质网应激水平.与单纯DOX组相比较,IMD17-47抑制DOX诱导的内源性IMD的作用后明显降低细胞的存活率(P<0.05)、增加细胞内MDA含量(P<0.01)、caspase-3活化片段和内质网应激水平(P<0.01);外源性给予IMD干预呈剂量依赖性地促进DOX处理细胞的存活率、降低细胞的MDA含量、凋亡和内质网应激水平(P<0.05).此外,DOX处理明显增加心脏组织内源性IMD及其受体的mRNA表达.结论 DOX诱导心肌细胞内源性IMD及其受体的表达,内源性IMD和外源性给予的IMD均通过DOX刺激增强的IMD受体系统,有效降低DOX诱导的氧化应激和内质网应激水平,实现其促进心肌细胞存活、抑制细胞凋亡的保护作用.     

黄芪甲苷的抗氧化性对缺氧缺糖H9c2细胞的保护作用探讨

目的:探讨黄芪甲苷(AST-Ⅳ)的抗氧化性对缺氧缺糖H9c2细胞的保护作用.方法:对用无糖Na2S2O4溶液制造的细胞缺氧模型给予AST-Ⅳ预处理,同时以抗氧化能力相近的抗氧化剂水溶性维生素E(Trolox)作为对照检测细胞内氧自由基(ROS)、丙二醛(MDA)的浓度和乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,CCK-8检测细胞存活率,FITC-annexin V/PI双染检测凋亡情况.结果:经60 μmol·L-1的AST-Ⅳ预处理后,细胞内ROS、MDA浓度较模型组有明显下降(P<0.01),下降程度与Trolox预处理组相近.AST-Ⅳ预处理组细胞存活率明显高于模型组(P<0.01),但低于Trolox预处理组(P<0.01).AST-Ⅳ预处理组LDH漏出率和细胞凋亡率较模型组均下降(P<0.01),但不如Trolox预处理组下降明显(P<0.01).结论:AST-Ⅳ能减轻无糖Na2S2O4溶液造成的细胞氧化应激,但效果不如Trolox,其抗氧化性对H9c2细胞的保护作用有限.     

丹酚酸B对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用机制研究

目的 观察丹酚酸B(Sal B)对H9c2心肌细胞缺氧复氧(hypoxia-reoxygenation,H/R)损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制.方法 首先构建H9c2心肌细胞缺氧复氧模型,采用噻唑蓝(MTT)法研究丹酚酸B与H9c2心肌细胞活力的量效关系,确定丹酚酸B的保护作用,给药方式为预给药.实验分为正常对照组、丹酚酸B组、模型组(H/R组)、H/R+丹酚酸B组,分别检测各组乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、活性氧簇(ROS)以及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)的含量变化.Western印迹检测添加丹酚酸B对Akt磷酸化的影响,添加Akt抑制剂LY294002加以比较.结果 与正常对照组相比较,模型组LDH、MDA、ROS以及Caspase-3含量水平显著升高(P<0.05),SOD、GSH-Px以及CAT含量水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,丹酚酸B能够显著提高SOD、GSH-Px以及CAT含量水平(P<0.05),显著降低LDH、MDA、ROS以及Caspase-3含量水平(P<0.05).Western印迹结果显示与正常对照组相比较,模型组Akt磷酸化水平显著降低(P<0.001),相对于模型组丹酚酸B能够显著提高Akt的磷酸化水平(P<0.01),而这种保护作用能被LY294002所阻断(P<0.01).结论 丹酚酸B对H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤具有保护作用,其机制可能与磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K/Akt)通路相关.     

