宫内生长迟缓大鼠成年期发生胰岛素抵抗的机制

目的:探讨宫内生长迟缓(intrauterine growth retardation,IUGR)的雄性大鼠肝胰岛素受体(insulin recep-tor,IR)、胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)、胰岛素受体底物-2(insulin receptor substrate-2,IRS-2)、磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidyl inositol 3-kinase,P13K)等胰岛素信号传导蛋白及胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)的表达及与其发生胰岛素抵抗的关系.方法:用雌性大鼠妊娠期半定量饥饿法建它IUGR大鼠模型.RT-PCR法检测出生后12周龄雄性大鼠肝IR,IRS-1,IRS-2,PDK和IGF-1 mRNA的表达,免疫组织化学法检测肝IR,IQRS-1和IRS-2蛋白的表达.结果:12周龄IUGR雄性大鼠肝IR mRNA表达(0.41±0.06)较对照组(0.62±0.11)下降(P<0.05),而蛋白的表达(6.21±0.57)较对照组(6.69±0.47)无明显降低(P>0.05);IRS-1 mRNA(0.77±0.20)较对照组(1.32±0.42),IRS-2 mRNA(1.05±0.280)较对照组(1.48±0.40),IRS-1蛋白(2.15±0.23)较对照组(5.96±0.38),IRS-2蛋白(4.33±0.29)较对照组(7.08±0.35)的表达均受到抑制(P<0.05);PDK mRNA(1.12±0.19)的表达与对照组(1.18±0.24)差异无统计学意义(P>0.05);肝IGF-1mRNA的表达(0.55±0.12)较对照组(1.22±0.34)明显降低(P<0.05);相关分析显示IGF-1 mRNA在肝的表达降低与IRS-1 mRNA(r=0.821,P<0.05)和IRS-2 mRNA(r=0.643,P<0.05)的表达减少有关.结论:IUGR雄性大鼠成年期肝胰岛素受体信号传导蛋白IRS-1和IRS-2的表达受剑明显抑制,并导致肝IGF-1表达降低,可能与其生后的牛长迟缓及胰岛素抵抗有关;肝IR和PDK的表达与IUGR大鼠胰岛素抵抗的发生无明显关系.     

宫内发育迟缓胎鼠肝脏PGC-1和PEPCK基因的表达变化

目的宫内发育迟缓(IUGR)是胰岛素抵抗的独立危险因素,通过检测IUGR胎鼠肝脏糖代谢相关酶的表达,探讨IUGR个体发生胰岛素抵抗的分子机制。方法通过孕期蛋白质营养不良法建立大鼠IUGR模型,孕21天时剖宫产,测量胎鼠的体重和肝重,采用RT-PCR和蛋白印迹技术检测胎鼠肝脏PGC-1和PEPCK的mRNA及蛋白表达的变化。结果与正常对照相比,IUGR胎鼠肝脏PGC-1的mRNA和蛋白表达水平明显增高(P<0.01),肝中PEPCKmRNA的表达也明显增高(P<0.01)。结论IUGR胎鼠肝脏PGC-1表达增加诱导了糖异生关键酶PEPCK的表达,促进肝脏糖异生,这是IUGR鼠成年后发生胰岛素抵抗的原因之一。     

补肾通脉方对伴胰岛素抵抗的多囊卵巢综合征大鼠IRS-1表达的影响

目的 观察补肾通脉方对伴胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)大鼠胰岛素靶器官中胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)表达的影响,探讨补肾通脉方改善伴IR的PCOS的机制.方法 23日龄雌性SD大鼠皮下注射硫酸普拉睾酮钠9 mg/(100 g·d)共20 d,联合高脂饮食喂养80 d建立IR的PCOS大鼠模型.成模大鼠随机分为模型组(27只)和中药组(23只),另设13只正常组.中药组以补肾通脉方干预.各组大鼠动情后期于门静脉推注胰岛素前后各处死一部分.逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测各组大鼠肝脏、脂肪组织IRS-1 mRNA表达,免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠肝脏、脂肪组织中IRS-1蛋白表达,免疫组化检测卵巢组织IRS-1蛋白表达.结果 模型组IRS-1在肝脏、脂肪组织中mRNA及蛋白表达,以及卵巢中蛋白表达,均明显低于正常组(均P<0.05),中药组均显著高于模型组(均P<0.05).各组IRS-1的表达在胰岛素刺激后均较刺激前明显增多(均P<0.05).结论 补肾通脉方可提高伴IR的PCOS大鼠肝脏、脂肪和卵巢中IRS-1的表达,这可能是其改善IR和促进排卵的机制之一.     

