细胞因子联合对4.5Gyγ射线照射比格犬造血损伤的治疗作用

目的 观察细胞因子组合对4.5 Gy γ射线照射比格犬造血系统损伤的治疗效果,为极重度骨髓型急性放射病的临床救治提供实验依据。方法 16只比格犬均给予4.5 Gy ⁶⁰Co γ射线全身照射,随机分为照射对照、综合对症和细胞因子3组。细胞因子组动物在综合对症支持治疗的基础上应用rhG-CSF、rhIL-11和rhIL-2联合治疗。2 d检测1次外周血象,分别于照射前4 d,照射后1和45 d收集骨髓和外周血进行造血细胞集落培养,制备胸骨病理切片观察组织形态学改变。结果 照射后各组动物外周血各类细胞数急剧下降,细胞因子联合治疗可提高白细胞最低值(1.04×10⁹/L,而照射对照组和综合对症组分别为0.28×10⁹/L和0.68×10⁹/L),缩短血小板减少持续时间(细胞因子组24 d,综合对症组33 d),使红细胞维持在正常值范围;照射后1 d骨髓及外周血中造血干细胞集落形成率明显下降,照射后45 d 2个治疗组造血干细胞集落数均恢复为照射前水平;照射对照组动物骨髓造血细胞完全消失,细胞因子治疗使得骨髓造血功能完全恢复,与照射前水平比较差异无统计学意义。结论 rhG-CSF、rhIL-11和rhIL-2联合应用可提高极期时外周血白细胞最低值,加速白细胞、血小板和红细胞恢复,促进4.5 Gy γ射线照射犬体内残留造血干/祖细胞的增殖、分化和成熟,从而加速造血功能的重建。rhG-CSF、 rhIL-11和rhIL-2不失为治疗极重度骨髓型急性放射病的有效措施。     

细胞因子治疗4.5Gyγ射线照射比格犬造血损伤的机制初探

目的 探讨多种细胞因子配伍应用治疗4.5 Gy γ射线照射比格犬造血系统损伤的作用及可能机制。方法 16只比格犬均给予4.5 Gy ⁶⁰Co γ射线全身照射,随机分为照射对照、综合对症和细胞因子3组。细胞因子组在综合对症支持治疗的基础上应用rhG-CSF、rhIL-11和rhIL-2联合治疗,采用流式细胞术检测外周血中CD34+细胞含量、有核细胞周期及凋亡比例。结果 4.5 Gy γ射线照射犬外周血中CD34+细胞含量在照射后1 d明显下降(照射对照组和综合对症组分别为照前值的61.3%和52.1%),G₀/G₁期有核细胞比例增加(分别为99.27%和99.49%),且凋亡率(分别为26.93%和21.29%)和坏死率(分别为3.27%和4.14%)明显升高(与照前值比较, P<0.05);而经过细胞因子治疗后,外周血中CD34+细胞含量在照射后1 d即明显升高(为照前值的135.6%),G₀/G₁期有核细胞比例(99.71%)进一步增加,其凋亡率(5.66%)和坏死率(1.60%)明显低于照射对照和综合对症组。结论 本研究的细胞因子组合可能通过动员骨髓中CD34+细胞到外周血,使细胞周期阻滞在G₀/G₁期,减少细胞凋亡,从而促进极重度骨髓型急性放射病犬造血功能的恢复。     

