压力负荷增高性心肌肥厚大鼠心肌胶原网络重塑及其与内皮素的关系

目的探讨压力负荷增高性心肌肥厚大鼠心肌胶原网络的重塑及其与内皮素（ＥＴ）的可能关系。方法腹主动脉部分结扎致大鼠心肌肥厚，ＶＧ染色和图像处理观察心肌胶原网络重塑，放免测定心肌局部ＥＴ１含量，３Ｈ胸腺嘧啶（３ＨＴｄＲ）和３Ｈ脯氨酸参入试验观察心肌成纤维细胞的分裂增殖和胶原合成。结果手术组大鼠术后２周即出现明显左室肥厚，其程度随时间进展而加重。与假手术组比较，左室心肌总胶原容积百分比（ＣＶＦＴ）于术后２周增高，术后４、８周ＣＶＦＴ和无小血管视野ＣＶＦ（ＣＶＦＮＶ）均明显增高（Ｐ＜０．０１）。手术组大鼠左室心肌局部ＥＴ１含量明显高于相应假手术大鼠（Ｐ＜０．０１），且１０－１２～１０－８Ｍ浓度的ＥＴ１对培养心肌成纤维细胞３ＨＴｄＲ和３Ｈ脯氨酸的参入量有明显刺激作用，呈剂量依赖性。结论压力负荷增高性心肌肥厚形成过程中伴有心肌胶原网络重塑，心肌局部ＥＴ１含量增加可能与心肌胶原网络重构的形成有一定关系     

低氧对肺血管周细胞增殖及分化的影响

目的研究低氧对肺血管周细胞增殖及分化的影响,探讨低氧性肺动脉高压时无肌型肺动脉肌化的细胞来源。方法实验分为４组：直接低氧组（Ｈ组）,常氧组（Ｎ组）,低氧内皮细胞条件培养液组（ＨＥＣＣＭ组）,常氧内皮细胞条件培养液组（ＮＥＣＣＭ组）。应用细胞培养、３Ｈ胸腺嘧啶核苷（３ＨＴｄＲ）、免疫细胞化学、图像分析等技术,研究低氧对肺血管周细胞３ＨＴｄＲ的掺入量、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）、α平滑肌肌动蛋白（αＳＭＡｃｔｉｎ）表达的影响。结果Ｈ组周细胞３ＨＴｄＲ的掺入量、ＰＣＮＡ及αＳＭＡｃｔｉｎ的表达量分别是Ｎ组的２．１６倍（Ｐ＜０．０１）、１．１６倍（Ｐ＜０．０１）及１．１１倍（Ｐ＜０．０５）,ＨＥＣＣＭ组周细胞３ＨＴｄＲ的掺入量、ＰＣＮＡ及αＳＭＡｃｔｉｎ的表达量分别是ＮＥＣＣＭ组的１．８倍（Ｐ＜０．０１）、１．１５倍（Ｐ＜０．０１）及１．１２倍（Ｐ＜０．０５）。结论低氧可直接或刺激内皮细胞分泌某些细胞因子促进肺血管周细胞增殖、并向平滑肌样细胞分化。肺血管周细胞的增殖、向平滑肌样细胞分化是低氧性肺动脉高压无肌细动脉肌化的重要细胞来源     

汉防己甲素对大鼠肝细胞,贮脂细胞DNA及胶原合成的影响

以３Ｈ－胸腺嘧啶（３Ｈ－ＴｄＲ）、３Ｈ－脯氨酸掺入量及掺入抑制率测定的方法，观察汉防己甲素对离体大鼠肝细胞、贮脂细胞ＤＮＡ及胶原合成的影响。结果表明，在１０～５０ｕｇ／ｍｌ浓度范围的汉防己甲素能明显抑制细胞内ＤＮＡ及胶原合成，抑制程度与浓度、作用时间均呈正相关。结果提示，汉防己甲素抗肝纤维化作用的机制之一是抑制肝内贮脂细胞、肝细胞增殖及合成胶原。     

