我国1980—1989年伤寒沙门氏菌噬菌体分型调查

1980～1989年共搜集我国28省市伤寒沙门氏菌2946株。以96型vi噬菌体分型,查知我国伤寒沙门氏菌噬体型别已达50个。其中主要流行型别为M_1、A、D_2、E_1、D_1、J_1、E_(10)、K_1、B_3和E_(11),占菌株数的91.15％。     

肺炎克雷伯菌调控肺泡Ⅱ型上皮细胞自噬的机制研究

目的探讨肺泡Ⅱ型上皮细胞自噬体与肺炎克雷伯菌相互作用的分子机制。方法建立体外肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae)感染A549细胞模型,分为感染组(Pneu)、自噬抑制组(Pneu+3-MA)、自噬诱导组(Pneu+rapa)、阴性对照组(ctrl),每组3个样本;通过免疫荧光染色与western-blot实验检测肺炎克雷伯菌不同时间点及不同浓度感染后细胞中自噬相关蛋白LC3Ⅱ的表达变化及分布情况;进一步采用自噬抑制剂3-Methyladenine (3-MA)与激动剂雷帕霉素(Rapamycin)干预细胞,观察K.pneumoniae感染A549细胞后自噬水平的变化。结果与未感染肺炎克雷伯菌的对照组相比,共聚焦显微镜观察感染组细胞LC3自噬体发生明显改变(P<0.05),western-blot检测感染组细胞LC3Ⅱ蛋白表达上升(P<0.05),且LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ升高(P<0.05),表明肺炎克雷伯菌能够促进细胞自噬,随着细菌感染细胞比例(MOI)的增大,细胞自噬随之增多,随着时间的延长,肺炎克雷伯菌对细胞的入侵能力减弱(自噬增加),LC3Ⅱ蛋白的表达逐渐增加。自噬抑制剂和激动剂处理细胞后,免疫荧光和western-blot检测结果显示,感染组、自噬诱导组的LC3Ⅱ蛋白高于对照组(P<0.05),采用3-MA处理的感染组LC3Ⅱ蛋白低于感染组(P<0.05),表明3-MA能够抑制细胞的自噬,Rapamycin可以促进细胞的自噬。结论自噬在肺泡Ⅱ型上皮细胞抵抗肺炎克雷伯菌过程中发挥着非常重要的作用。     

脉冲凝胶电泳技术在沙门菌属染色体结构分析中的应用

沙门菌属 (Salmonella)是肠杆菌科家族中的成员 ,属内有五个亚属 ,包括 2 5 0 0多个血清型。因该属细菌中不同的种、型往往具有很强的宿主特异性 ,故能在哺乳类、鸟类和爬行类等多种动物中引起疾病。多年来对该属细菌的研究主要基于宿主特异性、是否存在特异性表面抗原及对噬菌     

自噬与胰岛素抵抗关系的研究进展

胰岛素抵抗是肥胖、高脂血症和2型糖尿病等代谢性疾病的主要发病机制之一。胰岛素抵抗的发生机制复杂,至今仍不十分清楚。近年来的研究显示,自噬参与胰岛素抵抗发生过程,其机制可能是通过胰岛素信号转导通路、氧化应激、内质网应激以及游离脂肪酸途径。本文就自噬的基本概念及在胰岛素抵抗中的可能作用机制作一综述。     

