联合使用骨形态发生蛋白和碱性成纤维细胞6生长因子对成纤维细胞成骨表型的影响

目的 研究联合使用骨形态发生蛋白 (rhBMP 2)和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对成纤维细胞成骨表型的影响.方法向培养的成纤维细胞 NIH3T3中加入不同浓度的 rhBMP 2和 bFGF, 观察成纤维细胞形态学变化、碱性磷酸酶 (ALP)活性与染色的情况和骨钙素表达的变化,同时观察细胞增殖周期的变化.结果在两种因子作用下,成纤维细胞由长梭形向多角形方向转化,细胞体积增大、细胞内颗粒增多 ; 成纤维细胞 ALP活性增高、骨钙素表达增多,细胞内 ALP染色加深 ; 细胞增殖周期缩短.结论联合使用 rhBMP 2和 bFGF可以促进成纤维细胞成骨表型表达并促进细胞增殖 .     

碱性成纤维细胞生长因子对成骨细胞增殖和分化的影响

目的 :明确外源性碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对成骨细胞生长的影响。方法 :用体外培养的SD大鼠的成骨细胞 ,加入不同浓度的bFGF( 10～ 10 0ng/ml) ,培养 2 4h后 ,通过MTT检测法、增殖细胞核抗原免疫组化分析及细胞碱性磷酸酶量的测定观察bFGF对成骨细胞的增殖和分化的影响。结果 :bFGF在此浓度范围内能明显促进成骨细胞生长 ,细胞内ALP含量下降。结论 :bFGF可以明显刺激成骨细胞的增殖 ,对细胞的分化无促进作用     

bFGF和地塞米松对骨髓基质干细胞增殖与分化的影响

目的：探讨碱性成纤维生长因子（bFGF）和地塞米松（Dex）在体外培养条件下对SD大鼠骨髓基质干细胞（MSC）增殖与分化的影响。方法：用DMEM冲洗股骨、胫骨骨髓腔，收集骨髓细胞悬液，接种在塑料培养瓶内进行体外培养及扩增，并分别加入不同浓度bFGF和Dex，通过MTT法检测2者对MSC增殖的影响，通过RT-PCR技术测定碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（OCN）和骨桥蛋白（OPN）的表达，了解2者对MSC分化的影响。结果：bFGF对MSC增殖呈剂量依赖性，10ng／ml时促增殖最明显；Dex对骨髓基质细胞的增殖起抑制作用，并随Dex浓度的升高而增强。bFGF降低MSC的ALP活性及OCN、OPN的表达；而Dex以及2者联合应用则增加ALP活性，促进MSC的ALP、OCN及OPN表达增加。结论：bFGF促进MSC增殖、抑制其分化；Dex抑制MSC增殖，但可促进其分化，bFGF（10ng／m1）和Dex（10^-8mol／L）联合应用能有效的促进MSC的增殖和成骨分化。     

腺病毒介导的BMP-2基因转染骨髓基质干细胞及种植异种骨支架的体外观察

目的　用人骨形态发生蛋白 2腺病毒表达载体 (Ad BMP 2 )转染的兔骨髓基质干细胞 (BMSC) ,种植BCB(去抗原牛松质骨 )支架体外构建组织工程骨。方法　蛋白印迹法检测转染后细胞BMP 2的表达 ,ALP活性检测分析基因转染对细胞分化的影响。然后将转染后细胞接种到BCB支架上 ,扫描电镜观察细胞贴附、生长状况。结果　转染后 ,BMSC表达BMP 2 ,ALP活性明显增高。扫描电镜见转染细胞分布均匀 ,伸展良好。结论　Ad BMP 2可高效转染BM SC ,且促进细胞分化。转染后细胞在BCB上生长良好 ,BMP 2基因治疗的组织工程骨构建成功     

中枢神经系统再生的可能性:碱性成纤维生长因子和表皮生长因子对胚胎神经干细胞生长分化的影响

目的研究碱性成纤维生长因子(bFGF)和表皮生长因子(EGF)对胚胎神经干细胞生长和分化的影响.方法从孕11～13d大鼠胚胎神经管取神经干细胞,原代体外培养中加入bFGF和EGF,观察对神经干细胞胞体发育及突起生长的影响.结果EGF主要影响神经干细胞的增殖,也可以促进细胞突起的生长,但胞体直径与相应的对照组无显著差异;bFGF可促进胞体发育及突起的生长;两种因子联合应用,生长作用优于单独应用组.结论EGF和bFGF可以促进原代培养胚胎神经干细胞的生长和分化.     

