顺铂诱导宫颈癌SiHa细胞周期阻滞及凋亡的研究

目的:探讨顺铂在体外对宫颈癌SiHa细胞周期和凋亡的影响及其作用机制。方法:采用MTT法测定顺铂对SiHa细胞增殖的影响;DNAladder和Hoechst33258检测药物作用前后的细胞凋亡情况;流式细胞仪检测药物作用前后的周期阻滞和凋亡;Westernblot检测E6、p53和p21的表达。结果:顺铂抑制SiHa细胞生长呈时效和量效关系,10mol/L顺铂作用SiHa细胞12、24、36和48h,亚G1峰分别为(3·07±0·15)%、(5·18±0·28)%、(17·73±1·20)%和(32·55±2·74)%,与对照组比较差异均有统计学意义,t值分别为32·80、31·46、29·73和25·99,P值均为0·000;顺铂能使SiHa细胞发生G2~M期阻滞,24h达到最高(66·43±4·62)%,凋亡开始;Hoechst33258实验组可见凋亡细胞;琼脂糖凝胶电泳出现DNA梯形条带;Westernblot提示,顺铂作用SiHa细胞后HPVE6的蛋白水平表达逐渐降低,p53和p21蛋白水平表达逐步升高。结论:顺铂随着药物浓度和作用时间的增加对SiHa细胞的体外抑制效应增加,顺铂通过引起SiHa细胞G2~M周期阻滞及抑制HPVE6蛋白的表达,恢复p53功能,启动凋亡,起到杀伤肿瘤作用。     

Survivin基因在鼻型NK/T细胞淋巴瘤的表达及与p53和bcl-2基因表达的关系

目的 :探讨Survivin基因在鼻型NK/T细胞淋巴瘤的表达及其与p5 3、bcl 2蛋白表达的相关性。方法 :应用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白 -过氧化酶连接法 (SP法 ) ,检测Survivin、p5 3、bcl 2基因在2 4例鼻型NK/T细胞淋巴瘤和 17例良性淋巴结病变中的表达。结果 :鼻型NK/T细胞淋巴瘤Survivin基因阳性表达率 4 5 8% ( 11/2 4 ) ,良性淋巴结病变Survivin基因阳性表达率 11 8% ( 2 /17) ,且主要局限于少数生发中心细胞 ,P <0 0 2 5。Survivin基因表达上调与p5 3高表达密切相关 ,P <0 0 5 ,但与bcl 2蛋白无明显相关性 ,P >0 0 5。结论 :Survivin基因的异常表达而引起的凋亡抑制可能在鼻型NK/T细胞淋巴瘤的发生进展中有一定的作用 ,且其与p5 3异常表达显著相关 ,但与bcl 2蛋白表达无明显相关性     

核酶对食管癌EC9706细胞端粒酶活性及凋亡的影响

目的：观察针对人端粒酶RNA模板区的核酶对食管癌细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响。方法：利用脂质体Lipofectamine介导，将已构建好的带有端粒酶核酶基因的重组质粒pBBS212Rz及空载质粒pBBS212转染食管癌EC9706细胞，采用TRAP—ELISA法检测端粒酶活性，用倒置相差显微镜及流式细胞仪观察细胞生长和凋亡情况。结果：重组质粒pBBS212Rz转染的食管癌EC9706细胞的端粒酶活性明显下降，细胞生长速度明显变慢，凋亡加速。结论：端粒酶核酶对食管癌细胞端粒酶活性和细胞生长有抑制作用，可望成为食管癌基因治疗的新方法。     

TRAIL蛋白与顺铂协同诱导横纹肌肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的探讨肿瘤坏死因子（INF）相关凋亡诱导配体（TRAIL）蛋白和顺铂联合应用对人横纹肌肉瘤细胞生长抑制和诱导凋亡作用。方法将不同浓度的TRAIL作用于培养的人RD横纹肌肉瘤细胞，通过MTT比色法、流式细胞仪检测细胞凋亡和Fas蛋白表达的方法，观察其对横纹肌肉瘤细胞的作用，及其与顺铂协同作用的效果和机制。结果TRAIL浓度为1．0、10．0、100．0ng／ml时，细胞毒性指数分别为18．9％、20．8％和43．5％；顺铂浓度为1．0、5．0、10．0μg／ml时，细胞毒性指数分别为9．8％、23．4％和37．1％。而浓度为100ng／ml的TRAIL与浓度为5μg／ml的顺铂联合作用时，细胞毒性指数明显增加达66．4％，结合FCM分析显示联合应用提高了Fas蛋白的表达，与细胞凋亡率增加相一致。结论TRAIL和顺铂均能有效诱导横纹肌肉瘤细胞凋亡，联合应用具有明显的协同效果。     

