用小鼠艾氏腹水癌细胞检测抗核抗体

抗核抗体(ANA)是以细胞核成份为靶抗原的自身抗体的总称。常用检测方法为免疫荧光法和免疫酶法。ANA 的检测已被列入 SLE 的诊断标准。长期以来,检测中所用抗原片或为小鼠肝匀浆片或为传代细胞(HEP-2细胞系),因来源困难而使此项检查在基层实验室难以开展。我们试用小鼠艾氏(Ehrlich)腹水癌细胞为 ANA 的抗原片,经与人羊膜细胞、小鼠骨髓瘤细胞、小鼠肝匀浆抗原片比较,发现其灵敏度高,结果清晰,适于大量制备,现报告如下:     

用Hela细胞制备培养片检测ANA及ACA

目的:提高ANA检测的阳性率,加强ANA检测的特异性、敏感性。为结缔组织病的诊断、病情观察及疗效评估提供可靠依据。方法:用免疫荧光法以Hela细胞培养片为底物,同时检测ANA及ACA。结果:与鼠肝为底物进行比较,阳性率提高,特异性加强。与Hep-Ⅱ细胞涂片为底物比较,细胞形态完整、染色结果清晰、易判断。结论:用Hela细胞培养片为底物检测ANA及ACA是一种特异、敏感、准确的实验方法。     

喉癌细胞/鼠肝细胞复合片检测抗核抗体的临床应用

目的用间接免疫荧光法检测抗核抗体(ANA)时复合抗原片的应用,是否可提高抗核抗体(ANA)阳性率。方法分别用2种抗原片(Hep-2型细胞/鼠肝组织复合片,鼠肝组织片)检测抗核抗体,比较检出率和特异性。结果复合抗原片的检出率高、特异性好。结果:在类风湿关节炎(RA)患者中,分别是78.3和58.9;干燥综合征(SS)患者中,前者是47.6,后者是22.6;硬皮病(ssc)患者中分别是57.9和31.0,两种底物的ANA检测率差异有显著性。结论运用Hep-2型细胞/鼠肝组织复合抗原片检测ANA,有利于对自身免疫性疾病的初步筛选和判断。     

应用单克隆抗体鉴定组织培养中的腺病毒型别

<正> 材料和方法一、抗原:为1984年10月～1986年5月从患儿分离到的59株腺病毒(Adv)接种于Hela 细胞,制成细胞涂片,丙酮固定后待检。用标准3、7型 Adv(Ad_3、Ad_7)感染 Hela 细胞涂片为阳性对照,正常 Hela 细胞涂片为阴性对照。二、按已报道过的方法制备分泌腺病毒单克隆抗体(McAb)的杂交瘤,并制备含McAb 的小鼠腹水:经免疫酶组化法及 IgG亚类测定证实分泌组特异性 McAb 1株,分泌Ad_3、Ad_7型特异性 McAb 各2株。腹水的效价分别为1:2,560～1:51,200,工作浓度为1:20。三、McAb 检测法:按已报道过的方法按顺序滴加 McAb、酶标记葡萄球菌蛋白 A(SPA)、底物溶液,镜检。阳性细胞为核     

用免疫金银法检测抗核抗体

抗核抗体(ANA)是诊断风湿性疾病的常用实验室指标。经典的检测方法为间接荧光法(IFA),但此法受荧光显微镜、荧光抗体、底物(抗原)片的种类与质量影响甚大,荧光又极易淬灭,标本片不能长期保存。我们建立了一种免疫金银法(IGSS)测定ANA,操作简便,结果清晰,无需特殊设备,一般实验室均可采用。材料和方法 (一)试剂制备 1.鼠肝匀浆底物片:按本科常规制作。2.葡萄球菌A蛋白(SPA)交     

