不同浓度地塞米松在体外定向诱导分化兔骨髓间充质干细胞为成骨细胞的实验研究

目的探讨兔骨髓间充质干细胞(MSCs)体外定向诱导分化为成骨细胞所需的地塞米松的最佳浓度。方法抽取兔骨髓,采用全骨髓贴壁培养法体外培养,贴壁细胞进行传代。取第3代细胞,随机分为5组,在培养基中添加成骨分化诱导剂β-甘油磷酸钠、L-抗坏血酸,5组添加的地塞米松的浓度分别为1×10-6mol/L、1×10-7mol/L、1×10-8mol/L、1×10-9mol/L、1×10-10mol/L。培养10 d后,在倒置显微镜观察细胞形态,计算细胞浓度,采用5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸盐(BCIP)/氯化硝基四氮唑蓝(NBT)底物显色试剂检测碱性磷酸酶(ALP),茜素红染色检测钙结节。结果较高浓度(1×10-8mol/L、1×10-7mol/L、1×10-6mol/L)的地塞米松相对于较低浓度(1×10-9mol/L、1×10-10mol/L)的地塞米松可显著增加ALP表达(P均<0.05),并可增加钙结节的形成;1×10-9mol/L及其以下浓度的地塞米松对细胞增殖无明显影响(P均>0.05),1×10-7mol/L以上浓度的地塞米松可明显抑制细胞的增殖(P<0.01)。结论地塞米松在体外定向诱导分化兔骨髓间充质干细胞为成骨细胞,最佳的浓度为1×10-8mol/L。     

姜黄素对人癌细胞BCH、MGC-803、BEL-7402细胞增殖的影响

目的观察姜黄素对人癌细胞系BCH、MGC-83、BEL-7402细胞增殖的影响.方法采用Mosman MTT细胞增殖检测法.结果姜黄素在4×10-5mol/L与BCH细胞接触,在不同时相的药物细胞毒效应不同,其与BCH细胞接触16h是药物细胞毒作用最佳时期.姜黄素在(1×10-5～1×10-4)mol/L范围对上述三种体外培养癌细胞有明显的抑制活性.其IC50分别为3.58×10-5mol/L(BCH)、3.83×-5mol/L(MGC-803)、7.3×10-5mol/L(BEL-7402),并且药效与药物浓度呈相关性.结论姜黄素对三种癌细胞的增殖有明显抑制作用.其药效浓度达到国内抗肿瘤药体外药效评价标准.     

10种中草药抗炎有效成分对白三烯B_4生物合成的影响

10种中药有效成分在体外对钙离子载体A_(23187)刺激人多形核白细胞产生白三烯B_4影响试验的结果表明:1×10~(-5)mol/L的大黄素的抑制率为100％,3×10~(-5)mol/L齐墩果酸的抑制率为45.5±4.4％,1×10~(-4)mol/L的放线瑞香宁、去氧胆酸等也有一定抑制作用。     

问荆碱对大鼠脑囊泡膜Mg2+-ATPase,Ca2+-ATPase抑制作用的动力学研究

问荆碱对大鼠脑囊泡膜Mg²⁺-ATPase,Ca²⁺-ATPase有显著的抑制作用,对Mg²⁺-ATPase的抑制机制分别为竞争性抑制(Mg²⁺,Ki=4.93×10^-5mol/L)、非竞争性抑制(ATP,Ki=1.06×10^-4mol/L),对Ca²⁺-ATPase的抑制机制分别为混合型抑制(Ca²⁺,Ki=5.07×10^-5mol/L)、非竞争性抑制(ATP,Ki=3.27×10-4mol/L)。     

高效液相色谱法测定血脂灵胶囊中大黄酚的含量

目的:建立中成药血脂灵胶囊中大黄酚的含量测定方法。方法:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,DiamonsilTMC18,5μ,150×4.6mm,以甲醇-0.025mol/L磷酸(90∶10)为流动相;检测波长为428nm;流速1.0mL/min。结果:大黄酚在0.0538μg～0.269μg之间,都与相应的峰面积呈良好的线性关系(r=0.9997),平均回收率为98.7%,RSD为1.8%(n=5)。结论:该方法准确可靠,可用于本制剂的质量控制。     

