溶脲脲原体感染对男性不育患者精子质膜完整性的影响

目的:应用荧光染料SYBR-14/碘化丙锭(PI)双标法流式细胞术检测溶脲脲原体(Uu)感染对男性不育患者精子质膜完整性的影响。方法:收集63例男性精液标本,分为Uu感染组(n=32)和正常对照组(n=31)。通过计算机辅助精液分析系统进行精液常规分析,培养法进行Uu检测。精液标本经PBS洗涤处理后用荧光染料SYBR-14/PI双染后上流式细胞仪分析,用发绿色荧光精子百分率(SYBR-14+/PI-%)表示质膜完整精子的比例,检测精子质膜完整性。结果:Uu感染组精子质膜完整性[(45.14±10.69)%versus(72.68±9.91)%]和(a+b)级精子百分率[(23.29±8.81)%versus(46.32±9.54)%]均显著低于正常对照组(P<0.01),两组间精液量、pH值、精子浓度差异无显著性(P>0.05)。结论:Uu感染引起精子质膜完整性下降,可能是导致男性不育的重要原因之一。     

SYBR-14/PI双染法流式细胞术检测精子质膜完整性的研究

目的:探讨应用荧光染料SYBR-14/碘化丙啶(SYBR-14/PI)双色标记法进行流式细胞术检测精子质膜完整性的可行性及其临床意义。方法:收集208例男性精液标本,按WHO精液分析标准分为正常组(n=31)与异常组(n=177)。通过计算机辅助精液分析系统进行精液常规分析。精液标本洗涤处理后经SYBR-14/PI双染后上流式细胞仪(FCM)分析,用发绿色荧光精子百分率(SYBR-14+/PI-%)表示质膜完整精子(PMI)的比例。结果:正常组与异常组SYBR-14+/PI-与SYBR-14-/PI+精子百分率均存在统计学差异(P均<0.05)。正常组精子SYBR-14+/PI-%为(55.66±20.64)%,显著高于异常组[(39.71±19.21)%,P=0.000]。208例标本中,SYBR-14+/PI-%与精子活动率呈显著正相关(r=0.408,P=0.000),与(a+b)级精子百分率呈显著正相关(r=0.398,P=0.000),与d级精子百分率呈显著负相关(r=-0.413,P=0.000);SYBR-14-/PI+%与精子活动率呈显著负相关(r=-0.380,P=0.000),与(a+b)级精子百分率呈显著负相关(r=-0.397,P=0.000),与d级精子百分率呈显著正相关(r=0.385,P=0.000);SYBR-14+/PI+%与精子活动率呈正相关(r=0.172,P=0.013),与(a+b)级精子百分率呈正相关(r=0.177,P=0.011),与d级精子百分率呈负相关(r=-0.164,P=0.018)。结论:应用流式细胞术SYBR-14/PI双染法检测精子质膜完整性具有可行性,可用于评估男性生育力。     

流式细胞术检测吸烟对精子质膜完整性的影响

目的:应用荧光染料SYBR-14/PI双色标记法进行流式细胞术检测不育患者精子质膜完整性,分析吸烟对精子质膜完整性的影响并探讨其临床意义。方法:收集202例男性精液标本,其中132例为本院就诊男性不育患者,分为大烟量组(n=68)与小烟量组(n=64),正常生育男性为正常对照组(n=70)。通过计算机辅助精液分析系统进行精液常规分析。精液标本经PBS洗涤处理后用荧光染料SYBR-14/碘化丙锭(PI)双染后上流式细胞仪分析,用SYBR-14+/PI-(绿)表示质膜完整精子(PMI);SYBR-14-/PI+(红)表示质膜破损而坏死的精子;SYBR-14+/PI+(绿,红)表示正处于由活到死过度状态的精子。检测精子质膜完整性,并对精子质膜完整性与部分精液参数做相关性分析。结果:大烟量组与小烟量组质膜破损的坏死精子(SYBR-14-/PI+%)、过渡态的精子(SYBR-14+/PI-%)与正常对照组存在显著差异(P<0.01或0.05)。大烟量组SYBR-14+/PI-%明显低于小烟量组,SYBR-14-/PI+%明显高于小烟量组。所有202例标本SYBR14+/PI-%与精子活动率呈显著正相关(r=0.938,P=0.000)。结论:应用流式细胞术SYBR-14/PI双染法能快速、准确地检测精子质膜完整性。吸烟会导致精子质膜完整性下降,引起精子活力下降,可能是导致男性不育的重要原因之一。     

