抗纤灵药物血清对人肝癌细胞（HepG2）的体外生长抑制作用

目的研究抗纤灵的抑癌作用及分子机制.方法运用血清药理学及免疫组织化学等方法,观察抗纤灵药物血清对人肝癌细胞(HepG2)的体外生长抑制作用及对P21WAF1/CIP1蛋白表达的影响.结果含抗纤灵血清18,9,3g/kg对体外培养的HepG2细胞的细胞生长抑制率(%)分别为63.63±5.08,55.09士4.09,48.08士4.08,细胞毒活性(%)分别为48.06士4.08,38.09士5.01,25.00±4.13,其细胞毒活性均高于空白血清(P＜0.01).含抗纤灵血清各组细胞生长抑制率和细胞毒活性与环磷酰胺血清组比较,差异有显著性或无显著性.含抗纤灵血清18,9,3 g/kg各组HepG2p21WAF1/CIP1蛋白表达高于环磷酰胺血清组及空白血清组(P＜0.01).结论抗纤灵具有抑制人肝癌细胞体外生长的作用,其分子机制与该方提高HepG2p21WAF1/CIP1蛋白表达有关.     

抗纤颗粒对肺间质纤维化血清细胞外基质的影响研究

目的：观察特发性肺间质纤维化患者血清细胞外基质成分的改变及中药抗纤颗拄对其影响。方法：选择符合观察标准的病例33例，治疗组口服抗纤颗拄加小剂量强的松，健康对照组为来自我院的健康体检者。用放射免疫法测定患者的细胞外基质成分Ⅲ型胶原、Ⅳ型胶原(Ⅳ—C)、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)。结果：治疗组治疗前血清Ⅳ—C、Ⅲ—C、LN、HA含量明显高于对照组和治疗后(P＜0．001，P＜0．01，P＜0．05)。结论：特发性肺间质纤维化患者血清Ⅳ—C、Ⅲ—C、LN、HA含量明显增高。抗纤颗拉能够降低患者的细胞外基质。     

抗纤颗粒对肺间质纤维化血清细胞外基质的影响研究

目的 :观察特发性肺间质纤维化患者血清细胞外基质成分的改变及中药抗纤颗粒对其影响。方法 :选择符合观察标准的病例 33例 ,治疗组口服抗纤颗粒加小剂量强的松 ,健康对照组为来自我院的健康体检者。用放射免疫法测定患者的细胞外基质成分Ⅲ型胶原、Ⅳ型胶原 (Ⅳ -C)、透明质酸 (HA)、层粘连蛋白 (LN)。结果 :治疗组治疗前血清Ⅳ -C、Ⅲ -C、LN、HA含量明显高于对照组和治疗后 (P <0 .0 0 1,P <0 .0 1,P <0 .0 5 )。结论 :特发性肺间质纤维化患者血清Ⅳ -C、Ⅲ -C、LN、HA含量明显增高。抗纤颗粒能够降低患者的细胞外基质。     

抗纤灵药物血清对骨髓来源的成纤维细胞转化生长因子-β和Ⅰ型胶原的抑制作用

目的观察抗纤灵药物血清对骨髓来源的成纤维细胞转化生长因子-β（TGF-β）和Ⅰ型胶原（collagenⅠ）的抑制作用。方法将抗纤灵方煎至含原药材3.2 g/mL,福辛普利配成含药0.33 mg/mL,给大鼠灌胃（正常组给予蒸馏水灌胃）,制备抗纤灵血清、福辛普利血清和正常血清。用DMEM培养基稀释血清,将其分为正常血清组、福辛普利组、抗纤灵组、TGF-β1组、TGF-β1＋福辛普利组和TGF-β1＋抗纤灵组。以大鼠肾组织体外培养骨髓来源的成纤维细胞为材料,采用酶联免疫吸附法和实时荧光定量PCR法检测骨髓来源的成纤维细胞collagenⅠ和TGF-β的表达。结果加入TGF-β1刺激因子的细胞表达TGF-β和CollagenⅠ较正常大鼠血清组明显增强,抗纤灵及福辛普利药物血清可明显抑制其表达。结论抗纤灵药物血清可以通过抑制骨髓来源的成纤维细胞TGF-β的表达,减少细胞外基质collagenⅠ的沉积,从而延缓肾纤维化的进程。     

