Cyclopamine对人前列腺癌PC-3细胞增殖凋亡及Bcl-2，Bax，caspase-9蛋白表达的影响

目的研究cyclopamine对人前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的作用及对Bcl-2,Bax,caspase-9蛋白表达的影响,并探讨其机制。方法体外培养的PC-3细胞应用cyclopamine处理后,通过MTT测定细胞增殖抑制情况;电镜下观察肿瘤组织形态学变化;流式细胞仪检测凋亡率;Western印迹技术检测Bcl-2,Bax,caspase-9蛋白的表达变化。结果MTT法结果显示4μmol／L,8μmol／L及12μmol／L浓度的cyclopamine对PC-3细胞增殖有显著抑制作用,与对照组相比差异有显著性（P〈0．05或P〈0．01）,抑制效果都随着浓度的增大及时间的增加而增强。电镜下可观察到典型的凋亡细胞;流式细胞仪检测结果表明cyclopamine诱导PC-3细胞发生凋亡;Western印迹技术的结果：经培养72h后,随着药物浓度增大,Bcl-2蛋白表达呈逐渐减少,而Bax,有活性的caspase-9蛋白表达逐渐增多。结论Cyclopamine抑制PC-3细胞增殖,在一定剂量和时间范围内呈时间、浓度依赖关系,并呵诱导其凋亡。Cyclopamine诱导PC-3细胞凋亡可能通过Bcl-2,Bax,caspase-9介导。     

冬凌草甲素干预SHH信号通路抑制人结肠癌细胞SW1116增殖的实验探讨

目的研究冬凌草甲素对结肠癌细胞SW1116增殖的影响及机制。方法用不同浓度的冬凌草甲素处理SW1116细胞,MTT测定细胞增殖情况,计算其半数抑制浓度。SW1116细胞分为对照组、冬凌草甲素组、Cyclopamine组、联合组,对照组细胞培养液中不添加任何药物,冬凌草甲素组细胞培养液中添加70μmol/L的冬凌草甲素,Cyclopamine组细胞培养液中添加10μmol/L的SHH信号通路抑制剂Cyclopamine,联合组细胞培养液中添加10μmol/L的SHH信号通路抑制剂Cyclopamine和70μmol/L的冬凌草甲素,MTT检测细胞增殖,细胞克隆实验检测克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中音猬因子(SHH)、平滑蛋白(Smo)、锌指转录因子1(Gli-1)、剪切的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白水平。结果冬凌草甲素处理后的SW1116细胞增殖能力明显降低,其半数抑制浓度为(69.65±6.32)μmol/L。冬凌草甲素处理后的SW1116细胞增殖、克隆形成能力明显降低,细胞凋亡率明显升高,细胞中SHH、Smo、Gli-1蛋白表达水平降低,Cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低,与未用冬凌草甲素处理的细胞比较,差异有统计学意义(P0.05)。SHH信号通路抑制剂处理也可以抑制SW1116细胞增殖和克隆形成,诱导SW1116细胞凋亡,促进细胞中Cleaved Caspase-3蛋白表达,减少细胞中Bcl-2蛋白表达。联合组的SW1116细胞增殖能力和克隆形成能力下降更多,细胞凋亡增加更多,细胞中Cleaved Caspase-3蛋白水平更高,Bcl-2蛋白水平更低,与单纯冬凌草甲素处理的SW1116细胞比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论冬凌草甲素通过抑制SHH信号通路抑制结肠癌细胞增殖和克隆能力。     

吉西他滨对乳腺癌细胞凋亡作用及其对Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的探讨吉西他滨对乳腺癌细胞凋亡作用及其对Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法应用MTT比色检测法测定不同浓度(0、5、10、100、250)μmol/L不同作用时间(24 h、48 h、72 h)下吉西他滨对MCF-7人乳腺癌不同时期细胞生长抑制作用,倒置显微镜观察吉西他滨对MCF-7细胞形态学的影响,流式细胞仪测定MCF-7细胞凋亡情况,应用Western blot法及免疫荧光法对Bcl-2、Bax蛋白进行定性及定量分析。结果 MTT结果显示,吉西他滨能有效抑制MCF-7细胞增殖,且呈剂量及时间依赖性。在倒置显微镜下观察吉西他滨作用MCF-7细胞后,细胞呈通透性增加,形态不规则,细胞脱落破碎等改变。MCF-7乳腺细胞培养24 h后应用流式细胞仪可观察到5μmol/L、10μmol/L吉西他滨组细胞凋亡率分别为(34.25±3.89)%、(45.89±4.32)%显著高于对照组(4.02±0.39)%,差异有统计学意义(t=5.269,7.452,P0.05)。Western blot法显示MCF-7细胞中Bax蛋白表达增多,而Bcl-2蛋白表达减少。免疫荧光法显示在细胞培养24 h后随着吉西他滨浓度增加,Bax蛋白表达强度增加,而Bcl-2蛋白表达强度减弱。结论吉西他滨能有效抑制乳腺癌细胞增殖,诱导其凋亡,其诱导凋亡机制可能与上调Bax蛋白及下调Bcl-2蛋白有关。     