高效液相色谱法测定徐长卿药材、丹皮酚注射液及生物样品中丹皮酚含量

目的:建立完整的中药徐长卿及其注射液中丹皮酚的体外和体内HPLC含量测定方法。方法:采用HPLC法对中药徐长卿中丹皮酚、注射液中丹皮酚以及家兔血液中丹皮酚进行含量测定。色谱柱:Venusil XBP-C18(200mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-水(70:30,v/v);流速:1.000mL.min-1;检测波长:274.0nm;AUFS:0.6000;柱温:室温(30℃);进样量:20.00μL。结果:徐长卿药材中丹皮酚在0.032 25～12.90μg.mL-1范围内呈良好线性关系,r=0.999 9,检测浓度为0.0250μg.mL-1,平均回收率为97.80%,RSD为1.200%(n=3);丹皮酚注射液的平均回收率为98.60%,RSD为1.300%(n=3);血浆中的丹皮酚在0.030 25～12.10μg.mL-1范围内呈良好线性关系,检测浓度为0.015μg.mL-1,日内、日间RSD均≤15.00%(n=6)。结论:此方法灵敏、准确、重现性、稳定性良好,能准确地测定出丹皮酚的含量。     

艾纳香二氢黄酮对脂质过氧化损伤大鼠原代培养肝细胞的保护作用

研究 5种艾纳香二氢黄酮类化合物对过氧化损伤的原代培养肝细胞的保护作用。胶原酶灌流法分离大鼠肝细胞。以 CCl4或 Fe SO4 Cys损伤原代培养肝细胞 ,1× 10 - 4 和 1× 10 - 5 mol/ L 的 5种艾纳香二氢黄酮均能明显抑制受损伤细胞的转氨酶逸出、MDA产生及 GSH耗竭。其中以 2 ,5 -二羟基艾纳香二氢黄酮的作用最强 ,在 CCl4所致肝细胞损伤实验中 ,其抑制 MDA产生的 ED5 0 约为 2 .6× 10 - 6 mol/ L ,保护 GSH的 ED5 0 约为 1.0 8× 10 - 5 mol/ L ,抑制 AL T逸出细胞的 ED5 0 约为 9.39× 10 - 6 mol/ L     

齿痛消炎灵颗粒HPLC特征指纹图谱研究及多成分定量测定

目的建立齿痛消炎灵颗粒(CXG)的HPLC指纹图谱,并进行多成分定量分析,为评价其质量提供依据。方法采用Dikma Luster ODS(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱:0~15 min,20%~30%甲醇;15~30 min,30%甲醇;30~40 min,30%~60%甲醇;40~55 min,60%甲醇;体积流量1.0 m L/min;检测波长254、283、274、300 nm;柱温30℃。通过相似度评价对10批次CXG指纹图谱进行质量评价,并对指认的6个指标成分进行定量测定。结果共确定CXG HPLC指纹图谱18个共有峰,通过与混合对照品比较指认其中6个指标成分分别为升麻素苷(4号峰)、5-O-甲基维斯阿米醇苷(7号峰)、胡薄荷酮(10号峰)、橙皮苷(15号峰)、丹皮酚(16号峰)和欧前胡素(17号峰),利用相似度软件对10批样品指纹图谱进行分析,各批样品相似度均在0.9以上。升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、胡薄荷酮、橙皮苷、丹皮酚和欧前胡素线性范围分别为0.013~0.505 mg/m L(r=0.999 8)、0.052~2.097 mg/m L(r=0.999 2)、0.019~0.772 mg/m L(r=0.998 9)、0.025~1.003 mg/m L(r=0.999 1)、0.006~0.251 mg/m L(r=0.999 5)和0.014~0.576 mg/m L(r=0.999 4)。10批样品中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、胡薄荷酮、橙皮苷、丹皮酚和欧前胡素线质量分数分别在7.267~7.333 mg/g、4.260~4.522 mg/g、2.033~2.093 mg/g、12.234~12.771 mg/g、19.023~19.334 mg/g和11.152~11.291 mg/g。结论所建立的CXG HPLC指纹图谱和定量测定分析方法灵敏度高、专属性强,可用于CXG的质量控制。     

