降压宝蓝片含药血清对过氧化氢损伤的人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的:探讨降压宝蓝片含药血清对过氧化氢(H₂O₂)诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法:体外培养HUVECs,分为空白组、模型组、降压宝蓝片含药血清低、中、高浓度组(含量血清体积分数为5%,10%,15%),显微镜下观察细胞形态,用噻唑蓝(MTT)法检测HUVECs活力,微板法检测上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性及一氧化氮(NO)的含量,ELISA法检测内皮素-1(ET-1),组织型纤溶酶原激活物(tPA),组织型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)的含量。结果:与空白组比较,模型组细胞活力显著降低,上清液中LDH活性明显增高,ET-1和PAI-1含量显著增加,NO和tPA含量显著下降(P<0.01);与模型组比较,降压宝蓝片中、高浓度组细胞活力显著升高,LDH活性显著减低,ET-1和PAI-1含量显著减少,NO和tPA显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论:降压宝蓝片含药血清对H₂O₂诱导的HUVECs损伤具有显著地保护作用。     

桃红四物汤含药血清对过氧化氢损伤的人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的:研究桃红四物汤含药血清对过氧化氢损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用.方法:SD大鼠灌胃给予桃红四物汤提取液(生药1.75 g·mL-1),每天2次,按10 mL·kg-1连续给药3d后,制备桃红四物汤含药血清.MTT法考察桃红四物汤含药血清(终浓度为5％,10％,15％)预处理对H2O2诱导细胞活力减少的作用;显微镜观察细胞形态学变化;以丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性以及AO/EB染色考察桃红四物汤含药血清对HUVECs凋亡及抗氧化能力的影响;Western blot法检测细胞Caspase-3的表达.结果:与空白血清对照组比较,经400 μmol·L-1H2O2刺激后细胞活性显著降低,含药血清组可显著提高SOD活力、降低MDA和LDH含量,并抑制Caspase-3表达.AO/EB染色及相差倒置显微镜也观察到桃红四物汤含药血清能降低H2O2诱导的细胞凋亡.结论:桃红四物汤含药血清对H2O2诱导的HUVECs损伤有显著地保护作用.     

桃红四物汤含药血清对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞TNF-α、MCP-1和IL-1β表达的影响

目的:研究桃红四物汤含药血清对脂多糖(LPS)诱导刺激下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用。方法:SD大鼠灌胃给予桃红四物汤提取液(生药1.75 g·m L-1),每天2次,按10 m L·kg-1连续给药3d后,制备桃红四物汤含药血清。MTT法检测桃红四物汤含药血清(终浓度为5%、10%和15%)预处理对LPS诱导细胞生存率减少的作用;real-time RT-PCR检测TNF-α、MCP-1和IL-1βmRNA表达情况;Western Blot方法检测MCP-1和NFκB蛋白表达;检测活性氧(ROS)含量,研究桃红四物汤含药血清对HUVEC抗氧化能力的影响。结果:与空白血清对照组比较,经LPS(1μg·m L-1)刺激后细胞ROS含量明显增高而生存率显著降低,同时细胞炎性因子TNF-α、MCP-1和IL-1βmRNA表达增高;含药血清组可显著提高HUVECs活力、降低ROS含量和TNF-α、MCP-1和IL-1βmRNA表达。结论:桃红四物汤含药血清对LPS诱导的HUVECs损伤有显著地保护作用。     

芎芍胶囊含药血清对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的 研究芎芍胶囊含药血清对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的增殖作用。方法 采用血清药理学和体外培养HUVEC的方法,通过倒置显微镜观察、MTT法和流式细胞术（FCM）检测芎芍胶囊高、中、低3个浓度含药血清对HUVEC增殖的影响。结果 MTT法检测结果显示高、中、低剂量的芎芍胶囊含药血清均有促进HUVEC增殖的作用,增殖率分别为54．14％、54．98％、33．77％;FCM法检测发现高、中、低剂量芎芍胶囊含药血清均可增加S期细胞比例,分别为52．14％、42．65％、37．08％;显微镜观察结果也显示各含药血清具有促进HUVEC增殖的作用。结论 芎芍胶囊能促进HUVEC的增殖,其促进细胞增殖的作用与浓度有一定的关系;提示芎芍胶囊的促血管新生作用可能是通过促进血管内皮细胞的增殖。     

三棱含药血清对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用研究

目的 研究三棱含药血清对脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）诱导人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）损伤的影响。方法 SPF级雄性SD大鼠随机分为空白组和三棱组,制备空白血清及含药血清。建立LPS诱导的HUVEC损伤模型,设置对照组、模型组、5%空白血清组和三棱含药血清（1%、3%、5%）组,采用MTT法检测三棱含药血清对细胞活力的影响;采用荧光显微镜分析各组细胞线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential,MMP）和活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平;采用ELISA法检测各组细胞上清液乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(cystein-asparate protease-1,Caspase-1)活性和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-17、组织因子...     

