大花红天素对大鼠肺微血管内皮细胞凋亡影响的实验研究

目的研究大花红天素抗大鼠肺微血管内皮细胞凋亡的作用及机制.方法用血清药理学的方法观察不同量的含药血清(25、50、100μl)对体外培养的大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)凋亡的影响.细胞凋亡分别用流式细胞术、免疫细胞化学ABC法(测Fas及Bcl-2)测定.结果与对照组比,在RPMVEC中加25μl和50 μl含药血清组凋亡明显抑制(P＜0.05).凋亡抑制组Fas免疫细胞化学染色比对照组弱,阳性细胞明显减少(P＜0.05);而Bcl-2染色比对照组强,阳性细胞明显增加(P＜0.05).结论一定浓度的大花红天素具有抗大鼠肺微血管内皮细胞凋亡的作用,此作用与凋亡相关基因Fas表达减弱和Bcl-2表达加强有关.     

全反式维甲酸抑制微血管内皮细胞增殖

目的：研究不同浓度的全反式维甲酸（all-trans retinoic acid,atRA）对体外培养的小鼠脑微血管内皮细胞株bEnd.3增殖的影响。 方法： 将体外培养的bEnd.3细胞随机分为五组：空白对照组（加入atRA溶剂二甲亚砜, DMSO）、10-9、10-8、10-7和10-6mol/L atRA组。分别在24 h、48 h和72 h收集细胞，通过流式细胞术、MTT法检测不同浓度的atRA对bEnd.3增殖的影响，并采用免疫细胞化学法检测bEnd.3增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。在作用明显的时点（20 h）做小鼠血管新生相关基因芯片检测。 结果： 10-6mol/L atRA组在24 h明显抑制细胞增殖；PCNA表达明显降低；20 h时11种血管新生相关基因表达明显下调。 结论： 在体外细胞培养中，10-6mol/L 的atRA作用20-24 h 时，通过部分血管新生相关基因表达下调和PCNA的表达减少抑制bEnd.3细胞增殖。     

胰岛素对滋养层细胞凋亡的调节作用及机制

目的 :探讨胰岛素对培养的滋养细胞凋亡的影响及可能的机制。方法 :将培养的妊娠早期滋养层细胞 ,分为正常对照组(细胞 +培养液 )、H2 O2 组 (细胞 +培养液 +H2 O2 )和胰岛素 +H2 O2 组 (细胞 +H2 O2 +胰岛素 )。采用透射电镜观察及流式细胞术 ,观察H2 O2 诱导的细胞凋亡及胰岛素对H2 O2 诱导的细胞凋亡的抑制作用。并检测胰岛素对滋养细胞caspase 3的活性及Bcl 2蛋白表达的影响。结果 :H2 O2 可诱导培养的滋养细胞凋亡 ,透射电镜下可见特征性的细胞核改变。胰岛素可显著抑制H2 O2 诱导的细胞凋亡 ,流式细胞仪检测其凋亡率较H2 O2 组显著下降 (P <0 .0 1)。H2 O2 组滋养细胞中caspase 3的活性较对照组显著增高 (P <0 .0 1) ,而Bcl 2蛋白的表达则较对照组显著下降 (P <0 .0 1)。结论 :胰岛素可明显抑制H2 O2诱导的滋养细胞凋亡 ,其机制可能与降低caspase 3的活性和促进Bcl 2蛋白的表达有关     

小鼠脑微血管内皮细胞株bEnd.3的细胞特征及基因表达谱分析

目的:对一种小鼠脑组织来源的血管内皮细胞株bEnd.3的主要细胞特征进行研究并做血管内皮细胞生物学功能基因芯片分析。方法:利用倒置显微镜、扫描和透射电子显微镜观察细胞形态特征;免疫细胞化学法显示血管内皮细胞特异性表面标志;ELISA定量检测PGE₂;流式细胞术、MTT法研究增殖和凋亡、血管内皮细胞基因芯片研究正常培养bEnd.3基因表达谱。结果:bEnd.3具备多种典型的微血管内皮细胞(MVEC)特征:细胞呈多边形或梭型、呈铺路石样生长;存在管腔样结构(TLS)和毛细血管样网络,细胞表面有丰富的微绒毛;vW因子、CD34阳性;CD31、CD36、CD105等也有不同程度的表达;细胞高水平分泌前列腺素E₂(PGE₂);多种与正常血管功能密切相关的基因也有不同程度的表达。结论:bEnd.3保留了MVEC的基本特性,可用于心脑血管疾病、肿瘤等重大疾病的发病机制的基础与临床研究。     

