肺表面活性蛋白质A的提取和纯化

肺表面活性蛋白质Ａ（ＳＰＡ）是组Ｍｒ为（２８～３６）×１０３的亲水性糖蛋白，可增加肺表面活性物质（ＰＳ）活性，抑制肺Ⅱ型细胞对ＰＳ分泌和增加ＰＳ中磷脂摄入，对ＰＳ进入肺泡形成管鞘有关［１～２］。另外影响肺泡巨噬细胞活力，与免疫防御系统有关［３］。为了深入研究其生理功能及制备ＳＰＡ抗体，用于临床检测和诊断，我们从孕妇羊水中制备提纯ＳＰＡ。材料和方法材料和试剂羊水来自产院３７～４２孕周健康产妇，合格学水呈乳白色，无污染。试剂Ｂ－Ｄ－ＯＧＰ为ＳＩＧＭＡ公司产品，其他为国产分析纯。低分子量蛋白质标准（上…     

一种新的中心体蛋白质TACP1与有丝分裂激酶Nek2A相互作用的研究

目的:研究一种新的中心体蛋白TACP1蛋白与有丝分裂激酶Nek2A在有丝分裂期的相互作用关系。方法:在大肠杆菌中表达和纯化的Nek2A305-446蛋白与293T细胞中表达的TACP1蛋白,进行体外pull-down实验;TACP1和Nek2A两种质粒共转染293T细胞,用TACP1多抗进行免疫共沉淀实验;Hela细胞共转TACP1和Nek2A,利用间接免疫荧光的方法在荧光显微镜下观察两种蛋白的亚细胞定位。结果:TACP1条带可以出现在大肠杆菌中表达和纯化的Nek2A305-446泳道中,而对照组中无TACP1条带。TACP1抗体可以将细胞裂解液中的Nek2A蛋白连同TACP1蛋白一起沉淀下来,而对照组免疫前的兔血清则不能将TACP1或Nek2A沉淀下来。在Hela细胞有丝分裂中期,TACP1和Nek2A都呈点状定位于中心体,两者信号叠加后也重合。结论:中心体蛋白TACP1在体内、体外能与有丝分裂激酶Nek2A相互作用,两者在细胞有丝分裂期都定位于中心体。     

人白细胞蛋白质的提取及双向电泳分析

目的 :建立人白细胞蛋白质提取及双向电泳分析方法 ,为构建白细胞在不同生理或病理条件下的蛋白质表达谱或进行蛋白质表达的差异分析奠定基础。方法 :取人全血 ,分离白细胞 ,提取蛋白质 ,双向电泳分离 ,考马斯亮蓝R - 2 5 0染色获得蛋白质的电泳分离图谱 ,利用PDQuest2D分析软件进行图像分析 ,结合SWISSSPORT蛋白质数据库对白细胞蛋白质斑点进行初步鉴定。结果 :所得双向电泳图谱中各点分离清晰 ,无明显横向或纵向拖尾 ,分析显示图谱上有 2 12个蛋白质斑点 ,主要集中在pH4 .75～ 6 .81之间 ,其中高丰度蛋白斑点有 36个点 ,低丰度的蛋白质斑点约 176个 ,对其中 6个高丰度蛋白质斑点初步鉴定可知这些蛋白质为 :CAN2 (MW :77975 .95pI:4 .84 )、I17R(MW :94 4 15 .6 3pI:4 .90 )、CARF(MW :5 130 2 .6 5pI:5 .82 )、FIG1(MW :6 8184 .0 6pI:6 .2 9)、PIGR(MW :82 96 9.32pI:5 .2 2 )、F16P(MW :36 781.2 8pI:6 .18)。结论 :本实验建立了人白细胞蛋白质的双向电泳分析方法 ,图谱分离、染色效果好 ,能满足 2 -DE专业软件分析的要求 ,为后续白细胞的蛋白质组研究奠定了基础。     

