顺铂预处理对CIK杀伤肺癌细胞的影响

目的探讨顺铂（DDP）预处理对细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）杀伤活性的影响。方法采用CFSE/PI 双标法检测DDP预处理不同浓度、不同时间及预处理前后不同效靶比,CIK对肺癌细胞的杀伤活性。结果经IFN-γ,CD3单抗,IL-2诱导后20 d,获得典型的CIK细胞做为效应细胞。随着DDP预处理浓度的增加,CIK细胞的杀伤活性随之增强,随着DDP预处理时间的延长,CIK细胞的杀伤活性亦随之增强。在DDP预处理浓度25 ng/ml,预处理时间18 h的条件下,DDP对靶细胞并无明显影响,但联合CIK后,随着效靶比的增高,CIK细胞杀伤肿瘤细胞的活性明显增强。结论顺铂预处理肺癌细胞后,提高了CIK细胞的杀伤活性,对CIK细胞的临床应用具有借鉴意义。     

预处理化疗增强CIK细胞对Lewis肺癌的抑制作用

目的 观察预处理化疗在小鼠Lewis肺癌模型中对细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine - induced killer cells,CIK cells)的抗肿瘤活性的增强作用,并探讨介导此增效作用的机制.方法 建立C57BL/6小鼠Lewis肺癌模型,以紫杉醇( Paclitaxel,PTX)联合顺铂(Cispla...     

顺铂以T细胞依赖性方式增强ClK细胞的抗肿瘤作用

目的 观察顺铂预处理化疗联合细胞因子诱导的杀伤细胞( cytokine - induced killer cells,CIK cells)对小鼠CT - 26结肠癌的抑制作用,并探讨介导顺铂免疫调节效作用的机制.方法 分别建立BALB/c野生鼠或BALB/c nu/nu裸鼠CT - 26结肠癌模型,以顺铂(Cispla...     

CIK联合DDP对卵巢癌细胞株SKOV-3的杀伤效应

目的探讨多种细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)联合DDP对卵巢癌细胞株SKOV-3的杀伤效应。方法用健康人外周血单核细胞(PBMC)在体外用多种细胞因子诱导成CIK细胞,于培养14天收获CIK细胞作为效应细胞,流式细胞术分析其表型特征。将CIK细胞培养液上清作用于SKOV-3细胞,于培养24及48 h用流式细胞仪检测SKOV-3细胞的凋亡情况。杀伤实验共分为A1~4CIK作用组;B1~7DDP作用组;C1~2CIK联合DDP作用组;采用MTT法检测CIK和DDP对SKOV-3的生长抑制效应。结果 CIK细胞体外培养14 d时CD3+CD56+双阳性细胞数量达38.7%;SKOV-3与CIK细胞培养液上清共培养24 h及48 h后凋亡率分别为(12.30±1.47)%和(27.13±2.03)%;CIK及DDP对SKOV-3细胞的抑制率随着效靶比和药物浓度的提高及作用时间的延长而提高。而两者联合对SKOV-3的杀伤作用明显高于单一因素。结论 CIK细胞可通过诱导卵巢癌SKOV-3细胞凋亡发挥较强的杀伤作用。联合CIK治疗可明显增强DDP对卵巢癌SKOV-3细胞的杀伤作用。     

