组织芯片技术在原位杂交中的应用

组织芯片 (ｔｉｓｓｕｅｃｈｉｐ)是近年来新兴的一项生物芯片技术。本研究应用这一技术和原位杂交技术 (ｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａ ｔｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ,ＩＳＨ)检测 2 30例人体多种常见肿瘤中端粒酶ｈＴＥＲｍＲＮＡ和ｈＴＥＲＴｍＲＮＡ的表达。1　材料与方法1.1　标本来源　 2 30例标本均取自 1999年西安交通大学第二医院病理科外检人体标本 ,其中恶性肿瘤 2 0 7例 ,良性肿瘤 13例 ,正常对照组织 10例。1.2　组织芯片制备　按照本研究室建立的制备方法制备 4× 6规格的组织芯片 (容量为 2 3份组织样本 /张 )。其制备方法…     

提高组织芯片切片成功率的方法和体会

Ｋｏｎｏｎｅｎ等[1] 于 1998年创立了真正意义的组织芯片或称组织微阵列 (ｔｉｓｓｕｅｍｉｃｒｏａｒｒｙ ,ＴＭＡ)技术 ,将直径 0 .6ｍｍ的乳腺癌小组织样本 ,以阵列方式包埋于同一块 2 0ｍｍ× 45ｍｍ的石蜡块中 ,然后进行切片 ,用于同一实验指标的研究。而由此产生的蜡块切片可同时用于ＤＮＡ、ＲＮＡ或蛋白水平的原位组织学研究 ,使基因、蛋白水平的研究与组织形态学特征相结合。目前已应用到肿瘤的进展、预后、早期诊断以及与ｃＤＮＡ基因芯片相结合 ,进行高表达基因的定位研究 ,研究报道的有乳腺癌[1 3] 、前列腺癌[4 6 ] 、脑肿瘤…     

组织芯片

组织芯片 (ｔｉｓｓｕｅｃｈｉｐ)是将数十至上千个小组织整齐地排放在一张载玻片上而制成的组织切片。它分为多组织片[1] (ｍｕｌｔｉ ｔｉｓｓｕｅｓｅｃｔｉｏｎ) ,组织阵列 (ｔｉｓｓｕｅａｒｒａｙ,ＭＴＡ ,最多可含 6 0个直径 2ｍｍ的组织 )和组织微阵列[2 ] (ｍｉｃｒｏｔｉｓｓｕｅａｒｒａｙ,最多可含 10 0 0个直径 0 6ｍｍ的组织 ) (图 1,2 )。组织芯片的特点是 :体积小 ,信息含量大 ,一次性实验即可获大量结果(ｈｉｇｈ ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ)。组织芯片可用于组织中的ＤＮＡ、ＲＮＡ和蛋白质的定位分析和检测。像普通组织切片…     

组织芯片研究领域中的几个问题

自 1998年Ｋｏｎｏｎｅｎ等[1] 报道组织微阵列技术 (ｔｉｓｓｕｅｍｉｃｒｏａｒｒａｙｓ) ,也称组织芯片 (ｔｉｓｓｕｅｃｈｉｐ)技术以来 ,组织芯片作为不同于基因芯片和蛋白芯片的一种新型生物芯片 ,成为生物芯片研究领域新的热点。目前 ,组织芯片作为生命科学中进行原位组织学研究的重要技术已经引起重视 ,并逐渐成为分子病理学家和病理解剖学家最为看好的重要研究工具之一 ,除广泛应用于肿瘤病理学研究的各个方面[2 ] ,还可用于肿瘤特异性基因的筛选和功能基因组学的研究 ,正戏剧性地改变着我们进行各种疾病的研究方式[3] 。组织芯片…     