2型糖尿病大鼠胰腺IRS-1mRNA表达的变化及丝胶的调控作用

目的:分析2型糖尿病大鼠胰腺胰岛素受体底物-1 (insulin rceptor substrate-1,IRS-1)mRNA表达的变化及丝胶的调控作用.方法:雄性SD大鼠随机分组,正常对照组、糖尿病模型组、丝胶用药组.高脂饲料+高糖饲料喂养联合链脲佐菌素注射建立2型糖尿病大鼠模型,成功建模后,丝胶用药组大鼠给予丝胶(2.4g/kg)灌胃.采用葡萄糖氧化酶法检测各组大鼠的血糖,Real Time Q-PCR法检测各组大鼠胰腺RS-1 mRNA的表达.结果:与正常对照组大鼠比较,模型组大鼠的血糖明显升高,胰腺IRS-1 mRNA的表达明显降低(P＜0.05);与模型组大鼠比较,丝胶用药组大鼠的血糖明显降低,胰腺IRS-1 mRNA的表达明显升高(P＜0.05).结论:丝胶可能通过上调胰腺IRS-1的表达起到降低血糖的作用.     

高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝病大鼠IRS-1的表达

目的:利用高脂饮食建立非酒精性脂肪性肝(NAFLD)的模型,探讨NAFLD大鼠肝脏胰岛素受体底物-1(IRS-1)的表达。方法:雄性SD大鼠30只,随机分成正常组和高脂组,分别给予普通饲料与高脂饲料,至8周末分别检测大鼠的体重、体长及生长状况;生化分析仪检测血生化指标;HE染色观察肝组织病理学变化;通过免疫组织化学方法和RT-PCR检测肝脏IRS-1蛋白和mRNA的表达。结果:高脂组的ALT、TC、TG显著高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。予高脂饮食喂养8周后,高脂组大鼠肝脏符合NAFLD的病理特征。高脂组大鼠肝组织IRS-1较正常组表达显著下降,差异有统计学意义(P<0.01)。高脂组IRS-1的mRNA表达水平和蛋白表达一致。结论:高脂饮食喂养8周可使SD大鼠出现NAFLD,肝脏IRS-1的蛋白表达低于正常组。     

胰岛素受体及胰岛素受体底物-1、2在大鼠脑中的分布

目的:观察胰岛素受体(insulin receptor,InsR)及胰岛素受体底物-1、2(insulin receptor substrate-1、2,IRS-1、2)在正常成年大鼠大脑中的分布,为脑内胰岛素信号传导途径的研究提供理论依据。方法:应用免疫组织化学染色的方法观察正常成年大鼠脑中InsR、IRS-1、IRS-2的分布。结果:InsR、IRS-1、IRS-2在正常成年大鼠脑中广泛分布,在与学习记忆和能量代谢相关的脑区如大脑皮质、海马、丘脑和下丘脑的部分核团均有表达。结论:InsR及IRS-1、IRS-2在正常成年大鼠脑中广泛表达,但表达部位不完全一致,提示它们在大鼠中枢神经系统的正常功能活动中可能发挥不同的作用。     