龙蛭汤含药血清对氧化损伤人脐静脉内皮细胞管型形成的影响

目的:探讨龙蛭汤含药血清对氧化损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)管型形成的影响。方法:建立过氧化氢(H2O2)诱导HUVECs氧化损伤模型,采用CCK-8增殖实验、划痕实验和Matrigel实验比较龙蛭汤含药血清(治疗组)和补阳还五汤含药血清(对照组)对氧化损伤的HUVECs的增殖、迁移和管型形成的不同影响。结果:治疗组较对照组细胞具有较高增殖能力、更快迁移速度及迁移距离、形成更多的管形腔及小分支(P0.05)。此外,24 h后治疗组细胞仍能保持完整的管腔结构和形态,而对照组则不能。结论:龙蛭汤含药血清较补阳还五汤含药血清在促进氧化损伤HUVECs管型形成方面具有更优效果。     

冠心合剂含药血清对人脐静脉内皮细胞细胞周期及其分泌VEGF的影响

目的:探讨冠心合剂含药血清对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)细胞周期和血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)分泌的影响.方法:离体培养人脐静脉内皮细胞,设空白组、含药血清大、中、小剂量组和bFGF组.流式细胞仪分析各组细胞的细胞周期,酶联免疫吸附(ELISA)法及逆转录聚合酶链反应(RT - PCR)观察各组内皮细胞分泌VEGF及VEGF-mRNA表达量的变化.结果:冠心合剂含药血清可以增加细胞周期中S期细胞数目,以小剂量组作用明显(P＜0.01);可以促进细胞分泌VEGF,并使VEGF-mRNA表达增加,其中小剂量组作用明显(P＜0.05).结论:冠心合剂促血管新生作用可能与促进血管内皮细胞VEGF的表达与释放有关.     

蛇毒三肽pENW对LPS诱导人脐静脉内皮细胞中NOS表达的影响

目的:探讨焦谷氨酸-天冬酰胺-色氨酸(蛇毒三肽p ENW)对体外脂多糖(LPS)诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护机制。方法:采用LPS(1 mg·L-1)模拟人脐静脉内皮细胞炎症损伤模型,实验分为空白组、LPS模型组、蛇毒三肽p ENW高、中、低剂量组(10-4,10-5,10-6mol·L-1)、N-甲基-L-精氨酸组(L-NMMA,5×10-4mol·L-1);除空白组外,其余各试验组加入LPS,蛇毒三肽p ENW高、中、低剂量组和L-NMMA组同时给予不同浓度的药物,孵育24 h后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测人脐静脉内皮细胞活力;Griess Reagent法用于检测一氧化氮(NO)的含量;比色法测定一氧化氮合酶(NOS)分型的活力;Western blot分析内皮型一氧化氮合酶(e NOS),诱导型一氧化氮合酶(i NOS)蛋白表达的变化。结果:与空白组比较,模型组LPS显著性损伤人脐静脉内皮细胞并诱导NO大量释放,t NOS,i NOS的活性明显增强(P0.01),i NOS蛋白表达显著上调(P0.01),e NOS的活性和蛋白表达并无差异;与模型组比较,蛇毒三肽p ENW高、中、低剂量能够剂量依赖性的抑制LPS对人脐静脉内皮细胞的损伤,并且能够明显降低NO的释放,同时,蛇毒三肽p ENW高、中、低剂量能够降低LPS诱导人脐静脉内皮细胞中的t NOS,i NOS的活性及i NOS的蛋白表达(P0.05,P0.01),与L-NMMA组作用一致,但蛇毒三肽p ENW对人脐静脉内皮细胞中e NOS的活性及蛋白表达无显著性影响。结论:蛇毒三肽p ENW可降低LPS对人脐静脉内皮细胞的损伤作用,其保护机制可能与逆转LPS诱导的i NOS蛋白表达上调及NO的释放相关。     