肌肽对脂多糖诱导脑微血管内皮细胞凋亡的保护作用及机制探讨

目的　探讨肌肽对脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）引起脑微血管内皮细胞（HBMEC）凋亡的保护作用及机制。 方法　用倒置显微镜观察细胞形态变化;MTT法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞内的活性氧（ROS）含量及细胞凋亡情况;Western blot法检测NF-κB P65、白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）蛋白表达。 结果　与对照组相比,LPS组细胞存活率略降低（P>0.05）,早期凋亡率明显增加,同时ROS含量、核内NF-κB P65及胞浆IL-1β和TNF-α的含量均显著增加（P<0.05）。与LPS组相比,LPS+肌肽组（10 mmol/L、20 mmol/L、40 mmol/L）凋亡率有明显降低,ROS含量、核内NF-κB P65蛋白量及胞浆IL-1β和TNF-α的含量均不同程度显著降低（P<0.05）。 结论　肌肽可能通过抑制LPS诱导ROS释放,避免NF-κB P65过度激活,进而减少IL-1β和TNF-α分泌,对脑微血管内皮细胞发挥保护作用。     

松弛素保护心肌微血管内皮细胞缺氧复氧损伤的机制

背景：研究报道松弛素可显著改善病理因素导致的心肾功能障碍,抑制心肌肥厚、抗纤维化以及改善缺血再灌注损伤等,但其对内皮细胞缺氧复氧损伤的保护机制尚不明确。目的：探讨松弛素保护心肌微血管内皮细胞缺氧复氧损伤的机制。方法：取生长状态良好的小鼠心肌微血管内皮细胞系(H5V),分3组处理：对照组常规培养33 h,模型组常规培养24 h后给予6 h缺氧+3 h复氧模拟心肌缺氧再灌注损伤,松弛素组常规培养(加180 ng/mL松弛素)24 h后给予6 h缺氧+3 h复氧(加180 ng/mL松弛素)模拟心肌缺氧再灌注损伤。检测细胞通透性与Caspase-3的表达,细胞上清中肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素6水平,RT-PCR检测细胞中钙黏蛋白、Akt1、GSK-3β mRNA表达;Western blot检测细胞中钙黏蛋白、Akt、GSK-3β蛋白表达。结果与结论：(1)与对照组比较,模型组细胞通透性增强(P <0.05),细胞内Caspase-3表达升高(P <0.05);与模型组比较,松弛素组细胞通透性降低(P <0.05),细胞内Caspase-3表达降低(P &l...     

半胱天冬酶(caspase)

半胱天冬酶是ICE/CED-3蛋白酶家族的总称,在细胞凋亡中起着关键的作用。迄今已鉴定的人类半胱天冬酶共有11种,其底物可分为4类。半胱天冬酶的激活机制已初见端倪,有非自然抑制剂和自然抑制剂。抑制半胱天冬酶活性作为神经变性疾病的治疗途径已开始探索。     

雷公藤甲素对嘌呤霉素所致足细胞凋亡的抑制作用

目的 为了探讨雷公藤治疗足细胞病变的机制,利用嘌呤霉素诱导足细胞凋亡的体外损伤模型,观察雷公藤甲素对足细胞损伤的保护作用及其机制.方法 用CCK法观察雷公藤甲素对足细胞增殖活性的影响;应用TUNEL染色法定性观察雷公藤甲素对嘌呤霉素诱导的足细胞凋亡的保护作用;采用PI染色后再经流式细胞仪来定量分析雷公藤甲素对足细胞凋亡的抑制效应.结果 雷公藤甲素质量浓度小于1 μg/mL时对足细胞生存率没有明显影响;100 μg/mL嘌呤霉索诱导足细胞凋亡,但是此凋亡效应可以被1 μg/mL雷公藤甲素抑制;而且这种抑制作用具有时间依赖性.结论 雷公藤甲素通过抑制细胞凋亡来保护足细胞.雷公藤甲素对足细胞的保护作用可能是临床上雷公藤有效治疗足细胞病变的机制之一.     