补肾益气活血方对宫内发育迟缓胎鼠肝脏 IGF-Ⅰ表达的影响

目的观察补肾益气活血方对宫内发育迟缓(intrauterine growth retardation,IUGR)胎鼠肝脏胰岛素样生长因子-1(insulin like growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)基因在转录和翻译水平上的影响,探讨其防治IUGR的作用机制.方法采用被动吸烟法复制胎鼠IUGR模型,分为正常对照组、IUGR组、IUGR精氨酸治疗组(精氨酸组)、IUGR补肾益气活血方治疗组(中药组).采用Northern blot和免疫组织化学的方法分别检测胎鼠肝脏IGF-Ⅰ mRNA和蛋白的表达.结果IUGR组IGF-Ⅰ mRNA及蛋白表达水平与对照组比较明显下调(P＜0.01),而精氨酸组和中药组两者表达水平较IUGR组有所增加,其中,中药组IGF-Ⅰ的表达强度高于精氨酸组(P＜0.05),接近正常组(P＞0.05).结论补肾益气活血方可能通过直接(或间接)促进IGF-Ⅰ的合成和分泌,或者防止某些致病因素对IGF-Ⅰ基因表达细胞信息传导途径的阻断而起到防治IUGR的作用.     

宫内生长受限子鼠肝脏脂肪代谢关键酶表达的研究

目的 通过检测胎儿宫内生长受限(intrauterine growth restriction,IUGR)子鼠肝脏中脂肪代谢关键酶及可促进脂肪合成的核转录因子固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP1c)的表达,探讨IUGR个体发生脂肪性肝病的分子机制.方法 通过孕期低蛋白饮食法复制大鼠IUGR模型,采用定量逆转录-聚合酶链反应和Western blotting技术检测孕20 d(E20)胎鼠和12周成年子鼠(A12)肝脏中SREBP1c的mRNA和蛋白含量,同时检测肝脏脂肪酸合酶(FAS)和肝脂肪酶(HL)的表达变化.结果 IUGR成年子鼠肝脏三酰甘油浓度增加(P＜0.01).IUGR胎鼠和成年子鼠肝脏SREBP1和FAS的mRNA和蛋白表达均明显高于同龄对照,且FAS与SREBP1c的mRNA水平成正相关(均P＜0.05).IUGR胎鼠肝脏HL表达正常但成年后表达增高(均P＜0.05).结论 “胎儿程序化”影响使IUGR子代自围产期至成年肝脏中脂肪合成的调控因子SREBP1表达增加,诱导生脂酶FAS的表达,可能是成年肝脏脂质堆积及脂肪性肝病高发的机制之一.     

雌激素对前成骨细胞胰岛素受体底物-1的影响

目的:观察前成骨样细胞(MC3T3-E1细胞)分化过程中17β-雌二醇对胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)的影响。方法:应用10mmol/Lβ-甘油磷酸钠和50mg/L抗坏血酸诱导小鼠MC3T3-E1细胞分化成熟,分别在0,6,12,18,24,30d收集细胞。17β-雌二醇干预,用半定量RT-PCR和免疫印迹法检测干预组和对照组细胞IRS-1mRNA和蛋白的表达,比较两组细胞IRS-1表达量的变化。结果:在MC3T3-E1细胞分化成熟过程中,IRS-1 mRNA和蛋白的表达在MC3T3-E1细胞分化成熟过程中逐渐增高。结论:IRS-1可能在17β-雌二醇诱导的骨转换过程中起着重要作用。     

胰岛素增敏剂对PCOS大鼠子宫内膜胰岛素受体底物表达的影响

目的 探讨胰岛素增敏剂二甲双胍对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠子宫内膜胰岛素受体底物(IRS)1、2蛋白表达及酪氨酸磷酸化程度的影响。方法 Poretsky法建立PCOS大鼠模型,随机分为二甲双胍组和模型对照组,每组20只。空白对照组清洁级SD大鼠10只。采用免疫组织化学方法测定IRS-1和IRS-2蛋白在子宫内膜的表达及酪氨酸磷酸化程度。结果 3组大鼠子宫内膜腺上皮细胞均见IRS-1、IRS-2及酪氨酸磷酸化的表达。模型对照组子宫内膜腺上皮IRS-1、IRS-2、P-tyr(IRS-1)、P-tyr(IRS-2)表达水平明显低于空白对照组(P<0.01),二甲双胍组IRS-1、IRS-2、P-tyr(IRS-1)、P-tyr(IRS-2)表达水平显著高于模型对照组(P<0.01),低于空白对照组(P<0.05)。结论 IRS-1和IRS-2蛋白在PCOS大鼠子宫内膜表达及酪氨酸磷酸化异常与胰岛素抵抗有关;胰岛素增敏剂二甲双胍可通过增加IRS-1和IRS-2蛋白的表达水平,提高酪氨酸磷酸化程度,部分改善PCOS大鼠子宫内膜胰岛素抵抗。     