黄芩苷诱导HL-60细胞凋亡的分子机制研究

本研究旨在探讨黄芩苷对急性髓系白血病HL-60细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制。CCK-8法检测黄芩苷对HL-60细胞增殖抑制情况;普通光学显微镜和Hoechst 33342染色后荧光显微镜下观察细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR方法检测凋亡相关基因caspase-3、caspase-9、Bcl-2、Bax mRNA表达;Westernblot检测Bcl-2、Bax、caspase-8及caspase-3剪切片段的蛋白表达。结果表明,黄芩苷对HL-60细胞具有明显的增殖抑制作用,呈浓度和时间依赖性;在光学显微镜和荧光显微镜下细胞均呈凋亡的形态学改变;AnnexinⅤ/PI法检测到细胞早期凋亡;caspase-3、caspase-9、Bax基因mRNA表达水平呈上升趋势,Bcl-2 mRNA表达水平呈下降趋势,Bax、caspase-8及capsase-3剪切片段蛋白表达上调,同时Bcl-2蛋白表达下调,Bcl-2/Bax比值降低。结论:黄芩苷显著抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与降低Bcl-2/Bax比值,激活线粒体凋亡途径及死亡受体途径有关。     

大黄素对Jurkat细胞凋亡的诱导作用及其机制的初步研究

本研究探讨中药大黄素（emodin）对T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株增殖、凋亡的影响及其作用机制。应用MTT法检测细胞增殖能力;DNA片段化检测和末端缺口原位标记（TUNEL）法分析细胞凋亡;蛋白印迹法（Western blot）检测BCL-2、C—MYC、hTERT、caspase蛋白前体procaspase-8、procaspase-9、procaspase-3和caspase-3剪切片段以及PARP等蛋白的表达水平。结果表明：大黄素能明显抑制Jurkat细胞增殖,对Jurkat细胞的半数抑制浓度（IC50）约为20μmol／L。DNA片段化的检出及TUNEL凋亡细胞的检出证实了大黄素能有效诱导Jurkat细胞凋亡,细胞凋亡率在一定的药物浓度范围内（0—80μmol／L）与药物作用浓度和作用时间呈正相关。Western blot检测结果显示,BCL-2、C—MYC和hTERT蛋白在大黄素作用后表达水平下降,caspase家族的蛋白前体procaspase-3、8、9表达均下降,而激活后的活性片段caspase-3则表达上调。结论：大黄素能有效抑制Jurkat细胞增殖,诱导其凋亡。其机制可能与下调BCL-2、C—MYC、hTERT等凋亡相关蛋白表达,激活caspase家族特别是caspase-3活性片段蛋白表达有关。     

过氧化物酶体增殖因子激活受体γ介导5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素诱导人卵巢癌CoC1细胞凋亡的研究

目的 探讨5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素(ADFMChR)诱导人卵巢癌CoC1细胞凋亡作用的分子机制.方法 采用MTT法测定ADFMChR对卵巢癌CoC1细胞系细胞增殖抑制作用;DNA琼脂糖凝胶电泳证实ADFMChR诱导CoC1细胞凋亡作用;Western印迹检测ADFMChR对CoC1细胞过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)、Bcl-2及Bax蛋白表达的影响.结果 MTT法显示ADFMChR呈剂量依赖性抑制CoC1细胞增殖作用,IC50值为7.76 μmol/L;ADFMChR(30.0 μmol/L)处理CoC1细胞48 h的DNA琼脂糖凝胶电泳呈现典型"梯形"条带,加用PPARγ阻断剂(GW9662)后条带消失;Western印迹分析ADFMChR作用CoC1细胞后PPARγ和Bax蛋白表达上调,而Bcl-2蛋白表达下调(P<0.05或P<0.01);GW9662具有阻断ADFMChR对Bcl-2的下调和Bax上调作用.结论 ADFMChR通过活化PPARγ,进而减少Bcl-2/Bax比例,诱导CoC1细胞凋亡.     