番茄红素对心肌细胞氧化应激损伤的保护作用

目的：探讨番茄红素（Lycopene）对心肌细胞氧化应激损伤的保护作用及机制。方法体外培养 H9c2心肌细胞,分为正常对照组（对照组）、番茄红素预处理组（Lycopene组）、模型组（H2 O2组）和番茄红素预处理后建立模型组（Lycopene加H2 O2组）。除对照组及Lycopene组外,其余各组用过氧化氢（H2 O2）200μmol／L处理6 h ,建立心肌细胞氧化应激损伤模型。Lycopene组建模前30 min加入5μmol／L的番茄红素。6 h后M T T观察H9c2心肌细胞存活率;分光光度计检测细胞培养液上清中乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）活性和细胞中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）活性;激光共聚焦联合流式细胞仪观察细胞内活性氧（ROS）的产生和线粒体膜电位;流式细胞仪检测细胞凋亡;酶标仪检测细胞内ATP水平。结果与对照组比较,H2O2组LDH、CK-BM、ROS、MDA及细胞凋亡率显著增加,差异有统计学意义（P＜0．05）;H9c2心肌细胞存活率、SOD、ATP及线粒体膜电位显著降低,差异有统计学意义（P＜0．05）。与 H2O2组比较,Lycopene加 H2O2组LDH、CK-BM、ROS、MDA及细胞凋亡率显著降低,差异有统计学意义（P＜0．05）;H9c2心肌细胞存活率、SOD、ATP及线粒体膜电位显著增加,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论番茄红素可以减轻氧化应激条件下H9c2心肌细胞的损伤,其机制可能与清除细胞内氧化应激产物,增强细胞内抗氧化酶活性及改善线粒体功能有关。     

齐墩果酸对损伤血管内皮细胞的保护作用及其机制探讨

目的:探讨齐墩果酸(oleanic acid,OA)对过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)诱导人血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的保护作用及其机制?方法:培养HUVECs,分为正常组?H2O2模型组?H2O2+OA (0.25 ?滋mol/L)组?H2O2+OA (0.50 ?滋mol/L)组?H2O2+OA (1.00 ?滋mol/L)组?H2O2+维生素C(1.50 mmol/L)组?各组培养24 h后,通过MTT法检测细胞增殖能力,酶生化法测定上清液中的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和一氧化氮(nitric oxide,NO)含量,酶生化法测定细胞裂解液中的丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量?谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力,流式细胞仪测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)和细胞凋亡率?结果:OA能够恢复H2O2损伤的细胞活力,减轻H2O2诱导的LDH释放,减少H2O2诱导的MDA生成,恢复H2O2损伤的GSH-Px和SOD活力,清除H2O2诱导的ROS,减轻H2O2诱导的细胞凋亡,提高HUVECs细胞NO的生成?结论:OA对损伤血管内皮细胞有保护作用,这与OA能够启动HUVECs细胞内抗氧化防御机制,清除细胞内的ROS,提高HUVECs细胞NO的生成,抑制H2O2诱导的HUVECs细胞凋亡有关?     

硫化氢对MPP+诱导 PC12 细胞氧化应激损伤的保护作用

目的探讨硫化氢对MPP＋诱导PC12细胞氧化应激损伤的保护作用。方法以MPP＋损伤PC12细胞作为帕金森病的细胞模型,甲氮甲唑蓝（MTT）法检测细胞存活率;丙酮酸二硝基苯腙比色法检测细胞上清液乳酸脱氢酶（LDH）漏出量;硫代巴比妥法检测细胞上清液中丙二醛（MDA）浓度;双氢罗丹明123染色FCM检测细胞内活性氧水平变化;应用硫化氢钠（sodium hydrosulfide,NaHS）作为H2S的供体。结果 200μmol/L和400μmol/L硫氢化钠呈浓度依赖性阻断MPP＋引起PC12细胞存活率的降低;400μmol/L硫氢化钠能明显抑制400μmol/L MPP＋诱导的PC12细胞LDH的漏出,以及抑制MDA和活性氧的产生。结论硫化氢对MPP＋诱导PC12细胞的氧化应激损伤具有保护作用。     

复方丹参注射液对内皮前体细胞氧化应激损伤的保护作用

目的:观察复方丹参注射液对体外培养猪内皮前体细胞氧化应激损伤的保护作用。方法:建立猪内皮前体细胞体外培养模型,在培养液中加入100μm o l/L过氧化氢及不同浓度(1、2、5m g/L)复方丹参注射液,测定细胞增殖活力(MTT法)、乳酸脱氢酶(LDH)活性、丙二醛(MDA)含量及细胞凋亡率。结果:过氧化氢使细胞增殖活力下降,使LDH、MDA含量增加,细胞凋亡率上升,复方丹参注射液可使上述结果改变并呈浓度依赖性。结论:复方丹参注射液对内皮前体细胞氧化应激损伤有保护作用。     

