消化道恶性肿瘤患者CD4^＋ CD25^＋ Treg的检测及意义

目的：探讨消化道恶性肿瘤患者外周血CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞（Regulatory T cell,Treg）水平的特点及其临床意义。方法：采用流式细胞术对60例消化道恶性肿瘤患者与30名健康体检者的外周血CD4^＋ CD25^＋Treg水平进行检测。结果：消化道恶性肿瘤外周血CD4^＋ CD25^＋ Treg占总T细胞7.16%±3.37%,与对照组CD4^＋ CD25^＋ Treg4.52%±1.76%比较有显著性差异（P〈0.05）。结论：恶性肿瘤患者外周血CD4^＋ CD25^＋Treg水平的升高,与恶性肿瘤免疫功能低下及肿瘤的发生、发展密切相关。     

慢性肝脏疾病中CD3^-CD161^＋NK和CD3^＋CD161^＋NKT细胞亚群的变化研究

目的探讨CD3^-CD161^＋NK、CD3^＋CD161^＋NKT细胞在慢性肝炎／肝硬化及肝细胞癌患者肝脏组织及外周血中表达及意义。方法利用流式细胞仪对31例肝细胞癌患者、59例慢性肝炎／肝硬化患者肝脏组织及外周血、15例正常肝脏组织、48例正常人外周血中的CD3^-CD161^＋NK和CD3^＋CD161^＋NKT进行定量分析。结果慢性肝炎／肝硬化组CD3^-CD161^＋NK细胞[（13．4±1．3）％]和肝细胞癌癌周组CD3^-CD161^＋NK细胞[（16．7±4．8）％]及远离肝癌组的肝脏组织CD3^-CD161^＋NK细胞[（22．0±4．4）％]与正常肝脏组织CD3^＋CD161^＋NK细胞[（35．1±7．2）％]相比,肝细胞癌癌周肝脏组织内含量最低（t值分别为2．301、2．137、2．034,P〈0．05）;外周血中肝细胞癌组CD3^-CD161^＋NK细胞f（11．6±6．3％）]、CD3^＋CD161^＋NKT细胞[（14．7±6．2）％]与慢性肝炎／肝硬化组CD3^-CD161^＋NK细胞[（10．8±1．7）％]、CD3^＋CD161^＋NKT细胞[（12．5±0．8）％]、正常对照组CD3^＋CD161^＋NK细胞[（7．5±0．8）％]、CD3^-CD161^＋NKT细胞[（13．8±1．7）％]相比肝癌组CD3^-CD161^＋NKT细胞含量最高（t值分别为2．134,2．099,P〈0．05）,肝癌组CD3^＋CD161^＋NKT细胞含量最高（t值分别为2．125,2．154,P〈0．05）。结论由于NK细胞及NKT细胞数量减少或／和活性降低,使肿瘤细胞逃逸了免疫监视,可能促进了肿瘤的发生、发展及转移。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞和肿瘤免疫

近期研究发现一个有独特免疫调节功能的T细胞亚群：CD4^ CD25^ 调节性T细胞，不仅能抑制自身免疫性疾病发生，还可能参与肿瘤免疫的调节。这群细胞具有免疫无能和免疫抑制特性，通过与细胞直接接触发挥作用，而不依赖于其分泌的细胞因子。肿瘤环境中CD4^ CD25^ 调节性T细胞比例增加，导致肿瘤免疫失调，去除这群细胞可有效诱导肿瘤免疫，为肿瘤治疗提供了一种新的方法。     

CD4+ CD25+调节性T细胞AICD机制的研究

目的探讨CD4^＋CD25^＋调节性T细胞活化诱导的细胞死亡（AICD）发生的机制。方法CD4^＋CD25^＋T细胞以磁性细胞分离器（MACS）从BALB／c小鼠或DO11．10小鼠的静息T细胞分离纯化。体外细胞增殖抑制实验证实其免疫调节作用。CD4^＋CD25^＋T细胞的AICD以CD3／CD28单克隆抗体活化或以特异性OVA323-339肽、抗原提呈细胞活化等两种方法获得。CD4^＋CD25^＋T细胞凋亡相关基因的表达通过实时定量PCR检测。流式细胞仪检测细胞的凋亡率。进一步观察FasL中和抗体、TRAIL中和抗体及caspase抑制剂zVAD-fmk对CD4^＋CD25^＋T细胞凋亡的影响。结果MACS成功分离CD4^＋CD25^＋T细胞，纯度可达98％，该细胞可特异性表达Foxp3基因，能明显抑制效应性T细胞的体外增殖。CD3／CD28抗体以及OVA特异性抗原活化8d的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞AICD达39％～45％。活化前后的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞死亡受体家族表达发生明显变化；FasL、TRAIL中和抗体及zVAD-fmk可明显抑制CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的凋亡。结论FasL／Fas及其他凋亡相关分子可能参与了CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的凋亡。     

