应用双重PCR技术检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的：探讨双重聚合酶链反应(PCR)技术检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的临床价值。方法：临床分离得葡萄球菌，挑取单个菌落，用碱煮沸法制备DNA模板，进行双重PCR反应，即在同一反应管内同时扩增femA基因和mecA基因。结果：100株葡萄球菌中，38株凝固酶阳性的葡萄球菌，其femA基因均为阳性，而mecA基因阳性者为30株，占78．9％(30／38)，mecA基因阴性8株，占21．1％(8／38)。62株凝固酶阴性的葡萄球菌femA基因均为阴性，mecA基因阳性48株，占77．4％(48／62)，mecA基因阴性14株，占22．6％(14／62)。另外，药敏法中有4株临界水平MSSA经PCR法鉴定为MRSA。结论：应用双重PCR技术检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌是一种敏感、快速、特异的实验诊断方法，可防止药敏法临界水平MRSA漏检为MSSA。     

多重PCR快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的建立多重PCR方法,快速鉴定金黄色葡萄球菌并同时检测耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的mecA基因。与PBP2a乳胶凝集法及头孢西丁纸片扩散法进行比较。方法以nuc基因以及mecA基因合成2对引物,采用多重PCR扩增法,在279bp和310bp处出现扩增条带,表示检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）。结果 171株临床分离菌的mecA基因检出率为52.63%;nuc基因扩增结果与常规检测结果的符合率为100%;以PBP2a乳胶凝集法为＂金标准＂,PCR法和头孢西丁纸片扩散法的敏感性均为100%,特异性分别为98.78%和92.68%。3种方法结果差异无统计学意义（P〉0.05）。Kappa值均大于0.90。结论此多重PCR法能准确鉴定金葡菌,并可同步检测MRS,可作为临床实验室检测MRS的可靠方法。     

PCR扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的mecA基因

[摘要] 目的 应用mecA基因PCR扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。方法 对临床分离的84株金黄色葡萄球菌,应用mecA基因PCR扩增法鉴定MRSA,并与苯唑西林纸片扩散法和头孢西丁纸片扩散法进行比较。结果 84株金黄色葡萄球菌中, 41株金黄色葡萄球菌的mecA基因扩增呈阳性,其中有1株表现为对苯唑西林敏感;苯唑西林纸片扩散法检出42株阳性,其中有2株mecA基因呈阴性. 头孢西丁纸片扩散法与PCR扩增法的试验结果完全符合。结论 mecA基因PCR扩增法可以准确、快速判定MRSA。     

mecA、femA基因PCR联合扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的 探讨mecA、femA基因PCR联合扩增快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的敏感性及特异性。方法 用纸片扩散法及mecA、femA基因PCR联合扩增检测178株葡萄球菌中的MRSA，并与琼脂稀释法的结果比较。结果 纸片扩散法筛检MRSA(耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌，MRCNS)的敏感性、特异性分别为94．4％(89．5％)、92．4％(73．7％)。在金黄色葡萄球菌中若以mecA基因阳性为判定MRSA的指标，则敏感性、特异性分别为91．7％、95.5％。在178株葡萄球菌中若以mecA、femA基因阳性作为判定MRSA的指标，特异性提高到97．9％．结论 PCR mecA、femA基因联合扩增既可用于筛检MRSA，又可免去常规生化鉴定，具快速、特异性强的优点。     

异源双链PCR法快速检测ST239型耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的用异源双链PCR法快速检测ST239型耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。方法根据ST239型MRSA的分子结构特点设计两对引物序列,用PCR方法进行扩增反应。结果在102株MRSA中检测出99株ST239型MRSA,其余3株为非ST239型。结论用异源双链PCR法快速检测ST239型MRSA具有准确、快速、高通量、省时和省力特点,可作为研究MRSA分子流行病学特征的一个重要工具。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性分析

目的了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药情况,为临床合理用药提供参考。方法收集2005年1月至2007年12月临床分离的460株金黄色葡萄球菌,经培养鉴定,采用纸片扩散法(K-B法)测定10种非β-内酰胺类抗菌药物的耐药情况。结果460株金黄色葡萄球菌中,检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)242株,占52.61%,甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)218株,占47.39%;2005~2007年MRSA对复方磺胺的耐药率相对稳定在71.4%~77.5%之间,对红霉素、克林霉素、庆大霉素、左旋氧氟沙星、四环素和利福平的耐药率基本处于上升状态。MRSA对红霉素、克林霉素、庆大霉素、左旋氧氟沙星、四环素和利福平的耐药率明显高于MSSA相应的耐药率(P<0.001)。MRSA对呋喃妥因耐药率明显高于MSSA(P<0.001),对复方磺胺敏感率耐药率二者差异无统计学意义(P>0.05)。药敏结果显示,MRSA和MSSA菌株均对万古霉素和替考拉宁敏感。结论MRSA具有多重耐药特征,万古霉素和替考拉宁可作为治疗MRSA感染的首选药物,呋喃妥因和复方磺胺可作为次选药物。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测及耐药性分析