桃红四物汤含药血清对缺糖缺氧损伤PC12细胞的保护作用

目的 探讨桃红四物汤含药血清对缺糖缺氧（oxygen glucose deprivation,OGD）损伤的PC12细胞的保护作用及其机制。 方法 采用连二亚硫酸钠（Na2S2O4）联合低糖培养基建立体外OGD致PC12细胞损伤模型;分别给予不同浓度的桃红四物汤含药血清,以MTT法检测细胞存活率,倒置显微镜观察细胞形态学变化;检测乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性及丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量;观察Hoechst33258染色后的细胞形态学变化;Western blot法检测给药后细胞Caspase-3蛋白的表达。 结果 与空白血清对照组相比,经OGD损伤后,细胞活力显著降低,桃红四物汤含药血清可减轻PC12细胞形态损伤,显著提高SOD活力,降低MDA和LDH含量,降低Caspase-3蛋白表达;Hoechst 33258染色结果表明桃红四物汤含药血清能降低OGD诱导的细胞凋亡。 结论 桃红四物汤含药血清对OGD诱导的PC12细胞损伤具有保护作用,其机制与提高SOD活力和降低MDA含量有关。     

丹参多酚酸盐抑制氧化应激减轻阿霉素诱导的心脏毒性研究

目的 探究丹参多酚酸盐（salvianolate，SAL）对阿霉素（adriamycin，ADM）诱导心脏毒性的保护作用及调控机制。方法 采用随机数字表法将40只小鼠分为对照组、ADM组、等效剂量丹参多酚酸盐（equivalent dose of salvianolate，ESAL）组和高剂量丹参多酚酸盐（high-dose salvianolate，HSAL）组，每组10只，超声检测心脏结构和功能，测量小鼠体质量和心脏重量计算心脏体质量比，苏木精–伊红染色观察心脏组织形态，TUNEL检测法检测心脏组织凋亡，ELISA法检测小鼠血清中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）、天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase，AST）、B型钠尿肽（B-type natriuretic peptide，BNP）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）及超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）的含量水平。将小鼠心肌细胞仍分为上述四组，每组均设3个重复孔，每个实验重复3次。CCK-8和流式细胞术检测心肌细胞活性和凋亡；ELISA法检测心肌细胞上清液中LDH、AST、MDA和SOD的含量。结果 SAL可减轻ADM诱导的心肌肥厚、改善射血分数和降低心脏体质量比（P<0.05），减轻心肌组织纤维化，减少组织细胞发生凋亡（P<0.05）；降低了ADM诱导的小鼠血清中LDH、AST、BNP和MDA水平（P<0.05），升高了SOD的水平（P<0.05）；SAL能提高ADM抑制的心肌细胞活性（P<0.05）、减少细胞凋亡（P<0.05），降低了小鼠心肌细胞中LDH、AST和MDA水平（P<0.05），升高了SOD的水平（P<0.05）。结论 SAL可能通过抑制氧化应激发挥对ADM诱导的心脏毒性的保护作用。     

珠子参总皂苷通过促进Nrf2转位拮抗新生大鼠心肌细胞氧化应激损伤

目的观察珠子参总皂苷H2O2所致氧化应激损伤保护效应并探讨其机制。方法 Wistar乳鼠心肌细胞原代培养,用H2O2建立氧化应激损伤模型,然后用珠子参总皂苷(100、200μg/ml)孵育24 h后,观察细胞搏动频率,MTT法检测珠子参总皂苷对细胞活力的影响,流式细胞仪和Hoechst33258染色检测珠子参总皂苷对氧化应激诱导细胞凋亡及胞内ROS含量的影响,比色法测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)含量,同时检测培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及丙二醛(MDA)含量,实时定量PCR技术检测珠子参总皂苷对SOD/GPX/CAT反应系统SOD1、SOD2、SOD3、CAT和GPX1基因表达的影响,Western blot检测珠子参总皂苷对细胞质和细胞核Nrf2蛋白表达的影响。结果 H2O2明显影响细胞活力和诱导凋亡(IC50为500μmol/L),珠子参总皂苷(100、200μg/ml)处理能显著增加心肌细胞搏动频率和存活率(P<0.01),抑制心肌细胞凋亡和改善细胞形态,降低细胞内ROS含量(P<0.01);减轻H2O2所致乳鼠心肌细胞培养液中LDH、CK释放量,同时能够升高SOD、CAT和GSH-Px活性,降低MDA含量(P<0.05,P<0.01);上调SOD/GPX/CAT反应系统基因表达水平和促进Nrf2核移位,增加心肌细胞核内Nrf2的表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论珠子参总皂苷抑制心肌细胞氧化应激损伤,与Nrf2抗氧化途径的激活和清除ROS有关。     