碱性成纤维细胞生长因子的成骨细胞增殖和分化的影响

目的：明确外源性碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对成同细胞生长的影响。方法：用体外培养的SD大鼠的成骨细胞，加入不同浓度的bFGF（10－100ng/ml)，培养24h后，通过MTT检测法，增殖细胞核抗原免疫组化分析及细胞碱性磷酸酶量的测定观察bFGF对成骨细胞的增殖和分化的影响。结果：bFGF在此浓度范围内能明显促进成骨细胞生长，细胞内ALP含量下降，结论：bFGF可以明显刺激成骨细胞的增殖，对细胞的分化无促进作用。     

BMP-2和地塞米松对成人成骨细胞增殖和分化的影响

目的 观察不同浓度骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)和地塞米松(dexamathasone,DEX)对体外培养的人成骨细胞增殖、分化的影响。方法成人髂骨松质骨胰蛋白酶消化后获得成骨细胞进行培养,用倒置显微镜进行活体观察并做碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)、Ⅰ型及Ⅲ型胶原染色观察成骨细胞生物学特征。培养的细胞加入不同浓度BMP-2(1、10、100、1000ng／m1)和DEX(10^-8、10^-7、10^-6mol／L)作用48h后,用MTT法检测细胞增殖,同时测定细胞裂解液中ALP活性和OCN含量。结果 体外培养的成人成骨细胞可合成碱性磷酸酶、骨钙素、Ⅰ型胶原,并形成钙化结节、3个浓度的DEX在48h后均能刺激成骨细胞的增殖,增加成骨细胞ALP活性和OCN含量,4个浓度BMP-2在48h后对成骨细胞无增殖作用,但都能增加ALP活性和OCN含量。结论 地塞米松促进体外培养的成人成骨细胞增殖和分化;短期作用下,BMP-2对成骨细胞的增殖无明显作用,但可促进成骨细胞的分化。     

周期性张应力联合淫羊藿苷促进脂肪干细胞成骨分化的实验研究

目的探讨周期性张应力（CTS）联合淫羊藿苷促进脂肪干细胞（ASCs）成骨分化的作用。 方法分离10只Sprague-Dawley(SD)大鼠的ASCs,分别按不同的干预方法将收集的ASCs细胞分为对照组（仅用普通培养基干预）、淫羊藿苷组（仅用淫羊藿苷干预）、1000μ组（仅用1000μ的CTS干预）、2000μ组（仅用2000μ的CTS干预）、3000μ组（仅用3000μ的CTS干预）和联合干预组（用2000μ的CTS联合淫羊藿苷进行干预）。淫羊藿苷的作用浓度为10-7mol/L;CTS的设置参数为频率1.0Hz,应力大小分别为1000μ strain（简称1000μ）、2000μ、3000μ,每刺激5s之后休息15s,每日总刺激时间为2h。干预7d后,收获细胞采用Western Blot法检测碱性磷酸酶（ALP）蛋白的表达;用淫羊藿苷联合2000μ的CTS对ASCs进行干预3d后,收获ASCs细胞用Western Blot法检测其Runt相关基因转录因子2（Runx2）、YES相关蛋白（YAP）和结缔组织生长因子（CTGF）蛋白的表达;分别于干预3d和7d后,采用ALP活性定量检测试剂盒对ALP活性进行检测;干预3d后,利用RT-PCR检测YAP下游靶基因CTGF和锚蛋白重复结构域1（Ankrd1）的表达;干预7d后,利用RT-PCR检测成骨分化相关基因骨桥素（OPN）和Ⅰ型胶原的表达,并对各组所得数据进行统计学分析比较。 结果淫羊藿苷和CTS（1000μ、2000μ、3000μ）均能显著促进ALP蛋白的表达。与1000μ和3000μ应力大小的CTS相比,2000μ的CTS具有最强的促ALP蛋白表达能力;且2000μ的CTS联合淫羊藿苷能显著促进ALP的表达及Runx2和CTGF的表达,且其联合作用时效应更明显;但淫羊藿苷和2000μ的CTS单独作用并不能促进YAP蛋白的表达,只有联合作用时才具有促YAP表达作用。淫羊藿苷和2000μ的CTS单独作用3d和7d后均能显著上调ALP的活性,且其联合作用时上调ALP活性的效应更加明显。淫羊藿苷和2000μ的CTS单独作用7d后,能显著促进成骨分化基因OPN和Ⅰ型胶原蛋白的表达,且联合作用时效应更明显。淫羊藿苷和2000μ的CTS单独作用3d后能显著促进YAP靶基因CTGF和Ankrd1的表达,联合作用时效应更明显。 结论CTS和淫羊藿苷联合作用可以通过上调YAP活性来促进ASCs的成骨分化。     