纤维连接蛋白诱导CIK细胞治疗晚期癌症患者的安全性及疗效评价

目的:评价重组人纤维连接蛋白(RetroNectin,RN)诱导的CIK细胞治疗晚期癌症患者的安全性及疗效.方法:观察85例晚期癌症患者,经RN诱导的自体或异体血CIK细胞治疗的安全性.选择晚期非小细胞肺癌患者36例,分为2组:CIK细胞治疗组20例,化疗组16例,比较两组治疗前后的免疫功能、生活质量(用汉化生活量表QLICP系统测试)、临床疗效差异;选择晚期非小细胞肺癌患者32例,分为CIK细胞治疗组及姑息治疗组各16例,比较两组患者的生存期.结果:安全性:自体及异体CIK细胞治疗过程中主要出现兴奋感、失眠、低热,未见明显毒副反应.近期疗效:20例患者经CIK细胞治疗:PR 1例,SD 10例,PD 9例,ORR 5.00%,DCR 55.00%;16例患者经化疗:PR 5例,SD 5例,PD 6例,ORR 31.25%,DCR62.50%,2组的DCR差异不显著(P>0.05),但化疗组的ORR明显高于CIK组(P<0.05).在生活质量方面,化疗后病人心理模块中情绪方面明显低落(P<0.05),CIK细胞治疗的患者多有生活质量提高;CIK细胞治疗组与化疗组患者,治疗前后免疫功能无显著差异(P>0.05).CIK细胞治疗组(11.0个月)比姑息治疗组(6.0个月)中位生存期延长,但总生存时间无统计差异(x2=2.301,P=0.129).结论:RN诱导的CIK细胞自体及异体治疗均简便、安全、有效,可以改善晚期肿瘤病人的生活质量,延长生存期.     

联合应用顺铂、长春花碱酰胺和氮烯咪胺治疗晚期恶性黑色素瘤

目前对播散性恶性黑色素瘤的化疗效果并不理想,据报导,先前未用过化疗的病人平均寿命为16～18周。1979～1980年,欧洲癌症治疗研究组织(EORTC)恶性黑色素瘤协作组(MMCG)联合用顺铂(DDP)、长春花碱     

DC与CIK共培养对骨肉瘤细胞的杀伤作用

目的 探讨树突状细胞(dendritic cells,DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK)共培养对人骨肉瘤细胞的杀伤效应.方法 从健康志愿者中分离外周血单个核细胞,制备DC和CIK,并以5:1比例混合培养.采用CCK-8法和流式细胞术检测DC-CIK共培养...     

TNF-α诱导小鼠B16黑色素瘤细胞凋亡及其对小鼠B16细胞移植瘤生长的抑制作用

目的:探讨TNF-α对小鼠B16黑色素瘤(MM)细胞凋亡的诱导及其对小鼠B16移植瘤生长的抑制作用.方法:用不同浓度的TNF-α直接作用于培养的小鼠B16黑色素瘤细胞,36h后,采用流式细胞仪(FCM)及原位末端标记法(TUNEL法)检测B16细胞的凋亡率.动物实验观察TNF-α小量瘤体内注射对小鼠B16移植瘤生长的抑制作用.结果:在1000、3000、5000及10000U/mL TNF-α作用下,B16细胞的凋亡指数均明显高于空白对照组(P＜0.01),随着TNF-α浓度增加,B16凋亡细胞数呈增加趋势.动物实验结果显示,TNF-α治疗3周后,治疗组荷瘤小鼠MM移植瘤的体积和重量明显低于对照组(P＜0.01).结论:TNF-α能够诱导小鼠B16黑色素瘤细胞发生凋亡,且小剂量TNF-α瘤体内注射能显著抑制小鼠移植性MM的生长.     

树突状细胞与细胞因子诱导杀伤细胞治疗肿瘤研究进展

树突状细胞(dendritic cells,DC)是已知的功能最强的专职抗原提呈细胞,在抗原加工提呈、抗原识别及T细胞激活中发挥重要作用.而细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokineinduced killer cells,CIK)是由多种细胞因子诱导而成,对多种肿瘤细胞具有杀伤作用的细胞毒性T细胞.以DC为基础的肿瘤免疫治疗日益受到人们的重视.文章就近年DC与CIK免疫治疗肿瘤的研究进展作一综述.     