JC-1单标法检测精索静脉曲张患者精子线粒体膜电位的研究

目的:检测精索静脉曲张患者精子线粒体膜电位并探讨其临床意义。方法:将67例精索静脉曲张患者分为VC1组(精索静脉曲张1度,n=26)、VC2组(精索静脉曲张2度,n=21)和VC3组(精索静脉曲张3度,n=20),以正常生育男性为正常对照组(n=29)。通过计算机辅助精液分析系统进行精液常规分析。精液标本洗涤处理后用荧光染料JC-1染色后上流式细胞仪分析,检测精子线粒体膜电位(JC-1+%)。结果:VC1、VC2、VC3组精子线粒体膜电位[(56.29±16.32)%,P<0.05;(45.04±13.21)%,P<0.01;(31.63±12.91)%,P<0.01]均显著低于正常对照组[(76.21±13.96)%]。96例标本中,JC-1+%与(a+b)级精子百分率呈显著正相关(r=0.693,P=0.000)。结论:精索静脉曲张可引起精子线粒体膜电位降低,可能是导致男性不育的重要原因之一。     

双荧光探针检测冷冻对精子质膜完整性的影响

目的:检测精液冷冻对山羊精子质膜完整性的影响。方法:用假阴道法采集3只公山羊精液,经冷冻-解冻处理后,检测精子畸形率和顶体完整率,用碘化丙锭结合羟化荧光素双荧光探针标记,检测和比较精液冷冻对山羊精子质膜完整性的影响。结果:冷冻明显降低了精子的活动率[(74.43±13.78)%vs(46.25±2.69)%,P<0.01]和质膜完整率[(64.26±7.03)%vs(6.27±2.90)%,P<0.01];显著降低了顶体完整率[(80.77±10.70)%vs(58.42±18.05)%,P<0.05]。结论:冷冻使精子活动率和顶体完整率降低的同时导致精子质膜严重破损。     

精索静脉曲张对精子染色质结构及运动能力的影响

目的:探讨精索静脉曲张对精子染色质结构及运动能力的影响。方法:对精索静脉曲张组(无慢性疾病及生殖系统病史者,n=74)和对照组(n=89)进行精子染色质结构分析(SCSA)和精液常规分析(精液量、粘稠度、pH值、精子顶体完整率、精子存活率、畸形率、精子密度、活动率及各运动参数)。结果:精索静脉曲张组精子密度、a+b级精子百分率和精子存活率[分别为(41.4±38.7)×106/ml,(31.7±16.9)%,(62.8±22.2)%]显著低于对照组[分别为(80.9±63.1)×106/ml,(46.8±20.5)%,(77.2±17.5)%],P均<0.05;精子运动参数VCL、VSL、VAP精索静脉曲张组分别为(37.4±12.5)、(23.4±7.8)、(26.5±8.2)μm/s,对照组分别为(42.4±10.7)、(27.3±7.3)、(30.7±7.8)μm/s,精索静脉曲张组与对照组相比显著降低(P均<0.05),而MAD显著增加(P<0.01),SCSACOMPαt值精索静脉曲张组(为23.2±16.2)明显高于对照组(为14.1±11.8)(P<0.05)。结论:精索静脉曲张引起精子DNA损伤和精子运动能力的改变,可能是导致男性不育的主要原因之一。     