联合使用骨形态发生蛋白和碱性成纤维细胞生长因子对成纤维细胞成骨表型的影响

目的研究联合使用骨形态发生蛋白(rhBMP-2)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对成纤维细胞成骨表型的影响。方法向培养的成纤维细胞NIH3T3中加入不同浓度的rhBMP-2和bFGF,观察成纤维细胞形态学变化、碱性磷酸酶(ALP)活性与染色的情况和骨钙素表达的变化,同时观察细胞增殖周期的变化。结果在两种因子作用下,成纤维细胞由长梭形向多角形方向转化,细胞体积增大、细胞内颗粒增多;成纤维细胞ALP活性增高、骨钙素表达增多,细胞内ALP染色加深;细胞增殖周期缩短。结论联合使用rhBMP-2和bFGF可以促进成纤维细胞成骨表型表达并促进细胞增殖。     

骨形成蛋白-2、成纤维细胞生长因子-2对大鼠触须毛乳头细胞增殖和毛发诱导能力的影响

目的探讨骨形成蛋白-2(BMP-2),成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)单独及联合作用对毛乳头细胞增殖和毛发诱导能力的影响。方法采用显微机械法分离大鼠触须毛乳头并培养,行免疫荧光鉴定。CCK-8法检测毛乳头细胞的增殖活性。毛发诱导能力通过检测碱性磷酸酶(ALP)活性确定。采用ELISA法检测胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的含量。结果毛乳头细胞的ALP免疫荧光染色阳性,确定培养的细胞是毛乳头细胞。BMP-2对毛乳头细胞增殖无影响,但可提高毛乳头细胞的ALP活性并呈剂量依赖性。FGF-2促进毛乳头细胞增殖,但会降低毛乳头细胞的ALP活性并呈剂量依赖性。联合BMP-2和FGF-2既可以促进毛乳头细胞的增殖,又可以增强ALP活性,并呈时间依赖性。BMP-2可上调毛乳头细胞培养上清液中IGF-1的含量,并呈剂量依赖性。结论 BMP-2可能通过促进毛乳头细胞分泌IGF-1以保持毛乳头细胞的毛发诱导能力,按适当浓度比例联合BMP-2和FGF-2可形成互补作用,既促进毛乳头细胞的增殖,又可以保持其毛发诱导能力。     

复合抗生素的人工骨及异体骨材料

人工骨具有良好的抗生素缓释能力,部分人工骨还具有一定的骨诱导能力,以人工骨作为抗生素缓释载体治疗感染性骨缺损具有广阔的应用前景.异体骨具有良好的骨诱导能力,以异体骨作为抗生素载体可在抗感染的同时促进骨缺损愈合.由于不同载体在抗生素负载、缓释能力以及骨传导、诱导作用等方面各有优劣,因此在感染性骨缺损的治疗中应根据不同患者选取不同的载体,并对载体制作工艺进行不断改进,使其从仿生学意义上更接近人骨组织,进一步增强其骨传导和骨诱导作用,同时具有更强的抗生素缓释功能.     

纳米人工骨混合自体骨治疗骨肿瘤及骨病43例

背景:纳米人工骨是一种新型的骨移植材料,具有良好生物相容性等优势,但其治疗骨肿瘤及骨病的临床效果尚有待进一步研究.目的:回顾性分析纳米人工骨混合自体骨治疗骨肿瘤及骨病的临床效果.方法:对43例骨肿瘤及骨病患者病灶进行彻底刮除,选用大小不一的纳米人工骨条或颗粒混合人工骨充填,并用尽量将腔隙填满压实.病理性骨折的4例患者行内固定,其余患者未行内固定,依病情选择适当的支具.观察植骨后患者全身状态及植骨局部情况,术后不同时间X射线片观察植骨局部情况.结果与结论:43例患者均获随访,最短为6个月,最长为24个月.1例患者切口延迟愈合.余患者全身状态及切口愈合均良好.术后1～3个月纳米人工骨混合人工骨植入区与缺损周围的骨组织之间界限模糊,但局部仍可见密度高影.约12个月植入骨区与周围骨组织密度相似.结果证实应用纳米人工骨混合人工骨治疗骨肿瘤及骨病效果满意,且并发症较少,其为一种比较理想的移植骨替代物,且具有良好应用前景.     