rhIL-11和rhG-CSF对中子照射致小鼠骨髓损伤的治疗作用

目的 探讨rhIL-11和rhG-CSF对中子照射致小鼠骨髓损伤的治疗作用。方法 将BALB/c小鼠130只用随机数字表法分为对照组(30只)、照射组(40只)、rhIL-11治疗组(30只)、rhIL-11+rhG-CSF治疗组(30只),用3.0 Gy中子照射,并于照射后给予600 μg·kg^－1·d^－1 的rhIL-11和50 μg·kg^－1·d^－1的rhG-CSF,1次/d,共3 d;用血细胞自动分析仪、HE染色、AgNOR染色、流式细胞术、免疫组织化学染色和图像分析等,检测小鼠外周血细胞、骨髓病理形态变化、有核细胞计数、AgNOR含量、凋亡与坏死率和Bax蛋白含量的变化。结果 照射组和rhIL-11治疗组于照射后6 h～3 d,小鼠外周血白细胞、骨髓有核细胞计数和AgNOR含量进行性下降,Bax蛋白于造血细胞胞质内呈阳性至强阳性表达,含量进行性增加(F=0.003,P＜0.01);照射后6 h,照射组小鼠造血细胞凋亡与坏死率增加,以坏死为显著;照射后3 d,rhIL-11+rhG-CSF治疗组小鼠的骨髓有核细胞计数和AgNOR含量均增加(F=0.037、0.026,P＜0.05),Bax蛋白含量减少(F=0.018,P＜0.05);rhIL-11治疗组各指标较照射组差异无统计学意义。结论 3.0 Gy中子照射可使小鼠骨髓造血功能严重受损,rhIL-11和rhG-CSF对照射后小鼠的造血功能恢复有一定改善作用,联合使用效果优于单独使用。     

造血因子治疗中子急性放射病的实验研究

目的通过观察造血生长因子-重组人白细胞介素-11(rhIL-11)和重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)联合应用的方法对中子急性放射病狗的治疗效果,探讨中子损伤治疗的救治方法。方法14只雄性成年比格狗随机分为照射对照和rhIL-11+rhG-CSF治疗组。所有动物均接受90%裂变中子照射,治疗组于照后当天开始每天1次皮下注射rhG-CSF10μg·kg-1·d-1和rhIL-1150μg·kg-1·d-1,给药时间分别为14和21d。照射后观察动物的外周血象、外周血CD4+/CD8+比值变化、骨髓CFU-E及组织病理学改变。结果照射后早期对照组动物全部发生不同程度的呕吐,治疗组仅1只动物呕吐。照射后30d照射对照组死亡3只,治疗组动物全部存活。照后治疗组外周血白细胞数和恢复期血小板数明显高于照射对照组。照射后1、21和33d治疗组外周血CD4+/CD8+比值分别为照射对照组1·24、1·55和2·15倍。照射后1和33d治疗组动物骨髓CFU-E分别为照射对照组的5·25和2·34倍(P<0·01)。结论rhIL-11+rhG-CSF联合给药可明显促进中子照射所致骨髓型急性放射病狗的造血和免疫功能恢复,为细胞因子应用于中子急性放射病的临床治疗提供了实验依据。     

rhIL-11+rhG-CSF对中子急性放射病狗的治疗作用

目的　探讨rhIL-11与rhG-CSF联用对中子急性放射病(ARS)的治疗作用。方法　18只雄性成年比格狗,随机分为照 射对照组、对症治疗组和两因子+对症联合治疗组。所有动物均接受90%中子照射,吸收剂量为2.0Gy。联合治疗组动物于照射后 即刻开始皮下注射rhG-CSF10μg/(kg·d)和rhIL-1150μg/(kg·d),给药时间分别为14天和21天,观察照射后动物外周血象及骨髓 有核细胞形成CFU-GM能力的变化。结果　对症治疗组和联合治疗组动物全部存活,而照射对照组动物30天存活率为57.1%。照 射后联合治疗组各检测点外周血白细胞数及恢复期血小板和红细胞数均明显高于照射对照组及对症治疗组。照射后1天,联合治疗 组骨髓CFU-GM数量是两个对照组的6倍(P<0.01),33天分别是照射对照组、对症治疗组的1.75和1.46倍(P<0.01)。结论　 rhIL-11与rhG-CSF联合给药可以升高2.0Gy裂变中子照射狗的外周血白细胞、血小板数的最低值,缩短白细胞最低值持续的时间, 加速骨髓造血功能的恢复,对2.0Gy中子照射狗有明显的治疗作用。     