不同年龄对精子凋亡率及DNA完整性影响的研究

目的:探讨不同年龄阶段精子凋亡率、精子DNA完整性及精液基本参数与年龄是否存在相关性。方法:随机选取在我科因女方因素行体外受精-胚胎移植男性精液标本104例,按男方年龄分为3组,年龄<35岁组43例、35～39岁组31例、≥40岁组30例,按WHO手册第4版手工分析精液常规参数,流式细胞术(FCM)结合FITC-Annexin V/PI荧光染色检测精子凋亡率,吖啶橙荧光染色检测精子DNA完整性。结果:①3组精液量[(2.87±0.89)ml vs(2.98±1.09)ml vs(2.65±0.95)ml]、精子浓度[(60.40±25.43)×106/ml vs(69.74±28.33)×106/ml vs(55.97±27.22)×106/ml]无显著性差异(P>0.05),≥40岁组前向运动精子百分率[(39.00±8.35)%]减少,与<35岁组[(48.72±9.89)%]和35～39岁组[(45.65±10.55)%]相比,差异有显著性(P<0.01);≥40岁组正常形态精子百分率[(11.11±8.26)%]与<35岁组[(16.43±8.75)%]相比,差异有显著性(P<0.01)。②精子凋亡在不同年龄组人群均有一定发生率,≥40岁组精子凋亡率为[(11.82±5.77)%],高于<35岁组[(7.04±3.50)%]和35～39岁组[(9.42±4.73)%],与<35岁组相比结果有统计学意义(P<0.01);≥40岁组DNA完整精子百分率降低[(75.52±10.60)%],与<35岁组[(86.55±5.60)%]和35～39岁组[(81.39±8.94)%]相比,差异有显著性(P<0.01);③男性年龄与精子凋亡百分率呈正相关(P<0.01),与前向运动精子、DNA完整精子百分率呈负相关(P<0.01)。结论:男性年龄增加可能导致前向运动精子百分率减少,正常形态精子百分率降低,精子凋亡百分率增加,DNA完整精子百分率性降低,在生育过程中,男性年龄应引起关注。     

JC-1单标法流式细胞术检测精子线粒体膜电位的研究

目的:探讨应用荧光染料JC-1单色标记法进行流式细胞术检测精子线粒体膜电位(MMP)的可行性及其临床意义。方法:收集63例男性精液标本,分为生育组(n=31)和不育组(n=32)。通过计算机辅助精液分析系统进行精液常规分析。精液标本洗涤处理后用JC-1染色后上流式细胞仪分析,用发橙红色荧光精子百分率(JC-1+%)表示MMP正常精子的比例。结果:生育组精子JC-1+%为(75.89±15.69)%,显著高于不育组[(54.04±22.21)%,P=0.000]。63例标本中,JC-1+%与精子活动率呈显著正相关(r=0.610,P=0.000),与(a+b)级精子百分率呈显著正相关(r=0.614,P=0.000),与d级精子百分率呈显著负相关(r=-0.504,P=0.000)。JC-1+%与已建立的罗丹明/碘化吡啶双染法检测结果(Rh123+/PI-%)呈显著正相关(r=0.938,P=0.000)。结论:应用流式细胞术JC-1单标法检测精子MMP具有可行性,精子JC-1+%可作为男性不育的辅助诊断指标。     

吸烟对重庆主城区成年男性精子凋亡及精液质量的影响

目的:探讨吸烟对重庆市主城区健康成年男性精子凋亡和精液质量的影响。方法:235例健康成年男性根据吸烟习惯分为吸烟组和不吸烟组。不吸烟组89例,吸烟组146例。采用计算机辅助精液分析系统检测精液常规参数;流式细胞术结合Annexin V-FITC/PI荧光染色检测精子凋亡(AN-/PI-、AN+/PI-、AN+/PI+、AN-/PI+精子比率),并对吸烟组和不吸烟组的各项参数进行比较研究。结果:与不吸烟组比较,吸烟组的早期凋亡精子(AN+/PI-)率高于不吸烟组[(8.1±5.1)%vs(6.8±3.8)%,P=0.039],而晚期凋亡精子(AN+/PI+)率两组间差异无显著性[(5.6±5.2)%vs(5.5±5.1)%,P=0.87];两组间精液量、精子密度、精子活动率、活力和正常形态精子率等精液常规指标的差异均无显著性(P=0.30;0.82;0.37;0.81;0.84)。结论:吸烟者早期精子凋亡率较不吸烟者高,提示吸烟可能诱导精子出现早期的细胞损害。精子凋亡可作为较精液常规指标更为敏感的生物标志物反映吸烟对男性精子造成的损伤。     