冬凌草甲素诱导多发性骨髓瘤U266细胞、RPMI8226细胞增殖和凋亡实验研究

目的 探究冬凌草甲素对多发性骨髓瘤(MM)U266细胞、RPMI8226细胞增殖和凋亡的影响。方法 通过细胞培养和处理方法,采用0、10、20、30、40、50μmol/L的冬凌草甲素处理MM相关U266细胞、RPMI8226细胞48 h。采用MTT法测定U266细胞、RPMI8226细胞的增殖情况,采用Annexin V-FITC/PI染色试剂盒检测U266细胞、RPMI8226细胞凋亡情况,并采用蛋白质印迹法测定Bax、Bcl-2蛋白表达。结果 处理48 h后,随着冬凌草甲素浓度(10～50μmol/L)的增加,U266细胞、RPMI8226细胞的细胞增殖抑制率、细胞凋亡率均显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。处理48 h后,随着冬凌草甲素浓度(10～50μmol/L)的升高,促凋亡蛋白Bax表达量逐渐升高,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达量逐渐降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 冬凌草甲素具有抑制MM细胞增殖和诱导细胞凋亡的潜力,其作用机制可能与促进Bax表达,抑制Bcl-2表达,改变细胞Bcl-2/Bax比例,调节细胞凋亡有关。     

抑制Shh信号通路增加胰腺癌细胞对紫杉醇敏感性的实验研究

目的研究抑制音猬因子(Shh)信号通路对胰腺癌细胞紫杉醇敏感性的影响。方法给予人胰腺癌SW1990细胞0、10 nmol/L、20 nmol/L、40 nmol/L、80 nmol/L、160 nmol/L的紫杉醇刺激,MTT测定细胞增殖情况,计算其半数抑制浓度约为50 nmol/L。用Western blot方法测定0、50 nmol/L紫杉醇处理后细胞中Shh信号通路蛋白Shh、锌指转录因子1(Gli1)、补丁蛋白1(Ptch 1)的表达水平。分别用紫杉醇、Shh信号通路抑制剂cyclopamine处理SW1990细胞,用紫杉醇和cyclopamine共同处理SW1990细胞,MTT测定增殖,克隆实验测定细胞克隆能力,流式细胞术测定细胞凋亡,Western blot测定细胞中剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Shh、Gli1、Ptch 1蛋白水平。结果 10 nmol/L、20 nmol/L、40 nmol/L、80 nmol/L、160 nmol/L的紫杉醇抑制SW1990细胞的增殖,50 nmol/L的紫杉醇可以抑制细胞中Shh、Gli1、Ptch 1蛋白表达。紫杉醇和cyclopamine单独处理后的细胞增殖能力和克隆形成能力降低,细胞凋亡增多,细胞中Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平升高。与紫杉醇和cyclopamine单独处理的细胞比较,紫杉醇和cyclopamine共同处理后的细胞增殖和克隆能力下降更多,细胞凋亡率更高,细胞中Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平更高,细胞中Shh、Gli1、Ptch 1蛋白水平更低。结论抑制Shh信号通路能够增加胰腺癌细胞对紫杉醇的敏感性。     

辣椒素对人结肠癌SW-480生长及Bcl-2/Bax表达的影响

目的 探讨辣椒素对人结肠癌SW-480细胞的作用及机制。方法 用四甲基偶氮唑蓝（MTT）方法检测SW-480细胞生长情况;透射电镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪分析细胞凋亡;蛋白印迹法（Western blot）检测细胞内Bcl-2、Bax蛋白表达。结果辣椒素对SW-480细胞有明显生长抑制及诱导凋亡作用,并呈剂量、时间依赖性;光镜与电镜下可见到明显的凋亡细胞;琼脂糖凝胶电泳显示出特征性凋亡梯状带,随着作用时间延长,细胞内Bax蛋白表达逐渐增高、Bcl-2蛋白表达逐渐降低。结论辣椒素能明显抑制人结肠癌SW-480细胞生长,诱导细胞凋亡可能是其主要作用机制,调节Bcl-2、Bax蛋白表达是其诱导细胞凋亡的作用机制之一。     