目的 分析耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的临床感染现状及耐药性.方法 采用美国MicroScan全自动细菌分析仪鉴定细菌种类,并用纸片扩散法进行药敏试验.结论 2006～2007年共分离出金黄色葡萄球菌270株,其中,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)174株,检出率为64.4%.所有的分离株对万古霉素都敏感;MRSA对 红霉素、克林霉素、庆大霉素、复方磺胺、利福平和左旋氧氟沙星的耐药率分别为94.8%、71.8%、67.8%、85.1%、15.5%和48.9%.结论MRSA的分离率显著增高,耐药性严重,临床细菌室应高度重视MRSA的检测.     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌与慢性鼻窦炎

随着广谱抗生素广泛应用于临床，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）已成为院内感染的重要致病菌，由其感染导致慢性鼻窦炎已不可忽视。因此，对其生物学特性、耐药机制以及导致慢性鼻窦炎的机制进行研究，制订出准确、快速检测方法和有效的治疗方案非常必要，作者就近年来这些方面研究进展作一概述。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌两种基因分型方法的对比研究

目的 比较耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）两种基因分型方法的特点，为MRSA流行病学调查选用合适的基因分型方法提供参考。方法用聚合酶链反应（PCR）扩增MRSA基因高变区（Hypervariable region，HVR），并根据扩增片段大小进行基因分型，同时与ERIC-2随机引物多态性DNA分型法进行比较，并观察不同退火温度条件下两种基因分型方法的差异。结果 50株MRSA以基因高变区（HVR）分型，可分为A、B、C、DE5种基因型，其中以B（47．3％）和D（32．1％）型多见，A（3．5％）、C（10．7％）、E（6．4％）型少见，当退火温度改变时，则不能分型；用ERIC-2随机引物对MRSA进行多态性DNA分型，在低退火温度下分为10种基因型，当退火温度明显改变时，仍能分型，但每型的扩增片断明显减少。结论随机引物多态性DNA分型和HVR基因分型两种方法均能用于MRSA感染的流行病学研究，HVR基因分型PCR反应温度控制严格，分型明确；而随机引物多态性ERIC-2的DNA分型随PCR退火温度的变化而变化，应用时需严格控制PCR退火温度等反应参数，否则重复性较差。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性分析

目的　了解韶关市第一人民医院患者耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)感染状况及其对临床常用抗菌药物耐药性特点。　方法　采用常规方法分离鉴定菌种 ,用K -B法作 12种抗菌药物体外抗菌活性试验。　结果　MRSA检出比率为 5 2 5 % ,其无耐万古霉素株 ,耐药率 <2 5 %的只有呋喃西林 ,对其余 10种抗菌药物的耐药率均 >5 0 %。　结论　MRSA已成为医院患者感染的重要病原菌 ,切实加强实验室监测 ,对指导临床合理用药具有十分重要的意义。     

菌液SYBR实时荧光PCR快速检测金黄色葡萄球菌

目的建立菌液SYBR荧光PCR法快速检测金黄色葡萄球菌的方法。方法根据金黄色葡萄球菌的特异基因耐热核酸酶nuc设计引物,PCR方法和SYBR荧光PCR溶解曲线法验证引物的特异性;建立菌液SYBR荧光PCR快速检测方法,奶粉加标实验和菌株特异性实验评价方法的特异性,制备基因组浓度梯度和菌落梯度检验方法的灵敏性。结果利用引物对实验室的3个标准菌株进行PCR扩增,出现的条带均为单一条带,且与目的片段长度一致。16株金黄色葡萄球菌菌株的熔解曲线均呈单峰,特异性良好,无非特异性扩增。建立的菌液SYBR荧光PCR方法对金黄色葡萄球菌有很好的特异性和灵敏性,灵敏度达1pg／山DNA浓度,并可检测1 CFU／ml的复杂样品。结论本研究建立的菌液SYBR荧光PCR方法快速、特异性好、灵敏性高,对快速检测样品中金黄色葡萄球菌有重要意义。     