内源性一氧化碳对内皮素-1诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的探讨内源性一氧化碳（ＣＯ）对内皮素１（ＥＴ１）诱导的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的影响。方法体外培养Ｗｉｓｔａｒ鼠主动脉ＶＳＭＣ，用ＥＴ１诱导其增殖，用氯血红素诱导血红素氧合酶１（ＨＯ１），促进ＣＯ生成，测定培养上清液中碳氧血红蛋白（ＣＯＨｂ）含量和ＶＳＭＣｓ３Ｈ胸腺嘧啶核苷（３ＨＴｄＲ）参入量。结果加入梯度浓度氯血红素１０μｍｏｌ／Ｌ、２０μｍｏｌ／Ｌ、４０μｍｏｌ／Ｌ，培养上清液中ＣＯＨｂ量分别增高８．３％、１４．６％和１６．７％（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），对由ＥＴ１增高的ＶＳＭＣｓ３ＨＴｄＲ参入量抑制率分别为２２．９％，４３．９％和５１．７％（Ｐ＜０．０１），与加入的氯血红素及上清液中ＣＯＨｂ含量呈浓度依赖关系。结论ＶＳＭＣｓ产生的ＣＯ对ＥＴ１刺激的平滑肌细胞的增殖有抑制作用。提示血红素ＨＯＣＯ系统在血管重塑中有一定作用。     

经免疫的柞蚕蛹提取物对人直肠癌细胞的杀伤作用

目的探讨柞蚕免疫血淋巴（主要成分为柞蚕杀菌肽）对肿瘤细胞的杀伤及选择性杀伤作用机制．方法采用３ＨＴｄＲ掺入法及扫描、透射电子显微镜观察柞蚕免疫血淋巴对人直肠癌细胞的生长抑制、细胞ＤＮＡ合成及超微结构的影响．结果柞蚕免疫血淋巴在低浓度（１∶１６）即可抑制癌细胞生长及３ＨＴｄＲ掺入ＤＮＡ，随浓度增加，作用时间延长，作用逐渐增强；扫描、透射电子显微镜下见作用３０ｍｉｎ人直肠癌细胞超微结构即出现改变，２４ｈ～４８ｈ细胞膜结构破坏致细胞溃解．而作用于正常猴肾细胞ＣＶ１２４ｈ未见细胞生长及３ＨＴｄＲ掺入ＤＮＡ受到抑制；亦未见细胞超微结构破坏．结论柞蚕免疫血淋巴（柞蚕杀菌肽）对肿瘤细胞具有杀伤及选择性杀伤作用；主要作用部位在细胞的膜性结构；为柞蚕杀菌肽（免疫血淋巴）应用于抗肿瘤临床提供了实验依据     

血小板源生长因子对动脉平滑肌细胞增殖,Ⅰ、Ⅲ型前胶原信使核糖核酸的表达及胶原蛋白合成的调节作用

目的：研究血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）对培养的人主动脉平滑肌细胞增殖、胶原蛋白合成、分泌及Ⅰ、Ⅲ型前胶原信使核糖核酸（ｍＲＮＡ）表达和转移生长因子βｍＲＮＡ表达的调节作用。方法：氚胸腺嘧啶脱氧核苷（３ＨＴｄＲ），氚脯氨酸参入及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析。３ＨＴｄＲ，氚脯氨酸参入的比较采用ｔ检验。结果：ＰＤＧＦ能促进人主动脉平滑肌细胞脱氧核糖核酸（ＤＮＡ）合成和胶原蛋白合成、分泌；ＰＤＧＦ能上调Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ表达和转移生长因子βｍＲＮＡ表达。结论：血小板源生长因子能通过上调Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ表达和转移生长因子βｍＲＮＡ表达促进平滑肌细胞胶原蛋白的合成、分泌。     

非酶糖化蛋白对体外培养血管内皮细胞生长的影响

目的 观察糖代蛋白终末产物（ＡＧＥｓ）及高糖对体外培养人血管内皮细胞增殖的影响。方法 采用＾３Ｈ标记的腺嘧啶（＾３－ＴｄＲ）掺入法测定细胞增殖情况。结果 在含ＡＧＥｓ的培养液（５μｇ／ｍｌ）中增培养的新生儿脐带静脉内皮细胞,其２小时＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入对照组的２．９５倍（Ｐ〈０．０１）,而在含３０ｍｍｏｌ／Ｌ葡萄糖的２液中培养的人胚胎脐带静脉内皮细胞,其２小时＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入对照组（１１ｍｍｏｌ／     