非小细胞肺癌p63基因的表达及其与3号染色体位点变化的关系

目的　探讨非小细胞肺癌 p6 3基因的蛋白表达水平及其与定位在 3号染色体 2 7～ 2 9区域改变的关系。 方法　应用比较基因组杂交 (CGH)技术对 70例原发性肺鳞状细胞癌和肺腺癌标本进行染色体不平衡性分析。采用组织芯片技术构建12 2例原发性非小细胞肺癌石蜡包埋标本组织芯片 ,并采用免疫组织化学方法检测p6 3蛋白表达情况。比较 p6 3蛋白表达及其与 3号染色体末端改变的关系。结果　CGH分析结果发现 ,30例鳞状细胞癌 2 4例出现 3q2 7～ 2 9区域DNA拷贝数目的增加 ,4 0例腺癌仅 8例发现 3q2 7～ 2 9区域DNA获得。p6 3免疫组化染色结果显示 :5 0例 (84 75 % )鳞状细胞癌免疫组化染色为阳性 ;3例大细胞肺癌中 2例 (6 6 6 6 % )为阳性反应 ;腺癌中仅有 1例 (1 6 7% )为阳性。p6 3蛋白的阳性表达率与患者的年龄、性别、肿瘤的分级、肿瘤的转移以及生存率无关 (P >0 0 5 )。p6 3免疫组化阳性率与 3q2 7～ 2 9区域的改变比较结果显示 :p6 3免疫组化阳性反应与 3号染色体长臂 2 7～ 2 9区域的DNA扩增呈正相关 (P <0 0 1)。结论　p6 3基因的扩增与肺鳞状细胞癌发生和发展有密切的关系     

肿瘤侵袭诱导基因蛋白在正常及癌组织中的表达及意义

一、材料与方法1.组织标本 :2例男性 (2 8岁和 48岁 ,均为创伤死亡 )尸检组织切片 (肝、肾、肺、胃、胰、心肌等 ) ,由第三军医大学新桥医院病理科提供 ;5 6例肿瘤组织 (男性 39例 ,女性 17例 ,患者年龄 19～ 78岁 ) ,随机取自本院 1997年 1～ 12月病理科活检材料 ,其中包括胃癌 2 2例 ,食管癌 10例 ,乳腺癌 9例 ,肝癌、肺癌及甲状腺癌各 3例 ,肾癌、胆囊癌各 2例 ,子宫内膜腺癌和膀胱移行细胞癌各 1例。所有标本均经 10 %甲醛溶液固定 ,石蜡包埋 ,切片厚 5 μｍ。2 .肿瘤侵袭诱导基因 (Ｔｉａｍ 1)单克隆抗体的制备[1] :用反转录ＰＣＲ扩增…     

建立科研使用FFPE肿瘤组织库的几点建议

福尔马林固定石蜡包埋( formalin fixed paraffn embed-ded, FFPE)是病理科普遍采用的组织处理和保存方法。组织标本经取材、固定、脱水、透明、浸蜡以及包埋等程序处理之后,可长时间保存[1]。《临床技术操作规范—病理学分册》(以下简称《操作规范》)要求, FFPE 组织需保存15年[2]。该操作由于流程简单,易于掌握,可以实现高度自动化处理,且代价低廉,适合大多数医院病理科开展。目前, FFPE组织已广泛应用于病理科的常规病理工作中。     

应用组织微阵列技术分析各期鼻咽癌组织p16的表达

目的　构建高通量组织微阵列 /组织芯片 (high throughputtissuemicroarray/tissuechip) ,明确p16基因表达与鼻咽癌的相关性及探讨组织芯片技术的可行性。方法　用组织阵列仪制备按不同临床分期排布的组织芯片 ,然后用免疫组织化学LSAB法检测一张组织芯片上 2 5 9例鼻咽活检组织样本中p16蛋白表达 ,并分析p16蛋白表达在鼻咽癌组织的分布状况及其与临床分期的相关性。结果在正常鼻咽黏膜组织、Ⅰ～Ⅳ期及未分期鼻咽癌组织中p16蛋白的缺失情况分别为 0 / 18、3/ 3、86 3%(38/ 44 )、86 8% (5 9/ 6 8)、82 1% (2 3/ 2 8)、88 8% (87/ 98)。鼻咽癌组织中p16蛋白表达率低于鼻咽非癌组织 (χ2 =82 5 8,P <0 0 0 1) ,p16蛋白表达与鼻咽癌的临床分期无显著相关性 (χ2 =0 0 9,P =0 76 9)。结论　鼻咽癌中p16蛋白的高频缺失提示p16基因在鼻咽癌的发生发展中起重要作用 ,而这种表达缺失在早晚期鼻咽癌中的一致性又提示p16蛋白缺失是鼻咽癌形成过程中的一个早期事件。应用组织芯片大规模高效检测临床组织样本是可行的 ,具有快速、方便、经济、准确的特点。     