金属硫蛋白抑制阿霉素引起的心肌细胞凋亡作用研究

目的 研究锌诱导的金属硫蛋白(MT)对阿霉素(DOX)所致心肌细胞凋亡的的抑制作用并探讨其作用机制.方法 雄性C57BL小鼠随机分成4组(每组7只),即对照组、锌处理组、给药组和锌预处理给药组.各组小鼠连续2 d皮下给予ZnSO4 300 μmol/kg(锌处理组和锌预处理给药组)或等量生理盐水(对照组和给药组),第3 d单次腹腔注射DOX 15 mg/kg(给药组和锌预处理给药组)或等量生理盐水(对照组和锌处理组).DOX给药后第4 d处死小鼠,采用血红素镉饱和法测定心脏组织MT含量,ELISA法测定心肌凋亡指数,蛋白印迹分析(Western blot)测定心肌组织凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达水平.结果 与对照组相比,DOX引起小鼠心脏质量下降10%,且显著引起小鼠心肌细胞凋亡;经锌诱导后,心脏组织MT水平提高约25倍,且MT高表达能抑制DOX引起的凋亡细胞增加;进一步的研究发现,Bax蛋白表达水平在DOX给药后明显升高,而MT高表达抑制了Bax的表达升高;Bcl-2蛋白表达水平各组间的差异无统计学意义.结论 锌诱导的MT高表达能抑制DOX引起的心肌细胞凋亡,其作用机制主要与抑制DOX引起的Bax蛋白表达升高以及Bax/Bcl-2比值增加有关.     

复方缬芎滴丸对大鼠乳鼠心肌细胞的保护作用

目的研究复方缬芎滴丸(VLC)对心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法采用血清药理学的研究方法,对大鼠进行灌胃给予VLC,剂量分别为32 mg.kg-11、6 mg.kg-1,空白组给予等体积生理盐水;制备含药血清,将含药血清加入培养5 d的乳鼠心肌细胞中,阳性组直接加入川芎嗪;厌氧培养24 h后,更换培养基(含有受试药),再给氧4 h,阴性对照组一直置于常规下培养;最后,检测培养基上清中的乳酸脱氢酶(LDH)及细胞中丙二醛(MDA)含量;消化受试乳鼠心肌细胞制成细胞悬液,进行碘化丙啶染色,用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡百分率。结果与正常组相比,缺氧再给氧损伤组LDH、MDA含量均增高,说明细胞在缺氧再给氧后脂质过氧化增强,心肌细胞出现明显的损伤。与模型组相比,VLC各含药血清组LDH、MDA值均明显降低,表明VLC有抗心肌细胞脂质过氧化的作用。流式细胞仪检测结果显示VLC含药血清组心肌细胞凋亡率分别降低38%、69%(P<0.01),表明VLC可降低缺氧再给氧后心肌细胞凋亡百分率。结论VLC对急性心肌缺血有明显的保护作用,其作用机制可能是VLC能够降低心肌缺血时氧自由基的产生,并有抗心肌细胞凋亡的作用。     

线粒体通透性转换孔在天麻素抗心肌细胞氧化应激损伤中的作用

目的探讨H9c2心肌细胞发生氧化应激损伤时,线粒体膜上的线粒体通透性转换孔（mPTP）在天麻素抗氧化应激损伤的 保护机制中所发挥的作用。方法本实验分为6组：正常组,过氧化氢组,天麻素+过氧化氢组,天麻素组,环孢菌素A组,环孢菌 素A+天麻素+过氧化氢组。通过加入环孢菌素A（mPTP开放剂）观察天麻素的保护作用是否被抑制。用MTT法初步检测各组 细胞存活率,采用Annexin V-FITC/PI双染法通过流式细胞仪观察细胞早期凋亡率,大鼠三磷酸腺苷（ATP）试剂盒检测ATP的 含量,活性氧检测试剂盒检测细胞内活性氧（ROS）的含量,激光扫描共聚焦显微镜观察Jc-1标记的线粒体膜电位,Western blot 检测细胞内细胞色素C（Cyt C）含量,Caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3的酶活性。结果环孢菌素A+天麻素+过氧化氢 组线粒体的相对膜电位低于天麻素+过氧化氢组（1.98±0.18 vs 3.08±0.14）,差异有统计学意义（P=0.014）。环孢菌素A可以阻断 氧化应激时天麻素降低细胞内活性氧和相关凋亡因子的含量、抑制相关因子活性的作用（P<0.05）,并且在一定程度上阻断了天 麻素的抗凋亡作用（5.77±0.75）% vs（1.97±0.82）%,两者差异有统计学意义（P<0.001）。结论天麻素可以通过抑制心肌细胞发 生氧化应激损伤时mPTP的开放,最终通过减少凋亡来发挥一定的抗氧化应激损伤的作用。     