知柏地黄丸中盐酸小檗碱和丹皮酚的含量测定

目的:提高知柏地黄丸的质量标准,建立同时测定盐酸小檗碱、丹皮酚含量的方法。方法:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以磷酸盐缓冲液[0.05mol/L磷酸二氢钾溶液和0.05mol/L庚烷磺酸钠溶液(1∶1),含0.2%三乙胺,并用磷酸调节至p H3.0]∶乙腈(60∶40)为流动相,流速:1.000m L/min,检测波长:266nm,柱温:30℃,进样量:10μL。结果:盐酸小檗碱、丹皮酚分别在0.9124~92.4976μg/m L(r=1.000)和1.0424~104.24μg/m L(r=0.9999)的范围内呈良好的线性关系;平均回收率分别为99.8%(RSD=0.7%)和99.9%(RSD=1.1%)。结论:本方法分离度好,快速,简便。可用于知柏地黄丸的质量控制。     

液相色谱法测定养阴清肺颗粒中丹皮酚的含量

[目的]采用高效液相色谱法测定养阴清肺颗粒中丹皮酚的含量。[方法]采用C18(4 6mm×250mm,10μm)色谱柱 ,甲醇 -水(75∶25)为流动相 ,流速1 00mL/min ,检测波长274nm ,外标法定量。[结果]丹皮酚在0 0413～0 2065μg范围呈线性 ,回收率为98 8% ,峰面积(RSD)为1 02 % (n=6)。[结论]液相色谱法简便可行 ,专一性强 ,能够有效控制该制剂的质量     

丹皮酚对原代培养的大鼠皮质和海马神经元缺糖缺氧再灌损伤的保护作用

 目的研究丹皮酚对大鼠神经元缺糖缺氧再灌损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法建立原代培养的新生大鼠神经元缺糖缺氧再灌损伤模型,随机分组为:对照组;模型组;丹皮酚组:建立模型,每个再灌时间点均经0.2×10^-6,1×10^-6,5×10^-6mol·L^-1 3个浓度药物处理;MK-801阳性对照药组。倒置相差显微镜下进行一般形态学观察,用MTT法测定神经元存活率。通过放射配基结合实验测定N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDA受体)结合力,采用荧光法测定细胞内游离钙离子([Ca²⁺]i)浓度及应用试剂盒测定一氧化氮(NO)含量及一氧化氮合酶(NOS)活性。结果丹皮酚可显著降低大鼠皮质和海马神经元缺糖缺氧再灌损伤时细胞死亡率,减弱NMDA受体结合力,降低神经细胞内游离钙离子浓度([Ca²⁺]i)及NO含量、NOS活性的升高。结论丹皮酚对离体培养的大鼠神经元缺糖缺氧再灌损伤具有明显保护作用,其作用机制可能与抗氧化及减弱NMDA受体结合力有关。     

阿夫唑嗪的示波极谱法测定及其电化学行为

 目的 研究阿夫唑嗪(alfuzosin,简称AFZ)的电化学行为和电极反应机制,拟定测定AFZ的单扫示波极谱法。方法 采用单扫示波极谱3法、循环伏安法进行研究。结果 在0.01 mol·L^-1 KH₂PO₄K₂HPO₄(pH7.05)底液中,AFZ在汞电极上有一灵敏的导数还原峰,峰电位Ep=-1.60V(vs.SCE),峰高与AFZ的浓度在1.0×10^-7～9.0×10^-6范围内呈线性关系(r＝0.997 9),检出限为3.0×10^-8 mol·L^-1。该法应用于片剂中AFZ含量的测定,得到满意结果。结论 实验表明,该体系属两电子还原的不可逆吸附过程。     