IL-21诱导SUDHL-4细胞凋亡的作用及其机制

目的 探讨IL-21对弥漫大B淋巴瘤(DLBCL)细胞系SUDHL-4细胞凋亡的影响及其相关机制.方法 用不同浓度IL-21(终浓度1、10、100、1000 ng/m1)处理SUDHL-4细胞不同时间(24、48、72 h),用CCK-8试剂盒检测细胞增殖抑制率,绘制细胞增殖抑制曲线,计算Ic50值;用流式细胞术检测细胞凋亡;用Western blot法检测IL-21处理后SUDHL-4细胞caspase-9、caspase-3、cleaved caspase3、Bcl-2、Bcl-XL、Bid、Bax和c-myc蛋白表达.用RT-PCR法检测Bcl-2、Bcl-XL、Bid、Bax、c-myc和Survivin基因mRNA表达.结果 IL-21可明显抑制SUDHL-4细胞增殖,且呈时间.剂量依赖性,其48 h半数抑制浓度(1C50)为140.9 ng/ml.流式细胞术分析发现100.g/ml IL-21处理的SUDHL-4细胞48 h凋亡率(Annexin V-FITC+细胞率)明显增加[(19.7±2.3)%],同时caspase-9、caspase.3、Bcl-2和Bcl-XL蛋白表达减低,均呈时问依赖性.cleaved caspase-3从48 h开始出现明显的剪切带;Bax和c-myc蛋白表达明显增高,而Bid蛋白表达变化不明显.RT-PCR检测显示IL-21上凋c-myc和Bax基因mRNA的表达,下调Bcl-2和Bci-XL基因mRNA的表达,Bid和Survivin基因mRNA表达变化不明显.结论 IL-21可抑制SUDHL-4细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用可能是通过c-myc和Bcl-2基因调节的线粒体途径实现.     

Caspase-dependent apoptosis induction by guggulsterone, a constituent of Ayurvedic medicinal plant Commiphora mukul, in PC-3 human prostate cancer cells is mediated by Bax and Bak

The present study was undertaken to gain insights into the molecular mechanism of cell death (apoptosis) by guggulsterone, a constituent of Ayurvedic medicinal plant Commiphora mukul, using PC-3 human prostate cancer cells as a model. The viability of PC-3 cells, but not a normal prostate epithelial cell line (PrEC), was reduced significantly on treatment with guggulsterone in a concentration-dependent manner. Guggulsterone-mediated suppression of PC-3 cell proliferation was not due to perturbation in cell cycle progression but caused by apoptosis induction characterized by appearance of subdiploid cells and cytoplasmic histone-associated DNA fragmentation. Guggulsterone-induced apoptosis was associated with induction of multidomain proapoptotic Bcl-2 family members Bax and Bak. Interestingly, the expression of antiapoptotic proteins Bcl-2 and Bcl-xL was initially increased in guggulsterone-treated PC-3 cells but declined markedly following a 16- to 24-hour treatment with guggulsterone. Ectopic expression of Bcl-2 in PC-3 cells failed to confer significant protection against guggulsterone-induced cell death. On the other hand, SV40 immortalized mouse embryonic fibroblasts derived from Bax-Bak double knockout mice were significantly more resistant to guggulsterone-induced cell killing compared with wild-type cells. Guggulsterone treatment resulted in cleavage (activation) of caspase-9, caspase-8, and caspase-3, and guggulsterone-induced cell death was significantly attenuated in the presence of general caspase inhibitor as well as specific inhibitors of caspase-9 and caspase-8. In conclusion, the present study indicates that caspase-dependent apoptosis by guggulsterone is mediated in part by Bax and Bak.     

哇巴因诱导Jurkat细胞凋亡与胱冬酶-3及bcl-2基因家族的关系

本研究探讨哇巴因诱导Jurkat细胞凋亡及其机制。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法观察哇巴因对Jurkat细胞生长的抑制作用，应用流式细胞术、原位末端标记技术（TUNEL）等观察细胞凋亡，应用Western—blot测定胱冬酶-3（caspase-3）的活性亚单位及Bcl-2、Bax蛋白表达水平，用比色法检测caspase-3活性。结果表明：哇巴因能诱导Jurkat细胞凋亡，在细胞凋亡过程中，Bax蛋白表达增加，easpase-3活性明显升高。结论：哇巴因可能通过调节Bcl-2、Bax蛋白表达，从而激活caspase途径诱导Jurkat细胞凋亡。     

