小鼠精于3种活体染色法的比较分析

目的 比较小鼠精子伊红、锥兰和苯胺黑-伊红3种活体染色法的存活率，结合活动率，低渗肿胀-伊红结合(HOS-EY)试验评价小鼠精子存活率的方法。方法 取昆明系小鼠(n＝15)附睾尾精子制成精子悬液，分别应用0．15％伊红、0.25％锥兰和10％苯胺黑-1．0％伊红3种活体染色法检测精于存活率，同时采用精子活动率和HOS-EY试验作对照测试。结果 小鼠精子用3种活体染色法测得的存活率没有显著差异(P＞0.05)，存活率与活动率有直线回归关系(P＜0．05)，HOS-EY试验中头-尾膜完整的精子率低于活动率和存活率(P＜0．05)。结论 伊红、锥兰和苯胺黑—伊红3种活体染色法均可应用于小鼠精子存活率检测，结合检测精子活动率和HOS-EY试验可以进一步反映小鼠精子的存活状态。     

应用人精子头-尾膜完整性试验对生育力组及不育组精液的评价

目的应用人精子头-尾膜完整性试验,比较生育力组与不育组男性精液4种精子膜完整性类型的差异.方法精液标本分为生育力组(n=32)和不育组(n=50),采用"低渗肿胀-伊红拒染"结合试验,检测人精子头-尾膜完整性.结果头膜尾膜均损伤的Ⅰ型精子和头膜损伤-尾膜完整的Ⅲ型精子,生育组和不育组存在明显差异(P<0.01);头膜完整-尾膜损伤的Ⅱ型精子,生育组和不育组无明显差异(P>0.05);头膜-尾膜均完整的Ⅳ型精子,生育组明显高于不育组(P<0.01);Ⅳ型精子率与生育组精子活动率(n=32, r=0.82,P<0.01)和不育组精子活动率(n=50,r=0.80,P<0.01)均呈显著相关性.结论生育组具有较多头膜-尾膜均完整的精子."低渗肿胀-伊红拒染"结合试验能够清晰显示包括过渡型膜损伤的4种膜完整性类型的精子,精子头-尾膜完整性可以作为评价精子生理学的一项检测指标.     

厨师职业与男性不育

目的探讨厨师职业对男性不育症患者精液质量的影响。方法对67例厨师不育者和364例不育对照组,采用计算机辅助分析系统对男性精液进行精子密度,精子活动率、精子活力等方面进行全面分析,同时采用伊红染色法检测精子存活率。结果厨师职业组与对照组比较,精液量、p H值差异无统计学意义(P0.05),而精子密度、存活率、精子活率差异具有统计学意义(P0.05),两组精子活力之间差异具有统计学意义(P0.01)。结论厨师可影响精液质量,主要表现在精子密度、活动率和活力降低,其原因可能与厨师所处的职业环境有关。     

衰老对小鼠精子成熟和受精能力的影响

目的：探讨衰老对附睾精子成熟、体外受精和胚胎发育的影响。方法： 取老龄小鼠（18月龄，n=15）和青年小鼠（6月龄，n=15）附睾头精子和附睾尾精子，分别检测精子密度、存活率、活动率、正常形态率和胞浆小滴率，并通过体外受精比较附睾尾精子受精率和各阶段胚胎发育率。结果：老龄小鼠附睾头精子和附睾尾精子活动率、精子密度显著低于青年组（P<0.01），胞浆小滴率和畸形精子率显著高于青年组（P<0.05），附睾尾精子的受精率下降（P<0.01），胚胎各阶段发育率降低（P<0.01）。结论：衰老影响小鼠精子功能及附睾精子成熟过程。小鼠可作为雄性生殖衰老研究的动物模型。     

精液中生精细胞5种染色方法的探讨与评价

对脱落于精液中的生精细胞，用瑞－吉染色法可使细胞核着色清晰度好；用伊红－瑞－吉染色法能区别死亡和活的精子，并使精子顶体着色清晰；用苯胺黑－伊红－吉染色法精子核染成红色，精子鞭毛不着色；用煌绿－瑞－吉染色法，成熟精子着色浅，不成熟精子头部着紫红色；过氧化物酶－瑞－吉混合染色，中性白细胞核呈紫红色，胞浆呈浅绿色。５种染色方法中瑞－吉法对生精细胞染色效果最好，可视精液检查的不同要求选用不同方法。     