缬沙坦对巨噬细胞凝集素样氧化低密度脂蛋白受体表达的影响

 目的　研究Ang II I型受体(AT₁)拮抗剂缬沙坦(valsartan)对巨噬细胞(THP-1细胞 )血凝素样氧化低密度脂蛋白受体(LOX-1)基因转录和蛋白表达的影响,以探讨valsartan在抗动脉粥样硬化(AS)中的地位和作用。方法　分别用不同浓度的val sartan预作用已诱导分化的THP-1细胞0.5h后,再加入Ang II(1.0×10^-6mol·L^-1)24h后,用细胞酶联免疫法和半定量RT-PCR分别检测LOX-1蛋白和mRNA表达的情况。结果　1.0×10^-5mol·L^-1的valsartan可完全拮抗Ang II诱导的THP-1细胞LOX-1蛋白和LOX-1 mRNA表达作用,1.0×10^-6,1.0×10^-7,1.0×10^-8和1.0×10^-9mol·L^-1的valsartan分别可降低Ang II诱导的LOX-1蛋白表达作用达100%,85.8%,47.2%和9.8%;降低AngII诱导的LOX-1 mRNA表达作用达95.1%,82.6%,63.0%和20.0%。结论　valsartan可浓度依赖地显著拮抗AngII诱导THP-1细胞LOX-1蛋白和mRNA的表达,从而可能减少巨噬细胞通过LOX-1途径的OX-LDL摄入,影响泡沫细胞的形成、AS的发展,发挥其抗AS作用。     

化学修饰型复合汞膜电极测定双黄连口服液中黄芩苷的含量

目的:利用铕离子掺杂普鲁士蓝(europium-doped prussian blue analogue,Eu-PB)化学修饰型复合汞膜电极(GC/Eu-PB/MFE)建立了黄芩苷的测定方法,并探讨了其电化学行为。方法:在BR(pH6.0)支持电解质中,采用差示脉冲伏安法(DPV)和循环伏安法(CV)。结果:GC/Eu-PB/MFE电极与传统玻碳汞膜电极(GC/MFE)相比,同浓度的黄芩苷在GC/Eu-PB/MFE上响应灵敏度高,重复性好。黄芩苷在该电极上表现较强的吸附行为,其还原峰电位为-1.22 V(vs SCE)。还原峰电流与黄芩苷浓度在8.0×10-9～1.0×10-6mol.L-1呈线性关系(r=0.999 2),检测下限为1.2×10?9mol.L-1(S/N=3)。不经预分离直接测定双黄连口服液中黄芩苷的含量,平均回收率为99.83%,平均RSD 2.3%(n=8)。结论:GC/Eu-PB/MFE用于双黄连口服液中黄芩苷含量的测定,检测限低、灵敏、可靠,可用于该制剂的质量控制。     

黄芩素对大鼠离体胸主动脉的舒张作用及其机制

目的:研究黄芩素(BAI)对去甲肾上腺素(NE,1×10-6mol· L-1)和氯化钾(KCl,6×10-2 mol·L-1)预收缩健康成年雄性大鼠胸主动脉环的舒张作用,并探讨其作用机制.方法:应用离体血管环技术观察BAI对大鼠胸主动脉环张力的作用,记录NE预收缩的离体大鼠胸主动脉环张力变化.采用一氧化氮合酶(eNOS)抑制剂L-硝基精氨酸甲酯(L-NAME,1×10-4mol·L-1)、环氧合酶抑制剂吲哚美辛(INDO,1×10-5mol· L-1)和鸟苷酸环化酶抑制剂亚甲蓝(MB,1×10-5mol· L-1)和不同的钾通道阻滞剂预孵后观察BAI对血管环张力改变的影响,并观察对NE诱发的内钙释放和CaCl2引起的外钙内流的影响.结果:BAI对NE或KCl预收缩的内皮完整和去内皮大鼠离体胸主动脉环均产生明显的舒张作用,与溶剂组相比差异有统计学意义.预先用L-NAME,MB,KV通道阻断剂四氨基吡啶(4-AP,1×10-4mol· L-1),KC.通道阻断剂四乙胺(TEA,1×10-3mol· L-1),Kir通道阻断剂氯化钡(BaCl2,1×10-4mol·L-1)孵育后,BAI对预收缩的血管张力的改变与无阻断药时比较,差异均无统计学意义;预先用KATP通道阻断剂格列苯脲(Gli,1×10-5mol·L-1)和INDO孵育后,BAI的舒张血管作用减弱,与无阻断药比较差异有统计学意义(P＜0.05);且BAI对NE外钙内流引起的收缩有明显的抑制作用.结论:黄芩素可明显降低由NE诱发的血管环张力的升高,且其作用具有浓度依赖性,此作用有内皮依赖性和非内皮依赖性的特点.内皮依赖性收缩可能与前列环素(PGI2)途径有关,非内皮依赖机制与KATP通道和钙离子通道有关.     