血浆蛋白质的前体形式

绝大多数血浆蛋白质除了分子中含有多糖链外，还含有较多的二硫键，如清蛋白含17对二硫键，铁传递蛋白含19对二硫键。二硫键具有稳定蛋白质空间构象并能帮助这些血浆蛋白质在通过循环系统的反复转换中维持其正常生理功能。近年来通过基因工程技术和蛋白质化学方法已测出六十余种血浆蛋白质的全部氨基酸序列。     

幽门螺杆菌HspA-UreB融合蛋白包涵体的纯化及活性鉴定

目的：建立一种有效的纯化幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位-尿素酶B亚单位(HspA-UreB)融合蛋白包涵体的方法。 方法：基因工程重组大肠杆菌BL21(pET-HU27)诱导表达的HspA-UreB融合蛋白包涵体经洗涤、变性、复性,在A¨KTA FPLC上运用HiTrap Chelating HP分离纯化,用SDS-PAGE和Bradford法检测目的蛋白的纯度和含量,用Western blotting对纯化后蛋白进行免疫学活性鉴定。 结果：纯化后HspA-UreB融合蛋白的纯度＞90%,含量达0.25 g•L^-1,并可以被HspA-UreB融合蛋白免疫小鼠血清识别。 结论：成功地建立了从包涵体中纯化高纯度HspA-UreB融合蛋白的方法。     

子宫中心体切除26例报告

腺肌症是妇科常见的疾病 ,手术治疗是其主要的治疗方法 ,传统为子宫切除术。因为切断了子宫动脉的卵巢支从而对卵巢功能及子宫自身内分泌功能有一定的影响。我们在传统术式的基础上作了改进 ,对 2 6例患者行子宫中心体切除术 ,效果良好 ,现报告如下。1　临床资料1.1　一般资料 :自 1998年 6月至 2 0 0 0年 6月间在我院住院病例中选择 2 6例腺肌症患者行子宫中心体切除 ,患者平均年龄 34岁 (2 8～ 4 1岁 )。其中 10例合并子宫内膜异位症 ,16例有痛经、月经量增多等症状 ,最后均以病理检查确诊。1.2　手术方式 :术前准备和麻醉同常规子宫全切…     

蛋白质中两种Strand-Loop-Strand模体的判断

目的:蛋白质的结构决定其功能,为了解蛋白质功能,需要了解蛋白质结构。随着基因测序的发展,大量蛋白质一级结构被测出,但直接从蛋白质的序列出发来预测高级结构,仍很困难,尤其是三级结构的预测。然而由超二级结构获得的结构信息可用于三级结构的预测,对蛋白质三维结构及功能预测有重大意义。方法:由一级结构出发,考虑氨基酸序列信息以及氨基酸的亲疏水性,利用Fisher判别法区分两种Strand-Loop-Strand超二级结构模体。结果:采用7交叉检验,Loop长为2～8时,最后平均结果为Q=71.8%,Q_L=68.2%,Q_H=73.4%,MCC=0.39。如Loop长度相差不大时,预测结果更好,如选取Loop长为2、3、4的序列,7交叉检验结果为Q=75.2%,Q_L=69.4%,Q_H=77.7%,MCC=0.45。结论:以氨基酸信息为特征指标,利用Fisher判别法能较好地区分两种Strand-Loop-Strand超二级结构模体。     

中心体γ-微管蛋白在人食管癌前病变及食管癌中的表达及其意义

目的探讨中心体γ-微管蛋白在人食管癌前病变及食管癌中的表达及其在食管癌发生发展过程中的作用。方法采用免疫组织化学法检测食管癌前病变及食管癌各40例中心体γ-微管蛋白表达水平,30例正常食管组织患者作为对照组,并用Western免疫印迹进行验证,所得数据进行统计学分析。结果不同样本组γ-微管蛋白表达水平不同（P=0．0001）,由食管正常上皮组织到出现不典型增生至进展为食管癌发展变化,γ-微管蛋白表达量呈增高趋势,各组间差异均有统计学意义（P=0．001）。比较同例和同组γ-微管蛋白的表达程度差异无统计学意义（P〉0．05）。Western免疫印迹与免疫组化检测结果一致。结论中心体异常为食管癌细胞恶性表型的明显特征之一,并可能是食管癌形成过程中的早期事件。γ-微管蛋白表达情况可为食管癌发生机制的探讨、高危病例的筛选及早期诊断、早期治疗提供一种新的思路和途径。     