地龙提取物对宫内发育迟缓大鼠大脑、肝脏和胎盘的影响

了解地龙提取物对宫内发育迟缓（ＩＵＧＲ）胎鼠的大脑,肝脏和胎盘的作用。方法利用被动吸烟的方法建立大鼠ＩＵＧＲ模型,喂食地龙提取物观察其对胎鼠的大脑、肝脏和胎盘的保护与生长促进作用。结果地龙提取物对ＩＵＧＲ胎鼠的大脑和胎盘具有良好的保护作用。结论地龙提取物对ＩＵＧＲ胎鼠大脑和胎盘的生长发育有显著的促进作用。     

胰岛素样生长因子基因在小于胎龄鼠胎盘和胎肝组织中的动态表达变化

目的：动态观察小于胎龄（small-for-gestational-age,SGA）鼠妊娠晚期胎盘及胎肝组织中胰岛素样生长因子-Ⅰ（insulin-like growth factor-I,IGF-I）及其结合蛋白（IGF binding proteins,IGFBPs）的基因表达变化,以探讨SGA的可能发病机制。方法：结扎子宫动脉（uterine arteries ligation,UAL）建立宫内发育迟缓（intrauterine growth retardation,I-UGR）模型,应用逆转录（RT）-PCR测定SGA鼠胚胎18、19、20、21天胎盘、肝脏组织IGF-I,IGFBPs mRNA表达变化,并与正常组比较。结果：（1）胎盘和胚胎重量随胎龄增加,两者呈正相关,同胎龄SGA组胎盘和胚胎重量均低于对照组;（2）胎盘和胎肝IGF-Ⅰ、IGFBP1、IGFBP2 mRNA表达均随胎龄增加而增加,胎盘中的表达均低于胎肝;（3）同胎龄SGA组胎盘和胎肝IGF-ⅠmRNA表达较对照组降低,而IGFBP1、IGFBP2 mRNA表达较对照组增加;⑷同胎龄SGA组胎盘和胎肝组织IGF-ⅠmRNA水平与胚胎重量成正相关,而IGFBP1、IGFBP2 mRNA水平与胚胎重量成负相关。结论：IGFs的表达存在组织差异性,妊娠晚期胎盘与胎肝组织IGFs mRNA表达水平紊乱可能与小于胎龄鼠不良的宫内生长有关。     

The relationships of the serum concentrations of insulin-like growth factors in fetal rats with intrauterine growth retardation]

OBJECTIVE: To observe the alterations of serum insulin-like growth factor-I,-II (IGF-I, IGF-II) in rat fetus and to investigate the relationship of serum IGFs with intrauterine growth retardation (IUGR). METHODS: 21 pregnant SD rats were randomly divided into control group (n = 9) and experimental group (IUGR group, n = 12). On day 14 of gestation, the bilateral uterine arteries and veins of experimental group were clamped for 20 minutes to build the rat IUGR models and sham surgeries were performed on control group. Fetal serum concentrations of IGFs, birth weight, the length and weight of fetal liver, lung, brain and placenta of all rats in the two groups were measured and compared. RESULTS: The serum concentrations of IGF-I,-II of IUGR group were 117.92 +/- 26.58 ng/ml and 223.19 +/- 33.35 ng/ml, respectively, which were significantly lower than those of control group (234.43 +/- 70.65 ng/ml and 397.74 +/- 23.69 ng/ml, respectively, P < 0.01). Likewise, birth weight, the length and weight of liver, lung, brain and placenta in IUGR group were significantly lower than those in control group (P < 0.05). CONCLUSION: The decrease of fetal serum concentrations of IGF-I,-II may be one of the internal factors contributing to fetal IUGR, and IGFs may play an important role in fetal growth.     