一起由金黄色葡萄球菌和路邓葡萄球菌引发食物中毒病原分析

目的 通过一起疑似葡萄球菌引发食物中毒进行葡萄球菌肠毒素检测,并结合检测出致病性葡萄球菌病原学分析,为下一步食物中毒处置提供诊断依据。方法 根据流行病学调查和国家标准《食品微生物学检验》GB4789,对可疑食物及患者呕吐物、肛拭子等进行了几种常见致病原菌分离培养,并直接采用实时荧光PCR方法对金黄色葡萄球菌肠毒素A~E基因进行分型,用全自动微生物鉴定分析仪进行系统生化鉴定,并做血浆凝固酶试验。结果 在食用剩余汉堡中分离出1株金黄色葡萄球菌、2名患者肛拭子中分离出2株金黄色葡萄球菌,1名患者呕吐物中分离1株血浆凝固酶阴性路邓葡萄球菌,利用PCR方法分别对其进行了肠毒素基因分型,结果显示,食用剩余汉堡中1株和2株患者肛拭子的金黄色葡萄球菌肠毒素均为SEA型,为同一型;1株患者呕吐物的路邓葡萄球菌的肠毒素为SEC型。 结论 该起食物中毒主要是由金黄色葡萄球菌产生SEA型肠毒素所导致,血浆凝固阴性路邓葡萄球菌跟金黄色葡萄球菌一样,也能产生肠毒素同样具有致病性作用,提示路邓葡萄球菌不单纯只是人类皮肤共生菌,或许还跟金黄色葡萄球菌同样具有侵袭性、产肠毒素等致病性,在进行公共卫生流行调查诊断时不能被忽视。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因多态性分型研究

目的研究耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的基因多态性分型特征，为控制感染提供分子流行病学依据。方法利用一条10bp随机引物，建立随机引物多态性（RAPD）分析方法，并利用这一方法对44株MRSA进行基因分型的研究。结果44株MRSA中有30株产生RAPD指纹图谱，经电泳得到2．8条片段，可分为5个型，其中Ⅲ型菌株占50％。结论通过RAPD分型研究，可了解MRSA的基因型流行特征，为控制感染提供分子流行病学依据。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性分析

目的：分析耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（MRSA）检测方法及其耐药性。方法：采用头孢西丁纸片法和PCR两种方法检测临床分离的60株金黄色葡萄球菌中MRSA菌株；纸片扩散法测定金黄色葡萄球菌对15种抗菌药物的敏感性。结果：纸片法及PCR法对MRSA检出率分别为15％、13．3％，两种方法对MRSA检出率差异无统计学意义（P〈0．05）。以PCR法检出mecA、femB基因为判断MRSA的金标准。除了替考拉宁、万古霉素以外，其余抗生素的耐药率MRSA组均明显高于MSSA组（P〈0．01）。结论：头孢西丁纸片法是筛选和确认MRSA菌株的一种可靠、简便的方法；MRSA为多重耐药菌株，临床应加强检测。     

外源性甘氨酸对金黄色葡萄球菌耐药及femA表达水平的影响

目的探讨外源性甘氨酸对金黄色葡萄球菌苯唑西林耐药水平及femA表达的影响。方法用琼脂平皿对倍稀释法检测不同浓度甘氨酸下苯唑西林对30株金黄色葡萄球菌的MIC值,用实时荧光定量PCR方法检测不同浓度甘氨酸下金黄色葡萄球菌femA表达水平。结果30株金黄色葡萄球茵中MSSA4株,低耐MRSA2株,高耐MR-SA24株,在0．2M外源性甘氨酸存在时MIC下降4-256倍,在0．3M外源性甘氨酸存在时MIC均〈0．25μg／ml。在所有金黄色葡萄球菌中均检测到femA表达,在0．2M甘氨酸存在时femA表达下降50％-80％,0．3M甘氨酸存在时femA表达下降75％-90％。结论外源性甘氨酸能降低金黄色葡萄球菌对苯唑西林的耐药水平及femA表达水平。     

Nosocomial methicillin resistant Staphylococcus aureus pneumonia - epidemiology and trends based on data of a network of 586 German ICUs (2005-2009)

The epidemiology of MRSA pneumonia varies across countries. One of the most import risk factors for the development of nosocomial MRSA pneumonia is mechanical ventilation. Methicillin resistance in S. aureus ventilator associated pneumonia (VAP) ranged between 37 % in German, 54 % in the US American and 78 % in Asian and Latin American ICUs. In 2009, the incidence density of nosocomial VAP caused by MRSA was 0.28 per 1000 ventilation days in a network of 586 German ICUs. Incidences peaked in neurological and neurosurgical ICUs. Crude hospital mortality in studies performed after 2005 lay between 27 % and 59 % and attributable MRSA pneumonia mortality at 40 %. Since 2005, US American and German data indicate decreasing trends for MRSA pneumonia. Measures to reduce MRSA pneumonia or to control the spread of MRSA include hand hygiene, standard and contact precautions, oral contamination with chlorhexidine, skin decontamination with antiseptics, screening, and (possibly) patient isolation in a single room.