顺铂对人肺癌SPCA-1细胞端粒酶活性的影响

目的 观察顺铂(DDP)对人肺癌SPCA-1细胞端粒酶活性的影响。方法 不同浓度的DDP处理体外培养的人肺癌SPCA-1细胞72h，非放射性标记的改良TRAP法测定端粒酶活性，MTT法测定细胞增殖抑制，透射电镜、流式细胞仪观察细胞凋亡。结果 DDP可抑制SPCA-1细胞端粒酶活性，随DDP浓度增大，端粒酶活性抑制增强。MTT结果显示DDP抑制SPCA-1细胞增殖且抑制率有浓度依赖性。透射电镜可观察到典型的细胞凋亡形态学，流式细胞仪结果表明DDP诱导SPCA-1细胞凋亡在一定浓度范围内呈剂量依赖性。结论 端粒酶活性的抑制可能是DDP发挥抗肺癌活性的作用机制之一，端粒酶活性可作为评价DDP抗肺癌化疗效果的指标之一。     

肝素对胃癌细胞端粒酶活性及生长的影响

目的:研究肝素对胃癌细胞生长及端粒酶活性的影响。方法:用不同浓度的肝素作用于胃癌SGC7901细胞,倒置相差显微镜进行细胞计数,绘制生长曲线,TRAPELISA法测定细胞端粒酶活性。结果:肝素浓度为10mg/mL时细胞端粒酶活性明显受抑制,P<005;各浓度肝素下胃癌细胞的生长速度减慢,以中等剂量(10mg/mL)时明显,但均无细胞死亡。结论:肝素对胃癌细胞的端粒酶活性有抑制作用,对肿瘤细胞自身的增殖有一定抑制作用,但肝素不引起细胞死亡。     

p53和Bcl-2 mRNA表达在三七皂苷R1诱导HL-60细胞凋亡中的作用

目的：探讨三七皂苷R1诱导HL-60细胞凋亡的作用机制.方法：采用MTT比色法观察三七皂苷R1对人白血病细胞株HL-60细胞增殖的抑制作用.采用流式细胞术检测细胞凋亡改变,并以RT-PCR检测凋亡调节基因p53、Bcl-2的表达.结果：三七皂苷R1能明显抑制人白血病细胞株HL-60细胞的生长,且呈时间和浓度依赖性.三七皂苷R1作用后人白血病细胞株HL-60细胞呈现凋亡特征,流式细胞术显示凋亡细胞比例升高.RT-PCR检测可见p53 mRNA表达显著增加,而Bcl-2 mRNA表达减少.结论：三七皂苷R1能诱导人白血病细胞株HL-60细胞凋亡,其作用可能与凋亡调节基因p53的上调和Bcl-2的下调有关.     

Survivin基因RNA干涉对HeLa宫颈癌细胞凋亡及顺铂敏感性的影响

背景与目的:Survivin基因是凋亡抑制因子家族的新成员,它在人类多种恶性肿瘤,包括宫颈癌中均高表达,其表达下调可提高恶性肿瘤的化疗敏感性。本研究观察了survivin基因RNA干涉对宫颈癌细胞HeLa凋亡及顺铂敏感性的影响。方法:通过脂质体介导将含人survivin基因siRNA的重组真核表达质粒pS ilencer2.1-s2转染宫颈癌细胞系HeLa,G418筛选阳性克隆,半定量PCR、W estern b lot分别检测survivin mRNA和蛋白表达,激酶活性检测法测定半胱氨蛋白水解酶-3(caspase-3)活性变化,流式细胞仪、Hoechst染色观察细胞凋亡情况,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率并计算顺铂的50%抑制浓度(IC50)。结果:G418筛选24天后出现阳性克隆,与转染阴性对照质粒(HeLa-NC)、空载质粒(HeLa-U6 neo)及未转染(HeLa)细胞比较,转染pS ilencer2.1-s2质粒者survivin mRNA和蛋白表达明显下降,表达抑制率分别为:62.8%和60.1%;caspase-3激酶活性增强,A405达1.26±0.04;细胞凋亡率明显升高,为(29.2±1.4)%(P<0.05);在同一药物浓度下,细胞存活率明显下降,顺铂的IC50值降低为0.87±0.02ug/m l(P<0.05)。结论:Survivin基因RNA干涉可通过阻抑HeLa细胞中survivin表达,增强caspase-3激酶活性,诱导细胞凋亡并显著提高宫颈癌细胞对顺铂的敏感性。     

