神经营养因子3在电刺激治疗脊髓损伤中的作用

目的 探讨神经营养因子-3（NT-3）在成年猫脊髓损伤后电刺激治疗中的作用.方法 成年猫25只,雌雄不拘,随机分为左侧脊神经根去传入手术组（手术组,保留L6脊神经节）、手术＋电刺激组（电刺激组）、手术＋电刺激＋NT-3抗体封闭组（抗体封闭组）,2个月后对相应脊髓节段和保留脊神经节进行霍乱毒素B亚单位结合辣根过氧化物酶复合物形态学示踪及免疫组化、酶组化染色观察并进行组间比较.结果 各组脊神经节感觉性神经元中枢投射轴突终末集中分布在脊髓后角Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ板层内侧,但电刺激组终末出芽标记点密度高于手术组,而抗体封闭组终末再生出芽能力相比电刺激组显著降低.结论 电刺激可能通过上调NT-3的表达促进损伤脊髓和感觉神经元的形态和功能修复,来参与脊髓可塑性过程.     

大鼠脊髓全横断后NT-3在运动皮质表达的变化

目的研究大鼠脊髓全横断后神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT-3)在运动皮质表达的变化,为进一步探索脊髓损伤后的再生修复机制和神经营养因子治疗脊髓损伤提供实验依据。方法雄性SD大鼠36只随机分为3组:手术组(脊髓横断组),大鼠脊髓在T10-T11节段之间完全横断,按存活时间不同又分为术后1、3、7及14 d组;假手术组,只行椎板切除术;正常对照组。动物到达存活时间点后,应用免疫组织化学ABC法和图像分析技术检测NT-3在运动皮质的表达。结果对照组和手术组运动皮质第V层有NT-3阳性细胞。脊髓全横断后NT-3的表达逐渐增高,在运动皮质于术后3 d达高峰,后缓慢下降。结论脊髓全横断后运动皮质NT-3的表达增加,内源性NT-3的增加可能有利于受损的皮质脊髓束神经元的存活与再生。     

内源性GDNF在针刺促进损伤脊髓神经元轴突出芽中的作用

目的探讨内源性胶质源性神经营养因子(glia derived neurotrophic factor,GDNF)在针刺促进SD大鼠脊髓神经元轴突出芽中的生物学机制。方法 25只雌性SD大鼠随机分为单侧备用根手术组、针刺组、针刺并GDNF抗体封闭组。切除脊髓单侧L1～L3及L5～L6背根节(dorsal root ganglion,DRG),保留L4背根为备用根,制备单侧备用根模型。选择足三里和悬钟、伏兔和三阴交两组穴位进行针刺实验。免疫组化和辣根过氧化物酶(HRP)追踪分别检测GDNF及背根神经节(DRG)源的神经纤维表达变化。结果针刺可显著增加GDNF在受损脊髓中的表达,而抗体封闭可显著逆转该作用。结论针刺可能通过增加内源性GDNF的表达促进损伤脊髓神经元形态和功能修复。     

猫脊髓部分去传入后神经营养素家族表达的时空变化

目的　探讨部分去传入后猫脊髓背角 板层内 NGF、BDNF、NT- 3及其 m RNA的时空变化规律。方法　用免疫组化和原位杂交技术检测部分去传入 (切断 L1 ～ L5、L7～ S2 背根 ,保留 L6背根为备用根 ) 3～ 5天、10～ 11天后 ,猫脊髓 L3 、L5、L6或 L7节段背角 板层内三种神经营养素及其 m RNA的表达变化。结果　 1正常猫 NGF及其 m RNA分布于 板层神经元内 ;BDNF分布于神经纤维终末、膨体和神经元内 ,m RNA阴性 ;NT- 3分布于神经元、胶质细胞和少量神经纤维及膨体中 ,m RNA阴性。 2去传入后 3～ 5天 ,NGF及其 m RNA阳性神经元数明显增多 ,NT- 3阳性神经元和胶质细胞数也明显增多 ,而 BDNF含量及阳性膨体数却明显减少 ;10～ 11天时 ,NGF及其 m RNA阳性神经元数仍维持高峰水平 ,NT- 3者虽仍高于正常但已有所下降 ,而 BDNF含量除 L7节段外已恢复到正常 ,但阳性膨体数仍未恢复。 BDNF和 NT- 3的 m RNA仍呈阴性。 3NGF达高峰的时间在 L5、L6节段较早 ,L3 较晚 ;BDNF含量的恢复以 L7最迟 ;NT- 3阳性胶质细胞数量的变化在各节段一致 ,唯 L5、L7节段的阳性神经元数在 10～ 11天时即降致正常水平 ,L3 节段仍维持较高水平。结论　三种因子均参与部分去传入后脊髓的可塑性反应 ,但其发挥作用的早晚及维持时间却不尽相     