抗纤灵抗大鼠肾间质纤维化的实验研究

目的探讨中药复方抗纤灵治疗大鼠单侧输尿管结扎（unilateral ureteral obstruction,UUO）所致肾纤维化的作用及机理。方法雄性SD大鼠18只随机分为3组,每组6只。用单侧输尿管结扎术建立大鼠肾纤维化模型,抗纤灵治疗2周后检测血肌酐、尿素氮含量等指标;HE染色和六胺银染色观察肾组织病变;采用RT-PCR和Western印迹分别检测转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）、肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）mRNA和α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、TGF-β1受体（TβRⅠ及TβRⅡ）及肝细胞生长因子受体（C-Met）蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠血肌酐、尿素氮均有明显上升;肾小球毛细血管基底膜明显增厚;肾组织TGF-β1 mRNA及α-SMA、TβRI、TβRⅡ、C-Met蛋白袁达显著上调,而HGF mRNA水平显著下调。中药干预后,血尿素氮含量显著降低,肾小球和肾小管基底膜仅见轻度增厚;肾组织α-SMA、TβRⅠ、TβRⅡ蛋白表达明显减少,HGF mRNA水平明显上调。结论抗纤灵可抑制肾组织α-SMA、TβRⅠ、TβRⅡ蛋白表达并增加肾纤维化保护性因子HGF mRNA的表达,从而改善梗阻性大鼠的肾间质纤维化及肾功能。     

中药复方“松友饮”含药血清体外抑制高转移人肝癌MHCC97H细胞的实验研究

目的：研究中药复方＂松友饮＂含药血清对体外培养的人肝癌MHCC97H细胞增殖、侵袭潜能的影响。方法：以MHCC97H细胞构建裸鼠原位移植瘤模型,84只成模裸鼠随机平均分成对照组和＂松友饮＂组,肝脏接种肿瘤24 h内开始1次/天灌胃给药。在第1、4、7、14、21、28、35次灌胃结束后2h,每组分别处死6只裸鼠收集血样。应用含药血清体外干预MHCC97H细胞,检测细胞增殖、侵袭潜能变化。结果：＂松友饮＂灌胃给药1、4、7天的荷HCC裸鼠含药血清体外抑制HCC作用逐渐增强,给药7、14、21、28、35天的含药血清抑制作用无统计学差异。灌胃7天的＂松友饮＂含药血清抑制HCC增殖的作用与中剂量卡培他滨作用近似,抑瘤率分别为37.4%、41.1%。给药7天的含药血清抑制HCC侵袭潜能达到最强,＂松友饮＂组穿膜细胞数明显少于对照组,为26.0±3.6和37.3±2.8。结论：给药7天的含药血清达到稳态血药浓度,对MHCC97H细胞的体外抑制作用达到最强。     

软脉灵药物血清抑制PDGF诱导的平滑肌细胞迁移研究

目的观察软脉灵药物血清对血小板源性生长因子（PDGF）诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）迁移的影响。方法采用体外组织贴块法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞;应用灌胃法制备SD大鼠的软脉灵药物血清;应用改良Boyden微孔膜双槽法进行细胞迁移实验;用FITC-鬼笔环肽标记F—actin,并在激光共聚焦显微镜下观察PDGF诱导的VSMCs骨架形态的变化。结果含软脉灵药物血清可显著抑制PDGF—BB诱导的VSMCs迁移,呈现一定的浓度依赖性,10％药物浓度时抑制作用最明显,抑制率为61．42％（P〈0．01）。PDGF（10ng／mL）刺激后细胞即发生伸展,应力纤维增多,可见伪足形成;加入含软脉灵药物血清后可见到伪足及张力纤维减少,而且随着软脉灵浓度的升高,可见到伪足及张力纤维显著减少。结论软脉灵药物血清能显著抑制PDGF—BB诱导的VSMCs迁移和应力纤维形成。     

抗纤抑癌方调控HGF/c-Met mRNA干预肝癌前病变的实验研究

目的：观察抗纤抑癌方对肝癌前病变大鼠HGF/c-Met mRNA的影响,探讨抗纤抑癌方防治肝癌前病变的作用机制。方法：75只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、抗纤抑癌组、鳖甲软肝组和秋水仙碱组。以二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌前病变模型,用抗纤抑癌方进行干预,并以复方鳖甲软肝片、秋水仙碱片作为对照,采用免疫组化检测肝组织α-SMA的表达情况,实时荧光定量PCR检测各组大鼠肝脏的HGF和c-Met mRNA的表达量。结果：免疫组化显示,与模型组及秋水仙碱组比较,抗纤抑癌组能明显减少α-SMA表达量,差异有统计学意义（P<0.01,P<0.05）。实时荧光定量PCR结果显示,HGF mRNA的相对表达量抗纤抑癌组与模型组比较有统计学意义(P<0.05),与秋水仙碱组比较亦有统计学意义(P<0.05),抗纤抑癌方能显著提高肝癌前病变大鼠HGF mRNA的表达水平。c-Met mRNA在DEN造模的各组中均低表达,各组间差异无统计学意义（P>0.05）。结论：抗纤抑癌方能够提高肝癌前病变大鼠HGF mRNA的表达水平,这可能是其防治肝癌前病变的作用机制之一。     