白藜芦醇诱导胃癌原代细胞凋亡(英文)

目的：探讨白藜芦醇诱导胃癌原代细胞发生凋亡的可能性，揭示该凋亡发生与Bcl-2和Bax之间的关系。 方法： 在体外实验中，采用MTT比色法测定白藜芦醇对胃癌原代细胞的生长抑制率；以透射电镜和TUNEL 染色法，定性、定量地研究白藜芦醇与胃癌原代细胞凋亡的关系；通过免疫组织化学法和RT-PCR检测凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。 结果： 白藜芦醇对胃癌原代细胞生长有明显抑制作用，随白藜芦醇浓度增加和培养时间的延长而增强；白藜芦醇诱导胃癌原代细胞出现典型的凋亡细胞形态；TUNEL 染色法可见，经白藜芦醇处理24 h、48 h、72 h、96 h后，胃癌原代细胞凋亡数明显随时间增加。免疫组化发现经白藜芦醇处理24 h、48 h、72 h、96 h后，胃癌原代细胞的Bcl-2蛋白阳性率减少，Bax蛋白阳性率增加。经白藜芦醇处理24、48、72、96 h后，RT-PCR检测发现胃癌原代细胞bcl-2和bax的mRNA表达阳性，并显示bcl-2 mRNA条带密度随时间的延长而递减，bax mRNA条带密度随时间的延长而增强。 结论： 白藜芦醇可能通过下调bcl-2的表达和上调bax的表达而诱导胃癌原代细胞发生凋亡。     

五味子乙素对氧化损伤的晶状体上皮细胞凋亡的影响

目的:探讨五味子乙素(Sch B)对实验性氧化损伤大鼠晶状体上皮细胞(LEC)凋亡的影响。方法:采用无菌操作摘取SD大鼠双眼,并在手术显微镜下分离晶状体,随机分为空白对照组、过氧化氢组(H₂O₂)、吡诺克辛(PS)组和Sch B组。使晶状体孵育在300μmol·L^-1H₂O₂培养液中复制LEC凋亡模型,同时加入终浓度为0.5mmol·L^-1的SchB,置二氧化碳培养箱共同孵育24h。取晶状体前囊膜,采用TUNEL法检测LEC凋亡及凋亡率,透射电子显微镜观察LEC超微结构改变和凋亡小体形成。结果:H₂O₂组LEC凋亡率(92.0±2.6)显著高于空白对照组(3.5±1.8)(P<0.01);SchB组LEC凋亡率(13.8±3.0)显著低于H₂O₂组,且与PS组(56.0±9.9)有显著的差异(P<0.05)。超微结构研究显示,H₂O₂组绝大多数LEC发生凋亡,并呈凋亡各期严重改变的全过程;Sch B组仅少数LEC发生凋亡,并多为早期或中期的轻微改变。结论:Sch B可明显抑制实验性氧化损伤大鼠LEC凋亡,且明显优于PS滴眼液。     

辅酶Q10对体外培养的小鼠脑微血管内皮细胞凋亡和增殖的影响

目的:研究辅酶Q₁₀抑制血管内皮细胞凋亡和增殖的作用及其可能机制。方法: 用血清药理学方法和流式细胞仪法检测体外培养的小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)中不同浓度CoQ₁₀对细胞凋亡和增殖的变化。用免疫细胞化学ABC法观察Fas蛋白及Bcl-2蛋白表达的变化。结果: 与对照组比(加不含药血清),在bEnd.3细胞培养中加入50 μL、25 μL、12.5 μL含CoQ₁₀的血清组细胞凋亡明显抑制(P<0.05)。免疫细胞化学检验结果证明,此时Fas蛋白表达明显减弱,而Bcl-2蛋白表达明显增强(P<0.05)。 但CoQ₁₀对细胞增殖影响不显著。 结论: 一定浓度的CoQ₁₀能通过上调Bcl-2蛋白和下调Fas蛋白表达抑制小鼠微血管内皮细胞凋亡,从而对微血管内皮细胞起保护作用。     

