成骨细胞与血管内皮细胞联合培养对成骨细胞功能的影响

目的　探讨不同比例兔成骨细胞(ROB)与血管内皮细胞(RVEC)直接联合共培养后,对成骨细胞功能的影 响。方法　取兔成骨细胞与血管内皮细胞,将两者分为4组分别以1∶0、1∶1、2∶1、4∶1直接联合共培养于培养皿中, 通过对细胞内碱性磷酸酶活性(ALP)测定和培养液中骨钙素(OC)定量测定,观察血管内皮细胞对成骨细胞功能的 影响。结果　成骨细胞与血管内皮细胞直接联合共培养相容性良好,2∶1的细胞比例组ALP活性及OC含量较其 他各组明显增高。结论　在体外直接联合共培养的体系中,血管内皮细胞有明显促进成骨细胞活性的作用。     

共培养下成骨细胞与血管内皮细胞相互功能影响

目的:了解共培养条件下成骨细胞(ROB)与血管内皮细胞(RVEC)功能相互影响。方法:取传代兔成骨细胞与血管内皮细胞,首先将成骨细胞与血管内皮细胞以1∶0、1∶1、2∶1、4∶1比例联合直接共培养于培养皿中,另将成骨细胞与血管内皮细胞以0∶1、1∶1、2∶1、4∶1联合直接共培养于培养皿中的盖玻片上。通过对成骨细胞内碱性磷酸酶活性(ALP)测定及培养液中骨钙素(OC)定量测定,观察血管内皮细胞对成骨细胞功能的影响。通过血管内皮细胞计数、生长曲线测定,检测成骨细胞对血管内皮细胞的影响。结果:成骨细胞与血管内皮细胞比例为2∶1组碱性磷酸酶活性测定、骨钙素含量明显高于其他两实验组,但与对照组无明显区别。血管内皮细胞增殖能力高于其他两实验组,而与对照组无差异。结论:两种细胞在该培养体系中可以起到互相促进作用。     

矿化胶原膜浸提液对MG-63人骨肉瘤细胞分化相关基因表达的影响

目的 研究新型矿化胶原膜对MG-63人骨肉瘤细胞(简称：MG-63细胞)成骨分化相关基因表达的影响。方法 将 MG-63细胞与新型矿化胶原膜浸提液(实验组)共培养,以市售的胶原膜(Bio-gide)浸提液作为同类产品对照组,以不加材料的细胞培养液为空白对照组,采用荧光实时定量 PCR法检测碱性磷酸酶(ALP)、I型胶原(COL I)、骨保护素(OPG)和骨钙素(OC)mRNA表达水平;采用SPSS 17.0 软件对数据进行统计学分析。结果 在ALP与OPG mRNA相对表达量检测中,3组成骨细胞的表达量差异无统计学意义(P>0.05);在COL I与 OC基因相对表达量检测中,14天时Bio-gide组和矿化胶原膜组表达均明显上调,与空白对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.05),而Bio-gide组和矿化胶原膜组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 矿化胶原膜和Bio-gide膜的浸提液均可上调MG-63细胞COL I和OC的基因表达,在一定程度上促进了成骨细胞的分化。     

人牙槽成骨细胞的体外培养和生物学特性检测

目的:研究人牙槽成骨细胞体外培养及其生物学特性.方法:取人牙槽骨用组织块法进行体外细胞培养,用倒置显微镜观察细胞生长、细胞形态,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖;在条件培养液中培养后用酶动力学方法作碱性磷酸酶(ALP)活性定量测定、Alizarin red 染色和von Kossa染色作成骨特性检测,同位素 3H掺入结合细菌胶原酶消化法测定I型胶原的合成.结果:培养第5 天细胞从组织块中爬出,再培养14～16 d可以传代;在条件培养液中细胞ALP活性明显,Alizarin red 染色和von Kossa染色细胞呈阳性,体外培养人牙槽成骨细胞具有分泌I型胶原的功能. 结论:体外培养的人牙槽成骨细胞生长良好,并具有成骨细胞的形态和生物学特性.     

补肾中药合剂促进成骨细胞功能的机制研究

目的:探讨补肾中药合剂对体外培养的人成骨细胞(hFOB 1.19)功能影响的分子机制。方法:分别对低剂量、高剂量补肾中药血清和5%空白对照组血清培养的成骨细胞进行碱性磷酸酶(ALP)测试,并通过酶联免疫吸附实验分别检测其成骨细胞骨钙素(OC)的分泌量。采用蛋白质印迹法分析补肾中药合剂含药血清对骨保护素(OPG)、骨桥蛋白(OPN)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)蛋白表达水平的影响。结果:补肾中药合剂含药血清能提高hFOB 1.19细胞中的ALP活性;作用96 h后,能促进hFOB 1.19细胞分泌OC,均具有剂量依赖关系;在蛋白表达水平上,补肾中药合剂含药血清能明显上调人成骨细胞的OPG、OPN,并抑制其RANKL的表达。结论:补肾中药合剂含药血清可增张成骨细胞的成骨功能,其机制可能与影响OPG/RANK/RANKL骨代谢信号调节系统有关。     