自体骨、同种异体骨及骨形态发生蛋白重组骨治疗腰椎骨折

背景：骨形态发生蛋白重组骨是一种新型植骨材料,已逐步应用于临床,但在椎骨折机骨融合中效果仍少见报道。 目的：比较自体骨、同种异体骨及骨形态发生蛋白重组骨治疗腰椎骨折的疗效差异。 方法：选择2005年3月至2009年3月南阳医学高等专科学校附属第一医院收治的腰椎骨折患者78例,根据植骨材料不同随机分为3组,分别植入自体骨、同种异体骨、骨形态发生蛋白重组骨。     

组织工程化骨替代材料的评价及其在修复骨肿瘤性骨缺损中的应用

目的制备和综合评价组织工程化骨替代材料并用于修复骨肿瘤所导致的骨缺损。方法制备狗和人的异体脱钙骨基质颗粒(DBM),提取牛骨形成蛋白(bBMP)并经成骨诱导活性测定,将bBMP与DBM用直接掺和的方法复合后,再与骨水泥(BC)混合制成组织工程化复合材料,进行综合评价后备用。56例下肢骨肿瘤患者在微波诱导高温原位灭活后,应用组织工程化复合材料对遗留的骨缺损进行修复重建。结果bBMP、DBM和BC组织工程化复合骨修复替代材料具有良好的生物相容性、很强的生物力学强度和成骨诱导活性,并且具有良好的粘合性和可塑形性。临床应用56例,经平均9个月的随访,效果良好且无任何不良反应。患肢膝关节功能评价,优52例(93%),良4例(7%),优良率100%。结论bBMP、DBM和BC组织工程化复合骨修复替代材料是目前修复骨缺损理想的产品,有广阔的临床应用前景。     

跟骨骨密度及骨强度与运动的关系

背景:对跟骨骨密度和骨强度进行全面评价,为骨质疏松症的预防和治疗提供新的思路。目的:了解苏州市20～65岁人群跟骨骨密度及骨强度与纵跳高度、闭目单足站立时间的相关性。设计、时间及地点:随机整群分层抽样调查,于2007年在苏州市体育科学研究所完成。对象:每5岁为一个年龄段,随机抽取20～65岁成年人,男性104人,年龄(34.1±9.7)岁,身高(172.54±4.94)cm,体质量(69.50±8.82)kg;女性54人,年龄(39.5±13.6)岁,身高(160.14±10.61)cm,体质量(53.70±8.15)kg。方法:按照国家体育总局群体司颁发的《国民体质测定标准手册》的要求测试闭目单足站立时间和纵跳高度。采用超声骨密度仪测试跟骨超声参数,即反映骨密度的超声波衰减系数和反映骨强度的跟骨骨质量指数。在跟骨超声参数测试之前,对受试者进行运动方式和运动年限的调查。主要观察指标:①单足闭目平衡站立时间和纵跳高度对跟骨超声参数的影响。②不同的运动方式和运动年限对跟骨超声参数的影响。结果:①纵跳高度与超声波衰减系数和跟骨骨质量指数之间有显著相关性(P<0.01)。即纵跳高度越高,骨密度和骨强度越大,骨折危险性降低。②单足闭目平衡站立时间与超声波衰减系数不存在相关性;而与跟骨骨质量指数存在显著相关性(P<0.05)。③力量和跳跃等运动项目的超声波衰减系数和跟骨骨质量指数要高于游泳和散步等有氧运动项目,差异存在显著性(P<0.05)。④运动年限在3年以上成年人的超声波衰减系数和跟骨骨质量指数高于运动年限在1年以下的成年人,差异存在显著性(P<0.05)。结论:苏州市20～65岁人群纵跳高度与跟骨的骨密度和骨强度存在线性关系,单足闭目平衡站立时间仅与骨强度存在相关性。经常进行力量和跳跃项目锻炼且锻炼年限越长,骨密度和骨强度越高。     

