干扰素对人胃癌细胞IAP—2表达的调节

应用基因重组干扰素－α和－γ体外诱导三侏人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１，ＭＧＣ８０３和ＭＫＮ４５，ＡＢＣ－ＣＥＬＩＳＡ法测定诱导组和对照细胞表面免疫抑制酸性蛋白Ⅱ型的表达量。在基础培养条件下，三株细胞表达ＩＡＰ－２均呈低水平。低浓度（＜１０００ｕ／ｍｌ）ＩＦＮ－α或－γ反使其ＩＡＰ－２表达量显著减少。这些结果提示：（１）ＩＦＮ－α和－γ可能对胃癌细胞ＩＡＰ－２表达呈双向调节作用；（２）癌细胞ＩＡＰ－２     

γ干扰素cDNA在胃癌细胞中的表达研究

实验用构建的正向连入人ＩＦＮ－γｃＤＮＡ片段的重组表达载体ｐＭＡＭｎｅｏ－γ－ＩＦＮ，以Ｌｉｐｏ－ｆｅｃｔｉｎ介导法将重组载体转染入胃癌细胞７９０１中，挑选出Ｇ４１８抗性克隆，地塞米松诱导其分泌ＩＦｔＩ－γ经活性测定筛选出高分泌ＩＦＮ－γ的细胞株ＲＰＭ７９０１－７（１７２５ＩＵ／ｍｌ），Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ证实ＩＦＮ－γｃＤＮＡ确已导入该细胞株中。体外培养过程中，ＲｐＭ７９０１细胞与转染了对照质粒ｐＭＡＭｎｅｏ的细胞ｐＭ７９０１及野生型７９０１细胞在形态，生长能力等方面无明显差别，而经地塞米松诱导的ＲpＭ７９０１细胞则与之有显著差异。裸鼠体内接种显示，经诱导的ＲｐＭ７９０１细胞在致瘤性上显著低于野生型７９０１细胞及ｐＭ７９０１细胞。经基因转移后可高分泌ＩＦＮ－γ的肿瘤细胞为肿瘤的基因治疗提供了资料。     

重组人γ－干扰素单克隆抗体的制备及初步应用

应用常规方法制备了４株能稳定分泌抗人重组γ－干扰素单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的小鼠杂交瘤细胞系：３Ｄ３、３Ｄ１２、３Ｆ９和３Ｂ８．经免疫琼脂双扩散法鉴定，其分泌的ＭｃＡｂ的亚类分别为：ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ１和１ｇＧ１．相对亲和常数前两株ＭｃＡｂ为６．２５×１０－１１、后两株ＭｃＡｂ为６．２５×１０－１３．问接ＥＬＩＳＡ法测培养上清的效价为２×１０２～１．２８×１０５．由小鼠腹水提取的４株ＭｃＡｂ与天然γ－干扰素均产生交叉反应，对重组的人γ－干扰素均具有中和活性．其中３Ｆ９和３Ｄ３培养上清对重组人γ－干扰素亦有明显的中和活性。用３Ｆ９ＭｃＡｂ与溴化氢活化的ＳｅＰｈａｒｏｓｅ４Ｂ偶联制备了亲和层析柱，用其纯化粗提的γ－干扰素纯度达到９５％以上，比活性达１．９×１０７ＩＵ／ｍｇ蛋白．     

ABC－ELISA检测人天然及重组γ－干扰素

采用生物素－亲和素双抗体夹心酶联免疫吸附分析技术（ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ）检测人天然及重组γ－干扰素。以固相化兔多抗ＩｇＧ捕获待检样品中γ－干扰素，以具有中和γ－干扰素抗病毒活性的生物素化单抗作为检测抗体，再加ＡＢＣ复合物，用邻苯二胺显色。据已知不同浓度标准γ－干扰素显色后的ＯＤ值的标准曲线，判定待检品中γ－干扰素蛋白含量。所检γ－干扰素与抗病毒活性一致，与肿瘤坏死因子、白细胞介素－２（ＩＬ－２），α、β－干扰素等无交叉显色反应；最低检测值为１００ｐｇ／ｍｌ（相当于抗病毒效价１～２Ｕ／ｍｌ）；可用于重组人γ－干扰素生产、纯化过程中的定性、定量分析以及血清γ－干扰素水平、人淋巴细胞γ－干扰素分泌量及ＬＡＫ和ＴＩＬ细胞等产生γ－干扰素水平的测定。     