4.5Gyγ射线照射后比格犬凝血机制的改变

目的 比格犬4.5 Gy γ射线照射后,经综合对症和细胞因子2种治疗,观察其凝血机制的改变。方法 血小板体外聚集实验、血栓弹力图(TEG)描记分法、出凝血时间检测。结果 照后7 d照射对照组、综合对症组血小板聚集率明显降低,TEG凝固时间(k)值升高,而细胞因子治疗组则变化不明显。照射后14 d照射对照组TEG各项参数变化最为明显,表现为凝血反应时间(r)、凝固时间(k)、r+k和血栓最大凝固时间(M)值大幅度升高,凝血时间、血栓最大凝固时间延迟,血栓最大弹力度(Ma)值大幅度下降,血栓最大弹力幅度减小。细胞因子治疗组各项参数均好于综合对症组。照射对照组照射后14 d凝血酶时间明显延长,综合对症和细胞因子组于照后2~3周凝血酶时间最长,两组间差异无统计学意义。照后42 d,血小板体外聚集实验综合对症组75%动物血小板聚集功能处于极低水平(正常值的20%以下),而细胞因子对症组仅有33%动物血小板聚集功能处于极低水平。结论 细胞因子新组合治疗可明显改善急性放射病比格犬血小板聚集和凝血功能。     

重组人白细胞介素-11和姜黄素对中子照射致小鼠肠道损伤的治疗作用

目的 探讨重组人白细胞介素-11(rhIL-11)和姜黄素对中子照射致小鼠肠道损伤的治疗作用。方法 选取二级雄性BALB/c小鼠140只,随机分为健康对照组(20只)、单纯照射组(60只)、IL-11治疗组(30只)和姜黄素治疗组(30只)。单纯照射组小鼠采用3 Gy中子全身均匀照射,两个治疗组于照射后即日分别腹腔注射500μg·kg^-1·d^-1的rhIL-11或200 mg·kg^-1·d^-1的姜黄素,每天1次,连续给药5d。观察各组动物的死亡率。照射后6 h、1、3和5 d分别处死健康对照组和单纯照射组动物,3和5 d分别处死两个治疗组动物。取空肠标本,用HE深色、核仁组成区嗜银蛋白染色、Feulgen氏染色和图像死亡分析等,检测空肠病理形态变化、空肠上皮细胞核内嗜银蛋白含量和DNA含量变化。结果 照后5d,单纯照射组小鼠全部死亡,rhIL-11治疗组存活剩余2只,姜黄素治疗组存活剩余3只。3Gy中子照射后6 h～3 d内,空肠黏膜大面积坏死脱落,3d偶见隐窝细胞再生,5d见较多新生隐窝;IL-11治疗组在照后3d隐窝再生较明显,5d见大量新生绒毛;姜黄素治疗组在照后3d隐窝有部分再生,5d可见新生绒毛,排列结构较IL-11治疗组紊乱,绒毛高度较IL-11治疗组略低。照后5d,两个治疗组小鼠空肠上皮细胞AgNOR含量和DNA含量均高于单纯照射组(F＝0.015～0.035,P<0.05)。结论 3 Gy中子照射引起小鼠空肠明显损伤,rhIL-11和姜黄素治疗可减轻损伤并促进肠道上皮再生修复,对中子辐射肠上皮损伤具有保护作用。     

Experimental therapeutic effect of combined cytokines on beagle dogs exposed to 4.5 Gy γ-rays

Objective To evaluate the effects of combined administration of recombinant human interleukin-11(rhIL-11),recombinant human G-CSF(rhG-CSF)and recombinant human interleukin-2 (rhIL-2)on acute radiation sickness(ARS)beagles.Methods Sixteen beagle were irradiated with 4.5 Gy60 Co γ-rays to establish ARS models,and were divided into irradiation control group,supportive care group and combined cytokines treatment group.After irradiation irradiation control group was given no treatment,the dogs in supportive care group received purely symptomatic treatment,while combined cytokines treatment group received rhIL-11 50μg/(kg·d)and rbG-CSF 10μg/(kg·d)subcutaneously(0-14 d)and rhIL-2 1×1 06 U/d(29-43 d)besides symptomatic treatment.Manifestation and characteristics of ARS beagles were observed,and the survival time were recorded.At last,post-mortem examination and histological examination were performed.Results All animals underwent nausea,diarrhea and fever.After irradiation,all animals in irradiation control group died in two weeks,and the mean survival time was 12.7 d,while only one died at 33 d in supportive care group.All dogs in combined cytokine group survived at 45 day after exposure,and their haematopoiesis and gastrointestinal tract were recovered.Conclusions Combination of rhIL-11 + rhG-CSF + rhIL-2 treatment could be significantly effective on ARS beagles irradiated by 4.5 Gy60 Co γ-rays,which could accelerate injured haemotopoiesis and intestinal tract recovery,increase the survival rate and improve the life quality of animals.     