膜联蛋白5对人精子膜及DNA完整性的影响

目的:研究膜联蛋白5(Annexin5)对人精子细胞膜及DNA完整性的影响。方法:①精子膜完整性测定:按精子浓度>20×106/ml;活率>60%选取标准收集精液标本53份,分为3组,实验组为47.5μl精液中加入2.5μl10-6mol/L的Annexin5;阴性对照组为47.5μl精液标本中加入2.5μl1mol/L的Tris-HCl(pH8.0,25℃);空白对照组为47.5μl精液标本中加入2.5μl0.01mol/L的PBS(pH7.4),作用20min后,通过精子低渗肿胀试验(HOS)检测精子膜的完整性。②DNA完整性测定:同方法①,3组实验标本作用20min后,每份标本加入2.5μl0.02mol/L的H2O2,作用60min,通过吖啶橙(AO)荧光染色检测精子核DNA的完整性。结果:An-nexin5处理20min后低渗肿胀精子百分率与空白对照组及阴性对照组比较均具有极显著差异[(66.17±12.02)%vs(58.13±13.08)%,P<0.01;(66.17±12.02)%vs(59.94±11.91)%,P<0.01];空白对照组与阴性对照组比较无显著性差异。加入H2O2后,Annexin5组的DNA碎片指数与空白对照组及阴性对照组比较均具有极显著差异[(6.39±1.07)%vs(11.16±1.16)%,P<0.01;(6.39±1.07)%vs(10.86±1.05)%,P<0.01],空白对照组与阴性对照组比较无显著性差异。结论:Annexin5蛋白能在体外提高低渗肿胀精子百分率,对精子膜的完整性具有保护作用,同时对HO作用引起的精子核DNA破坏起保护作用。     

人类T型钙通道α1H和α1G基因在精索静脉曲张患者精子中的差异表达

目的:探讨精索静脉曲张(VC)患者精子中T型钙通道α1H和α1G基因的表达与精索静脉曲张的关系。方法:根据WHO标准用计算机辅助精液分析(CASA)方法对所取精液进行检查,根据检查结果分为正常精液组(20例)、VC精液正常组(16例)、VC精液异常组(44例),用Percoll非连续梯度离心法对精液进行分离,应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术分别检测3组精子T型钙通道α1H和α1G mRNA的表达。结果:与正常精液组相比较,VC精液正常组α1H和α1G mRNA的表达差异无显著性(P>0.05);VC精液异常组α1H和α1GmRNA的表达差异具有极显著性(P<0.01)。结论:T型钙通道α1H和α1G基因表达异常可能是导致VC患者精液质量下降从而不育的原因之一,此为VC不育的病因及治疗提供了新的方向。     

Is selective internal spermatic venography necessary in detecting recurrent varicocele after surgical repair?