氯沙坦对阿霉素致大鼠急性心脏毒性的保护作用

目的研究氯沙坦对阿霉素（DOX）所致大鼠急性心脏毒性的保护作用,并探讨其作用机制。方法取大鼠32只,随机分为4组,每组8只大鼠。对照组：生理盐水灌胃;模型组：腹腔注射DOX;氯沙坦治疗组：氯沙坦灌胃,最终腹腔注射DOX;氯沙坦组：氯沙坦灌胃。用药7 d,取血处死大鼠。测定血清乳酸脱氢酶（LDH）活性、丙二醛（MDA）水平,观察心肌病理切片。结果氯沙坦治疗组血清乳酸脱氢酶（LDH）下降（P〈0.01）,同时丙二醛（MDA）含量下降（P〈0.05）,心肌细胞变性、坏死及间质的改变明显减轻。结论氯沙坦有对抗阿霉素的心脏毒性的作用,机制可能与其抗氧化作用有关。     

右丙亚胺对阿霉素引起的心脏毒性防治效果及其机制研究

目的 探讨右丙亚胺对蒽环类药物(阿霉素)所致心脏毒性的防治效果及可能作用机制.方法 31只新西兰大白兔随机分为阿霉素[3 mg/(kg·week)×10,iv]组和阿霉素+右丙亚胺组[60 mg/(kg·week)×10,iv或ip],分别于用药前、用药第4周末及10周末测定血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)和脑钠肽(BNP)水平,超声心电图机检测心功能变化,并观察心肌组织病理形态学改变及心肌细胞凋亡情况.结果 阿霉素组实验前后对比,血清SOD活性降低,MDA含量升高(P＜0.05),cTnI和BNP浓度升高(P＜0.05),左室射血分数(LVEF)和左室短轴缩短率(LVFS)下降(P＜0.05);右丙亚胺可明显降低MDA、cTnI和BNP水平(P＜0.05),使LVEF和LVFS值升高(P＜0.05),并能减轻心肌病理损伤,减少心肌凋亡细胞.结论 右丙亚胺对阿霉素所引起的心脏毒性具有一定的保护作用,其作用机制主要是减少氧自由基的产生、降低脂质过氧化产物含量和减轻心肌细胞凋亡.     

金樱子对阿霉素心肌损伤大鼠的抗氧化和抗凋亡保护作用

目的观察金樱子(Rosa Laevigata Michx,RLM)对阿霉素(Doxorubicin,DOX)诱导心肌损伤的保护作用。方法 Wistar大鼠随机分为空白对照组(8只)、DOX模型组(15只)、RLM和DOX联合用药组(每个剂量组30只)。空白对照组仅给予等体积生理盐水,DOX模型组大鼠用DOX腹腔注射,使其累计剂量达15 mg/kg。联合用药组在DOX组基础上每千克体重分别用1,2和5 g RLM灌胃。处理结束后,测量血清中天冬氨酸转氨酶(aspartate transaminase,AST)、肌酸激酶(creatine kinase,CK-MB)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、总胆固醇(total cholesterol,TC)的含量,同时采用比色法测量还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、丙二醛(myocardial lipid peroxide,MDA)、肿瘤坏死因子α(tumour necrosis factor-alpha,TNF-α)及caspase-3的含量。结果 DOX能显著增高大鼠血清中AST,LDH,CK-MB和TC水平,5 g/L RLM处理能将血清中AST降至(6.73±0.18)U/L,LDH降至(251.34±33.08)U/L,CK-MB降至(53.62±4.45)U/L,TC降至(67.82±9.47)mg/dL,与DOX模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。DOX也降低还原型GSH水平,能增加MDA,TNF-α及caspase-3的含量。而给予RLM处理后,每毫克组织中GSH水平增加至(1.06±0.11)mg/g,MDA降至(0.82±0.14)nmol/mg,TNF-α降至(3.49±0.05)pg/mg,caspase-3 OD值降至(0.83±0.02),与DOX模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 RLM通过其抗氧化、抗炎症及抗凋亡机制发挥对DOX诱导的心肌毒性的保护作用。     