高通量肿瘤组织-细胞系芯片技术平台的建立及应用

1998年Ｋｏｎｏｎｅｎ等[1] 首次介绍的组织芯片 (ｔｉｓｓｕｅｍｉｃｒｏａｒｒａｙ)技术给广大病理学和相关学科领域的研究人员带来了极大方便 ,其中以在免疫组织化学和原位杂交技术中的应用最为普遍。本研究室于 1999年引进了相关仪器设备 ,国内首家建立了组织 细胞系芯片 (ｔｉｓｓｕｅ ｃｅｌｌｌｉｎｅｓｍｉｃｒｏａｒｒａｙ)技术平台并成功用于科研工作。此平台具有高通量 (一个载玻片上可排列 10 0 0个组织或细胞样品 )、经济、省时省力、易于标准化、可重复性高等优点 ,现介绍如下。一、材料和方法(一 )标本1.组织标本 :35对肝细…     

金属硫蛋白在人不同结肠组织中的表达

目的 :研究金属硫蛋白 (MT)在人正常结肠组织和结肠癌组织中的表达及其生物学意义。方法 :应用免疫组织化学方法检测 1 0例人正常结肠组织和 2 0例结肠癌组织标本中金属硫蛋白的表达水平 ,比较MT表达的差别。结果 :MT在人正常结肠组织和结肠癌组织中的阳性率均为 1 0 0 % ,用HPISA - 1 0 0 0图像分析系统测得其不同的平均阳性灰度值 (AGA)分别为 6 7 5 4± 7 4 6 ,93 71± 9 1 2。MT在人正常结肠组织和结肠癌组织中的表达有显著性差异 (p <0 0 5 )。结论 :MT在人正常结肠组织和结肠癌组织中的不同表达显示MT与结肠癌关系密切 ,对结肠组织的恶性变具有一定的意义     

一种特异的EBER-1原位杂交探针检测石蜡组织中的EB病毒

我们自行设计EBER 1探针 ,原位检测HL和NPC蜡块组织中的EB病毒 ,取得了满意的效果。现将具体方法介绍如下 ,以便推广应用。1　材料和方法1 1　材料　石蜡包埋标本分别取自南方医院、广州总医院以及广州市儿童医院病理科 ,连续切片 (3～ 4 μm厚 ) ,粘贴于经 2 %的 3 氨基丙基三乙氧基甲硅烷 (3 aminopropyltriethoxsilane ,APES)处理过的载玻片上备用。以10例NPC标本作为阳性对照。1 2　探针制备　从GenBank中找出EBER1的全长序列 (gi|16 32 6 314 |AB0 6 5 135 )。用Primer2 2软件设计探针 ,序列为 :5′CTACAGCCACACACG…     

全自动密闭式组织脱水机的使用改进

全自动密闭式组织脱水机以其卓越的性能和良好的处理效果 ,特别是安全、高效 ,将逐渐被各级医院病理科广泛使用。我科自 1997年使用全自动密闭式组织脱水机以来 ,标本的处理效果明显改观 ,切片质量显著提高。一、材料与方法1.仪器和设备∶(1)进口全自动密闭式组织脱水机 ,附不锈钢脱水篮 2只 ,分别可容 15 0个包埋盒。 (2 )塑料包埋盒。2 .试剂∶(1)ＡＡＦ固定液 :70 %乙醇 85ｍｌ,冰乙酸 5ｍｌ,4 %甲醛液 10ｍｌ。 (2 ) 95 %乙醇 ,(3)无水乙醇 ,(4)硬脂酸 ,(5 ) 5 8～ 6 0℃熔点石蜡。3.处理过程∶新鲜组织取材后 ,放入写有检验号码的塑料…     