黄连解毒汤含药血清对血管内皮细胞增殖及粘附中性粒细胞能力的影响

以体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）为模型,应用MTT和蛋白染料染色法,观察给药一次及连续给药3d后5,1,1．5,2,2．5h所取黄连解毒汤（HLJDT）含药血清对HUVEC增殖及粘附中性粒细胞（PMN）能力的影响,以探讨HLJDT含药血清制备的最佳取血时间点及其抗炎作用机制,结果：（1）与对照血清相比,40％及20％浓度的含药血清HUVEC产有不同程度的抑制增殖作用,而10％浓度时无明显抑制作用;（2）各点的HLJDT含药血清均有一定的抑制HUVEC－PMN粘附的作用,且与取血时间点存在一定的时效关系。其抑制细胞粘附的最佳时间点为连续给药3d组的1．5h左右。结论：HLJDT含药血清能抑制HUVEC－PMN粘附,可能是HLJDT抗炎作用的机制之一。     

黄连解毒汤含药血清对LPSTNF-α诱导的人中性粒细胞与血管内皮细胞间粘附的影响

以体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）为模型,应用蛋白染料染色法,观察HLJDT含药血清及其与LPS／TNF－α共同处理HUVEC4h、12h、24h后,对中性粒细胞与血管内皮细胞粘附的影响。结果显示,HLJDT含药血清不仅能抑制非致炎状态下中性粒细胞与血管内皮细胞的粘附,而且能抑制致炎因子所诱导的中性粒细胞与血管内皮细胞粘附作用增强,这可能是黄连解毒汤抗炎作用的机制之一。     

痰瘀同治方药物血清对人脐静脉内皮细胞增殖和迁移的影响

目的观察痰瘀同治方对人脐静脉内皮细胞增殖和迁移的影响,探讨其促血管生成作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞模型,大鼠连续5 d灌胃不同剂量的痰瘀同治方(78.0、39.0、19.5 g/kg)制备各剂量药物血清,采用MTT法检测细胞活力来反应其增殖能力,用细胞划痕实验观察给药后细胞迁移能力。结果与正常组比较,490 nm处吸光度痰瘀同治方高、中剂量组内皮细胞增殖能力明显增强(P0.01),增殖率分别为49.78%、33.92%;内皮细胞迁移能力也有提高,划痕区相对距离明显减少(P0.01),细胞迁移率分别增加11.36%、11.62%。结论痰瘀同治方对人脐静脉内皮细胞有促进增殖和迁移的作用。     

常规制备家兔血清对人脐静脉内皮细胞-304的影响

目的 :探讨中药血清药理学研究中常规制备的正常家兔血清浓度变化对培养体系中细胞的影响。方法 :常规制备无污染、无溶血正常家兔血清 ,通过细胞形态学、台盼蓝染色活细胞计数、细胞毒四唑盐 (MTT)比色试验、乳酸脱氢酶 (LDH)及血管紧张素转换酶 (ACE)等指标 ,观察 5 %、10 %、2 0 %、4 0 %、60 %和 80 %家兔血清对人脐静脉内皮细胞 (VEC) 30 4的影响。结果 :5 %和 10 %两浓度组各指标均无变化 ,对VEC 30 4没有损伤作用。 4 0 %、60 %和 80 % 3个浓度组家兔血清浓度对细胞均有不同程度的损伤 ,而且随着浓度的增加 ,呈现出损伤加重的趋势 ,而 2 0 %的浓度从细胞形态、台盼蓝染色活细胞计数、MTT及ACE方面没有表现出明显的损伤作用 ,只有LDH含量差异有显著性 (P <0 0 1)。结论 :常规制备的家兔血清在无污染和无溶血的情况下 ,其对细胞的作用浓度是有一定限制的 ,当达到 4 0 %或更高浓度时有较为明显的损伤。所以 ,在中药血清药理学研究中 ,应进行常规制备正常血清及含药血清的细胞毒实验 ,以尽量减少血清本身带给实验的影响     