正肝方药物血清诱导人肝癌细胞分化的体外实验研究

目的：探讨正肝方对Bel-7402人肝癌细胞分化的诱导作用,及对其端粒酶活性的影响。方法：正肝方水煎液灌喂正常大鼠,采血制备药物血清。以正常鼠血清为阴性对照,维甲酸(RA)为阳性对照,将药血清温育Bel-7402人肝癌细胞。噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖,图像分析系统测定细胞核质比,放射免疫法测定甲胎蛋白(AFP)含量,动态比色法测定γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)和碱性磷酸酶(ALP)活性,多聚酶链反应-酶联免疫吸附法(PCR—ELISA法)检测细胞端粒酶活性。结果：正肝方药物血清可抑制人肝癌细胞的增殖,显著降低细胞核质比,抑制细胞分泌AFP,降低细胞γ-GT活性,升高ALP活性,并有显著抑制人肝癌细胞端粒酶活性的作用。结论：正肝方具有诱导人肝癌细胞分化的作用,其主要机理可能是抑制了Bel-7402细胞端粒酶活性。     

贞芪酪蛋白肽药物血清诱导Bel-7402细胞分化的体外实验研究

目的:探讨贞芪酪蛋白复合肽对Bel-7402人肝癌细胞分化的诱导作用,及对其端粒酶活性的影响。方法:贞芪酪蛋白复合肽给正常大鼠灌胃,采血制备药物血清。以正常鼠血清为阴性对照,维甲酸(RA)为阳性对照,将药物血清温育Bel-7402人肝癌细胞。噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖,图像分析系统测定细胞核质比,放射免疫法测定甲胎蛋白(AFP)含量,动态比色法测定γ-谷氨酰转肽酶(-γGT)和碱性磷酸酶(ALP)活性,多聚酶链反应—酶联免疫吸附法(PCR-ELISA法)检测细胞端粒酶活性。结果:贞芪酪蛋白复合肽药物血清可抑制人肝癌细胞的增殖,显著降低细胞核质比,抑制细胞分泌AFP,降低细胞-γGT活性,升高ALP活性,并有显著抑制人肝癌细胞端粒酶活性的作用。结论:贞芪酪蛋白复合肽具有诱导人肝癌细胞分化的作用,其主要机理可能是抑制了Bel-7402细胞端粒酶活性。     

虎杖提取物抗人肝癌细胞株HepG-2作用的实验研究

目的:观察虎杖提取物体外抗HepG-2细胞的作用.方法:用高效液相色谱法测定虎杖不同给药时间段大鼠血清中大黄素含量,通过3H-TdR掺入法药敏试验观察虎杖提取物及含药血清体外抗HepG-2肿瘤细胞的作用.结果:虎杖提取物及虎杖含药血清对HepG-2细胞均有很好的抑制作用,其抑制率随着药物浓度增加而相应增高.虎杖提取物灌胃1小时后血液中浓度可达高峰.结论:虎杖提取物体外具有较强的抗肿瘤作用.     

三氧化二砷对人肝癌细胞黏附和侵袭影响的实验研究

目的探讨三氧化二砷(亚砷酸,As2O3)注射液是否具有抗肝癌细胞黏附和侵袭的作用及其相关机制。方法选用人类肝癌细胞株SMMC-7721细胞及裸鼠人类肝癌转移模型为研究对象,通过细胞运动迁移实验、细胞黏附实验和免疫组化方法观察As2O3对SMMC-7721细胞的运动迁移、与纤维粘连蛋白(FN)、内皮细胞黏附以及裸鼠人肝癌转移模型肝移植瘤表达CD44和MMP-2基因蛋白的影响。结果As2O3注射液可显著抑制SMMC-772l细胞在FN上的迁移运动和SMMC-7721细胞与FN、内皮细胞的黏附,并能降低裸鼠肝移植瘤CD44、MMP-2的表达。结论As2O3具有抗肝癌细胞黏附和侵袭的作用,其机制可能与As2O3能降低肝癌细胞表达CD44和MMP-2有关。     

苦参素与顺铂联合应用诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其机制

目的:探讨苦参素和顺铂联合应用诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其机制。方法:采用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,应用金氏公式分析药物间的相互作用,RT-PCR方法检测fas和caspase-3基因mRNA表达水平。结果:与单药组相比,联合用药对肝癌SMMC-7721细胞增殖抑制率明显增高(P<0.05),细胞凋亡率显著增高(P<0.05),并表现明显的协同作用,细胞fas和caspase-3基因mRNA表达水平明显上升(P<0.05)。结论:苦参碱与顺铂联合应用能明显诱导肝癌SMMC-772 l细胞凋亡并有协同作用,其机制可能与上调细胞fas和caspase-3基因表达有关。     