亚砷酸钠致人肝星状细胞纤维化及自噬中DNA甲基化位点筛查及差异甲基化谱构建

目的分析亚砷酸钠(NaAsO2)致人肝星状细胞(LX-2细胞)纤维化及自噬相关的DNA甲基化位点, 筛选与纤维化及自噬相关的特异性甲基化基因。方法采用DNA甲基化芯片Illumina Infinium Methylation EPIC BeadChips(850K甲基化芯片)对LX-2细胞(对照组)及NaAsO2干预(低、中、高剂量组:终浓度分别为5、10、15 μmol/L NaAsO2, 干预48 h)致LX-2细胞纤维化及自噬模型进行全基因组DNA检测, 寻找差异甲基化位点。对筛选出的差异甲基化基因进行GO功能富集分析和KEGG信号通路富集分析, 了解基因功能。结果高剂量组细胞纤维化及自噬模型构建成功。850K甲基化芯片检测结果显示, 高剂量组与对照组间存在25 817个显著差异甲基化位点, 其中高甲基化位点12 083个、低甲基化位点13 734个。GO功能富集分析显示, 差异甲基化基因参与的分子功能主要包括蛋白结合、离子结合、催化活性、酶结合。KEGG信号通路富集分析显示, 差异甲基化基因参与的通路主要包括代谢通路、癌症通路、磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt...     

石蒜碱通过Mek/Erk信号通路诱导自噬抑制肝癌细胞增殖

目的 探讨石蒜碱对肝癌细胞增殖及自噬的影响,并分析其机制。方法 采用CCK-8法分析石蒜碱对肝癌细胞增殖的抑制作用,MDC 染色法检测石蒜碱对HepG-2细胞自噬的影响,Western blot检测石蒜碱对HepG-2细胞自噬相关蛋白Beclin-1、LC3 II、Mek/Erk信号通路关键因子Mek、Erk蛋白的影响,运用自噬抑制剂（3-MA）研究自噬对细胞增殖的影响。数据通过用SPSS 19.0进行统计分析。结果 CCK-8结果提示石蒜碱对肝癌HepG-2细胞的增长具有抑制作用（F=87.362,P<0.001）;MDC 染色法显示石蒜碱促进自噬小泡的形成。Western blot结果显示石蒜碱上调Beclin-1、LC3 II水平抑制自噬,下调Mek、Erk2磷酸化水平（p-Mek、p-Erk2）抑制HepG-2细胞增殖,差异均有统计学意义（F=25.571, P<0.001;F=315.002,P<0.001;F=35.481,P<0.001;F=150.103,P<0.001）;与100μmol/L石蒜碱组相比,3-MA+石蒜碱组LC3II蛋白水平明显下调,p-Mek、p-Erk2蛋白水平明显上调（t=5.988,P=0.004;t=2.883,P=0.045;t=4.157,P=0.014）。结论 一定浓度的石蒜碱能抑制肝癌HepG-2细胞增殖,可能与调控Mek/Erk信号通路诱发自噬有关。     

隐丹参酮对人肝癌HepG2细胞自噬及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的观察隐丹参酮对人肝癌HepG2细胞自噬的影响,并探讨其可能机制。方法体外培养HepG2细胞,采用CCK-8检测细胞活力,并计算IC_(50);Annexin V-FITC/PI双染法检测HepG2细胞凋亡;mRFP-GFP-LC3转染HepG2细胞,检测自噬流情况;Western blot分析检测自噬相关蛋白LC3,Beclin-1及PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白的表达。结果隐丹参酮可显著抑制HepG2细胞活力,并诱导细胞凋亡;隐丹参酮显著增加HepG2细胞自噬小体及自噬溶酶体数量(P0.05);隐丹参酮显著升高HepG2细胞LC3-II/LC3-I比值及Beclin-1表达(P0.05),同时降低p-PI3K/PI3K,p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR(P0.05)。结论隐丹参酮可诱导HepG2细胞自噬,其机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路有关。     