乙肝定康对大鼠肝细胞DNA及胶原合成的影响

目的：研究乙肝定康抗肝纤维化的作用及其作用进行机理。方法：以＾３Ｈ－胸腺嘧啶（＾３Ｈ－ＴｄＲ）、＾３Ｈ－辅氨酸（＾３Ｈ－Ｐｒｏ）掺 及掺入抑制率测定的方法，观察乙肝定康对离体大鼠肝细胞ＤＮＡ及胶原合成的影响。结果：在１：１６００－１：１００ｍｇ／ｍｌ浓度范围的乙肝定康能明显抑制肝细胞ＤＮ及胶原合成，抑制程度与浓度、作用时间均呈正相关。结论：乙肝定康抗肝纤维化的作用机制之一是抑制肝细胞增殖及胶原合成     

苯那普利拉对自发性高血压大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的观察转换酶抑制剂（ＡＣＥＩ）苯那普利拉（Ｂｅｎａｚｅｐｒｉｌａｔ）对自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）肾小球系膜细胞增殖的影响．方法采用细胞培养和３Ｈ－胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）参入技术．结果（１）血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）组的３Ｈ－ＴｄＲ参入率高于对照组；（２）ＡｎｇⅡ加Ｂｅｎａｚｅｐｒｉｌａｔ组的３Ｈ－ＴｄＲ参入率低于ＡｎｇⅡ组；（３）ＡｎｇⅡ对ＳＨＲ肾小球系膜细胞增殖的刺激作用和Ｂｅｎａｚｅｐｒｉｌａｔ的抑制作用呈剂量依赖关系．结论苯那普利拉能逆转ＡｎｇⅡ对ＳＨＲ肾小球系膜细胞的增殖作用，从细胞水平体现其肾脏保护作用．     

虫草多糖对大鼠Ito细胞增殖及胶原基因表达的影响

目的　研究虫草多糖（ＣＰ）对大鼠Ｉｔｏ细胞增殖及Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因ｍＲＮＡ表达的影响,探索ＣＰ抗肝纤维化的作用机制。方法分离、培养大鼠Ｉｔｏ细胞,采用~３Ｈ－胸腺嘧啶（~３Ｈ－ＴｄＲ）和~３Ｈ－脯氨酸（~３Ｈ－Ｐｒｏ）掺入法测定Ｉｔｏ细胞增殖及胶原合成;用原位杂交法检测Ｉｔｏ细胞Ⅰ、Ⅲ前胶原基因ｍＲＮＡ含量。结果　在０．１～８０μｇ／ｍ剂量范围内,ＣＰ可明显抑制Ｉｔｏ细胞~３Ｈ－ＴｄＲ和~３Ｈ－Ｐｒｏ的掺入。当ＣＰ浓度为１０μｇ／ｍｌ时,抑制率分别为２７．９％和４５．４％（Ｐ均＜０．０５）。随着浓度的增加和作用时间的延长,其抑制作用逐渐加强,１０μｇ／ｍｌ ＣＰ可显著抑制Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ的表达,抑制率分别为３２．６０％和３７．３２％（Ｐ均＜０．０１）。结论 ＣＰ在体外可抑制Ｉｔｏ细胞的增殖和胶原合成,下调Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ表达,并呈剂量和时间依赖性,提示ＣＰ对Ｉｔｏ细胞增殖和胶原合成的抑制可能是其体内抗肝纤维化作用的主要途径。     

脂质体白细胞介素Ⅱ对小鼠脾淋巴细胞增殖及杀伤作用的影响

目的　探讨脂质体ｒＩＬ２ 对鼠脾淋巴细胞增殖及杀伤活性的作用。方法：参照Ｋｏｎｎｏ 及我所建立的方法制备复层大囊泡ｒＩＬ２ 脂质体（ ＭＬＶｒＩＬ２） 。选昆明鼠随机分成ＭＬＶｒＩＬ２ 组、ｒＩＬ２ 组、空白ＭＬＶ 组和对照组,分别腹腔注射１－５ 万Ｕ·ｋｇ１的ＭＬＶｒＩＬ２ 、１－５ 万Ｕ·ｋｇ１ 的ｒＩＬ２ 和等体积空白ＭＬＶ,连续７ 日,停药３ 日处死鼠无菌摘取脾。制取脾淋巴细胞悬液,掺入３ＨＴｄＲ 培养后测其３ＨＴｄＲ 活性,反映脾淋巴细胞增殖情况。同时选新鲜制取的脾淋巴细胞为效应细胞,Ｐ８１５细胞为靶细胞,提前使Ｐ８１５细胞掺入３ＨＴｄＲ,在效∶靶＝ ２５∶１ 和效∶靶＝ ５０∶１ 情况下使效、靶细胞共同孵育,收集残留的Ｐ８１５ 细胞并测其放射活性,反映脾淋巴细胞的杀伤活性。结果：ＭＬＶｒＩＬ２ 组、ｒＩＬ２ 组和空白ＭＬＶ 组３ＨＴｄＲ 掺入量（ ×１０３） 分别为１４－４３ ±１－２１ 、１０－７４ ±１－４９ 和９－８３ ±１－０８ 、ＭＬＶｒＩＬ２ 组最多,与各组比较 Ｐ＜ ０ ．００１ ;Ｐ８１５ 细胞中３ＨＴｄＲ 残留活性（ ×１０３） 在效∶靶＝ ５０∶１ 时,以上三组分别为１３－９５     