质谱技术在蛋白质组学中的应用发展

蛋白质组学能阐明基因组所表达的执行生命活动的蛋白生物学功能。其研究成果为药物和临床医学提供了新的发展方向。作者就近年来国际上重点研究的几类质谱技术在蛋白质组定性、定量研究中的最新进展以及它们在蛋白质组研究中的优点和发展前景作一综述。     

基于质谱的代谢组学在病毒性疾病相关研究中的应用

随着代谢组学及其相关技术的发展,关于代谢组学研究的范围愈发广泛,同时关于病毒性疾病代谢组学相关研究愈发兴起。一些学者应用质谱技术研究HIV、慢性肝炎和病毒性肺炎等病毒性疾病的代谢组学时发现机体产生一些特异性代谢产物,这些代谢产物对疾病的发生、发展起到预判和疗效监测作用,可为疾病研究提供新的思路。本文现就质谱在HIV、慢性肝炎、人乳头瘤病毒和病毒性肺炎代谢组学研究中的应用进行综述。     

HPV永生化细胞系与SiHa细胞系蛋白质表达差异的质谱分析

目的：分析人乳头瘤病毒（HPV）永生化细胞系与SiHa细胞系之间的蛋白质表达差异,探讨从HPV感染到宫颈癌发生间的变化。方法高效液相色谱（LC）与质谱（MS）联用对HPV永生化细胞系与SiHa细胞系的蛋白质进行鉴定,然后通过蛋白质组学和生物信息学分析两种细胞系之间的蛋白表达,及一种新型翻译后修饰－琥珀酰化修饰的差异。结果在两种细胞系中,质谱鉴定到的蛋白总数为10691个,琥珀酰化修饰位点共6342个;非标定量分析共发现572种差异表达蛋白。HPV永生化细胞系中高表达的273种蛋白多集中在疾病的相关通路,而宫颈癌细胞系中高表达的299种蛋白多集中在代谢通路和核糖体通路。琥珀酰化修饰无差异,但发现一个新的琥珀酰化修饰位点———血清和糖皮质激素激酶1（SGK1）K41琥珀酰化。结论与HPV永生化细胞系相比,SiHa细胞系代谢能力及翻译蛋白能力更强;而HPV永生化细胞中高表达蛋白则大多与疾病相关,且更易发生恶化。     

中心体异常及P53蛋白过表达在食管癌变过程中的作用

目的了解食管癌变过程中中心体的变化及P53蛋白的表达情况,探讨中心体异常和P53蛋白过表达在食管癌变过程中的作用。 方法选取食管鳞状细胞癌50例,非典型增生22例,正常食管粘膜12例的石蜡包埋组织,采用免疫组织化学染色SP法检测P53蛋白的表达,组织免疫荧光染色法检测中心体的变化。结果食管癌组织中P53蛋白呈过表达（88%）,非典型增生组织中呈弱表达（54%）,而正常组织无表达。 同样,食管癌组织中有明显中心体异常, 非典型增生组织中可见部分中心体异常,而正常组织未见中心体异常。 中心体异常和P53蛋白过表达均与肿瘤分化程度及浸润程度呈正相关(P<0.05)。食管鳞癌组织中突变的P53蛋白表达与中心体异常显著相关(P<0.05)。结论中心体异常和P53蛋白过表达发生于食管癌变的早期阶段,且与预后相关。P53突变可能参与中心体异常的形成,与之共同参与食管癌的发生。     