猫脊髓部分去传入后神经营养素家族表达的时空变化

目的 探讨部分去传入后猫脊髓背角Ⅱ板层内NGF、BDNF、NT-3及其mRNA的时空变化规律，方法 用免疫组化和原位杂交技术检测部分去传入（切断L1-L5、L7-S2背根，保留L6背根为备用根）3-5天、10-11天后，猫脊髓L3、L5、L6或L7节段背角Ⅱ板层内三种神经营养素及其mRNA的表达变化。结果 （1）正常猫NGF及其mRNA分布于Ⅱ板层神经元内；BDNF分布于神经纤维终末，膨体和神经元内，mRNA阴性，NT-3分布于神经元，胶质细胞和少星神经纤维及膨体中，mRNA阴性，（2）去传入后3-5天，NGF及其mRNA阳性神经元数明显增多，NT-3阳性神经元和胶质细胞数也明显增多，而BDNF含量及阳性膨体数却明显减少；10-11天时，NGF及其mRNA阳性神经元数仍维持高峰水平，NT-3者虽仍高于正常但已有所下降，而BDNF含量除L7节段外已恢复到正常，但阳性膨体数仍未恢复，BDNF和NT-3的mRNA仍呈阴性。（3）NGF达高峰的时间在L5、L6节段较早，L3较晚，BDNF含量的恢复以L7最迟；NT-3阳性胶质细胞数量的变化在各节段一致，唯L5、L7节段的阳性神经元数在10-11天时即降致正常水平，L3节段仍维持较高水平。结论 三种因子均参与部分去传入后脊髓的可塑性反应，但其发挥作用的早晚及维持时间却不尽相同。     

神经营养因子-3基因修饰的骨髓间充质干细胞和水凝胶联合应用对脊髓损伤模型大鼠的治疗作用研究

目的研究骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)、神经营养因子-3(neurotrophic factor-3,NT-3)、水凝胶(hydrogels)对脊髓损伤的联合治疗作用。方法首先,培养大鼠BMSC基因修饰,使其过表达NT-3,制作水凝胶并搭载细胞。然后,建立大鼠急性不完全性脊髓损伤模型并植入相应治疗。最后,术后通过运动行为学(Basso Beatlie Bresnahan,BBB评分)和病理学检测其对脊髓损伤的治疗作用。结果各个联合治疗组大鼠BBB评分均有不同程度增加,BMSC+NT-3+hydrogels组治疗作用最为明显。免疫组织化学检测显示各个联合治疗组神经元、神经纤维数目均有不同程度增加,星形胶质细胞数目较少。治疗组中,BMSC+NT-3+hydrogels组大鼠神经元、神经纤维数目最多,星形胶质细胞数目最少。所有结果组间比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论细胞(BMSC)、因子(NT-3)和支架(hydrogels)在治疗脊髓损伤中相互促进,联合移植于急性不完全性脊髓损伤模型大鼠,可提升模型大鼠后肢运用行为能力;促进损伤后神经元和神经纤维再生与修复并抑制损伤节段胶质瘢痕形成。本研究提示,制备更完美、可注射的细胞+因子+支架的复合材料,可对脊髓损伤神经修复再生的治疗提供新的思路。     

中药脊髓Ⅰ号对脊髓损伤大鼠背根节CGRP表达的影响

为研究在脊髓损伤后服用中药脊髓I号(SCI)对背根节(DRG)神经元降钙素基因相关肽(CGRP)表达的影响,探讨SCI促进脊髓修复再生效应的机制,用免疫细胞化学法和定量图像分析法,检查了SCI对Wistar大鼠下胸髓半横断损伤诱发的局部DRG神经元CGRP表达的影响.结果发现:①脊髓半横断引起同侧首、尾向各3个DRG内CGRP表达的明显和持续性下调;②损伤后投给SCI冲剂,可以明显减轻、但不能完全阻止脊髓损伤诱发的CGRP表达下调;③损伤后投给中药补阳还五汤,或用大剂量的氢化可的松治疗,不能减轻脊髓损伤诱发的CGRP表达下调;④在服用SCI大鼠脊髓的损伤区,显示有明显的修复再生.提示:CGRP表达程度与脊髓损伤及其修复再生的情况相关;SCI可能通过对CGRP-mRNA基因表达的调节,激发损伤脊髓组织的修复再生.     