Balb/C小鼠免疫系统结构与功能的增龄性变化

目的 观察不同月龄Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠免疫系统结构珉 改变,以增进对衰老免疫学机制报了解。方法 采用＾３Ｈ胸腺嘧核苷（＾３Ｈ－ＴｄＲ）掺入法,噻唑蓝（ＭＴＴ法）,白细胞介素２（ＩＬ－２）依赖细胞株（ＣＴＬＬ－２）测定等实验,检测１、５、１０和１９月龄小鼠脾细胞表面抗原表达及免疫功能,并用苏木精伊红（ＨＥ染色检测胸腺和脾脏的组织学变化。结果 随着增龄,小鼠胸腺皮、髓质比例砬小,界限消失,有分泌液泡形成,     

固真方对老年大鼠下丘脑—垂体—甲状腺轴和免疫功能的影响

研究发现，与青年组比较，老年大鼠血清游离甲状腺素Ｔ４（ＦＴ４）、游离甲状腺素Ｔ３（ＦＴ３）水平明显下降，而血清３，３′，５′三碘甲腺原氨酸（ｒＴ３）水平显著升高，血清促甲状腺释放激素（ＴＲＨ）、促甲状腺激素（ＴＳＨ）呈代偿性增高，下丘脑ＴＲＨ明显下降，血清胸腺因子活性和脾细胞白介素２（ＩＬ２）活性降低。固真方可明显提高老年大鼠下丘脑ＴＲＨ、垂体ＴＳＨ，血清ＦＴ４与ＦＴ３，降低老年血清增高的ＴＲＨ、ＴＳＨ、ｒＴ３，使老年大鼠血清胸腺因子和ＩＬ２活性增高。     

HBV基因疫苗联合抗原蛋白免疫小鼠的研究

目的构建乙肝病毒（ＨＢＶ）基因疫苗,观察其与ＨＢＶ表面抗原蛋白（ＨＢｓＡｇ）联合免疫小鼠诱导的免疫应答．方法构建重组真核表达质粒ｐＣＲ３１Ｓ作为ＨＢＶ基因疫苗,联合应用纯ＨＢｓＡｇ蛋白免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,以单用基因疫苗ｐＣＲ３１Ｓ或纯蛋白ＨＢｓＡｇ免疫小鼠作为对照组．采用ＥＬＩＳＡ法检测免疫小鼠血清抗ＨＢｓ,另取免疫小鼠脾细胞,用３ＨＴｄＲ掺入法测定各组免疫小鼠的淋巴细胞增殖活性．结果２,４ｗｋ时联合免疫组抗ＨＢｓ效价低于纯蛋白免疫组,高于基因疫苗免疫组;６ｗｋ后基因疫苗免疫组抗ＨＢｓ效价升至最高,联合免疫组次之．３ＨＴｄＲ掺入法测定显示,各组免疫小鼠的淋巴细胞增殖反应差异不显著．结论乙肝病毒基因疫苗与表面抗原蛋白联合免疫无优势．     

