链脲佐菌素诱导巴马小型猪1型糖尿病模型对胰岛β细胞凋亡的影响

目的：探讨腹腔多次注射链脲佐菌素（ STZ）诱导的巴马小型猪1型糖尿病模型中β细胞凋亡的变化。方法选用健康雄性巴马小型猪12只,随机分为对照组6只和模型组6只。模型组腹腔注射STZ,第1次腹腔注射STZ 75 mg／kg,1周后第2次腹腔注射STZ 150 mg／kg,对照组注射等量柠檬酸钠溶液;实验结束后观察两组小型猪血糖、胰岛素水平的变化,并进行胰腺组织病理学检查及胰岛β细胞凋亡TUNEL检测。结果（1）造模成功1周后,模型组葡萄糖耐量试验各时点血糖水平均高于对照组的（10.17±1.23）％（P＜0.01）,胰岛素释放实验各时点胰岛素水平均低于对照组（P＜0.01）。（2）模型组胰岛β细胞凋亡率为（33.58±5.67）％明显高于对照组（ P＜0.01）。结论采用腹腔多次注射STZ可以成功构建巴马小型猪1型糖尿病模型,为人类糖尿病研究提供了良好工具。     

一次性静脉注射高剂量链脲佐菌素建立1型糖尿病小型猪模型

目的 探讨通过一次性注射高剂量链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）方法建立1型糖尿病小型猪模型的可行性。方法 中华实验小型猪耳缘静脉一次性注射链脲佐菌素溶液150 mg/kg,分别在给药前和给药后10 min、30 min、90 min、第1天、第2天、第3天和第7天空腹采集静脉血,动态监测空腹血糖,并利用静脉糖耐量实验和C肽释放实验对模型进行鉴定。结果 给药后第1天开始,模型组空腹血糖明显升高并始终维持在16.7～20.6 mmol/L的浓度范围,达到糖尿病标准;静脉葡萄糖耐量试验和C肽释放实验结果表明,静脉注射体积分数50%的葡萄糖1 h后模型猪血糖浓度高于11.1 mmol/L,2 h后未能恢复至空腹血糖水平;而胰岛素和C肽在注入葡萄糖后基本未发生任何反应,始终保持痕量水平。结论 一次性静脉注射大剂量链脲佐菌素的方法能够成功建立1型糖尿病小型猪模型。     

巴马小型猪T2DM模型胰岛素抵抗与同型半胱氨酸的关系

目的应用高脂高糖饮食联合链脲佐菌素(STZ)构建巴马小型猪2型糖尿病(T2DM)模型,并探讨T2DM小型猪胰岛素抵抗(IR)与同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)的关系。方法选用健康雄性巴马小型猪10只,随机分为两组:对照组(n=5),喂养普通饲料;糖尿病模型组(n=5),喂养高脂高糖饲料,上述两组共喂养10个月。11个月初糖尿病模型组腹腔注射STZ 100 mg/kg,1周后重复1次;对照组腹腔注射等剂量柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。观察两组小型猪体重、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)及血浆Hcy水平,同时计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。结果高脂高糖饲料喂养10个月后,模型组小型猪体重、FPG、FINS及HOMA-IR高于对照组(P<0.01);与对照组相比STZ给药后(12个月末实验结束时),模型组的FPG进一步升高,FINS水平明显下降(P<0.01)。模型组Hcy高于对照组(P<0.01),且HOMA-IR与Hcy呈正相关(r=0.906,P<0.05)。结论T2DM小型猪Hcy升高与IR密切相关。     

链脲佐菌素诱导2型糖尿病大鼠模型的探索

目的：分析链脲佐菌素诱导2型糖尿病大鼠模型造模的具体步骤,解决造模过程中出现的问题。方法：选用80只雄性Wistar大鼠,利用高脂高糖饲料喂养联合低剂量链脲佐茵素（STZ）30mg·kg-1剂量腹腔注射诱导形成2型糖尿病的大鼠模型。结果：以空腹血糖值≥11．1mmol·L-1者为造模成功,80只Wistar大鼠中66只造模成功,成功率为82．5％。结论：链脲佐菌素诱导形成的2型糖尿病大鼠造模步骤切实可行此方法成模率高。     