圆头精子的冷冻保存

目的:探讨圆头精子的冷冻保存效果及其精子功能改变。方法:6例圆头精子症患者各提供1-3份精液标本,应用不含卵黄冷冻保护剂和二步降温方法冷冻保存圆头精子症标本,检测冷冻精子活动率、头-尾膜完整率、存活时间和顶体蛋白酶活性。结果:圆头精子标本冷冻保存后,精子活动率显著减少,膜完整率显著下降,头膜损伤-尾膜完整的精子率显著升高(n=13,P＜0.01)。体外存活时间缩短。精子冷冻前后无顶体蛋白酶活性。不含卵黄冷冻保护剂与含卵黄冷冻保护剂,以及两步冷冻与多步冷冻的效果比较未见显著差异(n=7,P＞0.05)。结论:圆头精子可经历冷冻保存后存活,但冷冻复苏率低。冷冻-解冻过程显著降低精子功能。不含卵黄冷冻保护剂和两步降温可应用于冷冻保存圆头精子症标本。     

福建地区5680例男性不育患者精子参数和精子DNA完整性分析

目的探讨福建地区男性不育与精液参数和精子DNA完整性关系。方法对5680例男性不育患者和3200例健康体检者进行精液参数和精子DNA完整性检测。采用SQA-V全自动精子分析仪进行精液常规分析,精子形态采用改良巴氏染色法,精子DNA完整性检测采用精子染色质扩散试验(SCD),用DNA断裂指数(DFI)表示。结果不育患者精子精子密度、活动率、精子形态和DFI与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);两组的精液量、精液p H值差异无统计学意义(P0.05)。结论精子密度、活动率、精子形态和DFI的异常是引起福建地区男性患者不育的最主要原因。     

男性不育精液中尿酸含量与生殖细胞凋亡的探讨

目的探讨人精液中尿酸含量与生殖细胞凋亡的关系.方法参照WHO标准方法,进行精液常规分析,按精子密度、活动率不同分为(正常、＜20、20～40、＞40)4个组.采用尿酸酶-过氧化物酶偶联法检测精液尿酸含量.用脱氧核苷酸末端转移酶(TdT)介导的缺口末端标记(TUNEL)和瑞-姬染色法,分别检测和观察生殖细胞的凋亡.结果75例不育者精液尿酸含量和生殖细胞的凋亡率分别为(263.87±57.15)μmol/L和(16.38±1.25)%与正常生育组(397.60±52.1)μmol/L、(4.61±1.23)%比较呈显著性差异(P＜0.01).精子密度和活动率随精液尿酸含量减少而降低,生殖细胞调亡率随之上升(P＜0.01).不育组精液尿酸含量与生殖细胞的凋亡地显著性负相关(r=-0.93,P＜0.05).凋亡的生殖细胞体积缩小,核染色质致密,凝聚在核周形成新月形,或核裂解形成凋亡小体.结论精液尿酸含量与生殖细胞的凋有着密切关系.低精液尿酸含量可使睾丸生殖细胞凋亡率增加,使精子密度和活率下降而致男性不育.     

精液处理前后精子DNA碎片的变化及对IVF-ET结局的影响

目的探讨经密度梯度离心结合上游法处理前后精子DNA碎片率的变化以及对体外授精-胚胎移植(In Vitro Fertilization-Embryo Transfer,IVF-ET)结局的影响。方法收集107例行IVF助孕患者的精液,按照WHO标准对处理前精液行精液常规分析,采用精子染色质扩散试验(Sperm Chromatin Dispersion,SCD)检测处理前和处理后精液的精子DNA碎片率,并收集IVF实验室及临床结局。根据处理前精子DNA碎片率将患者分为两组:精子DNA碎片率≤20%的患者为A组,精子DNA碎片率20%的患者为B组。结果处理后精子DNA碎片率显著低于处理前精子DNA碎片率(3.49 3.38%vs18.69 10.89%,P0.001);处理前和处理后精子DNA碎片率均与精子总活动率、前向运动率及受精率有显著负相关关系(Spearman相关系数:-0.508、-0.629、-0.283、-0.299、-0.399、-0.329,P0.05)与男方年龄、精液量、精子密度、正常形态率及卵裂率无显著相关关系;B组处理后精子DNA碎片率高于A组,差别有统计学意义(P0.05);B组的精子总活动率、前向运动率和受精率均低于A组,差别有统计学意义(P0.05);两组男方年龄、女方年龄、不孕年限、获卵数、精液量、精子密度、正常形态率、卵裂率、种植率和妊娠率之间的差异均无统计学意义(P0.05)。结论密度梯度离心加上游法处理精液后可以显著降低精子DNA碎片率,精子DNA碎片率与精子活力最密切相关,碎片率升高会降低受精率,但对种植率、妊娠率等临床结局没有显著影响。     