慢性丙型肝炎病毒感染者外周血淋巴细胞增殖反应

目的　观察慢性丙型肝炎患者外周血淋巴细胞对丙型肝炎病毒（ＨＣＶ） 抗原刺激的增殖反应．方法　外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ） 与ＨＣＶ 抗原ｃ２２ 、ｃ３３ 、ｃ１００ － ３ 、ＮＳ５ 和植物血凝素（ＰＨＡ） 分别共同孵育,加入胸腺嘧啶核苷（３ ＨＴｄＲ） ,然后收集细胞于液闪仪测定每分钟脉冲数（ｃｐｍ） ．结果　根据对不同ＨＣＶ 抗原的淋巴细胞增殖反应发现,以ｃ２２免疫原性最强,ｃ１００ － ３ 次之：淋巴细胞激活与ＨＣＶ 基因型关系不大;健康对照和慢性乙型肝炎患者对各ＨＣＶ 抗原未能显示有效的淋巴细胞增殖反应;与健康对照比较,慢性丙型肝炎和乙型肝炎患者对ＰＨＡ 刺激的淋巴细胞增殖反应降低．结论　ＨＣＶ 抗原ｃ２２ 免疫原性最强,丙型肝炎患者对ＨＣＶ 抗原的淋巴细胞增殖反应系特异性;慢性丙型肝炎和乙型肝炎患者存在抑制的细胞免疫应答．     

氧化修饰低密度脂蛋白对血管内皮细胞DNA合成的影响

目的 探讨氧化修饰低密度脂蛋白（ＯＸ－ＬＤＬ）对血管内皮细胞损伤的机制。方法 在人脐静脉内皮细胞体外培养的基础上,通过采用＾３Ｈ－胸腺啶核苷（＾３Ｈ－ＴｄＲ）掺入ＤＮＡ技术和硫代巴比妥酸比色法,分别分析了ＯＸ－ＬＤＬ对内皮细胞ＤＮＡ合成及脂质过氧化物（ＬＰＯ）的代谢产物丙二醛（ＭＤＡ）含量的影响。结果 当内皮细胞暴露于ＯＸ－ＬＤＬ（５０～２００ｕｇ／ｍｌ）２４ｈ后,其＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入明显减少,但     

表皮生长因子对人衰老成纤维细胞EGFR基因及HER－2基因表达的诱导

人胚肺成纤维细胞（２ＢＳ）的３Ｈ脱氧胸苷（ＴｄＲ）掺入率，衰老细胞明显低于中年和年轻细胞（Ｐ＜０．０１）。表皮生长因子（ＥＧＦ）对三种细胞的３Ｈ－ＴｄＲ掺入均有促进作用，衰老细胞的反应性明显降低。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ及斑点杂交法显示衰老细胞的ＨＥＲ－２ｍＲＮＡ较年轻细胞明显降低，ＥＧＦ受体ｍＲＮＡ水平仅在极端衰老时才下降，ＥＧＦ可诱导年轻细胞ＨＥＲ－２基因表达，而衰老细胞却难以诱导。     

缺氧时肺动脉内皮细胞与肺动脉平滑肌细胞增殖的相互调节

缺氧时肺动脉内皮细胞与肺动脉平滑肌细胞增殖的相互调节王培勇刘健于中和许蜀闽王俊元孙秉庸采用３Ｈ－胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）掺入和流式细胞技术，观察在常氧及缺氧条件下，肺动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ）与肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭ）混合培养、共同培养时增殖的...     

DDPH对实验性腹主动脉狭窄高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖及癌基因表达的影响

观察１－（２，６－二甲基苯氧基）－２－（３，４－二甲氧基苯乙胺基）丙烷盐酸盐（ＤＤＰＨ）对实验性腹主动脉狭窄高血压大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的作用及对原癌基因及抑癌基因的影响。方法氚－胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）掺入，电镜，原位杂交及Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交。结果ＤＤＰＨ在降低血压同时，能减少血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）的线粒体，粗面内质网及３Ｈ－ＴｄＲ掺入量（Ｐ＜０．０１），并能逆转ｃ－ｆｏｓ，ｃ－ｍｙｃ，ｃ－ｓｉｓ原癌基因ｍＲＮＡ表达增强（Ｐ＜０．０５～０．０１），Ｐ５３抑癌基因ｍＲＮＡ表达减弱（Ｐ＜０．０５）。结论ＤＤＰＨ能抑制实验性高血压大鼠的ＶＳＭＣ增殖，与癌基因调控的分子生物学机制有关。     

缺氧内皮细胞条件培养液诱导平滑肌细胞增生和C-fos原癌基因表达

缺氧内皮细胞条件培养液诱导平滑肌细胞增生和Ｃ┐ｆｏｓ原癌基因表达于江洲王迪浔郝天玲实验应用３Ｈ－胸腺嘧啶核苷酸（３Ｈ－ＴｄＲ）掺入和原位杂交技术探讨了内皮细胞条件培养液对平滑肌细胞增生影响的一些可能的细胞机制。体外培养的猪肺动脉内皮及平滑肌细胞分别经...