胃癌的细胞凋亡及Bcl-2,P53蛋白表达研究

维持胃粘膜的正常结构依赖于胃粘膜细胞的丧失和增殖的动态平衡．这一平衡的失调被认为是胃癌发生发展的重要病理机制．本文选择了65例胃癌标本进行细胞凋亡的形态学观察和凋亡调控基因bcl-2和P53蛋白表达检测，以了解细胞凋亡及其调控基因bcl-2和P53与胃癌组织学及临床的关系．1对象和方法1.1对象65例标本均来自本院内镜活俭并经手术证实的胃癌患者．其中男42例，女23例．年龄22岁～70岁，平均51.5岁±7．1岁．组织学分型：高分化腺癌23例，中分化腺癌16例，低分化及未分化腺癌26例．Lauren分型：肠型36例，弥漫型29例．胃癌的临床分期按…     

肝细胞癌P53，Bcl-2蛋白的表达和细胞凋亡

目的探讨肝细胞癌（ＨＣＣ）中细胞凋亡情况及其与Ｐ５３和Ｂｃｌ２蛋白表达的关系．方法细胞凋亡采用原位细胞凋亡检测法Ｐ５３和Ｂｃｌ２蛋白表达采用免疫组化方法．细胞凋亡与Ｐ５３，Ｂｃｌ２蛋白表达的关系采用双标记法进行检测．结果ＨＣＣ７０例，癌组织和癌周组织中细胞凋亡指数（１０００个细胞中）分别为３６±２０和１０６±３６．Ｂｃｌ２和突变型Ｐ５３蛋白检出率分别为２２９％和４２９％．Ｂｃｌ２主要表达在癌周组织中，抑制肝细胞凋亡；而Ｐ５３则仅表达在癌组织，抑制癌细胞凋亡．双染色显示细胞凋亡与Ｐ５３或Ｂｃｌ２不同时在一个细胞中表达．结论ＨＣＣ癌细胞凋亡减弱．突变型Ｐ５３蛋白是癌细胞凋亡减弱的主要原因，而Ｂｃｌ２则可能在维持ＨＣＣ的肝脏功能方面具有重要作用．     

HepG2与HepG2．2．15细胞中P53表达及活性的比较

目的探讨HBV对抑癌基因P53表达及活性的影响。方法选用HepG2及转染了HBV表达质粒的HepG2．2．15细胞，采用Western blotting法检测两种细胞P53的表达状况；磷酸钙法将报告基因质粒PG13-CAT和P21-LUC分别转染细胞，通过检测报告基因的表达观察各细胞中P53的活性。结果HepG2．2．15细胞中P53蛋白表达水平高于HepG2细胞，而且两种报告基因的表达在HepG2．2．15细胞中也较高。结论HBV在肝癌细胞内的复制对P53的表达及功能具有一定的增强作用。     

ASPP蛋白家族的研究进展

P53凋亡刺激蛋白(apoptosis stimulating protein of P53,ASPP)家族是新近发现的与P53有关的肿瘤抑制基因家族．P53是目前公认的肿瘤抑制基因,他能诱导细胞周期阻滞或直接诱导细胞凋亡,但其如何作用这两种不同选择的机制一直不清,直到ASPP家族的发现,才使这一问题逐渐明了．ASPP与P53的作用主要是能特异性增强P53的细胞凋亡功能,而对P53的细胞生长停滞功能则没有影响．     

三氧化二砷对人体胃肠癌细胞凋亡及P53、Bcl-2表达的影响

目的研究三氧化二砷（As2O3）在人体内诱导胃癌、结肠癌细胞凋亡及对凋亡相关基因P53、Bel-2表达的影响,探讨其抗肿瘤作用机制。方法采用原位末端转移酶标记技术和免疫组化法分别检测As2O3用药前后胃癌和结肠癌细胞凋亡指数和凋亡相关基因P53、Bcl-2的表达变化情况。结果As2O3用药后胃癌、结肠癌细胞凋亡率分别为15．53％和16．76％,与用药前比较均有显著性差异（P〈0．05）;用药后胃癌、结肠癌细胞P53蛋白阳性表达率分别为35．42％和30．83％,与用药前的38．08％和31．58％比较无显著性差异（P〉0．05）;用药后胃癌、结肠癌细胞Bcl-2蛋白阳性表达率分别为23．80％和16．90％,与用药前比较显著下调,二者均具有显著性（P〈0．05）。结论As2O3在人体内可诱导胃癌和结肠癌细胞凋亡发挥抗肿瘤作用,其机制可能是通过调节bcl-2基因的表达来实现。     