OBJECTIVES: Surgical varicocele repair can be complicated by postoperative recurrence. The aim of this study is to evaluate the diagnostic value of scrotal color Doppler ultrasonography (SCDU) and selective internal spermatic venography (SISV) in detecting recurrent venous reflux after conventional varicocelectomy. MATERIALS AND METHODS: A total of 36 men (mean age 30.1 +/- 4.3 years) with a persisting left unilateral varicocele and abnormal semen parameters more than 12 months after conventional varicocele repair were evaluated with physical examination, semen analyses, SCDU and SISV. RESULTS: The median interval between primary varicocelectomy and presentation was 13 (range 12-16) months. Physical examination at that time revealed a grade- I left varicocele in 22 and a grade-II left varicocele in 14 patients. Semen analyses showed oligoasthenozoospermia in 30 patients (83%), asthenozoospermia in 4 (11%) and oligozoospermia in 2 (6%). Although all patients had reflux on SCDU, SISV confirmed reflux in 8 (22%) cases. SISV was not able to document recurrence in 28 cases (78%) that were detected by SCDU. CONCLUSIONS: Considering clinical findings, confirmed with SCDU, and semen parameters as the reference point in the diagnosis of recurrent varicocele, the sensitivity of SISV in the radiological documentation of recurrence was 22%. SISV was unable to document the recurrence in 78% of cases implying that reflux was not through internal spermatic veins. Thus, we conclude that SISV is neither necessary nor sufficient in the evaluation of recurrent varicocele.     

一氧化氮、一氧化氮合酶与伴精索静脉曲张不育患者精液参数的关系

目的:探讨一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)与伴精索静脉曲张(VC)不育患者精液参数之间的关系。方法:根据体格检查和彩色多普勒超声检查选择伴VC的不育患者(组1,n=53),其中临床型和亚临床型分别为21例和32例;同时选择非VC少弱精子症患者(组2,n=29)和正常生育者(组3,n=28)作对照组。采用硝酸还原法分别测定外周血和精浆中NO含量和NOS活性。用计算机辅助精液分析仪测定VC组患者精子密度、活动精子(a+b级精子)和快速前向运动精子百分率。结果:①组1外周血清NO含量和NOS活性与组2及组3相比差异无显著性(P>0.05),但精浆中NO含量和NOS活性组1明显高于其他两组,差异有显著性(P<0.01和P<0.05)。②组1中,随着曲张的精索静脉内径的增加,外周血清和精浆中NO含量和NOS活性均有所上升,但只有精浆中临床型和亚临床型之间相比差异有显著性(P<0.05)。③组1中,随着精子密度和精子活力的下降,外周血清和精浆中NO含量和NOS活性均有上升趋势,且精子密度≥20×106/ml和≤10×106/ml之间,精子活力≥50%和≤25%之间差异有显著性(P均<0.05)。结论:在VC诊断中精浆中NO含量和NOS活性测定较外周血清中更有意义。早期测定精浆NO含量和NOS活性对VC的诊断和治疗具有重要的临床价值。     

精索静脉曲张对精液质量和血清、精浆中抑制素B水平的影响

目的:探讨精索静脉曲张(VC)患者精索静脉曲张程度对精液参数和血清、精浆中抑制素B(inhibin B)水平的影响。方法:收集95例不育伴VC患者,55例有正常生育力的男性作为对照组,均通过CASA进行精液常规检查,改良巴氏染色进行精子形态检查;通过ELISA法检测外周血、精浆中抑制素B的水平。结果:VC患者正常形态精子百分率[Ⅰ度:(6.3±6.5)%,Ⅱ度:(2.6±3.0)%,Ⅲ度:(1.0±0.7)%]和前向运动精子百分率[Ⅰ度:(33.3±20.8)%,Ⅱ度:(28.9±19.8)%,Ⅲ度:(13.5±8.4)%]明显低于对照组[(7.5±5.2)%,(43.9±22.7)%](P0.05),精子畸形以头部畸形为主;VC患者外周血和精浆中抑制素B水平[Ⅰ度:(160.9±48.9)pg/ml,(208.3±28.1)pg/ml;Ⅱ度:(150.6±44.7)pg/ml,(201.5±83.5)pg/ml;Ⅲ度:(132.6±41.5)pg/ml,(150.2±51.6)pg/ml]均低于对照组[(201.0±38.1)pg/ml,(225.3±82.5)pg/ml]。结论:VC可导致精子活力降低,畸形率升高,外周血和精浆抑制素B水平下降,从而导致男性生育力受损。     