Heat shock protein 27 regulates oxidative stress-induced apoptosis in cardiomyocytes: mechanisms via reactive oxygen species generation and Akt activation

Background  Increased reactive oxygen species (ROS) formation, which in turn promotes cardiomyocytes apoptosis, is associated with the pathogenesis and progression of various cardiac diseases such as ischemia and heart failure. Recent studies have shown that over expression of heat shock protein 27 (Hsp27) confers resistance to cardiac ischemia/reperfusion injury. However, not much is known about the regulation of myocyte survival by Hsp27.
Methods  The rat cardiac cell line H9c2, with a stable overexpression of Hsp27, was established, with empty vector transfected H9c2 cells as controls. Following the cells challenged by Hydrogen Peroxide (H₂O₂), lactate dehydrogenase (LDH) release, apoptosis, intracellular ROS, cell morphology, mitochondrial transmembrane potential and the activation of serine/threonine kinase Akt were determined.
Results  Along with marked suppression of H₂O₂-induced injury by Hsp27 overexpression in H9c2 cells, ROS generation and the loss of mitochondrial membrane potential were also significantly depressed. Furthermore, augmented Akt activation was observed in Hsp27 overexpressed H9c2 cells following H₂O₂ exposure.
Conclusions  Hsp27 inhibits oxidative stress-induced H9c2 damage and inhibition of ROS generation and the augmentation of Akt activation may be involved in the protective signaling.

     

乙醛脱氢酶2减轻多柔吡星所致细胞毒性作用的机制

目的：探讨乙醛脱氢酶2(aldehyde dehydrogenase 2,ALDH2)对多柔吡星(doxorubicin,DOX)所致肌原细胞毒性的保护作用及其机制。方法：以小鼠C2C12肌原细胞为研究对象,通过基因转染方式调节细胞内ALDH2表达水平,以流式细胞术检测细胞凋亡率,MTT法检测细胞增殖抑制率,化学荧光法检测组织活性氧(reactive oxygen species,ROS)、4羟壬烯醛(4-hydroxynonenal,4-HNE)蛋白加合物含量及caspase-3/7活性,Western印迹检测Bcl-2,NADPH氧化酶2(NADPH oxidase 2,NOX2)、胞浆调节亚单位p-p47PHOX水平。结果：ALDH2过表达可显著降低DOX所致C2C12细胞凋亡及增殖抑制,而抑制ALDH2的表达则增加DOX对C2C12细胞凋亡诱导及增殖抑制作用;ALDH2过表达可下调p47PHOX磷酸化水平,抑制NOX2活化及ROS生成,而ALDH2低表达则上调p47PHOX磷酸化水平,促进NOX2活化及ROS生成;此外,NOX2活性抑制剂apocynin可抑制p47PHOX磷酸化、ROS生成及caspase-3/7的酶活性,同时增加 ALDH2酶活性及其mRNA水平。结论：DOX所致的肌原细胞毒性与NOX2依赖性细胞氧化应激增强、ALDH2酶活性及表达降低有关,而ALDH2通过抑制上述NOX2信号,减轻细胞凋亡而发挥保护细胞作用。     

体外培养皮层神经元缺糖氧后氧化-抗氧化状态的变化

目的:观察皮层神经元缺糖氧复氧后氧化-抗氧化分子的变化,并探讨其对凋亡的影响.方法:建立体外培养皮层神经元缺糖氧复氧损伤模型,实验分为正常对照组,缺糖氧复氧不同时间组(3、6、12及24 h组),检测各组细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)含量及一氧化氮合酶(NOS)活性;观察神经元谷胱甘肽(GSH)含量及谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性变化:Hochest33258核染色观察皮层神经元凋亡情况.结果:与正常对照组相比,缺糖氧复氧后神经元LDH释放量及NO含量明显增多、GPx活性持续下降(P<0.05);于缺糖氧复氧3 h及6 h时,NOS活性增高、GSH含量减少(P<0.05),而于24 h时二者变化无显著差异(P>0.05);神经元于缺糖氧复氧3 h时出现凋亡,且随复氧时间的延长,凋亡持续增多(P<0.05).结论:随着缺糖氧复氧时间的持续,氧化及抗氧化平衡的破坏,可能是致体外培养皮层神经元凋亡的原因之一.