左旋精氨酸对被动吸烟孕鼠作用的实验研究

目的　研究左旋精氨酸对被动吸烟孕鼠及胎仔生长发育的影响及其与NO ,MDA和SOD的关系。方法　被动吸烟法建立大鼠IUGR模型 ,孕鼠随机分为 5组 :对照组、模型组、左旋精氨酸低剂量、中剂量、高剂量治疗组。孕 2 1d剖宫取胎 ,观察胎仔体重、脑重、肝重及胎盘重 ;检测孕鼠血清及胎盘组织中NO含量及MDA ,SOD活性。结果　低剂量及中剂量治疗组与模型组相比 ,胎仔体重、脑重、肝重及胎盘重均明显增加 (P <0 0 1) ,NO及SOD升高 ,MDA降低 (P <0 0 1) ,但高剂量治疗组与模型组比较差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　适量左旋精氨酸可有效防治被动吸烟孕鼠IUGR ,促进胎仔生长发育 ,其作用与调节机体的氧化与抗氧化失衡有关。     

胎鼠血清胰岛素样生长因子水平改变与宫内生长迟缓的关系研究

目的　观察胎鼠血清胰岛素样生长因子 和 (IGF- 和 IGF- )的变化 ,探讨 IGFs与胎儿宫内发育迟缓 (IUGR)发生的关系。方法　 2 1只 SD孕鼠被随机分为对照组 9只 ,实验组 (IUGR) 12只。实验组于第14天行双侧子宫动、静脉钳夹 2 0分钟以建立胎鼠 IUGR模型。对照组仅行开腹和关腹术。比较两组胎鼠血清 IGFs的浓度及体重、身长和肝、肺、脑及胎盘的重量。结果　实验组血清 IGF- 、 浓度分别为 117.92± 2 6 .5 8ng/ ml和2 33.19± 33.35 ng/ ml,明显低于对照组 (分别为 2 34 .43± 70 .6 5 ng/ m l和 397.74± 2 3.6 9ng/ m l) (P均 <0 .0 1) ,其体重、身长及肝、肺、脑、胎盘组织的重量亦明显低于对照组 (P均 <0 .0 5 )。结论　胎鼠血 IGF- 和 IGF- 水平的降低是 IU GR发生的内在因素之一 ,IGFs在胎儿生长发育中有重要的作用。     

妊娠期肝内胆汁淤积症对胎鼠生长发育影响的实验研究

目的：了解大鼠肝内胆汁淤积症对胎鼠生长发育的影响。方法：给妊娠第16天的大鼠分别于颈后皮下注射苯甲酸雌二醇(5mg／kg)和尾静脉注射游离胆酸(2．4mg／kg)，连续5天，制造两种妊娠期肝内胆汁淤积症模型，将该孕鼠于妊娠第21天在麻醉状态下剖腹，取胎鼠血、羊水、胎肝、胎盘。结果：雌激素组晚期死亡胚明显增高(15．66％)，21日龄胎鼠体重明显降低，胎血总胆酸(TBA)明显升高。胆酸组羊水中的TBA明显高于对照组，胎鼠体重与对照组差异不明显。病理学显示，两模型组胎盘水肿明显，绒毛变性坏死，并有大量中性粒细胞渗出。结论：雌激素组可引起胎儿的高胆酸血症；胆酸组羊水中的TBA高于对照组，胎盘水肿、坏死明显，提示胆酸可影响胎盘功能。     

地塞米松对胎鼠体细胞周期动力学及凋亡的影响

目的：研究不同剂量的地塞米松对妊娠大鼠的胎盘，胎鼠肝脏，肺脏的细胞周期动力学及细胞凋亡的影响。方法：将40只定时受孕的Wistar大鼠于妊娠15d时随机分为4组，分别给予安慰剂和不同剂量的地塞米松，妊娠17d时随机选取孕鼠胎盘，胎鼠肝脏和肺脏标本各5个，制成单细胞悬液，经流式细胞仪分析各组织细胞的周期动力学及细胞凋亡的变化。结果：在安慰剂组中，以胎鼠肝脏的增殖细胞指数最高，在给药组中，虽然各组织的反应略有差异，但总体趋势相同，即增殖细胞指数下降，凋亡细胞的比例上升，特别是在大剂量应用地塞米松时，作用更明显，各组织中的增殖细胞指数与凋亡细胞百分比均呈负相关，结论：地塞米松可抑,制活体细胞的增殖，诱导细胞凋亡，其作用呈剂量依赖性。     