原发性肝癌患者肝组织中乙型肝炎病毒X蛋白与P53蛋白的结合

癌抑制基因ｐ５３发生突变是导致肝癌发生的重要因素之一。突变的Ｐ５３基因的表达的Ｐ５３蛋白稳定性提高易被检出。作者前已报道，免疫组织化学分析１０例肝癌村本中ＨＢｘ蛋白基因全部阳性，但Ｐ５３蛋白仅有２例阳性。设想高度表达的ＨＢ蛋白有可能在肝组织中与ｐ５３蛋白作用形成了复合物。     

P53蛋白、C-erbB2蛋白在原发性肝癌、大肠癌中表达的流式细胞术定量研究

目的定量研究原发性肝癌、大肠癌P53蛋白、G-erbB2蛋白的表达．方法建立流式细胞术定量分析法检测15例原发性肝癌、22例大肠癌P53蛋白、C-erbB2蛋白的表达情况结果原发性肝癌组P53蛋白、C-erbB2蛋白的阳性率及平均阳性表达量分别为26．6％，0．69FI，20％，0．73FI，大肠癌组P53蛋白、C-erbB2蛋白的阳性率及平均阳性表达量分别为36．3％，0．86FI，31．8％，0．71FI；各例肿瘤细胞百分阳性表达率不同．结论流式细胞术是一种可定量分析原发性肝癌、大肠癌P53蛋白、C-erbB2蛋白表达的新方法     

野生型P53基因导入诱导血管平滑肌细胞凋亡

为观察野生型P53基因诱导血管平滑肌细胞凋亡的现象，探讨对生型P53基因导入抑制平滑肌细胞增殖的作用机理，构建了野生型P53基因的重组腺病毒载体，体外转染兔主动脉血管平滑肌细胞。应用流式细胞议分析细胞周期，氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入试验检测DNA合成，琼脂糖凝胶电泳观察DNA区带图谱，末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP切口末端标记技术原位检测细胞凋亡。结果发现，野生型P53基因重组腺病毒载体转梁平滑肌细胞后，细胞内DNA合成减少。流式细胞仪分析显示77％的平滑肌细胞生长停滞在G0／Gl期，约45％的细胞发生细胞凋亡。dUTP切口末端标记阳性细胞百分率为40％～50％。DNA在琼脂糖凝胶电泳中呈现阶梯状区带图谱。以上结果提示，野生型P53基因通过诱导细胞凋亡对血管平滑肌细胞增殖起抑制作用。     

重组人p53腺病毒抑制肝癌HepG2细胞增殖机制的研究

目的探讨重组人p53腺病毒(rAd-p53)抑制肝癌HepG2细胞增殖的作用机制.方法以高、中、低浓度(分别为3×1012VP、3×1011VP和3×1010VP)的rAd-p53处理肝癌HepG2细胞(分别为观察Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组),用免疫组化法检测周期素D1(cylinD1)、周期素E(cyclinE)蛋白在肝癌HepG2细胞中的表达,用MTT比色法观察rAd-p53对肝癌HepG2细胞生长的抑制作用,用流式细胞仪检测细胞周期分布;另设空白对照组.结果①rAd-p53对HepG2细胞有明显的抑制效应,且具有时间、剂量依赖关系.②观察Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组G1期细胞分别上升至75.8%、70.1%、66.5%,明显高于对照组(P<0.05);观察Ⅰ、Ⅱ组S期细胞分别下降至13.2%、20%,明显低于对照组(P<0.05).③观察Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组肝癌HepG2细胞cyclinD1蛋白水平分别减少45.6%、35.1%和26.3%,与对照组比较P均<0.05;cyclinE蛋白水平分别减少33.3%、27.1%和18.1%,与对照组比较P均<0.05.结论 rAd-p53对肝癌HepG2细胞有明显的抑制效应,其抑制效应具有时间、剂量依赖关系,其机制可能是通过抑制下游cyclinD1、cyclinE表达阻止细胞进入S期.     