肾上腺髓质素单克隆抗体制备和在人体器官组织中的表达

目的　自制特异性肾上腺髓质素 (AM)单克隆抗体 ,观察AM在人正常组织中的表达。方法　以AM为抗原免疫BALB/c小鼠 ,取其脾细胞与SP2 / 0骨髓瘤细胞株融合 ,建立阳性杂交瘤细胞克隆 ,制备AM单克隆抗体 ;以此为第一抗体 ,采用ABC免疫组化法检测其在人体心、肾、肝、肺和脾组织的表达。结果　AM在上述器官中的分布较广泛 ,表达于这些组织中的血管平滑肌细胞和内皮细胞 ,以及心肌细胞、肾小球上皮细胞和内皮细胞 ,肾小管和集合管上皮细胞 ,肝胆管上皮细胞 ,肺支气管及其黏液腺上皮细胞、平滑肌细胞和肺泡Ⅱ型上皮细胞胞质。结论　AM在人器官组织中分布广泛 ,提示其生物学作用可能是多方面的。     

TNF的分离纯化和TNFR实验研究

应用本室建立的方法制备、分离纯化肿瘤坏死因子(TNF),应用生物素标记技术,使TNF生物素化为肿瘤坏死因子生物素(TNFB)。应用TNFB建立肿瘤坏死因子受体(TNFB)的ABC法检测技术,检测几种培养细胞涂片,显示染色位于细胞膜上,非生物素化TNF能竞争阻断TNFB的结合,使染色下降,检测表明鼠成纤维母细胞L_(929)细胞、子宫颈癌细胞株(Hela细胞)、肝癌细胞株SMMC_(7721)细胞和白血病细胞株     

猴肝组织与Hep-2细胞联合检测抗核抗体的临床意义

本文探讨猴肝组织和人类上皮细胞(Hep-2细胞)检测血清抗核抗体(ANA)的临床意义.检测结果示Hep-2细胞检测ANA阳性率高于猴肝组织检测ANA阳性率,应用两种基质联合对疾病的诊断,减少抗核抗体的检测的漏检是有重要意义.     

猴肝组织与Hep-2细胞联合检测抗核抗体的临床意义

本文探讨猴肝组织和人类上皮细胞 (Hep - 2细胞 )检测血清抗核抗体 (ANA)的临床意义。检测结果示Hep - 2细胞检测ANA阳性率高于猴肝组织检测ANA阳性率 ,应用两种基质联合对疾病的诊断 ,减少抗核抗体的检测的漏检是有重要意义。     

猴肝组织与Hep—2细胞联合检测抗核抗体的临床意义

本文探讨猴肝组织和人类上皮细胞(Hep-2细胞)检测血清抗核抗体(ANA)的临床意义。检测结果示Hep-2细胞检测ANA阳性率高于猴肝组织检测ANA阳性率，应用两种基质联合对疾病的诊断，减少抗核抗体的检测的漏检是有重要意义。     

抗人有机阴离子转运蛋白3抗体制备及其在肾脏定位的研究

目的 采用新的基因免疫方法制备小鼠抗人有机阴离子转运蛋白3(anti-human organicanion transporter 3,hOAT3)多克隆抗体,并用该抗体对hOAT3在人肾小管上皮细胞的表达进行定位研究.方法 应用Accelrys软件分析hOAT3抗原表位,选择其细胞内表位,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法从人肾组织RNA中扩增其261 bp的cDNA序列,克隆到pBQAP-TT构建基因免疫载体,与辅助载体pCMVi-GMCSF和pCMVi-FIT3L同时免疫小鼠,5周后获得血清抗体,人肾组织Western blot和免疫组化鉴定抗体的特异性和定位表达.结果 成功构建基因免疫载体pBQAP-TT-hOAT3,序列分析鉴定正确,ELISA方法测得抗体滴度高达1∶3 000,该抗体识别人肾皮质膜蛋白62×103的hOAT3,人肾组织免疫组化提示该抗体识别定位在肾小管上皮细胞基底膜.结论 成功用基因免疫方法制备高效特异性抗hOAT3多克隆抗体,为今后的生理病理研究奠定基础.     

肝印片和胃、肾冰冻切片 ANA 试验比较观察

抗核抗体(ANA)检查的实验方法及其临床意义,国内外巳有报道。我们就 ANA 试验的底物小白鼠肝印片和小白鼠胃、肾冰冻切片对照检查进行了初步观察。一、实验方法以小白鼠胃、肾的冰冻切片(6～8μm 厚)和小白鼠肝印片作底物。两种底物均不固定,置于4℃冰箱备用。另外准备好病人血清和冻干兔抗入免疫球蛋白荧光抗体(成都生物制品研究所制作).     