常规制备家兔血清对人脐静脉内皮细胞-304的影响

目的：探讨中药血清药理学研究中常规制备的正常家兔血清浓度变化对培养体系中细胞的影响。方法：常规制备无污染、无溶血正常家兔血清，通过细胞形态学、台盼蓝染色活细胞计数、细胞毒四唑盐（MTT）比色试验、乳酸脱氢酶（LDH）及血管紧张素转换酶（ACE）等指标，观察5％、10％、20％、40％、60％和80％家兔血清对人脐静脉内皮细胞（VEC）－304的影响。结果：5％和10％两浓度组各指标均无变化，对VEC－304没有损伤作用。40％、60％和80％3个浓度组家兔血清浓度对细胞均有不同程度的损伤，而且随着浓度的增加，呈现出损伤加重的趋势，而20％的浓度从细胞形态、台盼蓝染色活细胞计数、MTT及ACE方面没有表现出明显的损伤作用，只有LDH含量差异有显著性（P＜0．01）。结论：常规制备的家兔血清在无污染和无溶血的情况下，其对细胞的作用浓度是有一定限制的，当达到40％或更高浓度时有较为明显的损伤。所以，在中药血清药理学研究中，应进行常规制备正常血清及含药血清的细胞毒实验，以尽量减少血清本身带给实验的影响。     

芪红合剂含药血清对体外培养人外周血内皮祖细胞NO及NOS的影响

目的观察芪红合剂含药血清对人外周血内皮祖细胞（EPCs）一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）的影响,探讨其对人外周血内皮祖细胞的保护机制。方法12只雄性Wistar大鼠随机分为芪红合剂组（低剂量组、中剂量组、高剂量组）和对照组,制备含药血清和空白血清。采集健康成人外周血,分离单核细胞,体外培养7d后,收集贴壁细胞,激光共聚焦显微镜及流式细胞仪鉴定正在分化的EPCs,加入含不同浓度芪红合剂药物血清及空白血清的M199培养基孵育24h,将其在倒置荧光显微镜下计数,硝酸还原酶法测定NO,化学比色法测定NOS。结果芪红合剂药物组的血清NO水平和NOS活性明显高于空白血清对照组（P〈0.05）,并且呈剂量依赖性。结论芪红合剂可能通过增加EPCsNOS活性,促进NO分泌,防止血管内皮损伤及动员血管内皮祖细胞修复损伤血管来发挥血管内皮保护作用。     

通络宁心方对人脐静脉内皮细胞保护作用的实验研究

目的观察通络宁心方对人脐静脉内皮细胞分泌作用的影响。方法体外培养人脐带静脉内皮细胞;分别制备通络宁心方煎剂、复方丹参滴丸含药动物血清,随机分为正常组、模型组、治疗组(大、中、小剂量)、对照组(大、中、小剂量)8组。除正常组外,其余7组予H2O2造模,治疗组、对照组分别予大、中、小剂量含药血清,分别检测一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、P-选择素(Ps)指标。结果模型组NO含量显著低于正常组、治疗及对照大、中、小剂量组;模型组ET-1含量显著高于治疗及对照大、中、小剂量组;模型组Ps含量显著高于正常组,治疗中、小剂量组,对照大、中剂量组,与治疗大剂量、对照小剂量组比较,无显著性差异。结论通络宁心方对血管内皮细胞分泌作用的影响与复方丹参滴丸有同一性,均能对抗H2O2对血管内皮细胞的损伤。     

四妙勇安汤对人脐静脉血管内皮细胞ECV304的增殖作用

目的:以血清药理学的方法观察血四妙勇安汤对于培养人脐静脉内皮细胞ECV304增殖的影响,为治疗性血管新生的靶基因选择提供线索。方法:取对数生长期的内皮细胞,同步化于G0期,ELISA法检测BrdU的掺入;用流式细胞仪分析细胞周期各时相分布。结果:与空白血清对照组相比,10%的四妙勇安汤含药血清体积添加分数可显著提高BrdU的掺入量,促进DNA合成,提高ECV304细胞周期S期所占比例。结论:10%的四妙勇安汤含药血清能促进内皮细胞ECV304DNA合成,加快细胞周期进程,从而对其增殖具有促进的作用,可能具有血管生成的作用。     

四妙勇安汤对缺氧人脐静脉内皮细胞的影响

目的观察四妙勇安汤对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)缺氧损伤模型的影响。方法实验分为3组,即正常组、模型组、四妙勇安汤组,后2组建立体外细胞缺氧模型,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验观察四妙勇安汤对缺氧内皮细胞存活率的影响,测定四妙勇安汤对缺氧内皮细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量的影响,并用免疫荧光法检测细胞中血管内皮生长因子(VEGF)生成量的表达。结果四妙勇安汤能显著增加MTT实验中各孔吸光度值,降低LDH漏出量,增加VEGF的生成量。结论四妙勇安汤具有保护缺氧的HUVEC损伤的作用,其作用机制与增加细胞活性、降低缺氧造成的细胞毒性、增加VEGF的表达、促进血管新生的作用有关。