细胞因子诱导的杀伤细胞逆转耐顺铂肺腺癌细胞系A549/DDP耐药性的研究

  目的  观察细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer, CIK)对耐顺铂(DDP)人肺腺癌细胞系A549/DDP的耐药逆转作用及其逆转A549/DDP耐药的可能机制。  方法  A549/DDP与CIK细胞采用Transwell非接触共培养。四氮甲唑兰比色法(MTT法)验证A549/DDP的DDP耐药性及检测共培养前后A549/DDP对DDP耐药性的变化。RT-PCR法筛选A549与A549/DDP有差异表达的基因作为检测耐药性变化的观察指标, 并检测共培养前后A549/DDP中基因表达水平的变化; Western blot检测A549及共培养前后A549/DDP中基因蛋白水平的变化。  结果  A549/DDP的耐药系数为14.5, 具有较强的DDP耐药性。RT-PCR筛选出A549与A549/DDP表达有差异的耐药相关基因为谷胱甘肽转移酶(glutathione-S-transferase, GST-π)基因、人类铜离子转运蛋白(human copper transporter1, hCTR1)基因, A549/DDP中GST-π表达量明显增加, hCTR1表达量明显降低。与CIK细胞共培养后, A549/DDP对DDP的耐药性明显下降, 共培养20h后耐药逆转倍数约为4.93倍, 细胞内GST-π基因及蛋白水平的表达明显降低(P < 0.05)。  结论  CIK细胞对A549/DDP有逆转DDP耐药的作用, 其机制可能与下调GST-π基因及蛋白水平的表达有关。      

Preconditioning chemotherapy with cisplatin enhances the antitumor activity of cytokine-induced killer cells in a murine melanoma model

Accumulating evidence has indicated that preconditioning chemotherapy could eliminate the suppressive factors in antitumor immune response, thereby leading to the full release of the efficacy of the subsequent immunotherapy. In this study, a single subtoxic dose (5 mg/kg, intraperitoneally) of cisplatin was chosen as the preconditioning chemotherapy in combination with cytokine-induced killer (CIK) cells (4×10(6), intravenously) to treat the murine B16 melanoma xenografts. It was found that cisplatin pretreatment could enhance the antitumor activity of CIK cells. To explore the potential mechanisms underlying the efficacy-enhancing effect of cisplatin, the in vivo trafficking and distribution of the infused CIK cells were traced. It was found that cisplatin could augment the homing ability of CIK cells into the tumor, tumor-draining lymph nodes (TDLNs), and spleen tissues. The endogenous effector cells, CD3(+) T lymphocytes also had an increased accumulation in the tumor and TDLNs after cisplatin precondition. Moreover, cisplatin could also modulate the percentages of myeloid cells, thus encouraging immune responses by increasing the percentages of dendritic cells and relieving the immunosuppression by preferentially eliminating the myeloid-derived suppressor cells. In conclusion, our findings suggested that cisplatin preconditioning chemotherapy could enhance the antitumor activity of CIK cells in a murine melanoma model, and this efficacy-enhancing effect was attributed to the augmented homing ability of exogenous and endogenous effector cells and the modulation of the myeloid cells.     

CIK、DC-CIK细胞对神经母细胞瘤细胞杀伤作用的研究

目的：研究细胞因子诱导的杀伤细胞（ CIK）与树突状细胞（ DC）共培养后对神经母细胞瘤（ neuro-blastoma,NB）细胞株的杀伤作用。方法：取健康人和肿瘤患者外周血单个核细胞（ PBMC）,加入不同的细胞因子分别诱导出DC和CIK细胞,用流式细胞术测定诱导培养前后DC和CIK细胞的表型,MTT法测定不同组CIK细胞对NB细胞株的杀伤活性。结果：流式细胞仪检测健康人PBMC培养后CD3＋CD56＋淋巴细胞百分比以及对NB细胞株的杀伤活性均显著高于肿瘤患者（ P〈0.05）。此外,与单纯CIK细胞相比,DC-CIK细胞具有更强的杀伤NB细胞株的活性（ P〈0.05）。结论：DC-CIK细胞是一种细胞毒作用高于单纯CIK细胞的免疫活性细胞。健康人和肿瘤患者的PBMC经诱导培养获得的CIK细胞有显著差别,为临床进一步提高CIK细胞的治疗效果提供了实验依据。     

CIK、DC—CIK细胞抗鼻咽癌CNE2细胞的作用比较

目的：研究细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）与树突状细胞（DC）共培养后DC—CIK细胞抗鼻咽癌CNE2细胞的作用。方法：正常人外周血单个核细胞诱导Dc和CIK细胞,加入CNE2细胞冻融液,将DC与CIK共培养,以CIK细胞单独培养为对照。用MTF法测定杀伤活性。结果：DC—CIK细胞杀伤鼻咽癌细胞活性高于CIK细胞（p〈0．05）。结论：DC—CIK细胞抗鼻咽癌CNE2细胞的作用显著,为DC—CIK细胞免疫治疗提供了实验和理论依据。     