沉默附睾P34H基因对小鼠精子P34H表达和精子透明质酸酶活性的影响

目的:通过慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)敲低P34H表达,分析其对小鼠精子P34H表达和精子透明质酸酶(HYD)活性的影响。方法:构建3种附睾精子P34H shRNA慢病毒表达载体GV-P34H-sh RNA-1、GVP34H-sh RNA-2和GV-P34H-sh RNA-3,提取阳性克隆质粒测序,转染HEK293T细胞,生产慢病毒颗粒。将3种重组慢病毒及阴性对照病毒分别注入小鼠附睾中,用real-time PCR和Western blot法分别检测其对P34H m RNA和蛋白的沉默效果。采用免疫荧光法观察P34H蛋白在小鼠精子上的定位,改良透明质酸钠-明胶底物膜法检测小鼠精子HYD活性(HYD阳性反应率和HYD活性强度)。结果:测序结果证实3种慢病毒载体均包装成功。感染小鼠附睾后,P34H的mRNA及蛋白表达量均较阴性感染组和正常对照组明显降低(P0.05);其中以GV-P34H-sh RNA-1作用最为显著,精子P34H阳性表达率和HYD活性均较阴性感染组和正常对照组明显降低(P0.05),而阴性感染组和正常对照组相比差异无统计学显著性。结论:附睾P34H基因沉默可抑制小鼠附睾中精子P34H阳性表达率和HYD活性。     

干扰Itk表达抑制CVB3感染小鼠的炎症反应

目的 研究在病毒性心肌炎小鼠模型上敲减Itk蛋白的表达对小鼠炎症反应的影响.方法 BALB/c小鼠尾静脉注射表达Itk-shRNA的质粒后感染CVB3,第4天后观察Itk基因的抑制情况、小鼠存活率,PBMC增殖率及部分炎症性细胞因子的分泌水平.结果 Itk-shRNA转染至小鼠体内后脾细胞中Itk基因的mRNA水平与空白对照组及转染shRNAnon的对照组相比,敲减率约40％(P＜0.05).与转染shRNAnon组相比,Itk-shRNA组中Itk基因表达的抑制导致小鼠PBMC增殖活性降低约41％,小鼠的存活率提高(P＜0.05).Itk-shRNA组血清中细胞因子水平降低.结论 抑制Itk表达能有效降低小鼠PBMC的增殖,同时减少炎症相关细胞因子的分泌,提高小鼠的存活率.     

不育井下煤矿工人精液质量分析

目的探讨煤矿井下工作环境对精子参数和精子DNA完整性的影响。方法 90名不育井下煤矿工人为实验组,并对工龄1-5年和5年井下煤矿工人的精液质量进行比较;将60例正常生育男性做为健康对照组。采用CASA全自动精子分析仪进行精液常规分析,精子形态采用改良巴氏染色法,精子DNA完整性检测采用精子染色质扩散试验(SCD),用DNA断裂指数(DFI)表示。结果实验组精子浓度、活动率、精子形态和DFI与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);而精液体积、精液p H值,液化时间差异无统计学意义;发现工龄5年组与工龄1-5年组相比活动率、精子形态和DFI差异显著(P0.05)。结论煤矿井下工作环境可以影响精液质量,从而导致男性不育。     

精子形态与活率相关性的研究及其在男性不育中的应用

目的探讨精子形态与活率的相关性,以便为男性不育的诊断提供理论指导。方法分别利用改良的巴氏染色法和伊红染色法,对精子形态和精子活率进行分析。结果与精子形态正常组相比,畸形精子组中精子活率异常的比例明显上升,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论精子活率与精子形态呈正相关。精子形态可影响精子活率,进而影响男性的生育。     

