荧光探针杂交技术检测临床标本内结核分支杆菌的价值

目的　评价聚合酶链反应(PCR)荧光探针杂交技术(TaqMan技术)检测临床标本中结核分支杆菌的应用价值。方法 应用细菌学方法(涂片镜检和培养)及TaqMan法检测133份结核病患者痰标本,53份非结核呼吸系疾病患者痰标本。结果 细菌学方法检测结核病患者临床标本中结核分支杆菌阳性率为36.1%,TaqMan法阳性率为61.7%,高于细菌学检测法,经统计学处理,两者有显著性差异(P<0.05),用TaqMan法检测临床标本特异性为96.2%。结论 TaqMan技术将PCR扩增、荧光探针杂交及检测一体化,在单一管内完成,具有简便、快速、防污染、敏感性及特异性较高等优点,是结核病辅助诊断的有效方法之一。     

KOD DNA聚合酶荧光PCR技术在肺结核诊断中的应用评价

目的 评估基于KOD DNA聚合酶的荧光PCR技术在肺结核诊断中的临床应用价值。方法 采集2019年10月至2020年4月疑似肺结核的住院患者痰标本,进行涂片抗酸染色、MGIT960液体培养、KOD DNA聚合酶荧光PCR和Taq DNA聚合酶荧光PCR检测。以临床诊断结果为参照,MGIT960液体培养法为金标准,荧光PCR与Taq DNA聚合酶荧光PCR法比较,评价KOD DNA聚合酶荧光PCR法检测MTB的效能。结果 共对337例临床样本进行检测,MGIT960液体培养法、Taq DNA聚合酶荧光PCR和KOD DNA聚合酶荧光PCR检测MTB的敏感度分别为71.56% (156/218)、76.15% (166/218) 和76.61% (167/218)。KOD DNA聚合酶荧光PCR与MGIT960液体培养检测敏感度差异无统计学意义 (χ²=1.445,P=0.229>0.05)。KOD DNA聚合酶荧光PCR检测MTB的敏感度和特异度分别为92.31% (144/156)和86.39% (146/169),涂阴患者中检测敏感度和特异度分别84.21% (64/76)和88.48% (146/165)。结论 KOD DNA聚合酶荧光PCR检测MTB敏感度和特异度较高,能够为临床诊断肺结核提供依据,操作简便、快速,适合在我国各级结核病实验室推广。     

2次与3次痰涂片对初治涂阳肺结核患者痰菌阴转结果的比较

目的　了解 2次痰涂片与 3次痰涂片法考核初治涂阳肺结核患者痰菌阴转结果的差异。方法 对 1047例初治涂阳肺结核患者,在 6月的治疗期间每月用 2次痰涂片和 3次痰涂片法查痰 1次。对治愈患者中的 998例进行了 2年的随访查痰。结果 在 6月治疗期间,治疗后 4～6月末的痰菌阴转率 2次痰涂片法和 3次痰涂片法几乎一致,差别较大的是在治疗头 1～2月,其痰菌阴转率分别相差 4.4%和 3.1%。 2月末 2次痰涂片法痰菌阴转,或未阴转但延长了 1月的强化期治疗者,与 2月末 2次痰涂片法痰菌阴转而 3次痰涂片法痰菌仍然阳性,但又未延长强化期治疗者的 2年细菌学复发率分别是 2.4%和 9.4%,经统计学处理有显著性差异意义。结论 涂片阳性肺结核患者治疗期间 1月末和 2月末的随访查痰应以 3次痰涂片法为好。     

PCR-ELISA微孔板杂交技术检测结核杆菌DNA

目的　采用PCR ELISA微孔板杂交技术检测结核杆菌DNA。方法 采用PCR技术扩增结核杆菌DNA，并将扩增产物加入预先包被结核杆菌探针的微孔板，再加入结核杆菌显色探针，同时进行微孔板核酸夹心杂交ELISA显色。共检测肺部疾病患者痰标本 510例。结果 该法的灵敏度为 59.3%，特异性为 95.0%；阳性预测值为 96.3%，阴性预测值为 51.4%。结论 PCR ELISA微孔板杂交技术可快速、准确地检测结核杆菌DNA，是结核病早期诊断和鉴别诊断的可靠实验室方法。     