Preconditioning chemotherapy with paclitaxel and cisplatin enhances the antitumor activity of cytokine induced-killer cells in a murine lung carcinoma model

Adoptive cell therapy involving the use of ex vivo generated cytokine-induced killer cells (CIKs) provides a promising approach to immunotherapy. However, the therapeutic activity of CIKs is limited by the immunosuppressive factors active in the host. It has become increasingly apparent that manipulation of the recipient immune system with the preconditioning regimen is essential to guarantee the antitumor effect of subsequent adoptive cell therapy. In our study, paclitaxel (PTX) and cisplatin (DDP) were used as preconditioning drugs combined with CIKs to illustrate the potential mechanisms underlying the synergic antitumor effect against Lewis lung cancer cells in vitro and in vivo. We found that 3LL cells displayed an increased sensitization to CIKs-induced lysis after treatment with PTX or DDP in vitro. Significant inhibition of tumor growth was observed in mice treated with combinatorial chemo-immunotherapy with respect to untreated or single regimen treated ones. Prior chemotherapy markedly enhanced the intratumoral accumulation of CD3(+) T lymphocytes and the homing of CIKs to the spleen and tumor. Moreover, the frequencies of intratumoral and splenic regulatory T cells (Tregs) were significantly decreased after chemotherapy pretreatment. Our findings provide a new rationale for combining immunotherapy and chemotherapy to induce a synergistic antitumor response in patients with lung cancer.     

DC-CIK细胞抗鼻咽癌细胞的作用

目的：研究细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）与树突状细胞（DC）共培养后DC—CIK细胞抗鼻咽癌细胞的作用。方法：正常人外周血单个核细胞诱导DC和CIK细胞,加入CNE1或CNE2细胞冻融液,将DC与CIK共培养,以CIK细胞单独培养为对照。用M1Tr法测定杀伤活性。结果：DC—CIK细胞杀伤鼻咽癌细胞活性高于CIK细胞（P〈0．05）;杀伤CNEl细胞活性高于CNE2细胞（P〈O．05）。结论：DC-CIK细胞抗鼻咽癌细胞的作用显著,为DC—CIK细胞免疫治疗提供了实验和理论依据。     

低剂量环磷酰胺联合 CIK 细胞治疗小鼠肝癌研究

目的：探讨低剂量环磷酰胺（CTX）对肝癌荷瘤小鼠调节性 T 细胞（Treg）的影响及联合细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）的抗瘤效果。方法建立小鼠皮下肝癌模型,采用随机数字表法随机分为4组（每组35只）：正常对照组、单独荷瘤组、单次 CTX 组（共1次,100 mg／kg,腹腔注射）、循环 CTX组（6 d 1次,共3次,100 mg／kg,腹腔注射）,流式细胞术检测小鼠脾脏 Treg／CD4＋细胞比例变化。取小鼠脾脏单个核细胞培养 CIK。观察体内抗肿瘤疗效实验中,将荷瘤小鼠随机分为6个治疗组：荷瘤对照组、单次 CTX 组、单独 CIK 组、循环 CTX 组、单次 CTX ＋CIK 组、循环 CTX ＋CIK 组,绘制各组肿瘤生长曲线,实验结束剥离瘤块称重,计算抑瘤率。结果单独荷瘤组小鼠脾脏 Treg／CD4＋细胞比例随荷瘤时间延长而逐渐升高,单次 CTX 组第10天该比例为（8．95±1．90）％,接近单独荷瘤组（9．25±1．74）％,差异无统计学意义（t ＝0．374,P ＝0．714）;而循环 CTX 组在第19天该比例为（8．99±2．11）％,仍低于单独荷瘤组（16．76±2．02）％,差异有统计学意义（t ＝8．544,P ＝0．000）。治疗21 d 后,荷瘤对照组、单次CTX 组、单独 CIK 组、循环 CTX 组、单次 CTX ＋CIK 组、循环 CTX ＋CIK 组的瘤体积和瘤重分别为（3800．4±607．5）、（3764．8±537．7）、（3352．2±485．4）、（2076．6±620．2）、（1867．1±533．6）、（970．7±135．3）mm3和（4．01±0．66）、（3．86±0．74）、（3．80±0．42）、（2．08±0．27）、（1．83±0．93）、（0．86±0．25）g;循环 CTX ＋CIK 组小鼠瘤体积及瘤重最小,循环 CTX 和单次 CTX ＋CIK 组对肿瘤抑制效应较弱,单独 CIK 和单次 CTX 组未能抑制肿瘤生长,6组间比较差异有统计学意义（F ＝213．750,P ＝0．000;F ＝27．142,P ＝0．000）。结论循环低剂量 CTX 联合 CIK 治疗小鼠肝癌疗效显著,可以为肿瘤治疗提供新思路。     