Experimental therapeutic effect of combined cytokines on beagle dogs exposed to 4.5 Gy γ-rays

Objective To evaluate the effects of combined administration of recombinant human interleukin-11(rhIL-11),recombinant human G-CSF(rhG-CSF)and recombinant human interleukin-2 (rhIL-2)on acute radiation sickness(ARS)beagles.Methods Sixteen beagle were irradiated with 4.5 Gy60 Co γ-rays to establish ARS models,and were divided into irradiation control group,supportive care group and combined cytokines treatment group.After irradiation irradiation control group was given no treatment,the dogs in supportive care group received purely symptomatic treatment,while combined cytokines treatment group received rhIL-11 50μg/(kg·d)and rbG-CSF 10μg/(kg·d)subcutaneously(0-14 d)and rhIL-2 1×1 06 U/d(29-43 d)besides symptomatic treatment.Manifestation and characteristics of ARS beagles were observed,and the survival time were recorded.At last,post-mortem examination and histological examination were performed.Results All animals underwent nausea,diarrhea and fever.After irradiation,all animals in irradiation control group died in two weeks,and the mean survival time was 12.7 d,while only one died at 33 d in supportive care group.All dogs in combined cytokine group survived at 45 day after exposure,and their haematopoiesis and gastrointestinal tract were recovered.Conclusions Combination of rhIL-11 + rhG-CSF + rhIL-2 treatment could be significantly effective on ARS beagles irradiated by 4.5 Gy60 Co γ-rays,which could accelerate injured haemotopoiesis and intestinal tract recovery,increase the survival rate and improve the life quality of animals.     

60Coγ照射和环磷酰胺对小鼠造血及免疫功能影响的研究

目的 比较⁶⁰Co γ射线照射及环磷酰胺对小鼠造血和免疫功能损伤的规律,为急性放射综合征(ARS)患者临床救治提供实验依据.方法 48只雌性BABL/c小鼠随机数字表法分为照射组、化疗组,每个剂量组6只.照射组接受⁶⁰Co γ射线照射,吸收剂量为2、4、6和8 Gy;化疗组注射环磷酰胺,剂量为100、150、200和250 mg/kg.处理后采尾静脉血,进行血常规检测.选择白细胞(WBC)差异无统计学意义的2 Gy和200 mg/kg组,处理后流式细胞术检测T、B、NK及调节T细胞.结果 各组外周血WBC计数均先下降,4 d后降至最低值.化疗组和2 Gy照射组WBC迅速回升,10~12 d基本恢复;而4 Gy照射组恢复较慢,6和8 Gy组不能自行恢复.2 Gy照射组与200 mg/kg化疗组差异无统计学意义,其余照射组与200 mg/kg化疗组的差异有统计学意义(t=2.531, 2.343, 2.074, P<0.05).2 Gy照射组CD8+T细胞数较200 mg/kg化疗组明显下降(F=5.026,P<0.05),2 Gy照射组调节T细胞在照射后升高,与200 mg/kg化疗组比较差异有统计学意义(F=4.848,P<0.05),但CD4+T、B和NK细胞数两组之间差异无统计学意义.结论 电离辐射较化疗对造血、免疫功能的损伤较大,恢复较慢.因此,在ARS患者中可针对性延长造血刺激因子和集落刺激因子的使用,以起到预防感染、出血及败血症、帮助造血及免疫系统重建的作用.     

