干扰素对肺腺癌A549细胞B7-H4分子表达的影响

目的:探讨IFN-α和IFN-γ对人肺腺癌细胞株A549 B7-H4 mRNA和蛋白表达的影响。方法:用不同浓度(100、500、1 000、2 000 U.ml-1)IFN-α和IFN-γ分别处理A549细胞,未经药物处理细胞作对照(对照组)。用MTT法观察细胞增殖活性的差异,RT-PCR观察B7-H4 mRNA表达水平的变化,蛋白质印迹法观察B7-H4蛋白表达水平的变化。结果:IFN-α和IFN-γ对人肺腺癌细胞株A549增殖有抑制作用,其抑制效应具有时间和剂量依赖性(P<0.05)。随着IFN-α浓度的增加,B7-H4分子mRNA和蛋白表达增强(P<0.05),而IFN-γ对B7-H4分子mRNA和蛋白表达影响不明显(P>0.05)。结论:IFN-α和IFN-γ均可抑制人肺腺癌A549细胞株的增殖;IFN-α可增强B7-H4mRNA和蛋白水平的表达,而IFN-γ对B7-H4分子mRNA和蛋白表达影响不明显。     

抑制survivin基因表达对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的研究survivin基因与肺腺癌的关系,探讨survivin对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法合成抑制survivin基因的siRNA,通过脂质体转染到肺腺癌A549细胞中,荧光倒置显微镜下观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测各组细胞增殖和凋亡指数,Western blot检测survivin编码表达的蛋白,RT-PCR检测survivin mRNA的表达。结果抑制survivin在肺腺癌A549细胞中的表达后,能够抑制A549细胞增殖,诱导细胞的凋亡,survivin基因编码表达的蛋白明显减少。结论应用RNAi抑制survivin基因,可以抑制A549细胞增殖,促进细胞凋亡。survivin能作为治疗肺腺癌的一个潜在的基因靶点。     

EGCG抑制肺癌细胞增殖及其机制的研究

目的:研究表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCG) 对人肺癌细胞增殖的影响及机制. 方法:培养肺癌细胞A549,加入EGCG制作细胞抑制曲线; EGCG作用于人肺癌A549细胞株前后通过Hoechst染色检测细胞凋亡. RT-PCR 及Western Blot印迹法研究survivin的mRNA 及蛋白表达的变化. 结果:EGCG可明显抑制A549细胞的增殖, 60 mg/L EGCG作用后,细胞出现明显的凋亡. 同时肺癌细胞中survivin mRNA 和蛋白表达减少. 结论:EGCG可抑制肺癌细胞的增殖,这可能与survivin表达降低有关.     

曲古抑菌素A对人肺腺癌细胞A549的生长抑制作用

目的 评价组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对肺腺癌细胞株A549的生长抑制作用.方法 分别以体外药物敏感实验、流式细胞术观察TSA处理肺腺癌细胞株A549后,其生长抑制情况以及细胞周期、细胞凋亡等指标的变化,Western blot检测p21及细胞外信号调节激酶(ERK)表达水平的变化.结果 TSA对肺腺癌细胞株A549具有生长抑制作用,其细胞毒性呈时间依赖性和浓度依赖性;TSA作用48及96h后,A549细胞凋亡、G0/G1期及G2/M期细胞显著增加(P<0.05);S期细胞显著下降(P<0.05).p21蛋白表达显著增强,磷酸化ERK蛋白表达显著下降.结论 HDAC抑制剂TSA对肺腺癌细胞株A549具有生长抑制作用,其机制可能是上调p21蛋白的表达,阻断ERK通路的活化,从而引起细胞周期的阻滞和细胞凋亡.     

脂质体转染survivin siRNA对A549细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨脂质体转染survivin siRNA 对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的影响.方法:人工合成抑制survivin基因的siRNA片段,通过脂质体转染到A549细胞内,倒置荧光显微镜下观察细胞形态学变化;用四氮唑盐(M1Tr)法观察转染后24h,48h,72h对细胞增生的影响;流式细胞术检测各组细胞周期变化和凋亡指数;RT-PCR检测survivin mRNA的表达.结果:转染siRNA后的A549细胞,细胞增殖受到显著抑制,细胞明显出现凋亡,survivin基因mRNA表达显著下降.结论:应用RNA干扰靶向抑制survivin基因可以显著抑制A549细胞增殖,促进细胞凋亡.survivin可能成为肺癌基因治疗的一个新靶点.     

厄洛替尼联合survivin siRNA对人肺腺癌细胞A549增殖的影响

目的:探讨厄洛替尼联合survivin siRNA对人肺腺癌细胞A549的作用.方法:survivin siRNA转染、厄洛替尼单独或联合应用于人肺腺癌细胞A549,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察对A549细胞的增殖抑制作用,免疫组化染色法观察A549细胞Survivin蛋白的表达情况.结果:survivin ...     