中药脊髓I号对脊髓损伤大鼠背根节CGRP表达的影响

为研究在脊髓损伤后服用中药脊髓I号 (SCI)对背根节 (DRG)神经元降钙素基因相关肽 (CGRP)表达的影响 ,探讨SCI促进脊髓修复再生效应的机制 ,用免疫细胞化学法和定量图像分析法 ,检查了SCI对Wistar大鼠下胸髓半横断损伤诱发的局部DRG神经元CGRP表达的影响。结果发现 :①脊髓半横断引起同侧首、尾向各 3个DRG内CGRP表达的明显和持续性下调 ;②损伤后投给SCI冲剂 ,可以明显减轻、但不能完全阻止脊髓损伤诱发的CGRP表达下调 ;③损伤后投给中药补阳还五汤 ,或用大剂量的氢化可的松治疗 ,不能减轻脊髓损伤诱发的CGRP表达下调 ;④在服用SCI大鼠脊髓的损伤区 ,显示有明显的修复再生。提示 :CGRP表达程度与脊髓损伤及其修复再生的情况相关 ;SCI可能通过对CGRP mRNA基因表达的调节 ,激发损伤脊髓组织的修复再生。     

针刺对备用背根节和脊髓NT-4表达的影响

目的 观察NT-4在针刺部分去背根猫的L6背根节（手术侧和非手术侧）和脊髓表达的时空变化,以了解NT-4与针刺促进脊髓可塑性的关系。方法 25只成年健康雄猫随机分为5组：即正常组,备用根术（动物行单侧部分去背根手术,即切除一侧L1-L5、L7-S2背根节,保留L6为备用根）后7d组与14d组、针刺备用根术（动物行单侧部分去背根术后针刺）后7d组与14d组。动物处死后,取L6背根节及L3、L5、L6节段脊髓,用兔抗NT-4（1：200）抗体行免疫组化ABC法染色。观察、计数并比较各组背根节、脊髓实验侧Ⅱ板层（L3、L5、L6）和背核（L3）中NT-4的分布及含量。结果 针刺备用根7d组,针刺侧DRG内NT-4阳性神经元数较正常组和术后7d组减少（P＜0．05）,较相应非针刺侧多（P＜0．05）;针刺14d组,针刺侧DRG阳性神经元数比针刺7d组术后14d和同组非针刺侧增高（P＜0．05）,且恢复至正常水平。针刺7d,针刺侧脊髓L6Ⅱ板层NT-4阳性神经元数较术后7d组及正常组增加（P＜0．01）。针刺14d时,L5、L6Ⅱ板层阳性神经元数较正常组及术后14d组相应节段均增加（P＜0．01）。针刺后L3背核NT-4阳性神经元数无明显变化（P＞0．05）。L5Ⅱ板层NT-4阳性神经元在针刺后14d时比针刺后7d时增多（P＜0．05）。结论 以上结果提示NT-4与针刺促进脊髓可塑性有关;针刺备用背根对非针刺侧DRG NT-4的表达亦有影响,提示非针刺侧背根节NT-4亦可能参与了脊髓可塑性和针刺促进脊髓可塑性。     

眼镜蛇毒神经生长因子对去部分背根猫脊髓背角内GAP-43表达的影响

目的观察眼镜蛇毒分离纯化出的神经生长因子(NGF)对去部分背根猫脊髓背角内生长相关蛋白-43(GAP-43)表达的影响。方法对45只成年雄性家猫切除一侧L1-L5、L7-S2背根节,保留L6背根及背根节为备用背根,按给药剂量将动物分成小剂量NGF组(1μg/kg)、大剂量NGF组(2μg/kg)和生理盐水对照组,每组15只,术后分别存活3、6、12d,对L6节段脊髓作GAP-43免疫组织化学检测。结果术后术侧GAP-43阳性反应产物主要分布在脊髓、、板层的神经终末;中央管室管膜细胞呈阳性反应;脊髓前角神经毯呈阳性反应,整个脊髓板层未见阳性反应的神经元。术后3d,三组术侧、、板层即有GAP-43阳性神经纤维的表达;术后6d,三组GAP-43阳性神经纤维数量明显增多,至术后第12d,神经纤维数量增加达高峰,治疗组神经终末数量增加明显,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),不同时间段均以大剂量组的增多尤为显著。结论蛇毒NGF能有效诱导脊髓损伤修复过程中神经元GAP-43的合成而促进保留背根的侧支出芽,其密度与蛇毒神经生长因子的治疗剂量有关。     