口腔鳞癌及癌前病变组织中p27、p53蛋白的表达

目的　探讨 p2 7、p5 3蛋白表达在口腔鳞癌发生发展中的意义。 方法　应用免疫组化S P法分别检测 9例口腔正常黏膜 ,11例单纯性增生、2 6例癌前病变及 5 4例鳞癌组织中p2 7、p5 3蛋白的表达。 结果　p2 7蛋白在口腔正常黏膜和单纯性增生组织中呈高表达 ,在癌前病变和鳞癌组织中高 (低 )表达率分别为 6 1 5 % (38 5 % )、2 5 9% (6 1 1% ) ,在鳞癌中阴性表达率为 13% ;p2 7蛋白的表达与鳞癌的组织分化程度、临床分期相关 (P <0 0 5 )。p5 3蛋白在正常黏膜、单纯性增生及轻、中度不典型增生中未见表达 ,在重度不典型增生和鳞癌中可见 2 8 6 %和 4 8 1%的阳性表达 ,二者差异有高度显著性 (P <0 0 1) ;在鳞癌中 p5 3蛋白表达与组织分化程度相关 (P <0 0 5 ) ;p2 7和p5 3表达在鳞癌中呈负相关 (P <0 0 1)。 结论　p2 7蛋白表达的减少在口腔鳞癌的发生发展中起着重要作用 ,并与其预后因素密切相关。p5 3蛋白的表达在癌前病变向鳞癌转变过程中起重要作用。综合分析 p2 7、p5 3表达有助于口腔鳞癌的早期诊断和患者预后的估计。     

食管鳞癌组织中人乳头状瘤病毒感染情况检测

研究已证实人乳头状瘤病毒 (ＨＰＶ)与女性生殖道某些肿瘤的发生关系密切[1] ,人体许多部位的肿瘤中都检出过ＨＰＶ ,少数学者也对食管癌中的ＨＰＶ感染进行过研究 ,但文献报道研究结果差别很大[2 ,3 ] 。本研究应用ＰＣＲ法对 1 0 0份食管癌标本中的ＨＰＶ感染情况进行检测 ,并结合食管癌的病理大体分型进行分析。一、材料与方法1 材料 :1 0 0份石蜡包埋的食管癌组织标本来自洛阳医学高等专科学校附属医院病理科 1 984～ 1 994年间外检材料。按照食管癌的病理大体分型 ,随机选择溃疡型、蕈伞型、缩窄型和髓质型食管癌各 2 5份。2 通用引…     

实验动物肝组织制片和胶原纤维染色方法的改进

在组织制片中 ,实验动物免疫损伤性肝纤维模型组织切片难度较大 ,因此我们改变了组织固定、脱水、透明、浸蜡和切片与Ｈ、Ｅ染色 ,提高了制片质量。特别是根据实验病理组织形态变化的要求 ,进行二种特殊对比染色 ,所选用和改进的显示胶原纤维的Ｓｉｒｉｕｓｒｅｄ(天狼星红 ) [1] 和Ｍａｓｓｏｎ三色染色法[2 ] ,已得到了较好的染色效果。1　材料和方法1 1　肝组织采用 1 5 %　中性甲醛固定液 ,得到了较好的固定效果。解剖后的动物大鼠肝脏标本切开 3～ 5块 ,置固定液中 5小时后 ,取材 0 2～ 0 .3ｃｍ厚度 ,再固定 5～ 1 0小时可得到充分…     

RT-PCR法检测软组织肿瘤石蜡包埋组织中小片段mRNA

有研究报道ＲＴ ＰＣＲ方法可以在石蜡包埋组织中检测融合基因表达 ,并可用于诊断和鉴别诊断中〔1〕。我们采用ＲＴ ＰＣＲ方法 ,检测了一组软组织肿瘤石蜡包埋组织中看家基因卟吩胆色素原脱氨酶 (ｐｈｏｓｐｈｏｂｉｎｉｇｅｎｄｅａｍｉｎａｓｅ ,ＰＢＧＤ)小片段ｍＲＮＡ表达情况 ,探讨软组织肿瘤石蜡组织中小片段ｍＲＮＡ保存情况及ＲＴ ＰＣＲ的可行性。1　材料与方法1 1　材料　收集复旦大学肿瘤医院和华山医院病理科1981～ 2 0 0 0年间软组织肿瘤 78例 ,均为 10 %福尔马林液固定、石蜡包埋组织。包括滑膜肉瘤 37例、恶性周围神经鞘膜…     