CD4^＋CD25^＋T细胞与移植免疫耐受

调节性T细胞是机体维持自身耐受的重要组成部分.CD4^＋CD25^＋T细胞以持续高表达CD25为特征,可通过细胞间直接接触或分泌TGF-β、IL-10来发挥抑制功能.它广泛参与自身免疫耐受、肿瘤免疫、移植免疫.现就其发育、特性、发挥功能的机制以及在移植免疫耐受中的作用和应用前景作一综述.     

尖锐湿疣患者皮损及外周血CD4^＋和CD8^＋细胞免疫功能的检测

目的通过对尖锐湿疣（CA）患者皮损及外周血CD4^＋和CD8^＋细胞免疫功能检测的分析,探讨尖锐湿疣患者细胞免疫功能的变化及其对CA的影响。方法通过流式细胞仪（FCM）对40例CA患者及20名正常人外周血进行反映细胞免疫功能的T淋巴细胞亚群的检测,实验采用免疫组化的方法对40例CA皮损样本中CD4^＋和CD8^＋细胞的数目进行检测。结果CA患者外周血及皮损较正常对照组中的CD8^＋细胞百分率增加．CD4^＋细胞百分率及CD4^＋／CD8^＋比值降低。结论CA患者存在全身和局部的细胞免疫功能低下,而且局部皮损细胞免疫功能低下可能在CA的发病中具有重要作用。     

手足口病患儿T淋巴细胞亚群与CD3^＋CD4ˉCD8ˉ双阴性调节性T细胞的检测及其临床意义

目的探讨外周血T淋巴细胞亚群及CD3^＋CD4ˉCD8ˉ双阴性调节性T细胞在手足口病病人发病中的临床意义。方法采用流式细胞术检测了46例手足口病患者以及17例健康体检者外周血T细胞亚群CD3^＋、CD3^＋CD4ˉCD8^＋、CD3^＋CD4^＋CD8^＋、CD3^＋CD4^＋CD8ˉ与CD3^＋CD4ˉCD8ˉ双阴性调节性T细胞水平。结果与正常对照组相比,手足口病患者组CD3^＋、CD3^＋CD4ˉCD8’、CD3^＋CD4ˉCD8ˉ双阴性调节性T细胞的百分率降低（P值分别为0．008、0．050、0．025）。CD3^＋CD4^＋CD8^＋、CD3^＋CD4^＋CD8ˉ百分率以及CD4／CD8比值差异无统计学意义（P值分别为0．847、0．775、0．149）,以上各细胞亚群的百分率以及CD4／CD8比值在年龄与性别方面差异无统计学意义。结论手足口病患者CD3^＋CD4ˉCD8ˉ双阴性调节性T细胞、CD3^＋、CD3^＋CD4ˉCD8^＋异常变化提示其免疫功能异常。     

不同结核病患者CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T细胞表达的变化

目的分析不同结核病患者体内CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T细胞（Tr）表达的变化,探讨其在结核病免疫中的作用。方法对33例结核病患者以及同期30例健康体检者运用流式细胞术检测其外周血CD4^＋CD25“。“和CIM^＋CD25^＋Foxp3^＋Tr表达情况。结果结核组CD4^＋CD25^high和CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋Tr检测结果分别为（8．84±2．55）％、（6．30±1．38）％,高于对照组（7．09±1．09）％、（5．22±0．64）％,差别有统计学意义（t=3．57,4．01,P〈0．01）;痰涂阳患者CD4^＋CD25^high和CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋Tr检测结果分别为（10．52±3．27）％、（7．18±1．77）％,高于痰涂阴患者（8．21±1．94）％、（5．97±1．06）％,两组问差别均具有统计学意义（t=2．51,2．42,P〈0．05）;初治患者和复治患者间CD4^＋CD25^high和CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋检测结果无统计学意义（t=0．03,0．02,P〉0．05）。结论结核病患者体内CD4^＋CD25^high和CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋Tr检测结果高于健康人群,提示患者体内存在免疫系统抑制状态。     

CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋调节性T细胞在与原因不明反复自然流产的相关性研究

目的探讨外周血中CD4＋CD25＋FOXP3＋调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋Tr）在原因不明反复自然流产（URSA）发病中的作用。方法应用三色荧光标记流式细胞术检测21例原因不明反复自然流产妇女（URSA组）、20例正常妊娠妇女（正常对照组）外周血中CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋Tr及T细胞亚群水平的表达情况。结果URSA组妇女外周血中CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋Tr表达率为（1.36±0.61）%,明显低于正常对照组（5.59±1.02）%,两组比较差异显著（P（0.05）,但两组相比较外周血中T细胞亚群CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋、CD4^＋/CD8^＋水平无显著差异（P（0.05）。结论原因不明反复自然流产的发生可能与患者外周血中CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋Tr数量减少有关。     

介导CD4+CD25+调节性T细胞发育与功能的一个关键基因--Foxp3

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞是天然产生的调节性T细胞的重要亚群之一，在维持免疫系统稳态中发挥重要的作用。目前有关CD4^＋CD25^＋调节性T细胞分化发育的确切机制还不清楚。最近的研究发现Foxp3基因与CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的分化发育和免疫调节功能的关系密切，进而提示Foxp3可能是CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的一个特征性标志。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在α-GalCer预防T1D中的作用机制探讨

目的：研究CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在α-GalCer预防NOD小鼠T1D中的作用机制。方法：流式细胞仪分析反复注射α-GalCer的NOD小鼠胰腺引流淋巴结（PLN）CD4^＋CD25^＋T细胞频率,CD4＋CD25＋T细胞中FoxP3＋细胞的比例,CD4＋CD25＋FoxP3^＋T细胞的FoxP3平均荧光强度（MFI）;检测CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的抑制功能。用Anti-CD25阻断CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的功能。结果：α-GalCer处理过的小鼠的CD4^＋CD25^＋T细胞中FoxP3^＋细胞的比例增加,CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋T细胞的FoxP3平均荧光强度（MFI）增强,CD4^＋CD25^＋Treg细胞的抑制功能增强。采用CD4^＋CD25^＋调节性T细胞功能阻断剂后,α-GalCer不能预防T1D的发生。结论：CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在α-GalCer预防NOD小鼠T1D中数量增加、功能增强,且是必需的。     

儿童晚期神经母细胞瘤自身造血干细胞移植疗效评估

目的评价自身造血干细胞移植（ASCT）和CD34^＋细胞分选的ASCT对晚期神经母细胞瘤（NB）的疗效。方法回顾性分析2001年6月至2007年4月在上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心诊断为Ⅲ、Ⅳ期NB并完成治疗随访8个月以上患儿的临床资料,比较传统化疗与ASCT和CD34^＋细胞未分选移植与分选移植的疗效。用荧光定量PCR方法检测CD34^＋细胞分选前后酪氨酸羟化酶（TH）mRNA表达,监测NB的微小残留（MRD）,并评估分选效果。结果55例NB患儿入组,其中Ⅲ期14例,Ⅳ期41例。Ⅲ期中的9／14例和Ⅳ期中的18／41例接受传统化疗;Ⅲ期中的5／14例和Ⅳ期中的23／41例接受ASCT。Ⅳ期13／23例接受ASCT治疗患儿移植物经CliniMACS行CD34^＋细胞分选处理。所有移植患儿均以卡铂、依托泊苷和美法仑行预处理,平均采得有核细胞（7．1±2．5）×10^8·kg^-1,CD34^＋细胞（4．0±1．5）×10^6·kg^-1,无一例因移植相关并发症死亡。随访患儿的生存时间及复发率：①Ⅲ期NB：化疗组平均随访33．5个月,3／9例（33％）复发;移植组平均随访37．0个月,1／5例（20％）复发,两组的中位无病生存时间差异无统计学意义,（37．0±15．7）个月US（18．0±29．9）个月,P=0．446。②Ⅳ期NB：化疗组平均随访20个月,13／18例（72％）复发;移植组平均随访29个月,14／23例（61％）复发,两组的中位无病生存时间差异有统计学意义,（24．0±5．4）个月vs（36．0±2．8）个月,P=0．006。③CD34^＋细胞分选移植：未分选组平均随访27．8个月,7／10例（70％）复发;CD34^＋细胞分选组平均随访30．0个月,7／13例（54％）复发,两组的中位无病生存时间差异无统计学意义,（34．0±11．8）个月US（36．0±5．1）个月,P=0．722。4例移植患儿CD34^＋细胞分选前后的标本同时进行THMRD检测,结果显示移植前TH阳性的2例标本经分选后全部转阴。结论ASCT能显著延长Ⅳ期NB患儿的长期生存时间,但对Ⅲ期NB患儿的疗效不显著。CD34^＋细胞分选能达到纯化NB细胞的作用,但可能因病例数较少,尚不能显示出ASCT临床优势。     