用生物传感器测定重组人α2a—干扰素单克隆抗体的亲和？…

测定抗重组人α２ａ－干扰素单克隆抗体的抗原识别表位其亲和常数。方法：借助于生物传感器技术进行抗原抗体相互作用的动力学分析。结果：抗体的亲和常数介于１０＾－５－１０＾－７之间,５株抗体识别干扰素分析上４种不同的抗原表位。结论：生物传感器在研究抗原抗体相互作用中确为一个理想的工具,适合于抗原抗体结合与解离的动力学分析及预测表位的构像关系。     

灵芝对小鼠B淋巴细胞分泌特异性抗体及T淋巴细胞产生γ－干扰素的调节

报道了灵芝对Ｂａｌｂ／ｃ小鼠产生抗ＳＲＢＣ抗体能力的调节及产生γ－干扰素的影响。实验组小鼠分成４组，分别经胃灌注不同灵芝制剂：１号、２号、３号及４号制剂，每天一次，连续９天，对照组小鼠则以等量蒸馏水代替。在实验第７天用ＳＲＢＣ免疫小鼠，于免疫后第４天进行溶血空斑试验和血清抗ＳＲｌＢＣ抗体凝集效价测定，并取小鼠脾细胞加ＰＨＡ刺激、诱导，于３７℃、５％ＣＯ＿２培养７２小时，测定培养液中γ－干扰素活性。结果表明，１号、２号制剂能明显提高实验组小鼠的溶血空斑数目及血清抗体凝集效价，与对照组相比，Ｐ＜０．０５，２号、４号制剂则能明显提高实验组小鼠产生的γ－干扰素活性，与对照组相比，Ｐ＜０．０５。提示灵芝能增强小鼠的免疫功能─—Ｂ细胞产生特异性抗体的能力及Ｔ细胞产生（经ＰＨＡ诱导）的γ－干扰素的能力。     

蛋白激酶C活性的阻抑对人胃癌细胞BGC－823恶性表型的影响

以人胃癌细胞ＢＧＣ－８２３为模型，在佛波酯（ｐｈｏｒｂｏｌ１２－ｍｙｒｉｓｔａｔｅ１３－ａｃｅｔａｔｅ，ＰＭＡ）导致蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）负效应条件下，探讨了ＰＫＣ活性的阻抑与细胞恶性表型变化的相关性及其可能作用机理。ＰＭＡ（１００μｇ／Ｌ）处理ＢＧＣ－８２３细胞７２ｈ，细胞质、膜和核中ＰＫＣ活性分别下降３５．６％和７２．３％。经电泳分析，观察到细胞核蛋白质磷酸化水平也明显下降。在ＰＫＣ活性被阻抑的同时，人胃癌细胞形态发生变化，细胞呈单层生长，出现接触抑制，在软琼脂中不能形成集落。表现出部分恶性表型丢失，并且与人胃癌细胞恶化密切相关的癌基因Ｈａ－ｒａｓ基因表达也明显被阻抑。这可能是ＰＫＣ活性被阻抑引起人胃癌细胞部分恶性表型丢失的分子机理之一。     