小鼠骨髓基质细胞Kusa-A1体外成骨活性评价

目的:检测骨髓基质细胞系Kusa-A1体外成骨活性,分析其用于成骨细胞功能和分化机制研究的价值。方法:培养Kusa-A1细胞,在常规培养和成骨诱导培养条件下,分别检测细胞的体外成骨活性,包括碱性磷酸酶(ALP)活性、细胞钙沉积能力、体外矿化结节(CN)形成能力、骨桥蛋白(OPN)和骨钙素(OC)表达水平、NF-κB受体激活因子(RANKL)水平。结果:常规培养下,Kusa-A1细胞表现出较高碱性的ALP活性(约为0. 75IU/mg)、一定的钙沉积能力,并可检测到OPN和OC表达,但无CN形成,RANKL蛋白低于可检测水平。诱导培养条件下,细胞ALP活性先升高后降低、钙沉积量持续升高、OPN和OC表达水平后期显著提高,汇片后3~7d检测到大量CN形成,汇片后24h可检测到RANKL蛋白。结论:Kusa-A1可能是一种成骨前体细胞,经诱导可以向成骨细胞分化,在体外表现出良好的成骨细胞活性。Kusa-A1细胞可作为成骨细胞功能及其分化机制研究的模型细胞。     

促红细胞生成素促进骨髓基质细胞成骨分化的实验研究

目的:研究促红细胞生成素(EPO)通过ephrinB2/EphB4信号通路在细胞成骨分化中的作用。探讨EPO在骨稳态中的作用及其机制。方法:体外培养小鼠骨髓基质细胞系(ST2),加入EPO后,采用real-time PCR方法检测EphB4的表达以及成骨细胞相关基因的表达,采用ALP活性检测和茜素红染色观察EPO对成骨细胞功能的影响;在体外培养的ST2细胞中加入ephrinB2-Fc蛋白,模拟破骨细胞-成骨细胞共培养,使ephrinB-EphB4正向信号激活,采用上述方法检测其对成骨细胞的影响;进一步采用RNAi技术,使EphB4基因沉默,检测EPO对成骨细胞的影响。结果:EPO能增加ST2细胞RUNX2、ALP和Col1等成骨细胞相关基因的表达,同时伴随ST2细胞表面EphB4的表达升高,ALP活性和钙结节也增加;在模拟破骨细胞-成骨细胞共培养体系中,EPO也能促进ST2细胞的成骨向分化和功能;EphB4基因沉默后,EPO对ST2细胞的作用被减弱。结论:EPO能促进成骨细胞的分化和功能,该作用是通过ephrinB2/EphB4信号介导的。     

TGFβ和rhBMP2对人牙周膜成纤维细胞的作用

目的 研究转化生长因子β（TGFβ）和重组人骨形成蛋白2（rhBMP2)对人牙周膜成纤维细胞（HPDLFs)增殖和分化的作用。方法 观察TGFβ和rhBMP2单独、同时和相继应用对培养的HPDLFs增殖、碱性磷酸酶（ALP）活性，骨钙素（OC）合成及矿化结节形成的作用。结果 TGFβ刺激HPDLFs增殖，对ALP活性，OC合成和矿化结节形成无明显影响；rhBMP2对HPDLFs增殖无明显作用。却显著提高其ALP活性，刺激OC合成和矿化结节形成；两者同时应用时对细胞增殖和分化的作用居于单独作用之间；先应用TGFβ对随后rhBMP2的促分化作用无明显影响；先应用rhBMP2再应用TGFβ对HPDLFs的分化具有显著的刺激作用。结论 RhBMP2能刺激HPDLFs表达成骨细胞表型，TGFβ对BMP2诱导的细胞分化具有明显的刺激作用。两者可能在促进HPDLFs向成骨细胞表型分化的不同阶段发挥作用。     

重组人骨形成蛋白2对人牙周膜成纤维细胞的生物学作用

目的:研究重组人骨形成蛋白2 (rhBMP2) 对人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs) 的生物学作用。方法:原代培养HPDLFs ,并观察rhBMP2 对HPDLFs 增殖、碱性磷酸酶(ALP) 活性、骨钙素(OC) 合成及矿化结节形成的作用。结果:0125～2 mgPml rhBMP2 对HPDLFs 的增殖无明显作用,015～2 mgPml rhBMP2 显著提高HPDLFs 的ALP 活性,刺激OC合成和矿化结节形成。结论:rhBMP2 对HPDLFs 的作用具有剂量依赖性。rhBMP2 能够刺激HPDLFs 表达成骨细胞表型并促进其表型成熟。     