建立增菌PCR方法对痰涂片阴性肺结核的早期诊断

目的　建立增菌PCR方法,以达到对涂片阴性痰标本中结核菌早期检定和确认活菌的目的。方法 采用7H12半流休培养和PCR扩增相结合的增菌PCR方法,对46份初治肺结核患者痰标本进行检测,并对杂交结果进行凝胶呈像灰度分析。结果 应用增菌PCR检测涂片阴性痰标本,其中86.2%的标本在增菌7d内得到阳性结果,于4周时得到最大阳性率,较培养法的阳性检出时间明显缩短(P<0.01),较普通标本PCR阳性率明显提高(P<0.05);有63.0%的标本增菌7d时的杂交结果凝胶灰度值与0d时相比>1;并有62.1%的增菌PCR7d内得到阳性的标本得到同一样本7H12半流培养阳性结果的支持和活菌判定。结论 增菌PCR不是单纯的PCR,增菌7d后PCR阳性率明显增加,且有杂交结果凝胶灰度比值的增加和随后的培养结果对其进行支持和活菌判断,有助于临床诊断的确切性。     

恒温扩增荧光检测技术在基层结核病实验室的应用价值

目的 探讨在基层结核病实验室采用恒温扩增荧光检测技术检测可疑肺结核患者痰标本诊断结核病的价值。 方法 搜集河南省4个项目点县级结核病实验室2014—2015年期间可疑肺结核患者的痰标本4242例,分别进行痰涂片、痰培养和恒温扩增荧光检测技术检测,比较恒温扩增荧光检测技术和传统痰涂片、痰培养方法的敏感度、特异度等。计数资料采用χ ²检验,以P<0.05为差异有统计学意义。 结果 纳入的4242例患者中,痰涂片检出阳性者351例,阳性检出率为8.21%(351/4276);痰培养检出阳性者576例,阳性检出率为13.47%(576/4276);恒温扩增荧光检测技术检出阳性者733例,阳性检出率为17.14%(733/4276)。3种检测技术的阳性检出率比较,差异有统计学意义(χ ²=153.412,P<0.001)。以痰培养试验结果为标准,恒温扩增荧光检测技术的敏感度和特异度分别为86.81%(500/576)、93.64%(3433/3666);阳性预测值为68.21%(500/733),阴性预测值为97.83%(3433/3509),与痰培养有较高的一致性(Kappa值为0.722)。痰涂片检测的敏感度为57.29%(330/576),特异度为99.43%(3645/3666),阳性预测值为94.02%(330/351),阴性预测值为93.68%(3645/3891);Kappa值为0.679。痰涂片与恒温扩增荧光检测技术检测痰标本的敏感度比较,差异有统计学意义(χ ²=153.336,P<0.001)。 结论 恒温扩增荧光检测技术检测的敏感度和特异度均明显高于传统的痰涂片,且其具有检测快速、操作简便等优势,便于在我国基层结核病实验室中推广应用。     

聚合酶链反应-增强化学发光法快速检测结核杆菌的研究

目的　建立聚合酶链反应 -增强化学发光法 (polymerase chain reaction-enhanced chemilumine cence ,PCR-ECL)快速高灵敏度和高特异性检测结核杆菌的方法。方法 以结核分支杆菌、牛分支杆菌特异性抗原Pab基因的419bp片段为靶序列,PCR体系经优化,直接酶标法标记探针 ,增强化学发光检测(ECL)进行分子杂交。结果 PCR体系对结核分支杆菌、牛分支杆菌、卡介苗的扩增为阳性,PCR体系灵敏度为5fgDNA分子。ECL体系灵敏度为0.5pgDNA分子。采用模拟痰样,可检至10个以下结核杆菌。结论 建立了结核杆菌的PCR-ECL快速检测方法,整个过程可在一天半内完成。     