p53、p63及p73在皮肤血管瘤组织中的表达

目的　为探讨p5 3p6 3及p73蛋白在皮肤血管瘤组织中的表达及意义。方法　采用免疫组织化学S P法和图像分析技术检测 4 0例血管瘤组织和 2 0例正常皮肤组织中p5 3、p6 3及p73基因的表达。结果　在增生期血管瘤、退化期血管瘤和正常皮肤组之间 ,p73蛋白免疫组化阳性反应颗粒的平均光密度分别为 6 4 0 8± 2 15 1、1 0 73± 0 5 16和 0 95 3± 0 12 0。p6 3蛋白免疫组化阳性反应颗粒的平均光密度分别为 8 2 71± 1 95 3、0 92 3± 0 191和 0 92 0± 0 187。p5 3蛋白免疫组化阳性反应颗粒的平均光密度分别为 7 2 4 0± 1 874、0 934± 0 187和 0 92 3± 0 16 5。增生期血管瘤与退化期血管瘤、正常皮肤组分别组比 ,p73、p6 3及p5 3阳性表达的差异均有高度显著性差异 (P <0 0 0 1) ,消退期血管瘤与正常皮肤组之间 ,p73、p6 3及p5 3阳性表达差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　在增生期血管瘤组织中p73、p6 3及p5 3呈高表达 ,促进了内皮细胞的增殖 ,是导致血管瘤发生、发展的主要因素     

人端粒酶RNA在成釉细胞瘤中的原位表达

8成釉细胞瘤 (ａｍｅｌｏｂｌａｓｔｏｍａ)约占牙源性肿瘤的5 9 3% [1] ,ＷＨＯ把成釉细胞瘤定为良性肿瘤 ,但由于其局部呈侵袭性生长 ,易复发 ,可恶变 ,可转移 ,有学者称之为交界性肿瘤。牙源性角化囊肿 (ｏｄｏｎｇｔｏｇｅｎｉｃｋｅｒａｔｏｃｙｓｔ,ＯＫＣ)由于其少见的生长方式和较高的复发率[1] ,日益受到人们的重视。我们采用原位杂交法对成釉细胞瘤、牙源性角化囊肿进行了ｈＴＲｍＲＮＡ表达的检测 ,并探讨其与成釉细胞瘤临床生物学行为的关系。一、材料与方法1.组织标本 :取自中国医科大学附属第一医院病理科1996～ 2 0 0 1年存…     

Graves病和桥本甲状腺炎甲状腺组织中凋亡调节蛋白的表达

越来越多的研究表明细胞凋亡参与自身免疫性疾病的发病过程[1,2 ] 。自身免疫性甲状腺疾病的Graves病 (Graves′disease ,GD)和桥本甲状腺炎 (Hashimoto′sthyroiditis ,HT)甲状腺均发生肿大 ,而病理形态、功能及疾病的临床表现迥异 ,其机制尚不清楚。我们对GD及HT甲状腺组织中凋亡调节蛋白Fas、FasL、bcl 2和bax表达进行了对照研究 ,以探讨其与自身免疫性甲状腺疾病发病机制的关系。一、材料与方法1.材料 :5 4例 (男 7例 ,女 4 7例 ,年龄 17～ 6 5岁 )GD及4 1例 (男 12例 ,女 2 9例 ,年龄 2 4～ 6 3岁 )HT患者甲状腺标本来源于我院…     

用蛋白质芯片联合检测肺癌患者血清中的肿瘤标志物

肿瘤标志物的检测不仅有助于恶性肿瘤的早期诊断 ,也是监测病情的依据之一[1] 。蛋白质芯片是一种高通量、高灵敏度、高特异性且微型化的蛋白质分析技术[2 ,3 ] ,本实验采用肿瘤诊断用蛋白芯片试剂盒 ,对肺癌患者、正常人及疾病对照组血清中的肿瘤标志物ＣＥＡ ,神经元特异烯醇化酶 (ＮＳＥ) ,ＣＡ2 4 2 ,ＣＡ15 3进行了联合检测。1　材料与方法1 1　血清样品来源　肺癌组 :4 0例经临床病理确诊但都未经治疗的肺癌者 ;正常对照组 :15 9例年龄小于 30岁的检康体检者、2 0 6例年龄在 30岁至 6 0岁的健康体检者、92例年龄大于 6 0岁的健康体检…