直肠癌内分泌样癌细胞分化与P^53蛋白表达关系的研究

目的：研究直肠癌内分泌样癌细胞分化与Ｐ＾５３蛋白表达的关系及意义。方法：采用免疫组织化学ＡＢＣ法检测４４例福尔马林固定、石蜡包埋的直肠癌手术切除及活检组织中的嗜铬蛋白Ａ（ＣＧＡ）及Ｐ＾５３蛋白的表达。结果：Ｐ＾５３、ＣＧＡ阳性表达率分别为６８．２％和３８．６％：ＣＧＡ阳性及阴性直肠癌Ｐ＾５３表达率分别为８８．２％和５５．６％，两者比较Ｐ〈０．０２５Ｘ＾２检测；Ｐ＾５３ＣＧＡ在分化差的直肠癌中的表达     

实验性心衰大鼠中的心肌细胞凋亡及去甲肾上腺素含量的变化

目的 心肌在由代偿性肥厚到心衰的转变过程中,伴有明显的心肌细胞数目下降以及收缩力减低。我们假设心肌细胞数目的减少以及功能的丧失可能与心肌细胞凋亡数目增加有关,而血中去甲肾上腺素含量增高可能促进这一过程。方法 为了检验这个假说,我们在实验性高血压大鼠（EHR）模型的基础上,采用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（terminal deoxynucleotiyltransferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)观察了发生心衰的实验性高血压大鼠（EHR－F组）和同期未发生心衰的实验性高血压大鼠（EHR－NF组）的心肌细胞凋亡状况,同时用改良荧光法测定了EHR－F组、EHR－NF组以及对照组外周血及心腔内血中的去甲肾上腺素含量,以探讨血中儿茶酚胺含量与心肌细胞凋亡的关系以及二者在心衰发展过程中的作用。结果 对照组心肌中未发现有心肌细胞凋亡,而EHR－F组和EHR－NF组均有心肌细胞凋亡发生,但心衰组心肌细胞凋亡的数目明显高于对照组。大鼠经腹主动脉结扎2周后,未发生心衰的EHR－NF组大鼠外周及心仙血的去甲肾上腺素水平均显著性高于对照组（P＜0．05）,其外周和心内去甲肾上腺素含量之间无显著性差异;而出现心衰的大鼠其外周和心内去甲肾上腺素水平明显高于EHR－NF组,差异有极显著性意义（P＜0．01）,并且EHR－F组心内血的去甲肾上腺素水平均明显高于其外周血的去甲肾上腺素水平（P＜0．05）。结论 心肌细胞出现凋亡可能是心脏由代偿性心肌肥厚向心衰转变过程中的重要机制,去甲肾上腺素水平特别是心腔内去甲肾上腺素水平的升高可能与这一改变有关,并可能是其促进因素。     

肺癌抑癌基因P53产物的免疫组织化学研究

用ＡＢＣ免疫组织化学方法，以抗Ｐ＿（５３）蛋白单克隆抗体ＰＡｂ＿（１８０１）为探针，研究了抑癌基因Ｐ＿（５３）产物Ｐ＿（５３）蛋白在７８例各型肺癌组织中的表达情况，发现Ｐ＿（５３）蛋白在肺癌组织中有较高的表达，总阳性率达８０．８％。在正常细胞未能发现突变Ｐ＿（５３），因而考虑Ｐ＿（５３）基因点突变是肺癌细胞的重要标志物。除文献报道的小细胞肺癌外，其他型肺癌也有很大一部分为细胞质阳性。提示在肺癌发生过程中Ｐ＿（５３）基因及产物的异常起着很重要的作用。     

SUMO-1、MDM2和P53对5-Fu诱导细胞凋亡的影响

目的:探讨SUMO-1、MDM2和P53对化疗药5-Fu诱导的HepG2细胞凋亡的影响.方法:5-Fu诱导HepG2细胞产生凋亡,以质粒pCMV-HDM1B(pMDM2)和pcDNA3-His6-SUMO-1(pSUMO-1)转染细胞,应用Western blot检测经药物诱导及转染前后细胞中内源性P53蛋白的表达强度...     