人G1型轮状病毒TaqMan荧光定量检测方法的建立与应用

目的本研究旨在建立一种快速准确定量检测人G1型轮状病毒的TaqMan探针荧光实时PCR检测方法。方法以轮状病毒VP6基因为靶基因,分别设计2对引物及其相应的TaqMan探针,扩增目的片段,将目的片段克隆于PCDNA3.1+载体上,体外转录获得RNA,系列稀释后为标准品,建立TaqMan探针荧光定量实时PCR检测方法并对该方法进行验证。结果　设计实验找到最优条件下的引物浓度(250 nmol/L)、探针浓度(300 nmol/L);通过对引起腹泻的人柯萨奇病毒、呼肠孤病毒等进行检测,结果均为阴性,表明该方法具有很好的特异性。该方法的最低检测量为5 copies/μL。对该方法进行重复性实验,发现变异率均小于1%,重复性好。用已建立的方法对4份粪便临床样品进行3次重复试验,病毒RNA的检出率为100%。结论本实验初步建立了人G1型轮状病毒TaqMan探针荧光实时PCR检测方法,为G1型轮状病毒的诊断、检测和分子流行病学研究提供了一种新的方法。     

rDNA探针杂交检测病人痰标本中结核杆菌的研究

目的 应用结核分枝杆菌特异的rDNA探针杂交检测痰标本中的结核杆菌rDNA,评价其在临床标本检测中的应用价值。方法 用引物b对结核分枝杆菌16S-23SrDNA间隔区序列进行扩增,同时加入生物素标记,制成250bp的rDNA探针。对该探针的敏感性、特异性进行了研究,并对90份结核病人,30份非结核病人痰标本的PCR产物进行了斑点杂交检测。结果 rDNA探针检测引物bPCR扩增产物的敏感性为100pg。rDNA探针与受试24种分枝杆菌和11种非分枝杆菌引物bPCR扩增产物杂交只有结核分枝杆菌、胃分枝杆菌为阳性杂交,特异性较高。而rDNA探针对90份结核病人痰标本引物b扩增产物检测的阳性率为80.2%,高于PCR扩增产物电泳检测结果 (64%)。rDNA探针与30份非结核病人痰标本杂交结果均为阴性杂交。结论 rDNA探针与引物bPCR扩增相结合能提高结核病人痰标本检测的敏感性与特异性。     

防污染支气管肺泡灌洗对痰菌阴性肺结核的诊断价值

目的　研究防污染支气管肺泡灌洗(PBAL)技术对痰菌阴性肺结核患者的诊断价值。方法 对96例痰菌阴性肺结核患者进行经支气管镜防污染支气管肺泡灌洗,防污染支气管肺泡灌洗液经过前处理,离心沉渣行涂片荧光染色镜检抗酸杆菌、改良罗氏法分离培养及BACTEC MGIT960快速结核菌培养。结果 防污染支气管肺泡灌洗液离心沉渣镜检抗酸杆菌阳性20例(20.8%),改良罗氏培养基分离培养阳性30例(31.3%),BACTEC MGIT960快速培养技术培养阳性59例(61.5%),最终获病原学确诊62例,确诊率为64.6%。结论 防污染支气管肺泡灌洗对痰菌阴性肺结核患者具有重要的诊断价值,对灌洗液进行多种检查可提高检出的阳性率。     