不同分化程度喉癌组织中bcl-2和p53的表达及其相互关系

目的 :探讨喉癌中抗凋亡基因bcl 2和突变型 p5 3的表达、相互关系及在喉癌发生机制中的作用。方法 :用免疫组化法对正常喉组织 2 7例和喉良性肿瘤 11例进行突变型 p5 3的检测 ,对喉癌 5 2例标本进行bcl 2与突变型p5 3的检测。结果 :正常喉组织突变型 p5 3免疫组化阳性检出率为 14 8% ( 4 /2 7) ,喉良性肿瘤为 18 2 % ( 2 /11) ,喉癌为61 5 % ( 3 2 /5 2 ) ,三者间差异有统计学意义 ,P <0 0 5 ;其中低分化喉鳞癌阳性检出率为 84 6% ,中分化为 73 0 % ,高分化为 15 4% ,三者间差异有统计学意义 ,P <0 0 5 ;低分化喉鳞癌bcl 2免疫组化阳性检出率为 69 2 % ( 9/13 ) ,中分化为 3 8 5 % ( 10 /2 6) ,高分化为 2 3 1%( 3 /13 ) ,三者间差异无统计学意义 ,0 1>P >0 0 5 ;喉癌中 p5 3的表达与bcl 2的表达呈明显正相关 ,0 0 2 >P >0 0 1。结论 :p5 3基因突变可作为喉部良性肿瘤向恶性转化及恶性程度增高的一个标志 ,在喉癌的发生机制上抑制细胞凋亡的bcl 2与 p5 3基因有协同作用     

鼻咽鳞癌组织中p53和bcl-2蛋白的表达及临床意义

目的:研究细胞凋亡相关基因p53和 bcl 2在鼻咽鳞癌中的表达及相互关系,初步 探讨他们在鼻咽鳞癌的发生、发展中的生物学 意义。方法:应用免疫组化SP法对64例鼻咽 鳞癌组织标本的p53和bcl 2基因蛋白表达进 行检测。同时取10例鼻咽部炎症组织标本作 对照。结果:64例鼻咽鳞癌中p53和bcl 2基 因蛋白表达的阳性率分别为76.56%(49/64) 和89.06%(57/64),其阳性表达率与鼻咽鳞 癌颈部淋巴结转移有关,均P=0.01;而与患 者的年龄、性别、临床分期和临床近期疗效无 关。10例鼻咽部炎症标本的p53和bcl 2基因 蛋白的表达均为10%(1/10)。结论:鼻咽鳞 癌组织中有p53和bcl 2基因蛋白的高表达, 他们在鼻咽鳞癌的发生发展中可能起了重要 作用。     

卵巢上皮性囊腺性肿瘤组织中C-erbB-2、PCNA和p53蛋白的表达及临床病理学意义

目的 :探讨原癌基因C erbB 2、增殖细胞核抗原 (proliferatingcellnuclearantigen ,PCNA)、抑癌基因p5 3在卵巢上皮性囊腺性肿瘤组织中的表达及其临床病理学意义。方法 :应用抗生蛋白链菌素标记法 (LSAB)和图象分析系统方法检测卵巢上皮性囊腺性肿瘤组织中 (其中 61例良性肿瘤、19例交界性肿瘤、4 4例恶性肿瘤 )C erbB 2、PCNA及p5 3蛋白的表达。结果 :1)C erbB 2、PCNA、p5 3三指标在囊腺瘤、交界性囊腺瘤、囊腺癌中阳性表达率均呈梯度升高 ,差异有极显著性 (P <0 0 0 1)。其中PCNA与p5 3在浆液性囊腺癌组织中的表达显著高于交界性肿瘤及黏液囊腺癌组织 (P <0 0 5 )。 2 )C erbB 2、PCNA和p5 3在囊腺瘤组织中的阳性细胞平均积分光密度值 (染色强度 )均显著低于交界性瘤和恶性肿瘤 ,且差异有极显著性 (P <0 0 0 1)。 3)p5 3蛋白表达与囊腺癌临床分期、组织学分级有相关性 (P <0 0 5 )。 4 )p5 3+PNCA和C erbB 2 +PCNA +p5 3联合表达率在交界性囊腺瘤与囊腺癌之间差异有显著性 (P <0 0 1)。结论 :C erbB 2、PCNA和p5 3蛋白的高表达与囊腺癌的发生有密切关系 ,可作为卵巢上皮性囊腺性肿瘤恶性化的分子标志。PCNA和p5 3蛋白的免疫组化检测可成为卵巢上皮性囊腺性肿瘤鉴别诊断的客观辅助指标 ,并为其诊     