蜂毒素对人成骨肉瘤细胞体外增殖抑制作用的机制探讨

目的:探讨蜂毒素对人成骨肉瘤U2OS细胞体外增殖抑制作用的机制。方法:通过MTT法检测蜂毒素对骨肉瘤U2OS细胞的增殖抑制率,倒置显微镜下观察细胞生长状态,免疫细胞化学法检测PCNA表达变化,流式细胞仪检测细胞周期,透射电镜观察细胞超微结构变化。结果:蜂毒素能明显抑制U2OS细胞增殖,下调PCNA表达,造成S期细胞堆积。经蜂毒素处理后的U2OS细胞,在透射电镜下见染色质边集,有凋亡小体出现。结论:蜂毒素能够抑制骨肉瘤U2OS细胞增殖,其作用机制可能与其下调PCNA表达,将细胞周期阻滞于S期以及诱导细胞凋亡的作用有关。     

软坚消瘤片药物血清对乳腺癌MCF-7细胞生长的机制研究

目的：通过观察软坚消瘤片药物血清对乳腺癌MCF-7细胞的芳香化酶和雌激素受体基因的表达、细胞增殖周期及细胞凋亡的影响,探讨软坚消瘤片治疗乳腺肿块性疾病的可能机制。方法：制备软坚消瘤片含药动物血清,以体外培养的MCF-7细胞为研究对象,以qRT-PCR法检测乳腺癌细胞芳香化酶（CYP19）及雌激素受体（ER）mRNA表达水平;流式细胞术（FCM）测定细胞增殖周期和凋亡水平;MTS实验测定细胞生长曲线。结果：与空白对照组比较,含药血清组作用细胞24h后能明显抑制乳腺癌细胞株MCF-7的CYP19mRNA、ERmRNA表达水平,表达水平分别降低0.32和0.09倍;药物血清作用48h后S期和G2/M期细胞所占比例降低,尤以G2/M期最为显著,相应的G0/G1期细胞增加,药物血清抑制了细胞增殖的正常进行;凋亡实验示细胞早期凋亡率增加,药物血清组总体凋亡率高于对照组;药物血清作用细胞48h以后细胞生长曲线幅度开始明显低于对照组,在96h时抑制效果最明显。结论：软坚消瘤片药物血清影响乳腺癌MCF-7细胞的雌激素合成及其作用发挥,同时抑制一定时段的细胞生长。     

六味地黄汤含药血清对软骨细胞增殖、凋亡影响的体外实验研究

目的:研究六味地黄汤含药血清对软骨细胞增殖、凋亡的影响。方法:取1月龄新西兰兔关节软骨经胶原酶Ⅱ消化,建立软骨细胞体外培养体系,随机分为3组,分别加入培养液、空白血清和中药血清继续培养72小时后,用MTT比色法检测其OD值变化,采用流式细胞仪检测软骨细胞凋亡及细胞周期的变化。结果:中药血清组的OD值显著高于正常对照组、空白血清组(P<0.05);流式细胞仪细胞周期检测显示中药血清能够刺激软骨细胞由G0/G1期进入S期和G2/M期,并呈现时间的依赖性,其G0/G1期细胞比例降低,S期与G2/M期细胞之和增加,与空白血清组对比有显著性差异(P<0.05)。结论:六味地黄汤能有效促进软骨细胞增殖、抑制软骨细胞凋亡。     

大黄虫丸含药血清对体外人肺腺癌PAa细胞株的影响

目的:实验通过大黄虫丸含药血清干预体外人肺腺癌PAa细胞株研究其抗肿瘤机制,进而探讨活血化瘀法在肿瘤治疗中的疗效和价值。方法:采用血清药理学方法以不同浓度的大黄虫丸含药血清与人肺腺癌PAa细胞株共同孵育,于不同时间观察,并与空白血清作对照。研究大黄虫丸含药血清对体外人肺腺癌PAa细胞株的细胞毒作用、生长抑制作用及对细胞周期的影响。结果:5%～20%各组含药血清OD值与相同作用时间10%牛血清、相同浓度的正常鼠血清OD值比较有明显差异(P<0.05～0.01),并随着血药浓度的提高OD值逐渐减低;药血清对人肺腺癌PAa细胞株增殖有明显抑制作用,并随药血清浓度提高、作用时间延长抑制作用增强;其诱导凋亡作用随药血清浓度的增加及作用时间的延长而增强。结论:大黄虫丸含药血清对体外人肺腺癌PAa细胞株有明显抑制作用,为大黄虫丸抗肿瘤提供了科学依据。