胎盘血流量下降对大鼠胎仔生长和胎盘结构的影响——宫内生长迟缓动物模型的研究

本实验采用 SD 大鼠,在孕后期行孕鼠一侧子宫动脉中段完全结扎,另一侧作对照.23只孕鼠(150只胎仔)分成未结扎上、下(CU 和 CL)与结扎上、下(LU、LL)四组.结果表明,LU 组宫内胎仔体重、胎盘重、脑肝重均较其它三组有显著下降(P<0.01);LU 组脑/肝重比值及脑/体重比值较其它三组有显著增加(P<0.01).其胎仔呈不均称性宫内生长迟缓(IUGR)。52只胎盘作了光镜观察,12只胎盘作了电镜观察。在已知子宫胎盘血流不足,且胎仔发生 IUGR 的情况下,其胎盘的改变与以往报道的人类 IUGR 胎盘病理改变相一致,从而证实了子宫胎盘血流量下降是 IUGR 发病的重要原因之一。     

阻断子宫动脉建立FGR大鼠模型的研究

目的通过暂时阻断妊娠期大鼠子宫血供的方法建立子宫缺血引起胎儿生长受限的动物模型。方法根据大鼠子宫动脉是卵巢动脉的一个分支的解剖特点,于孕鼠妊娠第15天时施行手术暂时阻断卵巢动脉并于第21天行剖宫产术,术后称量新生胎仔体重及胎盘、脑、心、肝、肺、肾等重要脏器重量,对比各组间新生胎仔的预后的不同,并对照研究阻断血供10、20、30及40 min对胎仔的不同影响。结果妊娠晚期阻断孕鼠卵巢动脉20min可成功构建胎儿生长受限模型,这种方法与阻断动脉血流30或40 min相比,手术时间短,技术要求不高,胎仔死亡率与对照组差异无显著性(P>0.05)。各实验组较对照组新生胎仔体重及胎盘、各重要脏器重量均明显降低(P<0.05)。结论通过阻断卵巢动脉从而阻断子宫动脉血流,成功建立缺血缺氧性FGR孕鼠模型。该模型重复性好,操作简便,并可成功设立同体对照,为进行FGR相关的产科理论研究提供了一个有利的技术平台。     

不同剂量重组人促红细胞生成素在宫内缺血缺氧环境中透过胎盘屏障及血脑屏障的通透性

目的探讨不同剂量重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)在宫内缺血缺氧时透过胎盘屏障及胎鼠血脑屏障的通透性。方法孕19d(孕晚期)SD大鼠,分为3组:rhEPO治疗组(Treat组)、假手术对照组(Sham组)和生理盐水缺血对照组(I/R组)。Treat组和I/R组制备宫内缺血缺氧模型,Sham组只进行开关腹手术。Treat组和Sham组根据注射rhEPO的剂量不同各自再分为3组,分别在宫内缺血缺氧处理或开关腹手术前30min经孕鼠尾静脉注射125I标记的rhEPO 2500U/kg、5000U/kg、7500U/kg,I/R组在宫内缺血缺氧处理前30min经尾静脉注入生理盐水。均于缺血缺氧处理或开关腹手术后24h取胎盘、羊水及胎鼠脑、肝、心、肺和肾,检测并比较各组织中125I-rhEPO的放射比活性。结果 Treat组和Sham组胎盘、羊水及胎鼠各组织中均能检测到125I-rhEPO的分布。125I-rhEPO在胎盘、羊水及胎鼠各组织中的分布均随rhEPO注射剂量的增加而增加。在各剂量组中,Treat组胎鼠各组织中的125I-rhEPO含量均高于Sham组(P<0.05)。结论在宫内缺血缺氧环境下,胎盘屏障及胎鼠血脑屏障对外源性rhEPO的通透性增加。