细胞骨架光镜制片的简便方法

在真核细胞的胞质中 ,存在许多纤维状结构 - -微管、微丝、中间纤维 ,它们共同组成细胞骨架。细胞生物学实验中 ,观察细胞骨架是一项重要内容。学生实验教学中常用洋葱鳞茎内表皮细胞临时装片和用人成纤维细胞或 Hela细胞制成的永久片来观察细胞骨架 [1 ]。笔者经过实验 ,摸索出一种用人口腔上皮细胞制作细胞骨架制片的简便方法 ,介绍如下。1　材料和方法1.1　材料　人口腔上皮细胞1.2　方法(1)涂片　用干净牙签刮取人口腔上皮细胞 ,置于装有生理盐水试管中 ,洗涤离心 1～ 2次 ,剩约 0 .5～ 1ml上清液 ,吸管吹打均匀、涂片、晾干。(2 )漂洗…     

米非司酮对宫颈癌Hela细胞的增殖抑制作用

目的 :探讨米非司酮对人子宫颈癌Hela细胞增殖的影响。方法 :采用MTT测定 ,观察不同浓度米非司酮 (10 ,5 ,2 .5 μmol/L)对Hela细胞增殖的抑制作用 ;通过ABC免疫组化法 ,检测用药后Hela细胞Ki 6 7抗原表达的变化。结果 :3个浓度的米非司酮对Hela细胞增殖均有抑制作用 ,并呈剂量依赖性 ,其中以 10 μmol/L浓度抑制作用最强 ,抑制率达 5 7.6 9% ;2 .5 μmol/L米非司酮可使Ki 6 7抗原表达明显减少。 结论 :米非司酮体外对PR阳性的人宫颈癌细胞有明显的抑制作用 ,通过降低细胞Ki 6 7抗原的表达而抑制其增殖。     

胎肝干细胞抗原阳性细胞向肾脏细胞分化的研究

目的　探讨小鼠胚胎肝组织中的 ,干细胞抗原 1阳性的细胞 (Sca 1+ 细胞 )向肾组织上皮细胞分化的潜能。方法　取 14 5d的小鼠胎肝 ,制作细胞悬液 ;用单克隆免疫磁珠细胞分离技术分离Sca 1+ 细胞 ;用PCR鉴别Y-染色体性别决定区域 (SRY)基因序列 ;将 2× 10 3 个雄性小鼠Sca 1+细胞输注给经 10Gy剂量60 钴全身照射的雌性小鼠体内 ;于移植后 2个月 ,处死受体小鼠 ,取肾脏组织固定 ,制片 ;用免疫组织化学染色和荧光原位杂交检测雌性受体小鼠肾脏组织内供体小鼠胎肝Sca 1+细胞的分布和横向分化情况。结果　在肾小管上皮内和肾小球边缘 ,分别发现存在Y染色体阳性的供体来源的细胞 ,同时呈现肾组织的部分特征 ,表型分别为RCA+ 、CYP+ 1A2 、CD4 5 -、F-4/ 80 和波形蛋白阳性、CD-45、F-4/ 80 。结论　小鼠胎肝Sca 1+ 细胞 (其中绝大部分是造血干细胞 ) ,具有向肾组织上皮细胞分化的潜能     

用Hela细胞检测Bip抗体间接免疫荧光法的建立

目的 建立抗免疫球蛋白结合蛋白(Bip)抗体检测的间接免疫荧光法(IIF),为探讨其在类风湿关节炎(RA)中的意义做出方法 学准备.方法 以Hela细胞为抗原基质固定于载片上,加入待测稀释血清温育,待抗原抗体特异结合后加入荧光素标记的抗人IgG与待测Bip抗体结合,最后置荧光显微镜下观察Hela细胞胞浆有无特异荧光出现.结果 RA患者血清检测中可见到Hela细胞胞浆中出现特异性荧光,而健康献血员血清检测中未发现Hela细胞胞浆中的特异性荧光,实验所见荧光模式与文献报道相符.结论 以Hela细胞为抗原基质的间接免疫荧光法能够对血清中Bip抗体进行检测.     