非小细胞肺癌端粒酶与p53、bcl-2、PCNA表达相关性

[目的]探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中端粒酶活性和p53、bel-2、增殖细胞核抗原(prolif-erating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白表达的相关性及其临床意义.[方法]采用PCR-ELISA检测端粒酶活性,SP免疫组化检测p53、bel-2、PCNA蛋白表达.[结果]NSCLC中端粒酶活性表达明显高于肺部良性肿瘤,且端粒酶活性与p53蛋白表达显著性相关(P＜0.01),而与bcl-2、PCNA蛋白表达无显著性相关.端粒酶活性与癌细胞分化程度呈显著性相关(P＜0.01),而与患者年龄、性别、吸烟、原发肿瘤大小(T)、淋巴结转移(N)、肺癌组织学类型均无显著性相关.[结论]端粒酶活性可做为NSCLC诊断及判断预后的较理想指标.端粒酶活性与p53基因之间可能存在着相互调控的机制.     

PTEN及bcl-2和p53蛋白表达与乳腺癌预后的关系

目的 :探讨新的抑癌基因PTEN在人乳腺癌组织中的表达、与bcl 2、p5 3的相关性及其与乳腺癌临床病理学特征和预后的关系。方法 :采用免疫组化SP法检测62例浸润性乳腺癌 (包括浸润性导管癌、浸润性小叶癌、髓样癌等 )标本中PTEN、bcl 2及p5 3蛋白的表达。结果 :62例乳腺癌标本中PTEN、bcl 2及p5 3阳性表达率分别为 64 5 % ( 4 0 /62 )、5 6 5 % ( 3 5 /62 )及2 7 4% ( 17/62 ) ;PTEN与bcl 2之间不具有相关性 ,P >0 0 5 ;PTEN与p5 3之间显著相关 ,P <0 0 1。乳腺癌PTEN蛋白表达水平与患者年龄、肿瘤组织学类型、肿瘤大小之间差异无统计学意义 ,P >0 0 5 ;与肿瘤细胞学分级、淋巴结有无转移及预后之间差异有统计学意义 ,P <0 0 5 ;PTEN低表达患者肿瘤细胞学分级高、淋巴结转移阳性率高、5年生存率低。结论 :1)抑癌基因PTEN在乳腺癌中确实存在突变或缺失。其表达水平的高低作为判断乳腺肿瘤细胞增殖活性、侵袭力及转移的重要指标。 2 )PTEN与bcl 2协同表达与预后相关 ,可作为乳腺癌预后评估的有效指标。 3 )PTEN突变或缺失可能与p5 3存在一定的相关性 ,但其作用机制有待进一步研究。     

贲门癌端粒酶活性表达及与p53基因突变关系的研究

目的探讨贲门癌组织中端粒酶活性及与p53基因突变的关系。方法采用TRAP-ELSIA、PCR-SSCP方法对46例贲门癌组织、配对癌旁黏膜及30例手术残端正常黏膜中端粒酶活性、p53基因突变进行研究。结果贲门癌癌灶、配对癌旁及正常黏膜端粒酶活性表达率分别为82.61%(38/46)、43.48%(20/46)、13.33%(4/30)。p53基因Exon5→8的突变率分别为39.13%(18/46)、14.35%(2/46)、0。上述两组数值癌与非癌组相比均有统计学意义(P<0.01)。端粒酶-A值癌组1.89±0.41,癌旁1.49±0.43,正常组0.54±0.45,癌与非癌组比较有统计学意义(P<0.05)。端粒酶活性表达组p53基因突变率44.74%(17/38),未表达端粒酶活性组p53基因突变率12.50%(1/8),组间比较有统计学意义。结论贲门癌端粒酶活性表达率及端粒酶-A值均明显高于非癌组织,表明端粒酶激活与贲门癌的发生密切相关。贲门癌组织中p53基因突变明显高于非癌组织,且端粒酶活性表达组p53基因突变率明显高于非表达组,提示p53基因突变使其抑癌功能丧失并促发端粒酶活性,导致贲门癌的发生。     