瘦素对小鼠胸腺细胞凋亡的保护机制

目的 观察瘦素对小鼠胸腺细胞凋亡的保护机制,探讨磷酸肌醇3位羟基激酶/AKT(P13-K/AKT)和胞桨型磷脂酶XZ(cPLA2)信号转导通路是否参与瘦素保护机制.方法 以IPS诱导小鼠胸腺细胞凋亡为模型,采用Annexin V-FTTC/PI双染色法流式细胞仪检测PI3-K/AKT特异性抑制剂LY294002 和 cPLA2 抑制剂AACOCF3对细胞凋亡的影响,以RT-PCR检测cPLA2 mRNA和caspase3 mRNA的表达,用cPLA2活性试剂盒检测cPLA2的活性.结果 瘦素可以保护LPS诱导的小鼠胸腺细胞凋亡,使胸腺细胞存活率由58%上升到65%,LY294002(10 μmol/L)和AACOCF3(10 μmol/L)可以明显抑制瘦素的保护作用,使胸腺细胞的存活率分别降至60%(P＜0.05)和62%(P＜0.05).RT-PCR表明加入瘦素后cPLA2 mRNA和caspase3 mRNA的表达下降.cPLA2活性试剂盒表明leptin可抑制cPLA2的活性.结论 瘦素抑制LPS诱导的胸腺细胞凋亡同时依赖IP3K/AKT和cPLA2途径.     

miR-338-3p通过负性调节cPKCγ表达减轻小鼠神经元缺血损伤

目的评估miR-338-3p对氧糖剥夺(OGD)/复糖复氧(R)神经元损伤的影响及其机制。方法建立小鼠脑中动脉阻塞(MCAO)和神经元氧糖剥夺(OGD)模型;Western blot检测1 h MCAO/R 24、48和72 h小鼠脑梗死区周围皮质(n=5)和1 h OGD/R 0、6、12和24 h神经元(n=5)cPKCγ蛋白表达量;实时定量PCR检测cPKCγ及miR-338-3p mRNA水平;生物信息学分析cPKCγ3′UTR与miR-338-3p结合位点;噻唑兰(MTT)比色法和乳酸脱氢酶(LDH)法测定神经元(n=6)的存活率和凋亡率。采用免疫荧光与高内涵细胞成像分析技术(HCA)检测caspase-3蛋白表达情况。结果 1 h MCAO/R 24、48和72 h小鼠脑梗死区周围皮层和1 h OGD/R 0、6、12和24 h神经元中cPKCγ蛋白及mRNA水平均明显上升(P0.001);cPKCγ3′UTR存在1个miR-338-3p结合位点,miR-338-3p与cPKCγmRNA水平呈相反趋势;过表达miR-338-3p后1 h OGD/R 24 h神经元存活率下降(P0.001),调亡率上升(P0.001),caspase-3蛋白平均荧光强度值增高(P0.001),抑制miR-338-3p后1 h OGD/R 24 h神经元存活率上升(P0.001),调亡率下降(P0.001),caspase-3蛋白平均荧光强度值降低(P0.001)。结论 miR-338-3p通过负性调节cPKCγ表达而使神经元存活率上升,凋亡率下降,减轻缺血神经元损伤。     

脱氢表雄酮对狼疮性BXSB小鼠脾脏淋巴细胞凋亡的影响

目的 研究脱氢表雄酮(DHEA)对BXSB狼疮性小鼠脾脏淋巴细胞凋亡的影响,并探讨其作用机理.方法 运用流式细胞术、免疫双荧光染色法检测脾脏淋巴细胞凋亡.结果 当DHEA的浓度为10-8mol/L时,淋巴细胞凋亡率降低,与对照组比较有差异有统计学意义(P＜0.05),细胞坏死率差异无统计学意义(P＞0.05);DHEA与西药组或中药组联合应用对淋巴细胞凋亡抑制作用更加显著,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 脱氢表雄酮可明显抑制BXSB小鼠脾脏淋巴细胞凋亡率.     