评价两种基质联合检测抗核抗体的临床意义

目的 :探讨猴肝组织和人类上皮细胞 (Hep - 2细胞 )检测血清抗核抗体 (ANA)的临床意义。方法 :以猴肝组织和Hep - 2细胞为基质 ,用间接免疫荧光 (IFA)法测 118例结缔组织病患者 ,80例非结缔组织病患者和5 0例健康人血清ANA。结果 :Hep - 2细胞检测ANA阳性率高于猴肝组织检测ANA阳性率 ,其阳性率比较差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ,两种基质联合检测结缔组织病患者和非结缔组织病患者及健康人组血清ANA阳性率差异有显著性意义 (P <0 .0 1) ,非结缔组织病患者及健康人组血清ANA阳性率差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。结论 :对每一份血清进行两种基质联合检测ANA及ANA滴度的观察对系统性红斑狼疮(SLE)的诊断及疗效的判断有一定的临床意义。     

番茄红素体外抗肿瘤作用实验研究

目的:研究番茄红素体外抑制肿瘤的可能机制。方法 :采用体外细胞培养技术观察番茄红素对人宫颈癌细胞 (Hela)、人肝癌细胞 (QGY- 770 3,Q3)、人肾癌细胞 (786 - O) 3种细胞系细胞凋亡及突变型 p5 3蛋白表达的影响。 结果 :吖啶橙荧光染色后未发现 3种癌细胞 (Hela、Q3、786 - O)有典型凋亡现象 ,Hoechst332 5 8荧光染色后在所试 2种癌细胞 (Hela、786 - O)中无典型凋亡现象。利用 DNA琼脂糖凝胶电泳技术检测细胞凋亡未见 3种 DNA移动呈“梯形”条带。受试物对 Hela、786 - O2种细胞突变型 p5 3蛋白表达的检测与未加受试物的空白对照相比未显示出明显变化。 结论 :番茄红素在体外对所试 3种癌细胞的抑制生长作用可能与促细胞凋亡无关 ,该作用也不是通过抑制突变型 p5 3蛋白表达途径实现的。     

肝细胞肝癌单克隆抗体的导向定位研究

作者用新鲜肝癌标本制备细胞悬液为抗原和用培养肝癌细胞(SMMC-7721)为抗原,制备6株与多数肝癌组织反应(63.1％～91.1％)而与正常肝细胞不反应的鼠单克隆抗体,并用胶体金标记抗体,在SMMC-7721细胞培养中,抗体能导向细胞,并进入细胞浆内,用放射性碘标抗体及其F(ab’)_2 片可在荷人肝癌裸鼠及     

CBA/N小鼠肝癌移植瘤的建立及重建SCID免疫的B淋巴细胞抗癌作用

目的: 研究CBA/N,nude,SCID小鼠建立人肝癌模型和重建SCID免疫的特点,初步探讨B淋巴细胞及其抗体对肝癌细胞生长的排斥作用.方法: 将体外培养的人肝癌细胞接种到B细胞缺陷的CBA/N,T细胞缺陷的BALB/c-nu,T,B细胞缺陷的SCID小鼠及免疫重建的SCID小鼠中,观察瘤细胞生长特点;取实验小鼠血清,测定荷瘤鼠抗体Ig含量的变化,取小鼠血清与肝癌细胞作抗原抗体凝集试验.结果: CBA/N和用BALB/c小鼠外周血淋巴细胞重建的SCID(B-PBL-SCID)小鼠不成瘤,nude,SCID和用CBA/N外周血淋巴细胞重建的SCID (C-PBL-SCID)小鼠100%成瘤;有B淋巴细胞的实验鼠(包括B-PBL-SCID)测到的Ig达到mg/mL水平,血清能与肝癌产生凝集反应.结论: SCID小鼠是建立肿瘤模型和免疫重建及其肿瘤免疫研究的理想的实验动物;B淋巴细胞及其产生的抗体在抗肿瘤中起着重要的作用.