Shh信号阻断对胰腺癌PANC-1细胞生物学行为的影响

目的研究胚胎发育相关信号通路Sonichedgehog（Shh）对人胰腺癌细胞系PANC-1生物学行为的影响。方法试验组以cyclopamine阻断Shh信号通路,并设立对照,四唑蓝（MTT）比色试验检测Shh信号通路特异性抑制剂cyclopamine对胰腺癌细胞系PANC-1增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞增殖指数（PI）和凋亡指数（越）,Transwell侵袭小室检测两组PANC-1细胞侵袭能力的变化。结果cyclopamine对PANC-1细胞株增殖的抑制作用呈剂量和时问依赖性。cyelopamine作用后使胰腺癌细胞周期阻滞在G0／G1期,细胞凋亡增加;PANC-1的AI为15．2±0．54,PI为38．3±0．23（P〈0．05）.Transwell侵袭小室检测对照组穿透细胞数为（96±4）个,而实验组穿透数为（43±5）个。结论shh信号分子对胰腺癌细胞的增殖起维持作用;通过特异性阻断该信号通路,可以抑制胰腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡,并抑制癌细胞的侵袭能力。     

环靶明对前列腺癌PC3细胞株生长的影响及其作用机制研究

目的 观察环靶明(Cyclopamine)对体外培养的人前列腺癌PC3细胞株增生、细胞周期及凋亡率的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法不同浓度环靶明处理体外培养的前列腺癌PC3细胞后,用MTT法检测药物处理24,48和72 h后的细胞增殖活性; 流式细胞仪检测药物处理72 h后的细胞周期分布和细胞凋亡率; Real-time RT-PCR 法检测用药后细胞Gli1,Bax和Bcl-2 mRNA的表达变化。结果 经5,10和15 μmol/L的环靶明处理后,PC3细胞的生长抑制率明显升高,且与药物浓度高低和作用时间长短呈一定正相关关系; 环靶明作用于PC3细胞72 h后,15 μmol/L环靶明组G0/G1期细胞数量增加,S期、G2/M细胞数量下降; 5,10和15 μmol/L环靶明组的细胞凋亡率分别为7.54%±1.19%,12.47%±2.11%和24.15%±3.40%,与对照组相比,差异具有统计学意义(t=5.414,7.159,10.413,均P<0.05)。明还可在转录水平下调Bcl-2 mRNA和上调Bax mRNA的表达,促进细胞凋亡。结论 环靶明可抑制PC3细胞生长,其作用机制可能与阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡有关。     

Shh信号阻断对胰腺癌PANC-1细胞生物学行为的影响

目的研究胚胎发育相关信号通路Sonic hedgehog(Shh)对人胰腺癌细胞系PANC-1生物学行为的影响。方法试验组以cyclopamine阻断Shh信号通路,并设立对照,四唑蓝(MTT)比色试验检测Shh信号通路特异性抑制剂cyclopamine对胰腺癌细胞系PANC-1增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞增殖指数(PI)和凋亡指数(AI),Transwell侵袭小室检测两组PANC-1细胞侵袭能力的变化。结果cyclopamine对PANC-1细胞株增殖的抑制作用呈剂量和时间依赖性。cyclopamine作用后使胰腺癌细胞周期阻滞在G0/G1期,细胞凋亡增加;PANC-1的AI为15.2±0.54,PI为38.3±0.23(P<0.05)。Transwell侵袭小室检测对照组穿透细胞数为(96±4)个,而实验组穿透数为(43±5)个。结论shh信号分子对胰腺癌细胞的增殖起维持作用;通过特异性阻断该信号通路,可以抑制胰腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡,并抑制癌细胞的侵袭能力。     

Proteasome-mediated degradation of cell division cycle 25C and cyclin-dependent kinase 1 in phenethyl isothiocyanate-induced G2-M-phase cell cycle arrest in PC-3 human prostate cancer cells