Hep-2人喉表皮样癌细胞自噬基因时空的表达及白藜芦醇的干预研究

目的观察人喉表皮样癌(human laryngeal epidermoid,Hep-2)细胞自噬基因时空的表达及白藜芦醇的干预研究。方法在2014年1—12月用RT-PCR和Western blot分别分析不同剂量和不同时间白藜芦醇对自噬基因的m RNA和蛋白水平的影响。组间差异统计分析采用One-way ANOVA,P0.05为差异有统计学意义。结果白藜芦醇剂量和时间依赖性地减少Hep-2细胞的存活率,以80μm作用的效果作为显著,白藜芦醇剂量和时间依赖性地促进Hep-2细胞自噬,以40μm和第6 h时最为显著,其能增加LC3Ⅱ与LC3Ⅰ的比例,促进beclin-1蛋白和m RNA的表达。结论白藜芦醇通过不同剂量和不同时间能依赖性地促进Hep-2细胞自噬,抑制自噬则白藜芦醇促Hep-2细胞凋亡作用减弱。     

细胞自噬与脓毒症

自噬可分为3种类型：微自噬(microautophagy)、分子伴侣介导的自噬(chaperone mediated autophagy,CMA)和巨自噬(macroautophagy)。巨自噬(简称自噬autophagy)是一种基因调控的、高度保守的细胞降解过程,也是一种重要的自我平衡的过程,发生于所有真核细胞中［1-3］。在针对应激的过程中,自噬常常扮演着细胞应答的角色［4］。而且,自噬无论在先天免疫还是适应性免疫机制中均有着不可忽视的重要作用［2］。自噬与各种疾病的病理及生理过程广泛相关（例如感染、肿瘤、神经退行性疾病、心血管及肺部疾病等）,近期的研究［5-6］也表明,自噬在脓毒症中发挥一定的保护作用。本文从细胞病理学和分子生物学角度就细胞自噬在脓毒症发生发展中的作用作一综述,为寻找脓毒症治疗的新手段提供依据与线索。     

自噬在氯化镉诱导小鼠初级精母细胞凋亡中的作用

目的 探究自噬在氯化镉(cadmium chloride, CdCl₂)诱导小鼠初级精母细胞(GC-2 spd)凋亡中的作用及其潜在作用机制。方法 以不同浓度CdCl₂(0、5和10μmol/L)染毒GC-2 spd细胞24 h。Hoechst33342染色法和单丹磺酰戊二胺法分别检测凋亡小体和自噬体;TUNEL荧光染色检测细胞凋亡情况;在不含/含CdCl₂(10μmol/L)的细胞培养液中分别加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(60μmol/L)、凋亡抑制剂胱天蛋白酶家族抑制剂(50 nmol/L)、自噬激动剂雷帕霉素(50 nmol/L)和溶酶体抑制剂氯喹(10μmol/L)处理GC-2 spd细胞24 h, Western blot检测细胞内自噬相关蛋白LC3、P62以及促凋亡蛋白cleaved Caspase-3和cleaved Caspase-9的表达水平。结果 CdCl₂染毒细胞24 h后,自噬体聚集且凋亡细胞增多。Western blot结果显示,5和10μmol/L CdCl_2<...     

儿童葡萄球菌性烫伤样皮肤综合征86例临床分析

葡萄球菌性烫伤样皮肤综合征(staphylococcal scalded skin syndrome,SSSS)是由凝固酶阳性噬体Ⅱ组71型金葡萄引起的急性表皮颗粒层坏死的严重型皮肤感染.     

激活自噬改善炎性因子诱导的血管细胞粘附分子1的表达

目的血管细胞粘附分子(VCAM)1表达是心血管疾病发生的风险因素。本研究旨在揭示自噬对炎性因子诱导的VCAM-1表达的影响及潜在分子机制。方法以人原代脐静脉血管内皮细胞为研究对象,分别采用炎性因子(肿瘤坏死因子-α,TNF-α或白细胞介素-1β,IL-1β)、自噬激动剂雷帕霉素、自噬抑制剂氯喹等对细胞进行干预,检测VCAM-1的mRNA、蛋白表达及磷酸化ERK1/2 MAPK的变化。结果炎性因子显著激活VCAM-1的转录及蛋白表达(P0.05)。激活自噬可显著降低TNF-α诱导的VCAM-1表达,而抑制自噬显著加重TNF-α诱导的VCAM-1增加。ERK1/2 MAPK抑制剂U0126显著抑制TNF-α诱导的VCAM-1表达(P0.05)。自噬调控显著影响TNF-α诱导的磷酸化ERK1/2表达增加(P0.05)。结论自噬激活可能通过ERK1/2 MAPK参与的信号通路改善炎性因子诱导的VCAM-1表达增加,自噬调控可作为改善血管内皮细胞功能及其相关心血管疾病的潜在治疗手段。     