Drug target discovery by magnetic nanoparticles coupled mass spectrometry

Drug target discovery is the basis of drug screening. It elucidates the cause of disease and the mechanism of drug action, which is the essential of drug innovation. Target discovery performed in biological systems is complicated as proteins are in low abundance and endogenous compounds may interfere with drug binding. Therefore, methods to track drug-target interactions in biological matrices are urgently required. In this work, a Fe₃O₄ nanoparticle-based approach was developed for drug-target screening in biofluids. A known ligand-protein complex was selected as a principle-to-proof example to validate the feasibility. After incubation in cell lysates, ligand-modified Fe₃O₄ nanoparticles bound to the target protein and formed complexes that were separated from the lysates by a magnet for further analysis. The large surface-to-volume ratio of the nanoparticles provides more active sites for the modification of chemical drugs. It enhances the opportunity for ligand-protein interactions, which is beneficial for capturing target proteins, especially for those with low abundance. Additionally, a one-step magnetic separation simplifies the pre-processing of ligand-protein complexes, so it effectively reduces the endogenous interference. Therefore, the present nanoparticle-based approach has the potential to be used for drug target screening in biological systems.     

Nek2调节中心体异常及其与肿瘤关系的研究进展

Nek2作为中心体的一种调控因素并因其与肿瘤发生、发展的关系逐渐被人们所认识。目前已经发现,Nek2在很多恶性肿瘤中都存在高表达、异位表达或基因变异,其异常表达会导致细胞有丝分裂的异常进而引起肿瘤的发生。该文旨在阐明Nek2基因与肿瘤的发生、发展关系的研究进展。     

蛋白质组学研究及其在寄生虫学上的应用

蛋白质组学为寄生虫学的研究提供了新的研究手段。本就蛋白质组学研究的主要技术(双向电泳、生物质谱技术、图象分析、生物信息学等)和内容，及其在寄生虫学研究中的现状和应用(新药物靶、新药物的发现、疫苗候选分子的寻找等)作了综述。     

Advancing mass spectrometry-based clinical proteomics in Saudi Arabia. Establishing a Saudi Proteomics Society

Rapid developments in the field of mass spectrometry-based quantitative proteomic technologies holds great promise in the search for clinically useful protein biomarkers for early detection, diagnosis, and prognosis of disease in general, and for monitoring response to therapy. Proteomics may contribute to finding novel drug targets and unravel molecular pathways associated with disease. Despite the application of clinical proteomics to a wide spectrum of disease research globally, however, there is lack of data with regard to quantitative proteomics in the Kingdom of Saudi Arabia (KSA) for the diseases common to the Saudi population. In this review therefore, we will discuss some aspects of clinical proteomics with regard to the occurrence of common diseases, and outline our perspectives and vision in the context of KSA. Furthermore, we aim to introduce the concept of a national Saudi Proteomics Society in the Kingdom as part of an advanced research and development program.     

蛋白质组学技术在胰腺的高糖毒性分析中的应用

慢性高血糖是糖尿病的一个主要特征,它也是发生糖尿病并发症的一个主要病因。目前普遍认为,高血糖毒性通过影响β细胞的分泌,使得2型糖尿病更加恶化。对于慢性高血糖有害影响的机制有很多不同的解释。其中一种学说认为,在高血糖状态下,几个关键蛋白的调节可能可以解释高血糖的慢性毒性作用。因此,在研究蛋白表达对于慢性高血糖毒性的影响方面,生物标本的蛋白质组学分析是一个有趣的方法。新发现的在慢性高血糖调节后表达的蛋白质,可能对更好的研究高血糖毒性条件下的机制有帮助。在这里,将对已应用于胰腺、胰岛细胞和β细胞相关研究的蛋白质组学技术作一综述。     

尿蛋白组学研究在肾脏病领域应用的新进展

早在20世纪90年代就有研究者开始了肾脏病尿蛋白组学的研究。应用双向电泳结合质谱技术寻找诊断疾病和判断预后的特异性标志物,分析疾病的分子机制以及找到药物作用的新靶点是蛋白组学研究的目标。本文就近几年尿蛋白组学技术在临床常见肾脏病,如肾病综合征、IgA肾病、狼疮性肾炎、糖尿病肾病等领域的研究及应用予以综述。