Phenethyl isothiocyanate (PEITC), a constituent of many cruciferous vegetables, offers significant protection against cancer in animals induced by a variety of carcinogens. The present study demonstrates that PEITC suppresses proliferation of PC-3 cells in a dose-dependent manner by causing G(2)-M-phase cell cycle arrest and apoptosis. Interestingly, phenyl isothiocyanate (PITC), which is a structural analogue of PEITC but lacks the -CH(2) spacers that link the aromatic ring to the -N=C=S group, neither inhibited PC-3 cell viability nor caused cell cycle arrest or apoptosis. These results indicated that even a subtle change in isothiocyanate (ITC) structure could have a significant impact on its biological activity. The PEITC-induced cell cycle arrest was associated with a >80% reduction in the protein levels of cyclin-dependent kinase 1 (Cdk1) and cell division cycle 25C (Cdc25C; 24 h after treatment with 10 micro M PEITC), which led to an accumulation of Tyr(15) phosphorylated (inactive) Cdk1. On the other hand, PITC treatment neither reduced protein levels of Cdk1 or Cdc25C nor affected Cdk1 phosphorylation. The PEITC-induced decline in Cdk1 and Cdc25C protein levels and cell cycle arrest were significantly blocked on pretreatment of PC-3 cells with proteasome inhibitor lactacystin. A 24 h exposure of PC-3 cells to 10 micro M PEITC, but not PITC, resulted in about 56% and 44% decrease in the levels of antiapoptotic proteins Bcl-2 and Bcl-X(L), respectively. However, ectopic expression of Bcl-2 failed to alter sensitivity of PC-3 cells to growth inhibition or apoptosis induction by PEITC. Treatment of cells with PEITC, but not PITC, also resulted in cleavage of procaspase-3, procaspase-9, and procaspase-8. Moreover, the PEITC-induced apoptosis was significantly attenuated in the presence of general caspase inhibitor and specific inhibitors of caspase-8 and caspase-9. In conclusion, our data indicate that PEITC-induced cell cycle arrest in PC-3 cells is likely due to proteasome-mediated degradation of Cdc25C and Cdk1, and ectopic expression of Bcl-2 fails to confer resistance to PEITC-induced apoptosis. Furthermore, the results of the present study point toward involvement of both caspase-8- and caspase-9-mediated pathways in apoptosis induction by PEITC.     

多西他赛联合恩度对前列腺癌PC-3细胞的体外作用

目的探讨多西他赛联合恩度对前列腺癌PC-3细胞的作用及其可能机制。方法将体外培养的PC-3细胞随机分为恩度组、多西他赛组、恩度与多西他赛联合组、无药物干预对照组,分别采用MTT法、流式细胞术、RT—PCR和Western—Blot方法,检测各组细胞的增殖、凋亡及MMP-9、MRP、Bcl-2、BaxmRNA和Bcl-2、Bax蛋白表达。结果多西他赛与恩度对PC-3细胞增殖有呈时间依赖性的抑制作用,两药联合的抑制率高于单独用药（F=8．38～16．39,P〈O．05）,G2／M期细胞比例较对照组增加（F=210．60,q=4.08,P％0.05）。与恩度组、多西他赛组比较,恩度与多西他赛联合组的MMP～9、MRP、Bcl-2mRNA表达明显降低（F=48．32～201．27,q=8．47～16．87,P％0．05）,BaxmRNA表达明显升高（F=101．60,q=4．46～11．29,P〈0．05）,Bcl2蛋白表达明显降低（F=121．80,q=2．95～26．92,P〈0．05）,Bax蛋白表达明显升高（F=342．80,q=3．23～5．26,P〈0．05）。结论多西他赛与恩度对PC-3细胞的生长均有-定的抑制作用,两药联合应用的效果优于单独用药,其机制与降低MMP-9、MRP、Bcl2表达、增高Bax表达有关。     

Biochemical studies of apoptosis induced by tamoxifen in estrogen receptor positive and negative breast cancer cell lines

OBJECTIVES: Tamoxifen has been reported to show an efficacy in the treatment of breast cancer. Apoptosis could be a major mechanism of its antitumor effect. Therefore, this study has been designed to investigate the biochemical mechanisms of tamoxifen-induced apoptosis in both ER(+) MCF-7 and ER(-) MDA-MB468 breast cancer cell lines. METHODS: Trypan blue dye exclusion test, Annexin V-Fluorescein/PI flow cytometry, MTT assay and Hoechst 33258 staining were used to detect cytotoxicity and apoptosis. The activation of caspase-3 was assayed by colorimetric assay kit. Bcl-2 and Bax proteins were estimated by western immunoblotting method. RESULTS: Tamoxifen induced apoptosis in both cell lines (chi-square test, p < 0.05). Unlike the MCF-7 cells, which responded to the low concentration (1 microM), the treated MDA-MB468 cells have mainly been affected at a higher dose (20 microM) at which a significant increase was also obtained in the caspase-3 activity (chi-square test, p < 0.05). Interestingly, tamoxifen at doses higher than 2.5 microM increased cell proliferation in the MCF-7 cells. The levels of Bcl-2 and Bax remained unchanged. CONCLUSION: Since tamoxifen has induced apoptosis in both cell lines by different mechanisms, it might be concluded that there exists ER(+) and ER(-) pathways for the induction of apoptosis.