肠型放射病的实验治疗研究

本实验用27只杂种狗全身照射⁶⁰Coγ线9～12Gy,全部发生肠型放射病。6只狗给予自身骨髓移植和对症治疗,10只狗只给予对症治疗,11只狗作为对照不给任何治疗。后两组动物均在照后8～11天间死亡,未见造血恢复。7只对症治疗动物胃肠损伤有恢复。在6只骨髓移植动物中,2只死于照后15天,3只活存超过30天,胃肠和造血损伤均恢复,1只狗已活存4年多。实验结果表明,骨髓移植和症治疗联合应用是治疗肠型放射病的有效措施。     

卷柏水部位对造血系统的辐射防护作用

目的 观察卷柏水部位对受γ射线照射小鼠造血系统的辐射防护作用。方法 1KM种小鼠于接受8.0Gy ⁶⁰Co γ射线照射前1周给药,观察受照射小鼠的30d存活率、死亡动物平均存活时间、受照射小鼠体重变化和外周血白细胞数变化;2KM种小鼠于6.0Gy ⁶⁰Co γ射线照射前72、48和24 h,以及照射后即刻灌服药物或蒸馏水,观察受照射小鼠骨髓细胞周期及凋亡率的变化。结果 卷柏水部位可明显提高照射后小鼠30 d的存活率、死亡动物平均存活时间和小鼠外周血白细胞数,抑制射线引起的小鼠体重的下降;另外,它还可降低受照射小鼠骨髓细胞G₀/G₁期细胞百分率,升高其G₂/M、S期细胞百分率,并可明显降低其细胞凋亡率。结论 卷柏水部位对照射损伤小鼠的造血系统有一定的辐射防护作用。     

部分照射离体血对淋巴细胞染色体畸变形成的影响

目的 分析⁶⁰Coγ射线部分照射离体血对人外周血淋巴细胞染色体畸变形成的影响。方法 用2Gy⁶⁰Coγ射线37℃照射人外周血后以不同比例混合后进行培养、制片和分析染色体畸变。结果 染色体畸变随照射血比例的增加而增加,与单纯照射组相比,混合照射血的染色体畸变率高。1:1比例混合估算出的剂量为1.27Gy,大于1Gy;0.5:1比例混合估算出的剂量为0.93Gy,大于0.5Gy;而在1:0组,照射剂量与估算剂量基本一致。结论 染色体畸变可以作为估算非均匀照射的生物学指标之一。     

小鼠放射性肠炎模型的建立

目的 建立小鼠放射性肠炎模型。方法雌性BALB/c小鼠84只,随机分为对照组(24只)、6 Gy组(28只)及10 Gy组(32只),⁶⁰Co γ射线对小鼠腹部一次性照射,在照射后3、7、14和21 d检测血象及肝、肾功能,并取肠道组织做病理及一氧化氮(NO)检测。结果照射后3、7 d,6 Gy及10 Gy组WBC、PLT均较对照组降低;10 Gy组肝功能异常;10 Gy组照射后3 d肠道组织NO水平降低;照射后3、7 d,2个照射组小肠绒毛高度降低,隐窝深度变浅、数目减少,隐窝腔变大,均出现放射性肠炎改变,10 Gy组死亡较多,6 Gy组更能模拟临床放射性肠炎,为研究提供模型。结论⁶⁰Co 射线一次性腹部照射建立小鼠放射性肠炎模型,6 Gy照射剂量更为合适。     

造血生长因子在医源性急性放射病的临床应用

目的 探讨造血生长因子对使用全身照射(TBI)进行干细胞移植预处理患者造血重建的影响,进而起到模拟事故性急性放射病,了解细胞因子在急性放射病患者救治中的作用。方法对1990-2012年75例预处理含TBI的造血干细胞移植患者及其供者的造血生长因子应用、植入情况、不良反应发生等进行回顾性分析,了解细胞因子在造血功能重建、造血干细胞动员中的作用以及不良反应。结果 造血干细胞移植患者除1例因预处理不良反应死亡外,其他患者全部恢复造血功能重建。应用rhG-CSF组粒细胞植入的中位时间自体移植为10 d、异基因移植为12 d。自体移植患者应用rhIL-11组与未应用rhIL-11组血小板植入的时间分别为(11.67±1.53)、(13.70±6.27) d。所有TBI患者中口腔溃疡发生率为48%,腹泻发生率为44%。造血重建过程中细胞因子不良反应不明显,动员过程中半数出现轻度不良反应。结论 细胞因子在TBI后造血功能重建以及移植时的造血干细胞动员中起关键作用。     