舒洛地特对低氧状态下人真皮微血管内皮细胞凋亡的影响

目的:探讨舒洛地特(sulodexide,SDX)对低氧状态下人真皮微血管内皮细胞(human dermal microvascular endothelial cells,HDMECs)凋亡的影响及其分子机制。方法:对HDMECs进行分组培养:常氧对照组在常氧状态下培养;低氧对照组于1%O_2、5%CO_2、37℃条件孵箱培养24 h;处理组用不同浓度(0.25、0.5和1 LSU/m L)舒洛地特作用于HDMECs低氧培养24 h。CCK-8法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;caspase-3活性检测试剂盒测定细胞内caspase-3活性;Western blot和real-time PCR检测促凋亡因子P53、Bax和caspase-3及凋亡抑制因子Bcl-2的蛋白及m RNA表达。结果:低氧状态下舒洛地特可提高HDMECs生长活力,降低其凋亡率,抑制促凋亡因子P53、Bax和caspase-3的表达以及caspase-3的活性,提高抑凋亡因子Bcl-2的表达。结论:舒洛地特可以抑制低氧状态下人真皮微血管内皮细胞的凋亡,其分子机制与抑制线粒体凋亡通路有关。     

小鼠脑微血管内皮细胞的原代培养与纯化

目的:探讨纯度较高的小鼠脑微血管内皮细胞的分离与原代培养。方法:取8～14周龄BALB/c或C57/BL6小鼠,无菌分离脑组织,采用改进的两种方法即2次酶消化和1次密度梯度离心法及1次酶消化和1次密度梯度离心法分离小鼠脑微血管段,接种于涂布有Ⅳ型胶原的培养皿上进行原代培养,相差显微镜下观察细胞形态,并以免疫荧光法鉴定Ⅷ因子相关抗原。结果:改进的两种方法均可见内皮细胞在接种后12～16 h从微血管段周围爬出,5～7 d时细胞呈"漩涡状"生长,并可见细胞汇合,90%以上培养的细胞Ⅷ因子相关抗原表达阳性。结论:改进后的两种方法均能进行较高纯度的小鼠腑微血管内皮细胞的分离和原代培养。     

Ghrelin对棕榈酸诱导的内皮细胞凋亡的影响及机制

 目的 探讨ghrelin能否抑制棕榈酸诱导的大鼠主动脉内皮细胞凋亡及其与PI3K/Akt通路的关系。 方法 大鼠主动脉内皮细胞在分别在含或不含0.3mM棕榈酸的DMEM培养基中孵育,培养基中加或不加ghrelin及PI3K/Akt的阻断剂LY294002,流式细胞仪Annexin Ⅴ/PI法检测凋亡,分光光度计检测caspase-3活性,Western blot检测总Akt及磷酸化Akt。 结果0.3mM棕榈酸作用24小时增加大鼠主动脉内皮细胞凋亡,Ghrelin抑制棕榈酸诱导的内皮细胞凋亡。棕榈酸干预内皮细胞24小时能显著抑制Akt的磷酸化,加入ghrelin可引起Akt的活化。Ghrelin引起的Akt的活化能够显著地被PI3K/Akt阻断剂LY294002所阻断,而且LY294002能够阻断ghrelin对棕榈酸诱导的内皮细胞凋亡的保护作用。 结论 Ghrelin能够抑制棕榈酸诱导的大鼠主动脉内皮细胞凋亡,ghrelin的抗凋亡作用至少是部分通过PI3K/Akt通路起作用的。     

Bradykinin enhances Sindbis virus infection in human brain microvascular endothelial cells

Sindbis virus (SINV) induces inflammatory and vasoactive responses that are associated with rash and arthritis in human infections. The mechanisms underlying infection-associated microvasculopathy are still unknown. We investigated whether endothelial cells infected by SINV are differentially responsive to bradykinin (BK), a potent inducer of inflammatory edema in a broad range of infectious diseases. Human endothelial cells (HBMECs) infected with SINV presented an upregulation of bradykinin B2 receptors (BK2R) expression. Also, BK reduced SINV-induced apoptosis and enhanced virus replication in HBMECs in a way dependent on BK2R, PI3 kinase and ERK signaling. Strikingly, intracerebral infection of mice in the presence of a BK2R antagonist reduced the local viral load. Our data suggest that SINV infection renders human endothelial cells hypersensitive to BK, which increases host cell survival and viral replication. Ongoing studies may clarify if the deregulation of the kinin pathway contributes to infection-associated vasculopathies in life-threatening arbovirus infections.     