精液体外优化对精子DNA以及IVF-ET妊娠结局的影响

目的探讨人工助孕前精液经体外优化制备技术处理后精子DNA的损伤以及对体外授精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)结局的影响。方法收集107例行IVF助孕患者的精液,按照WHO标准对处理前精液行精液常规分析,采用精子染色质扩散试验(sperm chromatin dispersion,SCD)检测处理前和处理后精子DNA碎片率,并收集IVF实验室及临床结局。根据处理前精子DNA碎片率将患者分为两组:精子DNA碎片率≤20%的患者为A组,精子DNA碎片率20%的患者为B组。结果优化处理后精子DNA碎片率显著低于处理前精子DNA碎片率(3.49±3.38%vs18.69±10.89%,P0.001);处理前和处理后精子DNA碎片率均与精子总活动率、前向运动率及受精率有显著负相关关系(Spearman相关系数:-0.508、-0.629、-0.283、-0.299、-0.399、-0.329,P0.05)与男方年龄、精液量、精子浓度、正常形态率及卵裂率无显著相关关系;B组处理后精子DNA碎片率高于A组,差别有统计学意义(P0.05);B组的精子总活动率、前向运动率和受精率均低于A组,差别有统计学意义(P0.05);两组男方年龄、女方年龄、不孕年限、获卵数、精液量、精子浓度、正常形态率、卵裂率、种植率和妊娠率之间的差异均无统计学意义(P0.05)。结论精液经过优化处理(密度梯度离心加上游法)可以显著降低精子DNA碎片率,精子DNA碎片率高与精子活力低下密切相关,并会降低受精率,但对种植率、妊娠率等临床结局没有显著影响。     

放射科医生职业与男性精液参数的相关性研究

目的探讨从事放射科医生职业对精子DNA完整性和精子参数的影响。方法将就诊的460例男性不育患者分为放射科医生组218例和非放射科医生组242例;将放射科医生组分为10年组85例和10年组133例,将520例正常生育组做为健康对照组。采用SQA-V全自动精子分析仪进行精液常规分析,精子形态采用改良巴氏染色法,精子DNA完整性检测采用精子染色质扩散试验(SCD),用DNA断裂指数(DFI)表示。结果放射科医生组和非放射科医生组的精子密度、活动率、精子形态和DFI与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);放射科医生组工作者组的精子密度、活动率、精子形态和DFI与非放射科医生组比较差异有统计学意义(P0.05);三组的精液量、精液p H值差异无统计学意义(P0.05);10年组与10年组相比,精子密度、活动率、精子形态和DFI均显著降低(P0.05)。结论长期从事放射科医生职业影响精液质量,工龄对精子质量的影响存在时效性,从而导致男性不育。     

胰岛素样生长因子-1对人精子氧化损伤的保护作用

目的探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对人精子氧化损伤的保护作用。方法用H_2O_2处理人精子悬液建立氧化损伤模型,将精子悬液分为对照组、H_2O_2组、IGF-1+H_2O_2组。分别于培养后12 h、24 h,采用精子分析仪检测精子活力,Diff-Quik染色法进行精子形态学分析,精子染色质扩散试验检测精子DNA碎片率。结果在培养后12 h、24 h,与对照组相比,H_2O_2组精子活力及前向运动百分比均显著下降,DNA碎片率明显升高(P0.05);IGF-1+H_2O_2组较H_2O_2组精子活力及前向运动百分比均显著升高,DNA碎片率明显下降(P0.05);各组间正常形态精子比率无显著性差异(P0.05)。结论 IGF-1对氧化损伤的精子具有一定的保护作用。     

不同精子来源及受精方式对胚胎冻融结局的影响

目的探讨常规体外受精(IVF)、精液精子与穿刺后精子卵胞浆内单精子注射(ICSI)对胚胎冻融结局的影响。方法分析我中心2013年1月至2013年12月间行胚胎冻融移植周期的临床妊娠结局,其中IVF周期1479,ICSI周期258,早期补救52例;来源于精液精子组105个周期,行穿刺后精子组33个周期。结果 IVF组、ICSI组与早期补救ICSI组间的复苏胚胎存活率相比无差异(96.5%、95.0%vs 99.0,P0.05);三组之间种植率、妊娠率相比也无统计学差异(27.7%、25.3%vs 35.1%;41.0%、39.5%vs 46.2%,P0.05)。精液精子组与穿刺精子组的复苏胚胎存活率、种植率和妊娠率之间差异不显著(P0.05)。结论 ICSI及穿刺后精子行ICSI胚胎其冻融后的存活率和妊娠率与常规IVF之间无显著差异。