部分背根切断对备用背根节和脊髓NT-4表达的影响

目的探讨NT-4在正常猫和部分去背根猫的L6背根节(手术侧和非手术侧)和脊髓Ⅱ板层与背核表达的变化。方法成年健康雄猫15只分为正常组、备用根术后7d组和14d组(动物行单侧部分去背根手术,即切除一侧L1-L5、L7-S2背根节,保留L6为备用根),采用免疫组化ABC法,观察、计数各组背根节、脊髓实验侧Ⅱ板层(L3、L5、L6)和背核(L3)中NT-4的分布及含量。结果①去部分背根后7d,备用背根节(术侧)中NT-4阳性神经元数比正常组显著减少（P＜0．05),但较非术侧明显增多(P＜0．05);至术后14d,术侧备用背根节NT-4阳性神经元比正常组、7d组和非术侧均减少(P＜0．05)。②正常组、术后两时相L3、L5、L6术侧脊髓Ⅱ板层和L3背核内NT-4阳性神经元数均无明显变化。结论去部分背根主要导致备用背根节NT-4的表达发生变化。     

部分去背根促进神经营养因子在初级感觉神经元顺行转运的研究

目的探讨部分去背根是否促进BDNF、NT-3和GDNF在初级感觉神经元顺行转运。方法将5只成年猫行单侧部分背根切断术,切除一侧的L1～L5,L7～S2背根神经节(DRG),保留同侧L6DRG为备用根,在L6背根距DRG1cm处捆绑双侧背根。术后3d取两侧L6背根制作20μm厚冰冻切片,分别用BDNF、NT-3、GDNF抗血清按免疫组织化学ABC法染色。观察实验侧和对照侧捆绑背根部位的近DRG端和近脊髓端各因子的免疫反应强度。结果对照侧捆绑处两端NT-3、GDNF的免疫反应强度均为弱阳性反应,BDNF捆绑处近DRG端的免疫反应( )较近脊髓端者强( )。实验侧捆绑处近DRG端。BDNF、NT-3和GDNF的免疫反应( )较捆绑处近脊髓端强,且较对照组近DRG强。结论部分去背根动物背根近DRG端BDNF、NT-3和GDNF的免疫反应强度增加可能提示部分去背根可促进BDNF、NT-3、GDNF从备用背根节神经元顺行转运进入脊髓。     

部分背根切断对备用背根节和脊髓IGF—I表达的影响

目的探讨IGF—I在正常猫和部分去背根猫的L6双侧背根节和脊髓Ⅱ板层(L3、L6、L5)与背核(L3)表达及变化，以了解IGF—I与脊髓可塑性的关系。方法成年健康雄猫15只分为正常组、备用根术后7d组与14d组，每组5只。用兔抗IGF—I(1：200)抗体行免疫组化ABC法染色。观察、计数并比较各组背根节、脊髓实验侧I板层(L3、L5、L6)和背核(L3)中IGF—I的分布、含量。结果①IGF—I在去部分背根后7d，术侧背根节阳性细胞数比正常组显著减少(P＜0．05)，与非术侧比无差异(P＞0．05)；术后14d，术侧背根节IGF—I阳性神经元数比正常组亦显著减少(P＜0．05)，与术后7d组比无差异(P＞0．05)，较非术侧者明显减少(P＜0．01)。②各组L3、L5、L6术侧脊髓Ⅱ板层内IGF—I阳性神经元数均无明显差异(P＞0．05)。L。背核IGF—I阳性神经元数在术后两时相则先减少后增加(P＜0．05)，且在术后14d时恢复至正常水平(P＞0．05)。结论部分背根切断导致双侧背根节IGF—I表达改变和脊髓背核IGF—I表达改变，提示IGF—I与脊髓可塑性有关。     

针刺对神经营养素3在脊髓可塑性中表达的影响

目的：探讨针刺对神经营养素3（NT3）在脊髓可塑性中表达的影响。方法：用NT3抗血清和NT3 cRNA探针，以免疫组化和原位杂交技术观察针刺前后备用背根节及脊髓Ⅱ板层中NT3表达的变化。结果：针刺侧备用背根节（DRG）NT3及其mRNA阳性大神经元（＞57um)和小神经元（P＜42um)百分数均较非针刺侧者明显增多（P＜0．05），此外，脊髓针刺侧Ⅱ板层NT3阳性神经元及胶质细胞百分数针刺侧亦较非针刺侧明显增多（P＜0．05），但两侧均未见NT3 mRNA的杂交信号。结论：针刺促进脊髓可塑性可能与DRG大，小神经元表达NT3和脊髓Ⅱ板层NT3阳性神经元和胶质细胞百分数的增多有关。     