福清市设立乡镇初筛点提高结核病人发现探讨

目的　探讨在乡镇卫生院设立初筛点提高结核病发现率。方法 将全市22个乡镇(农场)分成6个初筛点,由其中1个中心卫生院负责痰涂片、X线检查,经市(县)结防科定诊。结果 2003年6个初筛点可疑症状者就诊率1.93%,查痰率85.8%,涂阳病人占67.2%,涂阳新登记率40.6/10万,分别比2002年提高了91.1%,14.4%,60.4%,20.1%。结论 通过乡镇初筛既可提高结核病服务的可行性,又能提高涂阳病例发现。     

传染性肺结核病例不同检出和诊断方法评价

目的比较和评价基于胸透筛选的诊断规程与直接痰涂片方法检出、诊断传染性肺结核的效率和效益。方法对有可疑肺结核病症状者，采用胸透、拍摄胸片、痰涂片和痰培养４项检查。结果世界银行贷款中国结核病控制项目省的诊断规程，对涂阳、培阳和菌阳病例的漏检分别可达１０．５％、２８．３％、２８．２％，且较直接痰涂片方法诊断准确性差，支付费用高。结论直接痰涂片法为检出、诊断涂阳新病例的最佳方法，适用于我国广大农村地区。     

Diagnostic value of repeated sputum examinations in pulmonary tuberculosis: how many sputum specimens are adequate?

The aim of this study was to assess the value of examining multiple sputum specimens in the diagnosis of pulmonary tuberculosis (PTB). We analyzed sputum smear and culture results of patients diagnosed with culture-proven PTB during 2002. In 1027 patients, the diagnosis was established by detection of Mycobacterium tuberculosis bacilli in sputum samples. The number of sputum specimens submitted to laboratory was one in 634 cases, two in 167 cases, three in 186 cases and more than three in 48 cases. 760 (74%) cases had positive smear examination result. The first sputum smear examination was positive in 82.3% of smear positive cases. Either the first or the second sputum was diagnostic in 94.9% of these cases. Smear examination of third sputum revealed 4.2% additional diagnostic yield. In 863 (84%) cases, culture examination of the first sputum was positive. The second and the third sputum culture examinations revealed additional diagnostic yield of 11% and 4.5%, respectively. Percent 95 of culture-proven cases were diagnosed with the first two sputum cultures. In conclusion the majority of PTB cases can be diagnosed with the examination of two sputum specimens. Three or more sputum specimens submitted obtain a small additional diagnostic yield.     

巢式聚合酶链反应检测支气管内膜结核患者活检组织中结核 …

目的 了解巢式聚合酶链反应（ＮＰＣＲ）技术对支气管内膜结核的诊断价值。方法 应用巢式聚合酶链反应（ＮＰＣＲ）对６７份支气管内膜活检组织进行结核分支杆菌ＤＮＡ检测。并与病理检查,刷检涂片,支气管镜检后痰涂片和痰培养结果比较,对照为４３例支气管肺癌患者,结果６７例支气管内膜结核活检组织病理检查,刷检涂片,支气管镜检“激惹”后痰涂片,镜检术后痰培养及ＮＰＣＲ检测阳性率分别为１３％,１９％,２２％,１５％     

微量支气管肺泡灌洗在菌阴肺结核诊断中的应用

目的　探讨微量支气管肺泡灌洗对菌阴肺结核的诊断价值。方法　对 18例临床高度怀疑肺结核的痰菌阴性患者行灌洗液为 4 0 ml的微量支气管肺泡灌洗 ,并对回收液涂片做抗酸杆菌检查、普通细菌培养、细胞学检查及术后痰涂片检查抗酸杆菌。并于术后 1周至 1月复查胸片。结果　微量支气管肺泡灌洗液 (BAL F)检查抗酸杆菌阳性率为 5 0 % ,联合术后痰涂片检查抗酸杆菌阳性率为 71.4 % ,与术前相比 ,差异有显著性 (P<0 .0 1)。术后无 1例出现并发症。结论　微量支气管肺泡灌洗对菌阴肺结核的诊断是一种安全实用的检查方法。     