子宫内膜样腺癌组织中p53和p63基因的表达及其意义

目的:研究p53和p63基因在子宫内膜样腺癌(endometrial adenocarcinoma,EC)发生发展中的作用,及其与子宫内膜样腺癌临床病理特征的关系。方法:采用免疫组化SP法检测38例EC和23例子宫内膜增生过长(endometrial hy-perplasia,EH)及10例正常增生期子宫内膜(be-nign proliferative endometrium,BPE)组织中p53、p63基因的表达情况。结果:p53蛋白在EC中的阳性率为31·6%,明显高于EH组和BPE组,P值分别为0·0457和0·0389;p53的表达与EC的手术病理分期和肌层浸润深度有关,P值分别为2·19×10-4和1·436×10-6,而与组织学分级无关。p63蛋白在EC中的阳性率为81·6%,与EH组、BPE组比较,差异均有统计学意义,P值分别为9·58×10-7和5·59×10-5。p63的表达与EC的组织学分级、手术病理分期和肌层浸润深度均无关;p53和p63基因在EC中的表达呈正相关。结论:p53和p63均参与了EC的发生,二者可能起协同作用;p53更多地表达于高分期及深肌层浸润的EC组织中,p63在EC中呈高水平表达,说明p53与EC的浸润发展有关,p63在EC的发生中可能起癌基因的作用。     

非小细胞肺癌中p53蛋白表达及其临床意义

目的：为探讨非小细胞肺癌中p53蛋白表达与肺癌组织学类型、分化程度和淋巴结转移的关系。方法：应用免疫级化技术（ABC法），以p53单克隆抗体检测53例非小细胞肺癌组织中p53基因的表达，组织经微波抗原修复后进行免疫染色。结果采用X2检验。结果：p53蛋白在53例非小细胞肺癌中表达阳性率为64．2％，p53蛋白表达与非小细胞肺癌的组织学类型无关（P＞0.05）；与肺鳞癌分化程度有关（P＜0.01）；肺腺癌中与淋巴结转移有关（p＜0.05）。结论：p53基因的表达异常与不同类型的肺癌发生发展相关，提示P53基因在肺癌的形成、分化和转移过程中起不同的调节作用，p53蛋白过度表达则预后差，检测p53蛋白对判断非小细胞肺癌预后具有应用价值。     

脑膜瘤细胞凋亡及凋亡相关基因bcl—2、p53蛋白的表达

目的 探讨脑膜瘤自发性细胞凋亡相关基因bcl-2、p53蛋白在脑膜瘤中的表达及其意义。方法 采用TUNEL法和免疫组化S－P法检测40例脑膜瘤中细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2,p53蛋白的表达。结果 恶性和非典型脑膜瘤中的细胞凋亡指数（AI）明显高于良性脑膜瘤（P＜0．05）,良性脑膜瘤不同亚型之间bcl-2,p53表达无显著性差异（P＞0．05）;p53蛋白表达随脑膜瘤恶性程度增高而增强,具有显著性差异（P＜0．05）,p53阳性与阴性的脑膜瘤中的细胞凋亡指数无显著性差异;bcl-2蛋白表达与脑膜瘤细胞凋亡呈负相关。结论 恶性及非典型脑膜瘤中自发性细胞凋亡增多;凋亡是脑膜瘤恶性或不典型的1个重要的生物学行为;p53基因在脑膜瘤的恶变过程中发生重要作用,与脑膜瘤的恶性进展密切相关;bcl-2基因在脑膜瘤中可抑制细胞凋亡。     

COX-2与突变型p53蛋白在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的研究COX-2蛋白和突变型p53蛋白在乳腺癌组织中的表达情况,探讨两者在乳腺癌发生、发展中的作用、相互关系及与临床病理学特征之间的关系。方法运用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶免疫组织化学方法（S-P）对99例乳腺癌组织中COX-2蛋白和突变型p53蛋白的表达进行检测。结果99例乳腺癌中COX-2蛋白表达阳性率为69.7%（69/99）,COX-2蛋白表达与患者年龄、原发肿瘤大小、腋淋巴结转移状况、TNM临床分期、激素受体状况均无显著相关（P〉0.05）,而与C-erbB-2蛋白表达呈显著相关（P〈0.05）。99例乳腺癌中突变型p53蛋白表达阳性率为48.5%（48/99）,突变型p53蛋白表达与患者年龄、TNM临床分期、激素受体状况无显著相关（P〉0.05）,而与原发肿瘤大小、腋淋巴结转移状况、C-erbB-2蛋白表达呈显著相关（P〈0.05）。COX-2蛋白表达与突变型p53蛋白在乳腺癌组织中的表达呈正相关（r=0.288,P〈0.05）,两者共表达与肿瘤大小、腋淋巴结转移状况呈显著相关（P〈0.05）。结论COX-2蛋白和突变型p53蛋白在乳腺癌组织中高表达,COX-2蛋白与突变型p53蛋白在乳腺癌组织中的表达呈正相关,两者在乳腺癌的发生、发展中可能起协同作用,是反映乳腺癌生物学行为的重要指标。