饱和脂肪酸与单不饱和脂肪酸对HepG2细胞自噬和凋亡的影响

目的比较饱和脂肪酸棕榈酸(palmitic acid,PA)和单不饱和脂肪酸油酸(oleic acid,OA)对HepG2细胞凋亡和自噬的影响。方法 PA和OA处理HepG2细胞,CCK-8检测脂肪酸的细胞毒性,caspase-3活性测定检测脂肪酸对细胞凋亡的影响,油红O染色检测细胞内脂质沉积,酶法检测细胞内甘油三酯的含量,Western blot检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和凋亡相关蛋白caspase-3的表达,实时荧光定量PCR检测相关基因表达。结果 PA和OA都均同时诱导HepG2细胞凋亡与自噬,但PA的影响明显强于OA;PA诱导HepG2细胞自噬相关基因LC3B和VPS38表达、促进脂肪酸β-氧化的PPARα基因mRNA水平升高,但对细胞内脂肪沉积没有明显作用;而OA则导致HepG2细胞内甘油三酯的水平明显增加,但对上述基因表达没有明显影响。结论饱和脂肪酸PA和不饱和脂肪酸OA均能引起HepG2细胞凋亡和自噬,但PA的作用强于OA。     

吸入镍后不同超微结构的肺泡巨噬细胞中溶菌酶活性变化的研究

以往研究表明,吸入的镍能选择性地作用于肺泡Ⅱ型上皮细胞和肺泡巨噬细胞,并使表面活性物质增加。研究还发现,对肺泡巨噬细胞的某些毒作用是表面活性物质增加的结果。家兔吸入低浓度金属镍或NiCl_2的气溶胶,可明显降低肺泡灌洗液和肺泡巨噬     

自然水体中噬菌蛭弧菌与大肠菌群数细菌总数之间的关系

本文调查了３９份水样中噬菌蛭弧菌、大肠菌群、细菌总数，发现水样中噬菌蛭弧菌与大肠菌群数呈现高度正相关（ｒ＝０．７６４９，Ｐ＜０．００５），与细菌总数也呈高度正相关（ｒ＝０．８９９，Ｐ＜０．００５），当细菌总数在１０３个／ｍｌ以下，大肠菌群数在９５个／Ｌ以下时，噬菌蛭弧菌的检出为０，随水体中细菌总数的增加，噬菌蛭弧菌含量也增加。     

Ⅲ型磷脂酰肌醇-3激酶复合物调节自噬的研究进展

自噬指细胞内的物质通过膜转运方式运输到溶酶体进行降解,是一个多种因子参与的复杂过程。Ⅲ型磷脂酰肌醇-3激酶(classⅢphosphoinositide 3-kinase,PI3KC3)是酵母中Vps34的同源蛋白,通过与多种蛋白结合形成复合物,即PI3KC3复合物,主要用于调节自噬。     

自噬与肿瘤发生及其治疗的相关研究进展

正自噬是将细胞内的长寿命蛋白或者受损细胞器降解为基本生物分子的溶酶体降解途径。最新研究结果表明,细胞失去自噬功能可能导致对代谢压力、基因损伤敏感,从而诱导肿瘤的发生~([1])。然而,科学家们在多种肿瘤如乳腺癌、卵巢癌以及前列腺癌中发现自噬相关基因Beclin1缺失,说明自噬也可能发挥抑制肿瘤的作用~([2-3])。在肿瘤治疗领域,自噬一方面是肿瘤细胞凋亡缺陷情况下的另一种程序性死亡形     