巴马小型猪在医学研究中的应用进展

广西巴马小型猪作为国内小型猪主要品种之一,具有遗传性稳定、多产、体重较小、体表多覆白毛等特征,组织器官及生化指标与人类相似,已越来越广泛地应用于医学研究领域：猪的心脏解剖与生理特点与人类高度相似,已被广泛应用于心血管系统研究中,在我国,巴马小型猪被用来构建心肌缺血、卵圆孔未闭等心血管疾病模型;猪具有杂食性及与人相似的脂质代谢,可用于研究内分泌疾病,巴马小型猪已用于糖尿病动物模型建立及其遗传易感性、并发症的防治研究等;巴马小型猪的消化系统与人类相似,利用此特点已建立阻塞性慢性胰腺炎、结肠穿孔、胆肠吻合等消化系统疾病模型;巴马小型猪除头、尾外,体表覆以白毛,这一特点使其成为研究皮肤创伤、烧伤修复等的理想动物;小型猪的牙齿解剖结构与人类相似,口裂大,可作为口腔医学研究中的理想动物,巴马小型猪已用来建立牙髓坏死模型及对上颌扩弓方式的研究;类似人的解剖、生理、病理使其成为较为适合的异种移植供体。在中医药研究方面,已用巴马小型猪分别建立了肝脏、脾脏、股动、静脉出血及头颈恶性肿瘤放疗后的腮腺损伤动物模型以研究中药制剂的疗效及机制。     

广西巴马小型猪2型糖尿病模型骨骼肌糖代谢及能量代谢相关基因的表达差异

目的 本实验通过比较T2DM猪、非T2DM猪的糖代谢及能量代谢等关键调控基因（PGC-1α、Glut-4、ERRα、NRF-1、TFAM和线粒体基因）,探讨这些基因在T2DM发生中所起到的作用。方法 以广西巴马小型猪T2DM模型建立的发病组和未发病组的背最长肌为实验材料,利用QRT-PCR实时荧光定量的方法对糖代谢及能量代谢相关基因mRNA和线粒体基因的表达情况进行检测。结果 在广西巴马小型猪背最长肌中,T2DM组PGC-1α、Glut-4、ERRα和NRF-1的相对表达量均显著高于非T2DM组,TFAM和线粒体基因的相对表达量则稍低于非T2DM组。结论 在T2DM巴马小型猪骨骼肌中,上调PGC-1α及其下游基因Glut-4、ERRα和NRF-1的表达水平,有利于改善葡萄糖代谢;而线粒体合成不足,致使ATP合成量不够,或引起胰岛素抵抗,进而导致2型糖尿病的发生。     

不同途径注射链脲佐菌素致大鼠糖尿病模型的研究

目的：探讨不同给药途径致大鼠糖尿病成模状况的差异。方法：本实验通过不同的途径给药（腹腔非空腹给药、腹腔空腹给药、尾静脉给药）以建立大鼠糖尿病模型，给药后48h检测血糖，尿糖，同时观察糖尿病大鼠的胰腺变化。结果：尾静脉给药成模率最高，胰腺形态学检查病程3、6月胰岛萎缩、β细胞减少。结论：尾静脉给药是注射链脲佐菌素致大鼠糖尿病模型的最佳途径。     

STZ诱导构建1型糖尿病肾病动物模型

目的：本实验拟构建1型糖尿病肾病动物模型,为进一步进行糖尿病肾病实验研究提供基础。方法：采用STZ腹腔注射C57BL/6小鼠,观察一般情况,监测小鼠血糖、体重,检测24h尿蛋白。结果：1型糖尿病肾病动物模型构建成功。结论：采用STZ可成功诱导构建1型糖尿病肾病动物模型。     

SPF巴马小型猪的培育及应用

利用我国自有资源巴马小型猪群,完成了疫病净化,建立了无特定病原体巴马小型猪实验猪群。制定了饲育标准、实验猪遗传学检测标准和微生物质量控制技术标准,制订了黑龙江省地方标准《无特定病原体猪微生物学监测技术规范》,对建立的猪群进行了遗传学和微生物质量控制。建立了猪瘟病毒(CSFV)和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染巴马小型猪感染模型。扩增了巴马小型猪重要细胞因子及固有免疫相关的重要分子,从分子水平进一步证明巴马小型猪可以代替家猪进行猪病感染实验。目前建立的猪群已广泛应用在猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪圆环病毒等猪重要疫病防控及致病机理的研究,实现了共享利用。本项目的完成解决了实验用猪瓶颈问题,提升了动物疫病研究水平,提供了新型实验动物,实现了优质种质资源共享利用,加速了生命科学研究和生物制品产业发展,推动了农业实验动物的行业进步。     