三氧化二砷对人肺腺癌A-549细胞株增殖及c-Myc基因表达的影响

目的观察三氧化二砷(As2O3)对人肺腺癌A549细胞株的生长增殖、细胞周期、凋亡等方面的影响,并初步探讨其机制。方法选用不同浓度As2O3处理人肺腺癌A549细胞株,以MTT比色法检测细胞生长增殖的抑制情况;用流式细胞术测定细胞周期、凋亡率;以免疫组织化学法分析不同浓度As2O3对c-Myc基因表达的影响。结果 As2O3以时间和浓度依赖的方式抑制人肺腺癌A-549细胞的增殖,并能诱导细胞凋亡。不同浓度As2O3处理组可调控细胞周期分别发生G2/M期阻滞和S期阻滞,并下调c-Myc基因表达。结论三氧化二砷对人肺腺癌细胞株A-549的生长、增殖有明显抑制作用,其机制可能与细胞周期阻滞和抑制c-Myc基因的表达和诱导细胞凋亡有关。     

奥沙利铂对人肺腺癌A549细胞增殖凋亡及Survivin和CyclinD1表达的影响

目的 研究奥沙利铂(oxaliplatin,L-OPH)对人肺腺癌A549细胞株的生长抑制作用和对Survivin、CyclinD1基因表达的影响,探讨奥沙利铂抑制肺癌细胞增殖的机制.方法 以不同浓度(0、7.81、15.63、31.25、62.50和125.00μg/mL)的奥沙利铂干预体外培养的肺腺癌细胞株A549,分别于24、48和72 h后,采用MTT方法检测细胞光密度值,分析A549细胞的增殖活性.采用流式细胞术检测其细胞周期变化.采用Hoechst33342染色方法在荧光显微镜下观察细胞形态变化.采用RT-PCR、Westem-blotting方法检测Survivin和CyclinD1的mRNA及蛋白的表达情况.结果 ①奥沙利铂能有效抑制A549细胞的增殖(P＜0.05),呈时间-剂量依赖性.②奥沙利铂能改变A549细胞的周期分布并诱导其凋亡(P＜0.05),呈时间-剂量依赖性.③奥沙利铂作用48 h后A549细胞Survivin、Cyclin D1基因及蛋白的表达明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),且该抑制效应呈浓度依赖性.结论 奥沙利铂可以抑制A549细胞株的增殖、改变其周期分布、诱导其凋亡,且呈一定的剂量-时间依赖性;其机制可能与奥沙利铂下调Survivin和Cyclin D1基因的表达有关.     

反应停对人肺腺癌亲代及耐顺铂细胞系碱性成纤维细胞生长因子表达影响

目的 探讨反应停对亲代与耐顺铂人肺腺癌细胞系A549^DDP碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响及克服肺腺癌顺铂耐药的作用。方法 采用逆转录-PCR和免疫细胞化学方法分别检测反应停处理前、后A543与A549^DDP细胞bFGF mRNA与蛋白表达水平。结果 治疗浓度(6μg／ml)反应停处理A549与A549^DDP细胞后bFGF mRNA表达水平较处理前显降低，蛋白表达显减弱，蛋白表达与其相应mRNA表达呈显正相关；不同浓度反应停处理后第5 d，A549与A549^DDP细胞bFGF mRNA表达水平存在显性差异，蛋白表达均为阴性。结论 反应停呈剂量依赖性显下调A549与A549^DDP细胞bFGF mRNA表达，可能通过激活细胞凋亡途径而降低耐药。     

hTERT启动子特异性调控炭疽毒素致死因子表达以杀伤人肺腺癌A549细胞的研究

目的观察人端粒酶逆转录酶启动子(hTERTp)靶向调控炭疽毒素致死因子(LF)表达对人肺腺癌A549细胞活力及凋亡/坏死的影响。方法构建含hTERTp或CMV启动子(CMVp)且表达LF的真核质粒表达载体(phTERTp-LF或pCMV-LF),分别转染人肺腺癌A549细胞株和正常人胚肺成纤维MRC-5细胞株。针对A549、A549hTERTp-LF、A549CMVp-LF、MRC-5、MRC-5hTERTp-LF、MRC-5CMVp-LF六组细胞,分别采用RT-PCR和Western blot检测LF mRNA和蛋白表达,用MTT分析检测细胞活力,用流式细胞仪检测细胞凋亡/坏死。结果与A549组比较,A549hTERTp-LF组、A549CMVp-LF组均出现明显的LF mRNA和蛋白表达,以及细胞活力降低和凋亡/坏死率上升;与A549hTERTp-LF组相比,A549CMVp-LF组LF mRNA和蛋白表达更高,细胞活力降低和凋亡/坏死率上升更明显。与MRC-5组比较,MRC-5hTERTp-LF组也不能测出LF mRNA和蛋白表达,细胞活力和凋亡/坏死率亦无明显变化,但MRC-5CMVp-LF组的LF mRNA和蛋白表达上升,细胞活力降低和凋亡/坏死率增加。结论 hTERTp能特异性地驱动LF表达并杀伤人肺腺癌A549细胞,但避免了对MRC-5细胞的毒性,可望提供一种针对肺腺癌细胞且不良反应小的靶向治疗策略。