HBV转基因小鼠CD4＋CD25＋调节性T细胞免疫抑制功能的研究

目的通过对HBV转基因小鼠CD4＋、CD4＋CD25＋调节性T细胞数量和免疫抑制功能的研究,探讨CD4＋CD25＋调节性T细胞在乙肝免疫耐受中的作用。方法用流式细胞术对12只HBV转基因小鼠和12只正常小鼠外周血CD4＋、CD4＋CD25＋调节性T细胞的频率进行检测;磁珠分选小鼠脾CD4＋CD25-T细胞和CD4＋CD25＋T细胞,分为HBsAg刺激组和ConA刺激组体外单独和共培养,ELISA方法检测诱生的细胞因子IL-2。结果与正常小鼠比较,HBV转基因小鼠外周血CD4＋、CD4＋CD25＋调节性T细胞数量差异无统计学意义（P〉0.05）。HBsAg刺激组,CD4＋CD25-T细胞单独或共培养,HBV转基因小鼠CD4＋CD25-T细胞诱生IL-2水平显著低于正常小鼠（P〈0.01）;ConA刺激组,HBV转基因小鼠CD4＋CD25-T细胞诱生IL-2水平与正常小鼠相比则差异无统计学意义（P〉0.05）;两组小鼠CD4＋CD25-T细胞单独培养时诱生IL-2水平均显著高于共培养（P〈0.01）。结论与正常小鼠比较,HBV转基因小鼠CD4＋、CD4＋CD25＋调节性T细胞数量和免疫抑制功能差异无统计学意义,但T细胞水平对乙肝病毒存在特异性免疫耐受。CD4＋CD25＋调节性T细胞可抑制CD4＋、CD8＋T细胞。     

不同培养体系对脐带血造血干细胞扩增的影响

目的探讨不同培养体系对造血干细胞的体外扩增及其表型的改变。方法新鲜分离人脐带血单个核细胞（MNC），免疫磁珠法分选CD34^＋造血干细胞（HSC），计数富集得到的CD34^＋细胞，平均分为3组，每组含CD34^＋细胞2．2×10^5：A组（HSC＋CK）CD34^＋细胞接种于Stemline^TMⅡ无血清培养基中．加入早期作用因子FST组合（SCF、FL和TPO，质量浓度50ng／ml的SCF、质量浓度100ng/ml的TPO和FL），并于接种0d添加质量浓度20ng／mlIL-3：B组（HSC＋MSC）CD34^＋细胞接种于含MSC feeder的培养瓶．加入Stemline^TMⅡ无血清培养基：C组（HSC＋MSC＋CK）CD34^＋细胞接种于含MSC feeder的培养瓶．加入Stemline^TMⅡ无血清培养基，加入早期作用因子FST组合首剂添加IL-3（剂量同A组）。在培养后4、7、10、14d计数有核细胞总数，流式细胞术检测扩增细胞免疫表型的改变。结果0～14d培养后MNC细胞扩增数C组（HSC＋MSC＋CK）〉A组（HSC＋CK）〉B组（HSC＋MSC），P〈0．01。3组间CD34^＋细胞比例B组（HSC＋MSC）〉C组（HSC＋MSC＋CK）〉A组（HSC＋CK），P〈0．01。CD34^＋细胞绝对数也出现了明显增加，其中C组（HSC＋MSC＋CK）增加最为明显．其次是A组（HSC＋CK）。其中A组（HSC＋CK）培养4d较0d（14．68％）CD34^＋CD38^-细胞有明显增加（62．71％，P〈0．05），C组（HSC＋MSC＋CK）CD34^＋CD38^-细胞也略有增加（23．99％）：培养7d时，A组（HSC＋CK）、C组（HSC＋MSC＋CK）CD34^＋CD38^-细胞数明显下降，分别为4．44％和1.38％，而B组（HSC＋MSC）CD34^＋CD38^-细胞上升为18．92％，与0d时比较P〈0．05，与A组（HSC＋CK）、C组（HSC＋MSC＋CK）比较P〈0．05。结论MSC和细胞因子的联合应用，一方面使得总MNC细胞得到大量扩增，同时还使扩增后细胞保持CD34^＋免疫表型，培养体系中加入MSC能更有效／特异地扩增CD34^＋造虹干细胞群.     