奥曲肽对SGC-7901胃癌细胞中Fas,FasL及P53表达的影响

目的:探讨奥曲肽(OCT)对胃癌细胞SGC-7901中Fas,FasL,P53,P21,P27和C-Myc表达的影响.方法:流式细胞术和RT-PCR法分别用于检测经OCT(1×10-7 mol/L)处理前后胃癌细胞SGC-7901中Fas,FasL,P53,P21,P27,c-Myc阳性癌百分率、mRNA表达和蛋白表达及细胞周期G0/G1、S、G2/M的变化.结果:胃癌细胞SGC-7901经OCT诱导6、12、24和48 h垢,Fas和FasL mRNA表达均明显增加,P53 mRNA表达则显著减少,而P21,P27和c-Myc mRNA表达均无明显变化;胃癌细胞SGC-7901经OCT诱导12 h后,Fas和FasL蛋白相对表达强度也显著增加,P53蛋白相对表达强度则明显降低(5.5±0.3 vs 3.2±0.1,5.1±0.3 vs 4.5±0.1.3.3±0.2 vs 4.9±0.3,P＜0.05或0.01),而P21,P27和c-Myc蛋白相对表达强度均无明显改变.细胞周期G0/G1、S、G2/M在OCT处理前后的变化并不明显.结论:OCT能上调SGC-7901胃癌细胞中Fas和FasL表达,下调突变型p53表达,是其诱导凋亡作用的重要机制之一.     

Effects of low-dose hydroxychloroquine on expression of phosphorylated Akt and p53 proteins and cardiomyocyte apoptosis in peri-infarct myocardium in rats

BACKGROUND:

Low-dose hydroxychloroquine (HCQ) and ataxia-telangiectasia-mutated (ATM) protein kinase have recently been postulated to be beneficial for the prevention of the age-associated metabolic syndrome including hypertension, hypercholesterolemia and glucose intolerance; however, the effects of low-dose HCQ on the expression of ATM downstream phosphorylated Akt (protein kinase B) and p53 proteins and cardiomyocyte apoptosis in the peri-infarct myocardium remain unclear.

OBJECTIVE:

To explore the effects of low-dose HCQ on the expression of phosphorylated Akt and p53 proteins and cardiomyocyte apoptosis in the peri-infarct myocardium in a rat model.

METHODS:

Myocardial infarction (MI) was induced experimentally in a subset of rats, while others underwent sham operation (sham). Three days after operation, surviving Sprague-Dawley male rats were divided into MI+HCQ, MI, sham+HCQ and sham groups. MI+HCQ and sham + HCQ groups were treated with HCQ (3.4 mg/kg); and MI and sham groups were treated with phosphate buffered (ie, physiological) saline (10 mL/kg) by gavage every day for 12 weeks. The expression of phosphorylated Akt and p53 proteins and cardiomyocyte apoptosis in the peri-infarct myocardium was detected by Western blot and terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labelling, respectively.

RESULTS:

Twelve weeks after treatment, the expression of phosphorylated Akt protein was significantly increased (P<0.05). Expression of phosphorylated p53 protein was not significantly different (P>0.05) in the peri-infarct myocardium of the MI+HCQ group from that in the MI group. The cardiomyocyte apoptosis rate in the peri-infarct myocardium was significantly decreased in the MI+HCQ group compared with the MI group (P<0.05).

CONCLUSION:

Low-dose HCQ can significantly increase the expression of phosphorylated Akt protein without significantly impacting expression of phosphorylated p53 protein in the peri-infarct myocardium. Accordingly, it can inhibit cardiomyocyte apoptosis in the peri-infarct myocardium.     