早发型和晚发型子痫前期自噬与凋亡水平差异及相互关系研究

目的探讨早发型子痫前期(early-onset preeclampsia, EOPE)和晚发型子痫前期(late-onset preeclampsia, LOPE)胎盘组织中自噬和凋亡水平的差异,利用人绒毛膜滋养层细胞株HTR 8/SVneo缺氧模型探讨自噬与凋亡的关系,为解释子痫前期(preeclampsia, PE)的发病机制提供新的思路。方法选取2018年1～6月上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院产科剖宫产分娩孕妇26例的临床资料。按照PE发生程度分为EOPE组10例,LOPE组6例,正常孕妇组10例。通过透射电镜观察EOPE组、LOPE组和正常孕妇组胎盘组织滋养层细胞中的自噬溶酶体;采用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应和免疫印迹方法检测EOPE组、LOPE组和正常孕妇组胎盘组织中自噬相关基因(LC 3和Beclin-1)、抗凋亡基因Bcl-2和促凋亡基因Bax mRNA和蛋白水平的表达;利用HTR 8/SVneo缺氧模型,检测LC 3、Beclin-1、Bcl-2和Bax mRNA水平的表达。结果与正常孕妇组胎盘组织相比,EOPE组自噬溶酶体含量降低,LC 3、Beclin-1和Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平降低,Bax表达升高,差异均有统计学意义(P0.05)。LOPE组自噬溶酶体含量增加并且出现凋亡细胞,LC 3、Beclin-1和Bax表达均升高,Bcl-2表达降低,差异均有统计学意义(P0.05)。缺氧模型中,与正常HTR 8/SVneo细胞相比,缺氧12 h组LC 3和Beclin-1 mRNA表达水平均升高,Bcl-2和Bax mRNA表达水平均降低,差异有统计学意义(P0.05),抑制自噬活性后,Bax mRNA表达水平显著升高,差异有统计学意义(P0.05);24 h和48 h组LC 3、Beclin-1、Bcl-2和Bax的mRNA表达均降低,差异有统计学意义(P0.05);72 h组LC 3、Beclin-1和Bax表达均升高,Bcl-2表达降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论 EOPE组胎盘滋养层细胞中自噬活性受损,凋亡水平增加;而LOPE组中自噬和凋亡水平均增加;短期缺氧激活滋养层细胞自噬,凋亡降低,抑制自噬凋亡增加;长期缺氧引发过度自噬和凋亡。     

线粒体融合蛋白2低表达诱导绒毛滋养层细胞自噬的发生

目的观察线粒体融合蛋白2(Mfn2)si RNA转染人绒毛滋养细胞后自噬的发生情况。方法构建Mfn2 si RNA真核表达载体,电穿孔法将Mfn2 si RNA稳定转染人绒毛滋养层细胞并进行培养,获得Mfn2表达抑制的滋养层细胞。设立实验组(转染Mfn2 si RNA序列)、阴性转染组(转染Cy3 si RNA序列)、空白对照组(未转染序列)。采用Western Blot检测3组细胞转染后Mfn2及自噬相关基因Beclin1和Atg5的表达水平;采用免疫荧光化学染色检测LC3Ⅱ在3组绒毛滋养层细胞中的表达率。结果相对比阴性转染组和空白对照组,实验组Mfn2蛋白水平显著降低,Beclin1和Atg5蛋白表达水平增加;免疫荧光化学染色显示,LC3Ⅱ荧光光点表达率增加。结论 Mfn2低表达诱导Beclin1和Atg5的表达增加,进而诱导绒毛滋养层细胞自噬小体出现和自噬的发生,提示Mfn2可能通过调控绒毛滋养层细胞自噬参与胚胎发育。