慢性乙型肝炎患者外周血CD4＋CD25＋、CD8＋CD28＋淋巴细胞的变化及与病毒载量的关系

目的：研究慢性乙型肝炎患者外周血CD4＋CD25＋、CD8＋CD28＋淋巴细胞的表达变化及与病毒载量的关系。方法：利用流式细胞术检测50例慢性乙型肝炎患者外周血CD4＋CD25＋、CD8＋CD28＋淋巴细胞的表达率和绝对数,并与正常对照组30例进行比较;荧光定量PCR检测慢性乙型肝炎患者HBV核酸的载量,并与CD4＋CD25＋、CD8＋CD28＋淋巴细胞的表达进行相关分析。结果：慢性乙型肝炎患者的CD4＋CD25＋表达率和细胞数分别为（15.60±5.86）%和（0.34±0.13）×109/L,明显高于正常对照组（P〈0.01）;而CD4＋CD25-、CD8＋CD28＋为（21.13±5.32）%、（0.47±0.19）×109/L和（9.49±2.57）%、（0.21±0.07）×109/L,均低于正常对照组（均P〈0.01）;不同病毒载量的慢性乙型肝炎患者CD4＋CD25＋T细胞与病毒载量均呈正相关（r分别为0.552、0.588,P均〈0.01）,而CD8＋CD28＋T细胞与病毒载量均无相关性（r分别0.275、-0.092,P均〉0.05）。结论：慢性乙型肝炎患者细胞毒T细胞（CD8＋CD28＋）减少,免疫调节细胞的增加与慢性乙型肝炎患者病毒长期存在,病程迁延不愈有关。     

乙型肝炎患者外周血单核细胞CD14^＋CD16^＋亚群及HLA-DR的检测及其意义

目的：通过检测乙型肝炎患者外周血单核细胞各亚群分布情况以及HLA—DR表达水平,探讨慢性乙型肝炎患者外周血中CD14^＋CD16^＋单核细胞及HLA-DR的表达特点,以及与疾病进程之间的关系。方法：利用流式细胞仪（FCM）检测50例慢性乙型肝炎患者,其中21例免疫耐受（IT）患者、29例免疫活化（IA）患者,及31例正常人外周血CD14、CD16、HLA—DR的表达。同时调查肝功能、乙肝五项和血清HBVDNA等相应临床资料。结果：免疫活化组（IA）的CD14^＋CD16^＋亚群比率明显高于正常对照组和免疫耐受组（IT）（P〈0．01）;单核细胞CD14^＋CD16^＋亚群HLA．DR表达明显高于CD14^＋CD16^＋亚群（P〈0．01）;乙型肝炎患者CD14^＋CD16^＋单核细胞比率与ALT呈正相关（r=0．876,P〈0．01）,与HBVDNA载量成负相关（r=-0．267,P〈0．01）。结论：CD14^＋CD16^＋单核细胞可能在乙型肝炎患者外周血中参与调节针对HBV的免疫反应,CD14^＋CD16^＋单核细胞与HBV复制和肝脏炎症之间存在相关性,因此检测单核细胞CD14^＋CD16^＋亚群及HLA-DR水平对于了解乙型肝炎患者疾病进程具有重要的临床应用价值。