树突状细胞与细胞因子诱导的杀伤细胞共培养对多药耐药肿瘤细胞系的杀伤活性

目的探讨在细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)表达特异性抗原的肿瘤细胞过程中,是否存在抗原特异性杀伤。方法分离健康人骨髓获得单个核细胞,分别诱导为树突状细胞(DC)和CIK细胞,将人类乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR细胞的冻融物抗原冲击或未冲击DC与CIK细胞共培养(pulsed-DC CIK、DC CIK),CIK细胞单独培养作对照。用流式细胞仪分析细胞表型,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测IL-12、和IFN-γ分泌水平,用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法测定细胞毒效应。结果DC与CIK共育后,两组DC成熟表型较共育前明显提高(P=0.003、P=0.001);pulsed- DC CIK组与DC CIK组、CIK组比较,细胞表型(CD3、CD8、CD56)明显提高(P=0.003、P= 0.011),CD3 CD56 细胞明显增多(P=0.001,P<0.001),CD3 CD8 细胞亦明显增多(P=0.002, P=0.002);CD45RA表型则明显降低(P<0.001,P=0.004)。IL-12和IFN-γ水平在pulsed-DC CIK组表达最高,分别为(254±14.5)pg/ml和(3100±286)pg/ml。对有耐药抗原表达的MCF-7/ADR细胞,pulsed-DC CIK组杀伤效应最强,pulsed-DC CIK组、DC CIK组和CIK组比较,差异均有统计学意义(pulsed-DC CIK组与DC CIK组比较,P=0.039;pulsed-DC CIK组与CIK组比较,P= 0.002;DC CIK组与CIK组比较,P=0.049);而对于无P-gp抗原表达的MCF-7细胞的杀伤效应,pulsed- DC CIK组和DC CIK组之间无明显差异,但均高于CIK组,差异有统计学意义(pulsed-DC CIK组与CIK组比较,P=0.007;DC CIK组与CIK组比较,P=0.048)。结论从人骨髓培养得到DC和CIK细胞共培养后,能促进各自特征性表面标志的表达上调,并分泌大量相关细胞因子。细胞杀伤效应的明显提高及可能的特异性细胞杀伤效应,为多药耐药肿瘤的临床生物免疫治疗提供实验基础。     

DC 与同源 CIK 细胞抗急性粒系白血病细胞作用的研究

目的：探讨急性白血病细胞免疫治疗的新途径。方法：自正常健康人外周血分离淋巴细胞进行培养,于不同时间分别加入相应的细胞因子,培养9天后收获 CIK 和 DC 细胞。按照1：5的比例将 DC 细胞与CIK 细胞混合培养,收集共培养的细胞,以不同比例与急性粒系白血病细胞共培养测定细胞杀伤活性。结果：DC 细胞与 CIK 细胞共培养后,其细胞增殖能力、细胞毒活性与单独 CIK 细胞相比有统计学差异。在同一效靶比对急性粒系白血病细胞均有杀伤作用,随着效靶比的增高对急性粒系白血病细胞的杀伤活性增强。结论：DC 细胞可增强 CIK 细胞的杀伤活性。