经皮注射骨形态发生蛋白复合自体红骨髓治疗骨不连

目的 探讨骨形态发生蛋白（BMP）与自体红骨髓（RBM）复合经皮注射治疗骨不连的疗效。方法 在X线电视透视下一枚骨穿针准确刺入骨不连部位,然后将骨形态发生蛋白与自体红骨髓的复合混悬液即刻注入骨不连部位,并选用合适的外固定。结果 共治疗20例,骨折愈合18例,愈合时间5－9个月,平均7个月。2例骨不连未愈合。无感染并发症发生。结论 骨形态发生蛋白与自体红骨髓复合经皮注射在骨不连部位有较强的成骨作用。     

放射性核素骨显像骨代谢与骨密度的相关性分析

目的：探讨放射性核素骨显像骨代谢与骨密度的相关性,通过骨显像了解骨质疏松状况.方法：18例患者,男5例,女13例,年龄50～88岁,平均65岁.所有患者均通过骨密度扫描仪进行骨密度检查后,进行全身骨显像.骨显像与骨密度检查均取第L1～L4和股骨颈,并勾画感兴趣区（ROI）,然后分别测定各部位ROI放射性计数和骨密度值,计算骨显像各部位ROI值与同侧股骨中段ROI值的比值,观察各部位ROI比值与其骨密度值之间的相关性.结果：骨显像L1～L4各部位ROI比值与其骨密度值呈显著相关,而且,正常组与骨质疏松组的ROI比值与骨密度的相关性存在显著性差异.股骨颈的ROI比值与其骨密度无显著相关.骨显像L1～L4的ROI比值与其相应部位骨密度测定值之间变化趋势基本一致.结论：放射性核素SPECT骨显像腰椎ROI比值与其对应部位的骨密度值之间均呈显著相关,可通过其反映腰椎骨密度的变化.     

同种异体骨修复良性骨肿瘤及瘤样病变骨缺损

背景:骨肿瘤及瘤样病变切刮后骨缺损取自体骨填充,由于取材量不能完全满足临床需要,且供骨区常遗有不同程度并发症,使其在临床应用中受到明显限制.异体骨以其结构及生物特性与自体骨相似、来源丰富、可以长期保存及使用方便等特点日益广泛地应用于临床.目的:观察同种异体骨用于填充修复良性骨肿瘤及瘤样病变切、刮除术后骨缺损后的生物相容性表现及临床应用效果.设计:回顾性分析.单位:内蒙古医学院第二附属医院骨肿瘤科、骨盆外科.对象:选择1999-12/2005-12在内蒙古医学院第二附属医院骨肿瘤科因良性骨肿瘤及瘤样病变行病灶刮除、高温灭活,冻干同种异体小块骨填充修复骨缺损的患者230例,男156例,女74例;年龄5～56岁.患者同意使用异体骨,并签订植入异体骨协议书;实验经医院伦理委员会批准.方法:①使用由由山西奥瑞生物材料有限公司/山西省医用组织库提供的同种异体骨填充修复骨缺损.对良性骨肿瘤及骨囊肿和骨纤维结构不良等行囊内刮除术,用同种异体骨填塞空腔.②根据Mankin等对同种骨移植结果的评分标准评估疗效,分为满意和不满意两个层次.于术后3,6和12个月对手术部位拍摄X射线平片,并平均随访38个月以观察疗效.主要观察指标:异体骨填充修复骨肿瘤骨缺损的组织相容性.结果:患者230例全部进入主要结果分析.①同种骨生物相容性:少数患者术后有轻度排异反应.该植入材料生物相容性好,可与植入部位患者骨组织直接进行融合,不阻止骨细胞在其表面的正常活性或干扰自体骨细胞的自然替代过程,即无免疫排斥反应或很小.所有病例在术后6～18个月达到骨性愈合,平均6.5个月.并发症:34例切口渗出淡黄色液体,其中30例于2周后切口愈合(14.8%);切口延期愈合4例(1.7%).②疗效:满意196例(85.2%),不满意34例(14.8%).结论:同种异体小块骨具有良好的组织相容性及成骨作用,是骨移植术中良好的植骨材料.