部分去背根猫Sema3A及其受体NP-1在脊髓和背根节的表达

目的研究部分去背根对神经生长抑制因子Sema3A在脊髓及其受体NP-1在备用背根节内表达的影响。方法建立猫的单侧备用背根模型,分别在术后7d、14d取L3、L5、L6脊髓节段及手术侧L6背根节进行免疫组织化学ABC法染色,同时设置正常对照组。脊髓背角内检测Sema3A免疫阳性产物的平均光密度值(OD值),背根节内计数NP-1阳性中小神经元数。结果在L3脊髓节段,Sema3A的表达术后7d(0.25±0.14)、14d(0.27±0.09)较正常对照组(0.37±0.87)减弱(P<0.05);在L5脊髓节段,Sema3A的表达术后7d(0.26±0.11)较正常组减弱(P<0.05),术后14d(0.33±0.09)时有所恢复;L6脊髓节段各组Sema3A的表达无明显变化。背根节内,术后7dNP-1阳性中小神经元数(30.85±10.26)较正常组(45.06±12.47)减少(P<0.05),14d时阳性中小神经元数(40.73±12.25)较7d时有所增加(P<0.05)。结论脊髓部分去背根后,Sema3A及其受体NP-1表达的时空变化可能与脊髓损伤后可塑性有关。     

成年猫备用背根节内神经营养素-3对节内神经元的神经营养作用

目的 探讨成年猫部分去传入后备用背根节内神经营养素-3对节内神经元的神经营养作用。方法 切断L1、L3、L5和L7背根．术后第7d摘取L2、L4和L6背根节做分离细胞培养。对正常背根节、备用背根节和备用背根节加抗体封闭3个实验组中神经元存活、突起生长等情况进行观察比较。结果 备用背根节组存活细胞和细胞微团数目以及神经突起长度均明显高于正常组和抗体封闭组。结论 备用背根节内神经营养素-3对节内神经元有维持存活、促进突起生长的作用。     

针刺对备用根猫背根节神经元IGF-Ⅰ表达的影响

目的观察胰岛素样生长因子-I（IGF—I）在正常猫、部分去背根猫及针刺部分去背根猫的L6手术侧背根节（DRG）表达的时空变化，以了解IGF—I与针刺促进脊髓可塑性的关系。方法25只成年健康雄猫随机分为5组：即正常组、备用根术后7d组与14d组（动物行单侧部分去背根手术，即切除一侧L1～L5、L7～S2背根节，保留L6为备用根）、针刺备用根术后7d组与14d组（动物行单侧部分去背根术后针刺L6脊神经外周支配区内的两组穴位）。动物于术后7d、14d分别处死，取各组（手术侧）L。背根节，-20℃恒冷箱切片，片厚20μm，用兔抗IGF—I（1：200）抗体行免疫组化ABC法染色。观察、计数并比较各组背根节IGF—I阳性神经元的分布、含量及时空变化。结果针刺备用根7d组，DRGIGF—I阳性神经元数较术后7d组明显增加（P〈0．05），但仍低于正常水平；针刺14d，DRG阳性神经元比术后14d亦增多（P〈0．01），且恢复至正常水平。与针刺7d组比较，DRGIGF—I阳性神经元在针刺14d时明显增多（P〈0．05）。结论针刺可增加针刺侧DRG内IGF—I阳性中小神经元数。提示针刺后IGF—I在背根节的表达变化可能与针刺促进脊髓可塑性有关。     

脑源性神经营养因子在猫备用背根节的表达变化

为探讨脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）在备用背根节（ＤＲＧ）的表达变化情况,对２０只成年雄性家猫（其中１５只行单侧Ｌ６备用根手术后分别存活３、６、１２天）Ｌ６ＤＲＧ行ＢＤＮＦ免疫组化染色。结果：①正常猫Ｌ６ＤＲＧ神经元以胞体直径３２μｍ和４４μｍ为分界划分出大中小三类;②正常Ｌ６ＤＲＧ内有５０．８７％的神经元呈ＢＤＮＦ阳性反应,备用根手术侧其ＢＤＮＦ阳性神经元数量增多,反应增强,以术后６天变化最显著