红外热像诊断精索静脉曲张及其临床意义

目的 :探讨精索静脉曲张所致阴囊温度的变化及意义。　方法 :对 16 6例精索静脉曲张病人红外热像检查结果进行分析 ,配合彩超检查 ,其中 ,对 10 6例病人进行手术前后红外热像图及精液分析。　结果 :精索静脉曲张病人手术前后红外热像差异有极显著性 (P <0 .0 1) ,精液分析差异有极显著性 (P <0 .0 1;部分指标P <0 .0 5 )。结论 :红外热像检查配合精液分析及彩超检查对判断精索静脉曲张病人的诊断和治疗效果有一定意义。     

Epididymal stereocilia in semen of infertile men: evidence of chronic epididymitis?

As free stereocilia in semen samples from infertile men could be related to a subclinical chronic infection of the seminal tract, we carried out a retrospective analysis of 14 files of infertile men with stereocilia in semen (group 1) and in two control groups: 30 infertile men from the same study population (group 2) and 40 fertile sperm donors (group 3). Clinical, bacteriological, sonographic and microscopic findings associated with these semen samples were compared. Epididymal cysts were found in two of 14 men in group 1 and in four of 28 in group 2. Positive semen cultures for Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis or Ureaplasma urealyticum (chi(2) = 8.20; P = 0.002; OR: 7.22) and varicocele (chi(2) = 8.96; P = 0.002; OR: 2.25) were associated to the presence of free stereocilia in semen. These data suggest that a silent chronic infection of the epididymis by C. trachomatis, M. hominis, U. urealyticum and/or inflammation produced by varicocele might be the cause of stereocilia loss in the semen.     

Relationship between aryl hydrocarbon receptor and spermatogenic dysfunction in male patients with varicocele

The main purpose of this project is to verify whether there is a difference in the expression of aryl hydrocarbon receptor (AhR) between varicocele (VC) and normal male semen, and determine whether there is a connection with the parameters of semen analysis. The risk factors of infertility in patients with VC were also studied. Semen samples were collected for semen analysis and Western blot. Logistic regression was used to investigate the risk factors associated with infertility in patients with VC. Men with VC had lower AhR expression compared to healthy men; correlation analysis results showed that: AhR expression in patients with VC group was significantly positively correlated with sperm concentration and sperm motility; significantly negatively correlated with the diameter of spermatic veins during Valsalva and the percentage of abnormal sperm morphology; the research results of related risk factors show that the risk of infertility of patients with grade III is 1.67 times that of patients with grades I and II. For each unit of abnormal sperm morphology, the risk of infertility increases 1.04 times. Sperm concentration, total sperm viability and each unit the expression of AhR protein decreases the risk of infertility by 3%, 9% and 11% respectively.     

高压氧对精索静脉曲张家兔睾丸组织学影响的实验研究

目的 :通过研究高压氧 (HBO)对精索静脉曲张 (VC)家兔睾丸组织形态和功能的影响 ,进一步探讨VC导致男性不育的发病机理。　方法 :健康成熟雄兔随机分为假手术对照组、VC模型组及高压氧干预的VC模型组 3组 ,每组 8只。部分结扎家兔左腰睾丸干静脉建立VC模型 ,术后用HBO对动物模型进行干预 ,对模型的精液参数 ,睾丸的重量、体积 ,睾丸组织形态以及精曲小管平均直径 (MTDs)、精曲小管生育力指数 (TFI)、Sertoli细胞指标 (SI)进行研究。　结果 :HBO干预动物的精液质量明显改善 ,睾丸重量、体积明显增加 ,与VC模型组比较MTDs差异具有极显著性 (P <0 .0 0 0 1) ,睾丸组织形态基本正常。　结论 :①VC可导致睾丸病理损害和生精功能障碍 ;②慢性缺血、缺氧和微循环障碍可能是VC导致睾丸病理损害、生精功能障碍的首要原因和中心环节 ;③HBO可有效减轻甚至消除VC睾丸组织慢性缺血、低氧状态 ,改善其微循环灌注 ,保护VC睾丸的结构和功能。