成骨细胞对人牙周膜成纤维细胞生物学特性的影响

[摘要] 目的 观察成骨细胞(osteoblast cells,OBs)对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblast cells,HPLFs)生物学特性的影响,为进一步探讨正畸牙齿移动的生物学机制奠定基础。方法 建立人OBs与HPLFs共培养系统,通过细胞计数及生化检测法观察成骨细胞对人牙周膜成纤维细胞增殖和分化的影响。结果 3 d和5 d时,共培养组HPLFs细胞计数分别为3.5×10~4个/ml及7.5×10~4个/ml,均明显低于对照组HPLFs细胞计数,且差异有统计学意义(P<0.05)。HPLFs碱性磷酸酶(ALP)活性比较中,transwell共培养组HPLFs ALP活性高于对照组。在3 d时,差异有统计学意义(P<0.05),5 d及7 d时差异也有统计学意义(P<0.01)。结论 人OBs可能抑制HPLFs的增殖,促进HPLFs ALP活性。     

Behavior of two osteoblast-like cell lines cultured on machined or rough titanium surfaces

Background: Two osteosarcoma-derived cell lines have been extensively used to investigate the biological events occurring on titanium surfaces: MG63 and Saos-2. However, the behavior of the two lines on different titanium surfaces has never been compared.
Aim: The aim of the present study was to compare the behavior of MG63 and Saos-2 cells on two different titanium surfaces, machined and rough (sandblasting and acid-etched). We compared cell proliferation and morphology, alkaline phosphatase (ALP) activity and secretion of osteocalcin (OC).
Results: The most pronounced difference between the two cell lines was that ALP activity in the Saos-2 cells was 10-fold higher than in the MG63 cells. The proliferation rate of the MG63 cells was much higher than that of the Saos-2 cells at all the tested cell concentrations. MG-63 cells, but not Saos-2 cells, grown on rough surface titanium proliferated more rapidly than cells grown on machined surfaces. Morphological analysis revealed that Saos-2 cells and cells grown on the rougher surface, displayed a more mature phenotype. The level of OC secreted by the Saos-2 cells, but not the MG63 cells, were higher on the rough surface than on the machined surface.
Conclusions: This study shows that Saos-2 cells exhibit a more mature osteoblast phenotype, compared with that of MG63 cells, rendering them a good candidate for an in vitro model of osseointegration.     

Survivin activity in normal human osteoblasts and osteosarcoma cells

PURPOSE: This study was designed to investigate and compare in vitro survivin activity in normal human osteoblast and MG-63 osteosarcoma cell cultures with and without vitamin D3. METHODS: Normal human alveolar bone explants were recovered from extraction sites of non-carious teeth of 9 healthy donors and cultured to the 2nd passage. MG-63 osteosarcoma cells were obtained from ATCC. To compare the survivin activities in these two types of cells and to determine the effect of vitamin D3 on survivin expressio...     

Emdogain对共培养成骨样细胞及内皮细胞成骨及成血管基因表达的影响

目的 评价emdogain对直接与间接共培养条件下成骨样细胞和内皮细胞成骨及成血管基因表达的影响以及其间的相关性。方法 将人脐静脉内皮细胞（HUVEC）和成骨样细胞（MG63）按2∶1比例于12孔板内进行直接及间接共培养,并使用不同浓度（0、0.1、1、10、50 μg/mL）的emdogain共培养细胞72 h。采用细胞计数仪结合流式细胞仪评价细胞增殖情况,并通过荧光激活流式细胞分选技术分选共培养细胞。对分选后的成骨样细胞及内皮细胞采用实时荧光定量PCR分别检测成骨相关基因碱性磷酸酶（ALP）、I型胶原蛋白（Col-1）及成血管相关基因血管内皮细胞生长因子（VEGF）、VEGF酪氨酸激酶受体1（Flt-1）、VEGF酪氨酸激酶受体2（KDR）、von Willebrand因子（vWF）、内皮细胞C蛋白受体（EPCR）、E选择素（E-Selectin）、促血管生成素2（Ang-2）的表达水平。采用SPSS24.0软件包对数据进行统计学处理。结果 在直接与间接共培养条件下,Emdogain对MG63及HUVEC细胞增殖的作用具有浓度依赖性。随着emdogain浓度增加,细胞增殖率逐渐下降。50 μg/mL浓度的emdogain对MG63及HUVEC细胞增殖抑制作用最为明显。随着emdogain浓度增加,MG63表面ALP和Col-1表达水平逐渐增加;50 μg/mL浓度条件下,表达水平最高且与其他组基因表达水平差异显著（P<0.01）。同一emdogain浓度条件下,直接共培养MG63表面ALP及Col-1表达水平均显著高于间接共培养（P<0.01）。除10 μg/mL组外,直接共培养条件下,VEGF表达水平均显著高于间接共培养（P<0.01）。50 μg/mL组直接共培养的HUVEC表面Flt-1、KDR、vWF、E-selectin基因表达水平显著高于间接共培养及直接共培养的其他各组（P<0.01）。间接共培养条件下,HUVEC表面EPCR及Ang-2基因表达水平显著高于直接共培养（P<0.05）。结论 Emdogain对共培养MG63和HUVEC增殖的作用具有浓度依赖性,50 μg/mL可能是emdogain作用的关键浓度。在直接共培养条件下,50 μg/mL emdogain抑制MG63及HUVEC细胞增殖,但能同时促进MG63及HUVEC细胞相关基因表达;且该条件下emdogain的作用显著强于其他实验条件,细胞间直接交联可能在其中发挥重要作用。     