人羊膜间充质干细胞抑制异体淋巴细胞增殖并减少γ干扰素的分泌

目的观察人羊膜间充质干细胞(hAMSC)对体外培养的淋巴细胞功能的影响。方法通过酶消化法分离培养hAMSC,采用荧光团标记的小鼠抗人单克隆抗体结合流式细胞术鉴定细胞表面抗原;免疫荧光染色检测培养细胞波形蛋白(vimentin)和阶段特异表达抗原4(SSEA-4)的表达;分离培养hAMSC和外周血单个核细胞(PBMC),将刀豆蛋白(ConA)刺激的淋巴细胞与1×104、5×104、1×105个hAMSC进行共培养。CCK-8法测定淋巴细胞增殖,ELISA测定细胞上清液中IFN-γ的水平。结果5μg/mLConA能够引起淋巴细胞增殖;共培养条件下,hAMSC能够抑制ConA引起的淋巴细胞增殖,且随着hAMSC的数量增加,抑制效果更明显。培养72h后,CCK-8法结果表明,单纯ConA刺激后淋巴细胞数显著高于共培养细胞。选择抑制效果最佳的组别1×106个淋巴细胞与1×105个hAMSC共培养,ELISA测定1×105个hAMSC对淋巴细胞抑制72h后,上清液中IFN-γ分泌,共培养细胞上清液中IFN-γ水平显著低于单纯ConA刺激细胞。结论hAMSC能在体外抑制ConA引起的淋巴细胞增殖并减少IFN-γ分泌。     

淋巴细胞合成生长激素对自身细胞增殖及γ－干扰素产生的影响

淋巴细胞能够合成和分泌生长激素已被证实。本文的目的在于观察免疫反应性生长激素（ｉｒＧＨ）在体外诱导淋巴细胞应答反应中发挥的作用。以特异性抗体和ｉｒＧＨ结合进行阻断试验，结果显示ＰＨＡ诱导的淋巴细胞增殖程度显著下降。４５μｇ／ｍｌ的免抗人ＧＨ抗体使淋巴细胞增殖的抑制率达４１．２％；使γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）的产生从５６．３±２７．４ｎｇ／ｍｌ下降到４９．１±２３．０ｎｇ／ｍｌ（Ｐ＜０．０５）由此说明ｉｒＧＨ参与体外淋巴细胞应答活动的调节。     

γ－干扰素在淋巴细胞介导的子宫颈角化上皮细胞毒作用中的意义

本研究以子宫颈角化上皮为靶细胞，用试管培养技术及非同位素细胞毒性试验，探讨了干扰素（ＩＦＮ－γ）对淋巴细胞介导的对宫颈角化上皮细胞毒作用的影响及细胞间吸附分子１（ＩＣＡＭ－１）与白细胞功能相关抗原１（ＬＦＡ－１）在细胞毒作用中的意义。结果显示ＣａＳｋｉ、ＳｉＨａ、ＨｅＬａ、Ｗ１２及ＮＣｘ均为ＮＫ抵抗、ＬＡＫ敏感细胞。ＩＦＮ－γ预处理靶细胞明显增加ＬＡＫ细胞的杀伤活性，但对ＮＫ活性影响不大；ＩＦＮ－γ预处理效应细胞可增强ＬＡＫ细胞对上述靶细胞的溶解作用，但并不改变ＮＫ对靶细胞的选择性；抗ＩＣＡＭ－１与ＬＦＡ－１单克隆抗体能有效地降低ＬＡＫ细胞对靶细胞的杀伤作用，而抗ＨＬＡＡＢＣ及ＨＬＡＤＲ则无此作用。提示ＩＦＮ－γ仅对ＬＡＫ细胞介导的对宫颈角化上皮的细胞毒作用有明显增强作用，而对ＮＫ细胞无明显影响；ＩＣＡＭ－１－ＬＦＡ－１通路为ＬＡＫ细胞结合并溶解靶细胞的主要通路，且这种细胞毒作用是非ＭＨＣ限制的。     

人胃癌肿瘤浸润树突状细胞的形态学观察

目的　探讨人胃癌肿瘤浸润树突状细胞 (TIDC)的形态学特征。方法　应用免疫组织化学、光镜和电镜的方法观察人胃癌TIDC的分布和形态学变化。结果　TIDC主要分布癌周区 ,病变早期TIDC比病变晚期数量 (P <0 0 1)。电镜下 ,TIDC体积较大 ,形态不规则 ,表面有许多树突状突起 ,细胞核不规则 ,可见核仁 ,胞质内有丰富的线粒体、核糖体、高尔基复合体和内质网。TIDC与肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)和肿瘤接触方式和形式上呈多样性 ,一对一 ,一对多 ,或形成簇的接触方式 ,有紧密膜接触、指状膜接触和球状膜接触形式。结论　本实验提示TIDC数量多少与肿瘤的进展有关 ,TIDC与肿瘤浸润淋巴细胞和肿瘤细胞之间关系密切。     