瑞舒伐他汀改善缺氧/复氧引起的脑微血管内皮细胞损伤的作用

目的:探讨瑞舒伐他汀改善缺氧/复氧引起的小鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs)损伤的作用及其可能机制。方法:原代分离培养BALB/c小鼠BMECs,利用氧糖剥夺/复氧模拟体外缺血再灌注损伤,以瑞舒伐他汀处理干预。观察细胞形态,通过MTT实验测定BMECs细胞的活力,荧光染料羧基荧光素二乙酸酯琥珀酰亚胺脂(carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester,CFDA-SE)细胞增殖检测试剂盒观察造模及用药后细胞数目百分比的变化;免疫荧光染色检测细胞凋亡相关蛋白cleaved caspase-3的水平; Western blot法检测Bcl-2、Bax、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP) 2、MMP9、磷酸化核因子κB(phosphorylated nuclear factor kappa B,p-NF-κB)、磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶(phosphorylated P38 mitogen-activated protein kinase,p-P38)和磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phosphorylated c-Jun N-terminal kinase,p-JNK)的蛋白水平。结果:浓度为10μmol/L的瑞舒伐他汀可抑制氧糖剥夺/复氧诱导的BMECs存活率减低现象,同时维持BMECs结构。此外,瑞舒伐他汀能够显著抑制cleaved caspase-3、MMP2、MMP9、p-NF-κB、p-P38及p-JNK的蛋白水平(P 0. 05),上调氧糖剥夺/复氧导致的Bcl-2/Bax降低(P 0. 05)。结论:瑞舒伐他汀可通过降低凋亡相关蛋白及基质金属蛋白酶的表达,对抗缺氧/复氧引起的BMECs损伤,提示其在缺血再灌注损伤时维持血脑屏障完整性方面具有潜在应用价值。     

同型半胱氨酸对培养的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的:研究同型半胱氨酸(Hcy)对培养的人脐静脉内皮细胞(hUVEC)凋亡的影响。方法:原代培养hUVEC,通过Hoechst 33258荧光染色观察细胞核形态改变,琼脂糖凝胶电泳检测 DNA片段,流式细胞术检测Annexin V/PI联合标记的细胞凋亡率, Western blot检测P53、Bax的表达及比色法测定caspase 3活性。 结果: 同型半胱氨酸诱导培养的hUVEC出现明显的凋亡形态学改变。琼脂糖凝胶电泳检测可见明显的"DNA ladder"图谱。Hcy诱导凋亡细胞数明显增加。同时促进Bax、P53的表达,使caspase 3活性显著增强。结论: 同型半胱氨酸诱导培养的hUVEC凋亡。     

Oridonin-induced apoptosis of Jurkat cells and its mechanism

Jurkat cells in culture medium in vitro were exposed to different concentrations of oridonin. The proliferation rate of the cells was measured by MTT assay, cell apoptotic rate was detected by flow cytometry, morphology of cell apoptosis was observed by Hoechst 33258 fluorescence staining, DNA fragmentation was assayed by agarose gel electrophoresis, caspase-3 and poly(ADP-ribose) polymerase (PARP) expressions were detected by Western blotting using polyclonal anti-caspase-3 antibody and mouse anti-human PARP monoclonal antibodies, and caspase-3 activity was assayed with a colorimetric assay kit before and after apoptosis had occurred. Oridonin (over 32 mol/l) inhibited the growth of Jurkat cells and caused significant apoptosis. The suppression was both time-dependent and dose-dependent. Marked morphological changes of cell apoptosis, including condensation of chromatin and nuclear fragmentation, were clearly observed by Hoechst 33258 fluorescence staining, as well as by agarose gel electrophoresis. Western blotting showed cleavage of the caspase-3 zymogen protein (32 kDa), with the appearance of its 17 kDa subunit, and a cleaved 89-kDa fragment of 116 kDa PARP was also found, together with a concurrent increase in caspase-3 apoptotic activity. Oridonin can induce apoptosis in Jurkat cells via activation of caspase-3; the results indicate that oridonin might be an important potential anti-leukaemia reagent.