60Coγ射线诱导人外周血淋巴细胞核质桥的剂量-效应关系研究

目的 确定核质桥判定标准,建立 ⁶⁰Co γ 射线诱导正常人外周血淋巴细胞中核质桥（NPB）的剂量-效应曲线。 方法 用 ⁶⁰Co γ 射线照射3名健康男性离体外周血,照射剂量分别为0、1、2、3、4、5和6 Gy,剂量率为1 Gy/min,采用胞质分裂阻滞微核（CBMN）法进行细胞培养、收获、制片、染色。在光学显微镜下分析双核细胞中NPB及微核（MN）。 结果 在0~6 Gy ⁶⁰Co γ 射线照射后,人外周血双核淋巴细胞中的NPB符合泊松分布,且NPB频率随吸收剂量增加而增加（H=19.51,P<0.01）,拟合回归方程为线性平方模式y=（1.39×10^-3）x² + （4.94×10^-3）x （R²=0.981,P < 0.01）。 结论 成功建立 0~6 Gy ⁶⁰Co γ 射线诱导正常人外周血淋巴细胞中NPB的剂量-效应曲线。     

中子急性放射病的特点及治疗研究进展

中子可对机体造成多种损伤而导致ARS(急性放射病)。中子ARS胃肠道症状重，早期死亡率高，缺乏特异性治疗方法，综合对症治疗是救治的基本手段，细胞因子可改善造血功能。分子生物学技术的快速发展和研究工作的不断深入，rhIL-11(重组人白细胞介素11)等一批促进胃肠黏膜再生的细胞因子的出现，为中子ARS的临床救治带来了新的希望。     

中子急性放射病的特点及治疗研究进展

中子可对机体造成多种损伤而导致ARS(急性放射病)。中子ARS胃肠道症状重,早期死亡率高,缺乏特异性治疗方法,综合对症治疗是救治的基本手段,细胞因子可改善造血功能。分子生物学技术的快速发展和研究工作的不断深入,rhIL-11(重组人白细胞介素11)等一批促进胃肠黏膜再生的细胞因子的出现,为中子ARS的临床救治带来了新的希望。     

人工智能识别60Co γ射线照射诱导人外周血微核的剂量-效应曲线建立

目的 根据扫描显微镜搭配玻片扫描软件(Metafer 4),在松弛素B(CB)阻断微核法试验中识别和鉴定微核,建立⁶⁰Co γ射线照射剂量与人外周血淋巴细胞微核率的剂量-效应曲线。方法 采集4名健康人(2男2女)肘静脉血样品,用0、0.25、0.5、1、2、3、4和5 Gy ⁶⁰Co γ射线(剂量率0.74 Gy/min)离体照射,胞质分裂阻断微核法培养、收获和制备标本玻片,人工智能彩色识别分析系统分析并记录双核细胞和微核数。应用CABAS 软件拟合基于微核率的剂量-效应曲线。2份照射后的盲样进行生物剂量估算验证。结果 在0~5 Gy 剂量范围内,拟合的微核剂量-效应曲线符合二次多项式模型,回归方程为y=0.0321D²+0.0237D+0.0127(R²=0.998,D为剂量)。用拟合曲线对验证样本的剂量估算结果与实际照射剂量基本接近。结论 成功建立基于人工智能识别微核的剂量-效应曲线,为估算辐射生物剂量提供了可行方法。     

rhGM-CSF、rhEPO在3例急性放射病患者救治中的应用

目的 观察rhGM-CSF、rhEPO在3例急性放射病(ARS)救治中的疗效。方法 一例重度ARS患者使用了rhGM-CSF和rhEPO,另两例中度ARS患者仅用rhGMCSF.3例患者均在照后10d、79d检测血清GM-CSF、EPO浓度。结果 使用rhGMCSF后,外周血白细胞下降速度慢,低值持续时间短,回升速度快,骨髓恢复时间提前。使用rhEPO的患者,外周血网织红细胞为0的持续时间明显缩短,骨髓红系增殖池比例增加。3位患者照后10d血清GM-CSF、EPO浓度明显升高,并与受照剂量及骨髓损伤程度相关。结论 rhGM-CSF、rhEPO的应用促进了3例ARS患者造血功能恢复。