胃癌c－erbB－2蛋白高表达及其与c－erbB－2基因扩增的关系

胃癌ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白高表达及其与ｃ－ｅｒｂＢ－２基因扩增的关系黄焰，宋廷惠，蒋彦永，陆应麟，陈立军关键词胃癌，ｃ－ｅｒｂＢ－２，高表达，扩增中国图书分类号Ｒ７３５．２生长因子受体类癌基因ｃ－ｅｒｂＢ－２扩增或高表达已发现与部分胃癌的恶性发展密切相...     

IFNγ调控人肺癌A549细胞Fas／FasL表达对T淋巴细胞生长的影响

为探讨IFNγ调控有肺癌细胞Fas/FasL表达对T细胞生长的影响，分别采用FACScan,RT-PCR方法检测Fas/FasL蛋白质及mRNA表达；以荧光染色及FACScan法观察细胞凋亡；用苔酚兰排除实验分析细胞生长。结果表明，人肺癌细胞A549及T－细胞系（Jurkat)均有Fas及FasL表达；IFNγ可引起A549Fas表达上调，且与剂量相关，并增加了A549细胞凋亡诱导的敏感性；A549细胞与Jurkat细胞共培养实验证明：人A549细胞通过Fas/FasL介导导致Jurkat细胞生长抑制及凋亡诱导；IFNγ处理A549细胞后，减少了其对Jurkat细胞的生长抑制。上述结果提示：Fas/FasL途径介导了A549细胞与Jurkat细胞之间的凋亡，IFNγ通过对人肺癌细胞Fas/FasL系统表达调控，使A549细胞自身对凋亡诱导的敏感性增加，并对T细胞生长的抑制作用减弱，提示IFNγ在防止肿瘤细胞逃避免疫监控有一定作用。     

干扰素－α对兔离体的卵巢颗粒细胞孕酮生成的影响

本研究应用离体培养的兔卵巢颗粒细胞观察了ＩＦＮ－ａ对孕酮生成的影响。细胞预培养２４ｈ后，用ＩＦＮ－ａ（５０～８００Ｕ／ｍｌ）处理培养的颗粒细胞１２ｂ刺激孕酮的生成并呈剂量依赖关系。在ＩＦＮ－ａ加入培养细胞后３、１２和２４ｈ．刺激作用非常明显，但刺激作用的幅度在３和１２ｈ较大，分别为对照组的２４和２０倍。此外，ＩＦＮ－ａ刺激离体兔颗粒细胞孕酮生成的作用被同时加钙螫合剂ＥＧＴＡ（１ｍｍｏｌ／Ｌ）或钙通道阻断剂异搏定（ｖｅｒ）２０和２００μｍｏｌ／Ｌ所抑制。本研究结果表明，ＩＦＮ－ａ刺激离体兔卵巢颗粒细胞孕酮的生成，其作用依赖于细胞外的Ｃａ２＋浓度。     

hrIFN-γ和hrIL-4对人早孕滋养层细胞形态改变的研究

目的　研究人重组γ 干扰素 (hrIFN γ)和白细胞介素 4(hrIL 4)对人早孕滋养层细胞形态的作用。方法　采用人工流产方法取得绒毛膜组织 ,加入hrIFN γ和hrIL 42 4h短期组织培养 ,通过光镜和透射电镜观察滋养层细胞形态学变化。结果　hrIFN γ组滋养层细胞核由圆形变为扁圆形 ,细胞界限不清 ,滋养层细胞数目明显减少 ;hrIL 4组滋养层细胞核多呈圆形或椭圆形 ,滋养层细胞数目明显增多至数层。结论　外源性Th1、Th2型细胞因子对滋养层细胞形态具有调节作用     