Effects of a hydroxyapatite-based biomaterial on gene expression in osteoblast-like cells

Biostite is a hydroxyapatite-derived biomaterial that is used in periodontal and bone reconstructive procedures due to its osteoconductive properties. Since the molecular effects of this biomaterial on osteoblasts are still unknown, we decided to assess whether it may specifically modulate osteoblast functions in vitro. We found that a brief exposure to Biostite significantly reduced the proliferation of MG-63 and SaOS-2 osteoblast-like cells to approximately 50% of the plateau value. Furthermore, gene array analysis of MG-63 cells showed that Biostite caused a differential expression of 37 genes which are involved in cell proliferation and interaction, and related to osteoblast differentiation and tissue regeneration. Results were confirmed by RT-PCR, Western blot, and by an increase in alkaline phosphatase (ALP) specific activity. Biostite also increased levels of polycystin-2, a mechano-sensitive Ca(2+) channel, a promising new marker of bone cell differentiation. Biostite, therefore, may directly affect osteoblasts by enhancing chondro/osteogenic gene expression and cytoskeleton-related signaling pathways, which may contribute to its clinical efficacy.     

丝素蛋白-壳聚糖三维多孔支架材料生物相容性及促成骨性能研究

目的研究丝素蛋白-壳聚糖支架材料的生物相容性及成骨性能,为其在骨组织工程方面的应用提供理论挂础。方法采用冷冻干燥合并化学交联的方法制备出2组支架材料,实验组采用丝素蛋白-壳聚糖支架（质量比为2：3）,对照组采用壳聚糖支架。将MG-63成骨细胞接种于这2组支架上,通过Hoechst荧光染色观察其在支架材料上的生长,计算细胞粘附率和增殖率,最后通过矿化结节的形成以及MG-63成骨细胞分泌碱性磷酸酶能力来研究支架的成骨性能。以载玻片培养MG-63细胞为空白对照组。结果细胞培养1、3d时,对照组细胞粘附率分别为（26．63±0．57）％、（49．88±0．78）％,实验组细胞粘附率分别为（31．88±0．94）％、（62．13±0．36）％,实验组的细胞粘附率高于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）。细胞培养3d时,对照组和实验组细胞增确率检测的光镪度值分别为0．491±0．010、0．5964±0．008,实验组的细胞增殖率高于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）。实验组碱性磷酸酶活性和矿化结节的生长状况也均优于对照组。结论丝素蛋白-壳聚糖支架（质艟比为2：3）具有良好的生物相容性和优良的促成骨性能,对于骨组织工程研究有良好的应用前景。     

人牙乳头细胞体外矿化特征及其分化表型的表达

目的：观察人牙乳头细胞体外矿化特征。方法：组织块法培养人牙乳头细胞,取第三代细于矿化液中长期培养,检测不同培养时间细胞碱性磷酸酶（alkaline phospha tase,ALP)活性,骨钙素（osteocalcin,OC)活性,且倒置显微镜观察细胞生长。结果：体外培养的牙乳头细胞呈现以下表现特征：复层增长,胞外基质分泌与矿化结节形成。在β-GP和L－抗坏血酸存在条件下培养第14天细胞内ALP活性开始升高而OC在21d才开始升高,有细胞外基质分泌,但未见矿化。35d产生特异性牙本质矿化结节。42天以后,OC、ALP活性降低。结论：培养的人牙乳头细胞具有成牙本质细胞某些表型,可在体外形成牙本质或牙本质样矿化物质,可作为研究牙本质形成机制的实验模型。     

人羊膜间充质干细胞旁分泌对成骨细胞的影响

目的 探究人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)旁分泌对人成骨细胞生物活性的影响.方法 酶消化法提取原代hAMSCs,并检测细胞表面标记物表达.收取hAMSCs 24 h培养上清与新鲜培养液1∶1配比作为条件培养基(condition medium...