巴马香猪多次灌胃洛伐他汀的药动学研究

目的 探讨巴马香猪多次灌胃洛伐他汀后体内药代动力学特征. 方法 5头雄性巴马香猪,连续7 d清晨空腹灌胃洛伐他汀2.4 ms/(kg·d),采用RP-HPLC法测定其血药浓度后,并计算药动学参数. 结果 巴马香猪连续灌胃洛伐他汀2.4 mg/(kg·d),给药第4,5,6天的谷浓度低于检测下限.第1天和第7天的药代动力学参数Tmax分别为(3.02±0.24),(2.87±0.26)h;Cmax分别为(11.04±0.67),(12.95±0.87)ng/ml;T1/2α分别为(2.79±0.15),(2.13±0.21)h;T1/2β分别为(2.93±0.27),(3.45±0.75)h;AUC分别为(94.57±14.23),(109.53±13.29)ng·h/ml;CL/F分别为(0.025±0.007),(0.022±0.005)ml/min均无统计学差异(P>0.05). 结论 巴马香猪多次灌胃洛伐他汀,药代动力学特点不改变,连续给药无蓄积,与洛伐他汀在人体的药代动力学特点相近,提示巴马香猪可作为洛伐他汀药代研究的良好模型,同时为药物代谢动力学的研究提供新的实验动物品种.     

广西巴马小型猪和贵州小型香猪的DNA指纹分析

目的　应用DNA指纹分析的方法研究广西巴马小型猪和贵州小型猪的遗传背景。方法　采用ECL核酸直接标记和检测系统 ,以HRP标记JL 0 2多位点小卫星探针 ,对广西巴马小型猪和贵州小型猪基因组DNA的HinfⅠ或HaeⅢ酶切DNA片段进行Southern杂交 ,以化学发光法进行检测 ,获得了清晰可辨的、具有高度多态性的DNA指纹图。结果　广西巴马小型猪大于 2kb的HinfⅠ和HaeⅢ酶切DNA指纹图带数为 11 7和 2 4 5 ;贵州小型猪大于 2kb的HinfⅠ和HaeⅢ酶切DNA指纹图带数则为 15 8和 17 6。另外 ,广西巴马小型猪HinfⅠ和HaeⅢ酶切产生的不同个体DNA指纹的相似系数分别为 0 5 4± 0 0 7和 0 5 5± 0 0 8;而贵州小型猪则分别为 0 5 3± 0 0 4和 0 5 3± 0 0 7。结论　该探针适用于这两种猪的DNA指纹分析 ,不同酶切产生的DNA指纹图带数不同 ,但不同个体间相似系数的分析结果一致。同时说明这两种猪具有相当程度的种质均质性 ,符合封闭群动物的要求     

不同限饲水平下巴马香猪血液生理、生化指标的比较

目的 测定不同限饲水平下巴马香猪重要血液生理、生化指标,探讨限饲对血液生理生化指标的影响.方法 将336头断奶巴马香猪根据不同限饲水平按完全随机法分为对照组、80％日粮组和50％日粮组,每组112头,在60日龄和90日龄前腔静脉采集血液样本,对重要的10项血液生理指标和7项血液生化指标进行测定,统计不同限饲水平下指标的差异.结果 血液生化指标中ALT、TP、UREA和CREA指标值随着限饲水平的上升而上升;而TCHOL和GLU指标值随着限饲水平的上升而下降(P＜0.05).血液生理指标中RBC、HGB、HCT、MCH和MCHC指标含量随着限饲水平的上升而上升;而PLT、MCV、RDW-SD和RDW-CV指标含量随着限饲水平的上升而下降(P＜0.05).结论 巴马香猪在3个限饲水平下,血液生理、生化指标存在明显差异;按80％日粮限饲的巴马香猪更能获得稳定标准的巴马香猪血液生理、生化指标.     

高脂饮食联合STZ建立2型糖尿病大鼠模型稳定性观察

目的:探讨高脂饮食联合STZ建立2型糖尿病大鼠模型的稳定性。方法:87只雄性SD大鼠随机分为对照组和模型组。模型组在高脂喂养8周后,按30 mg/kg一次性腹腔注射STZ,然后继续喂养高脂饲料12周。在不同时间点检测体重、空腹血糖(FBG)、空腹血清胰岛素(FINS)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)和游离脂肪酸(FFA)等,并行腹腔葡萄糖耐量试验,计算胰岛素敏感指数(ISI)以及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。结果:模型成功率为38%。造模后各周模型组体重均低于对照组,FBG均显著高于对照组,注射葡萄糖后1 h和2 h血糖均显著高于对照组。模型组FINS在造模两周后显著低于对照组,造模12周后与对照组没有显著性差异;同时HOMA-IR均显著高于对照组,ISI均显著低于对照组。在高脂喂养8周后,模型组TG和TC均显著高于对照组;造模2周后模型组TG、TC和FFA显著高于对照组。结论:高脂饮食联合STZ建立2型糖尿病大鼠模型稳定性良好。     