淋巴细胞对人主动脉平滑肌细胞迁移的影响

用微孔滤膜法分别检测淋巴细胞条件培养液（ＬＣＭ）和γ－ＩＦＮ对培养的人主动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）的趋化活性。结果表明，ＬＣＭ对ＳＭＣ有明显的趋化活性和较弱的化学促动作用；γ－ＩＦＮ对ＳＭＣ有明显的趋化作用和化学促动作用，在５００Ｕ／ｍｌ浓度时其活性最强。提示动脉粥样硬化早期病灶中激活的Ｔ淋巴细胞可通过分泌γ－ＩＦＮ（或伴有其它因子），吸引中膜的ＳＭＣ迁入内膜。     

人IL-18结合蛋白A在CHO细胞中表达的研究

目的 克隆人IL－18结合蛋白A（hIL-18BPa)的cDNA，构建真核表达载体及其在CHO细胞中的表达。方法 采用RT－PCR，自人白血病血细胞株Jurkat中获得hIL-18BPa的cDNA。将其克隆至T-vector中，经测序确证后，将该基因定向插入真核表达载体pcDNA3．1中。以脂质体介导法，将其转染CHO细胞，用G418筛选抗性克隆，ELISA法测定其生物学活性。结果 获得的IL-18BPa的cDNA序列与GeneBank登录的cDNA序列一致。将hIL-18BPa插入载体pcDNA3．1后，成功地构建稳定表达的载体。转染CHO细胞2后，获得可稳定表达hIL-18BPa的基因工程细胞株。经纯化后，证明具有良好的生物学活性。结论 成功地克隆hIL-18BPa基因，并实现了在CHO细胞中的稳定表达，为研究其生物学活性奠定了基础。     

干扰素-γ对乳腺癌细胞HLA-Ⅰ分子表达的影响

目的 研究干扰素-γ（IFN-γ）对乳腺癌细胞表面HLA-Ⅰ类分子表达的影响,并探讨其在乳腺癌治疗中的免疫作用机制。方法 培养乳腺癌SKBR3细胞株,根据IFN-γ浓度将其分为25 U/ml、50 U/ml、100 U/ml组,未加药组为空白对照组。通过实时荧光定量PCR和流式细胞术实验检测经不同浓度IFN-γ作用后的乳腺癌SKBR3细胞内HLA-Ⅰ mRNA的含量,以及表面的HLA-Ⅰ类抗原的表达。结果 实时荧光定量PCR结果显示,空白对照组、25 U/ml、50 U/ml、100 U/ml组HLA-Ⅰ mRNA的表达量分别为（1.00±0.00）、（2.26±0.54）、（3.89±0.81）、（5.94±0.97）,三个浓度组均较空白对照组表达量高（P＜0.05）;流式细胞术结果显示,空白对照组、25 U/ml、50 U/ml、100 U/ml组细胞表面HLA-Ⅰ蛋白表达量为（14.87±2.80）、（44.33±3.36）、（48.80±2.63）、（56.77±1.93）,三个浓度组均高于对照组（P＜0.05）。结论 IFN-γ上调乳腺癌细胞HLA-Ⅰ类抗原的表达有利于抗乳腺癌作用。     

GM－CSF对人单核细胞HLA－DR抗原表达的影响

本文采用ＥＬＩＳＡ方法，研究了重组的人粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）对体外培养的正常人外周血单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达的影响。结果表明ＧＭ－ＣＳＦ能提高单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达，并且呈剂量依赖关系，最适剂量（５００ｕ／ｍｌ）时能使ＤＲ抗原表达量提高到对照组的２．５倍。ＧＭ－ＣＳＦ对ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达的诱导作用并不是通过诱生的ＩＦＮ－γ的作用而实现的，因为有中和活性的ＩＦＮ－γ单抗并不能阻断这种效应。ＧＭ－ＣＳＦ能够增强低剂量ＩＦＮ－γ（５ｕ／ｍｌ）对单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原的诱导作用，但未观察到对高剂量ＩＦＮ－γ（１００ｕ／ｍｌ）的ＨＬＡ－ＤＲ抗原的诱导增强作用。