保健灸法对更年期大鼠抗氧化能力及脑组织中p53蛋白表达的影响

目的观察保健灸法对更年期大鼠抗氧化能力及脑组织中p53蛋白表达的影响,以探讨保健灸法抗氧化及细胞凋亡的作用。方法SD雌性大鼠42只,其中青年组14只,12月龄28只,随机分为对照组和保健灸组。实验两个月后采用分光光度法检测各组大鼠血清中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性;采用免疫组化法检测脑组织中p53蛋白的表达水平。结果与青年组比较,更年期对照组大鼠血清中丙二醛(MDA)含量增多,超氧化物歧化酶(SOD)活性下降,脑组织中p53蛋白表达水平明显升高。与更年期对照组比较,更年期保健灸组丙二醛(MDA)含量降低,而超氧化物歧化酶(SOD)活性升高(P<0.05)。脑组织p53蛋白表达水平明显的下降。结论保健灸法具有抗氧化的功能,并且可通过调控p53蛋白的表达,抑制细胞的凋亡,延缓衰老。     

In vitro effect of radiation, antibody to epidermal growth factor receptor and Docetaxel in human head and neck squamous carcinoma cells with mutant P53 and over-expressed EGFR

Purpose  Radiotherapy is the most frequently used and cheapest treatment both for curative and palliative purposes in HNSCC. Despite advances in technology and intensive treatments with radiation, only half of the patients are cured. New therapeutic approaches focusing on the molecular mechanism that mediate tumour cell growth or cell death in combination with radiotherapy have been suggested. The effects of radiation, antibody to EGFR and Docetaxel as single treatment or in combinations on HNSCC cells were investigated. Methods  The established HNSCC cells with mutant (mt) P53 and over-expressed normal EGFR was used as the in vitro model. Gene expression profile, cell cycle progression and cell death were used as the indication of treatment outcome. Results  With c-DNA microarray of well-characterised functional genes, massive changes in the genes expression of HNSCC were detected. The alterations of gene expression profiles do not have any correlation neither on tumour cell growth nor cell death. HNSCC cells with mt P53 and over-expressed normal EGFR did not response to radiation, anti-EGFR monoclonal antibody and their combination therapy. Effective treatment could be obtained from single therapy with Docetaxel. No additive effects on cell cycle arrest or cell death were seen in the combination of Docetaxel to anti-EGFR antibody, radiation or anti-EGFR antibody + radiation. Conclusions  The c-DNA microarray analysis does not indicate any specific target or treatment effects of HNSCC with mt P53 and over-expressed normal EGFR. Single therapy, target at microtubules might be the most suitable treatment modulation in this tumour type.     

HepG2细胞表达蛋白HCVC体外活化肝星状细胞的研究

目的舰察HCV核心蛋白对肝星状细胞活化及合成细胞外基质的影响,为进一步研究HCV核心蛋白的致肝纤维化机制提供实验依据。方法采用双抗体夹心ELISA检测HepG2一HCVC细胞株培养液中TGF-{31的表达。用HepG2-HCV-C和HepG2两株细胞培养5d的上清液培养人肝星状细胞系LX2细胞,同时用DMEM培养LX一2细胞作对照,分别制备细胞爬片,采用免疫细胞化学染色（ICC）法检测I,X～2细胞中人a平滑肌肌动蛋白（a—SMA）、IV型胶原（ColIV）、结缔组织生长网子（CTGF）和纤维连接蛋白（FN）的表达;采用双抗体夹心EI．ISA检测LX-2细胞1～6d培养上清液中人ColIV、Ⅲ型前胶原肽（PⅢNP）、透明质酸（HA）和人层粘连蛋白（LN）的表达。所有数据采用SPSSll．0统计软件进行统计分析。结果双抗体夹心El。ISA检测HepG2-HCV-C细胞1～6d培养液中的TGFp1量为（110．00±111．45）pg／ml～（935．00±21．36）pg／ml,Helc）G2细胞为0～（124．16±11．81）pg／ml,差异有统计学意义（F一21984．81,P〈0．01）。1CC检测用HepG2-HCVC上清液培养的I．X～2细胞d—SMA、ColⅣ、CTGF和FN均为弥漫阳性,细胞染成深褐色;用HepG2培养的LX-2细胞呈局灶性棕黄色,DMEM培养的LX2细胞染色阴性。ELISA检测LX-2（HepG2-HCVC）组CollV、HA、LN和P11INP的值均显著高于LX2（HepG2）组和LX-2（DMEM）组（均P〈0．05或P〈0．01）。结论HCVC蛋白能上调TGF-β1的表达,表达C蛋白的细胞系能促进LX-2细胞多种细胞外基质（ECM）的合成。提示HCVC蛋白可能通过活化肝星状细胞,参与肝纤维化形成中多种ECM合成的调控。