巴马小型猪冠状动脉微栓塞后白细胞介素-1受体相关激酶1、肿瘤坏死因子受体相关因子6及AU碱基富集区RNA结合因子1mRNA的表达及意义

目的 探讨巴马小型猪冠状动脉微栓塞(CME)后心肌组织白细胞介素-1受体相关激酶1(IRAK1)、肿瘤坏死因子受体相关因子6 (TRAF6)及AU碱基富集区RNA结合因子1(AUF1)的动态表达情况及其意义.方法 将30只巴马小型猪分为假手术组(n=5)和CME组(n=25).CME组经微导管于左前降支中远端注入微栓塞球混悬液;假手术组注射等量生理盐水.将CME组均分为5组于建模后3h、6h、9h、12h、24 h进行观察;假手术组小型猪于6h后进行观察.光镜下观察各组心肌组织改变,并检测心肌组织IRAK1、TRAF6及AUF1 mRNA表达.结果 建模后6h,CME组血管内均可见微栓塞球,周围出现微梗死灶.建模后6h,与假手术组比较,CME组心肌组织IRAK1、TRAF6及AUF1 mRNA的表达水平均显著增加(P＜0.05).CME组心肌组织IRAK1、TRAF6及AUF1 mRNA的表达水平都在建模后3h和6h升高,9h达高峰,12 h和24 h下降;与3h和24 h比较,CME组9h心肌组织IRAK1、TRAF6及AUF1 mRNA的表达水平均显著增加(P＜0.05).结论 IRAK1、TRAF6及AUF1 mRNA高表达于CME后心肌组织,并呈现出明显的时间变化规律.     

II型糖尿病并发结核病小鼠模型的建立及评价

目的 建立II型糖尿病并发结核病小鼠模型,对其肺组织病变过程进行评价。方法 高脂高糖饲料喂养C57BL/6J小鼠,腹腔注射STZ,建立II型糖尿病小鼠模型。采用滴鼻的方式将结核分枝杆菌H37Rv接种至糖尿病小鼠体内,建立糖尿病并发结核病小鼠模型。分别于感染后的1-8周、10周及12周解剖小鼠,肉眼观察小鼠肺脏病变情况,活菌菌落计数,肺组织行HE及抗酸染色,镜下观察病理学改变。结果 肉眼观察发现,随着感染时间的增长肺部感染情况逐渐加重,至第8周时病灶达到全肺的80%,第10周时病变范围开始缩小;感染8周后HE染色肺组织出现典型的肉芽肿结构,至第10周部分病变肺组织出现修复现象;抗酸染色可见结核分枝杆菌。结论 从大体病变、菌落计数及病理改变等方面对小鼠模型进行评价,发现糖尿病并发结核病小鼠模型较单一的结核病小鼠模型具有发病早,病程进展快等特点,与临床患者表现类似,因此实验构建的糖尿病并发结核病小鼠模型基本成功。     

洛伐他汀在巴马香猪体内的分布和排泄

目的研究洛伐他汀在巴马香猪体内的分布和排泄特点。方法以抗动脉粥样硬化药物洛伐他汀为模型药,选择健康6月龄雄性巴马香猪为实验对象,经灌胃途径给药(45 mg/kg或2.4 mg/kg),采用RP-HPLC方法测定各组织及体液中的药物浓度,并对其分布和排泄过程进行研究。血浆蛋白结合率通过透析法测定。结果给药后,洛伐他汀快速分布到贲门、胃、小肠、肝、大肠、胰、前列腺、肺、肾、心、肌肉、睾丸、肾上腺、膀胱、脑和脾。以胃、肠、肝组织中药物浓度较高。单次给药4h后,贲门、胃、小肠、肝、心、肾上腺、膀胱药物浓度同给药后1h相比略有下降,其余组织均高于1 h。血浆蛋白结合率为95%以上,同正常人血浆非常一致。96 h尿中累积排泄量为给药量的7.4%,原形药经胆汁及粪排泄量达到80%以上。结论洛伐他汀在巴马香猪体内同人的分布排泄和血浆蛋白结合率相似,均在组织中广泛分布,血浆结合率达到95%以上,主要经胆汁和粪排泄。     

2型糖尿病患者血清对氧磷酯酶1活性与肥胖的相关性分析

目的探讨血清对氧磷酯酶1（PON1）水平与2型糖尿病（T2DM）患者肥胖的相关情况及其可能的作用机制。方法将T2DM患者83例根据有无肥胖分为T2DM肥胖组（50例）和T2DM非肥胖组（33例）,另设对照组（36例）。比较各组的一般情况、血脂、糖代谢等生化指标和PON1的差异。结果 T2DM肥胖组的血清PON1活性明显低于T2DM非肥胖组,且两组PON1活性均低于对照组。相关分析显示,血清PON1与体重指数（MBI）、腰围（WC）、收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、空腹血糖（FPG）、三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）显著负相关,与高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）显著正相关。结论肥胖T2DM患者PON1活性降低,促进了动脉粥样硬化的发展。