支气管镜检查对老年COPD合并肺结核患者的诊断价值

目的观察支气管镜检查在老年COPD合并肺结核患者诊断中的应用价值。方法分析142例老年COPD合并肺结核患者的临床资料,收集患者的痰涂片查抗酸杆菌结果,以及经支气管镜取支气管分泌物刷检涂片、支气管肺泡灌洗液（BALF）查抗酸杆菌、活检病理等检查结果,观察支气管镜检查对此类患者的诊断价值。结果老年COPD合并肺结核患者经支气管镜取支气管分泌物刷检涂片、BALF涂片、活检病理阳性率分别为44．4％,51．4％和60．6％,三种方法联合阳性率为100％,均显著高于痰涂片的阳性率21．8％（P〈0．05）。结论经支气管镜刷检、BALF涂片联合活检可提高老年COPD合并肺结核患者的阳性诊断率。     

贵州省黔东南州实施结核病控制项目对肺结核报告的影响分析

目的分析黔东南州实施中国结核病控制项目对肺结核报告的影响。方法对黔东南州结核病防治工作进行回顾总结以及2002—2004年推广实施中国结核病控制项目期间肺结核疫情报告和项目工作报表等资料进行分析。结果黔东南州推广实施中国结核病控制项目期间,涂阳肺结核报病率逐年提高,从2002年的4.84/10万提高到2004年的25.37/10万。肺结核报病率增加不明显,2003年较2002年增加22.0%,2004年较2003年反而下降4.7%。涂阳肺结核报病率提高主要是由项目县查痰率提高决定的。20022、003年项目县报告肺结核病人查痰率分别为60%、35.9%,明显高于非项目县,分别为6.3%、5.8%,有显著性差异(P<0.01)。2002年、2003年项目县肺结核报病率分别为132.7/10万和165.3/10万,明显高于非项目县,分别为109.6/10万和89.4/10万,(P<0.05)。项目县肺结核报病率和涂阳肺结核报病率高于结防机构肺结核报病率和涂阳肺结核新登记率。结论黔东南州实施中国结核病控制项目对肺结核的报告产生了积极作用,主要表现在报告肺结核的查痰率和涂阳肺结核的报告率逐年提高,但是结核病归口管理和肺结核报告工作有待进一步规范和加强,以便更好地促进黔东南州结核病控制工作。     

5种方法联合检测力阴肺结核诊断价值的研究

目的 探讨痰聚合酶链反应（ＰＣＲ）ＴＢ－ＤＮＡ检测、血清结核分支杆菌糖脂免疫球蛋白Ｇ（ＬＡＭＩｇＧ）、卡介菌免疫球蛋白Ｇ（ＰＰＤＩｇＧ）、结核特异性循环免疫复合物（ＳＣＩＣ）与结核菌素（ＰＰＤ）０．１Ｕ皮试联合检测对菌阴肺结核的诊断价值。方法 以上述５种检测方法用于力阳肺结核３１例、健康对照５３例、非结核肺疾病３０例、初治菌阴肺结核５４例同步检测。血清免疫学检测用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）。对     

利用症状者检查作为肺结核患病率调查方法的研究

目的　建立一个新的肺结核病涂阳患病率调查方法及其推算公式。方法 利用肺结核可疑症状者与无肺结核可疑症状者涂阳病人数构成比的参数作常数,建立直接症状检查法及其推数公式,并作费用分析。结果 (1)有肺结核可疑症状者与无结核症状者的涂阳病人比例,分别为 75%和25%。以此参数建立的(直接症状检查法 )肺结核涂阳患病率计算公式为:R=Sn×(1+1/3)N。R为肺结核涂阳患病率;Sn为有症状者患病人数;N为调查人数。(2)直接症状检查法调费用低,仅为普查法的24 .3%。结论 新建立的直接症状检查法样本大、参数(常数)稳定、科学性好、调查方法简便、实施工作费用低,可作为今后的肺结核患病率调查方法。