碳糊电极阳极吸附伏安法测定中成药及保健品中的槲皮素

目的:建立碳糊电极(CPE)阳极吸附伏安法测定中成药及保健品中槲皮素的方法.方法:用石墨粉-液体石蜡(4∶1)制备CPE,在HAc-NaAc(pH 3.6)缓冲液中,槲皮素在0.401 V(vs.Ag-AgCl)产生一灵敏的吸附氧化峰.结果:槲皮素浓度在3.13×10-7～1.0×10-5mol·L-1与峰电流呈良好的线性关系(r=0.996 0),检出限为2.1×10-8mol·L-1,应用该法测定中成药及保健品中的槲皮素取得了较好的结果.结论:该法准确可靠、经济实用,可用于槲皮素的测定.     

HPLC法测定菘黄感冒颗粒中盐酸小檗碱的含量

目的建立测定菘黄感冒颗粒剂中盐酸小檗碱含量的高效液相色谱法。方法色谱柱为大连依利特ODS柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈:0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(40∶50)流速:0.80 mL/min检测波长:265nm。结果盐酸小檗碱的线性范围是7.48μg/mL~37.4μg/mL,r=0.999 9平均回收率为96.48%RSD为0.57%结论用该法测定菘黄感冒颗粒剂中盐酸小檗碱含量,操作简单,重复性好,精密度高。     

芩夏止喘颗粒中黄芩苷的稳定性研究

 目的 建立芩夏止喘颗粒中黄芩苷含量测定的HPLC,并以此确定黄芩苷的热稳定性,为确定芩夏止喘颗粒的保质期提供参考。方法 甲醇超声提取样品,流动相：乙腈-水(0.05% H₃PO₄)＝30∶70;流速：1 ml·min^-1;检测波长：278 nm。采用加速实验法对黄芩苷的热稳定性进行了研究。结果 HPLC在6.05～291 μmol·L^-1内线性良好,相关系数R²＞0.9999(n=8),回收率为98.1%(n=3);3个批号样品中黄芩苷的含量分别为14.69,14.70,14.67 mg·g^-1;复方中黄芩苷的变化为一级反应;测得100,90℃下的反应速率常数分别为6.45×10^-3,2.99×10^-3h^-1。由Arrhenius公式得出常温下(20℃)的反应速率常数为3.21×10^-6h^-1。进而得出常温下复方药品以黄芩苷为指标的保质期为3.74年。结论 本方法的建立为快速确定药品的保质期,缩短新药的开发周期具有实际意义。     

气相色谱法测定丹皮酚软膏中丹皮酚的含量

目的建立用气相色谱法测定丹皮酚软膏中丹皮酚含量的方法。方法采用HP-5极性毛细管色谱柱（（5%苯基）-甲基聚硅氧烷）,氮气为载气,氢焰离子化检测器,甲醇为溶剂,直接进样,外标法计算丹皮酚的含量。结果丹皮酚在5.1-51μg.mL^-1浓度范围内与峰面积线性关系良好（r=0.999 6）,平均加样回收率为99.1%。结论本方法准确度高、精密度好,可以测定丹皮酚软膏中丹皮酚的含量。     

乙肝解毒胶囊质量标准的研究

目的建立乙肝解毒胶囊(黄柏、黄芩、大黄等)的质量标准。方法采用薄层色谱法鉴别乙肝解毒胶囊中的黄柏、黄芩、大黄;用HPLC法同时对制剂中的盐酸小檗碱、黄芩苷进行了定量分析,色谱柱Phe-nomenex Luna 5μC18(2)(250×4.6 mm),流动相:甲醇-0.05 mol.L-1磷酸二氢钾溶液-冰醋酸(38∶62∶1);流速:1.0mL.min-1;检测波长:276 nm;柱温:30℃。结果盐酸小檗碱在0.020 56~0.205 6μg范围内线性关系良好,r=0.9999;平均回收率为100.2%,RSD为1.89%(n=6);黄芩苷在0.0405 6~0.405 6μg范围内线性关系良好,r=0.999 9;平均回收率为99.7%,RSD为2.22%(n=6)。结论本方法操作简便,结果准确、可靠,能有效地控制制剂的质量。