肝癌细胞中端粒酶逆转录酶与c-myc表达的关系

目的探讨肝细胞肝癌（HCC）中端粒酶逆转录酶（hTERT）与C—myc蛋白表达情况及其相关性。方法采用免疫组化SP法检测52例HCC癌组织及相应癌旁组织中hTERT与c—myc蛋白表达,并用TRAP—ELISA法检测上述组织中的端粒酶活性。结果HCC组织中hTERT与C—myc蛋白阳性率分别为86．5％（45／52）和78．8％（41／52）,它们与相应癌旁组织比较差异有统计学意义（P〈0．01）;HCC癌组织中端粒酶活性阳性率为80．8％（42／52）,明显高于相应癌旁组织（15．4％,8／52）;HCC癌组织中端粒酶活性、hTERT及C—myc蛋白阳性表达率两两均呈显著正相关（r=0．761,P〈0．001;r=0．654,P〈0．001;r=0．486,P〈0．001）。结论HCC癌组织中hTERT与C—myc蛋白过度表达,两者相互作用而共同参与肝癌端粒酶活性的调控。     

大肠癌及腺瘤中端粒酶催化亚单位的检测及其临床意义

目的探讨端粒酶催化亚单位(hTERT)在大肠癌发生中的作用及其在大肠癌早期诊断中的意义。方法应用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)的方法对10例正常肠黏膜、40例腺瘤及21例早期大肠癌中的hTERTmRNA进行定量检测。结果肿瘤和中、重度不典型增生腺瘤中hTERTmRNA表达量明显高于轻度不典型增生腺瘤(P<0.01);hTERTmRNA在肿瘤组织和中小腺瘤(≤2cm)中的表达量差异有显著性(P<0.05)。结论利用RTPCR的方法检测大肠肿瘤组织中hTERTmRNA的表达敏感、可行,hTERT有望成为一个有效的大肠癌早期诊断的参考指标。     

人精浆中端粒酶活性测定及其临床意义

目的 观察精浆端粒酶活性(TA)在不同类型男性不育症患者中的变化,以及与精浆生殖激素浓度、精液中精子数量和质量之间的相互关系.方法 随机选取110例男性不育症患者与30例生育者,应用酶联免疫吸附(ELISA)方法,对其精浆TA进行检测;应用放射免疫分析(RIA)方法对其精浆T、FSH、LH浓度进行检测;按WHO规定的方法,定量分析精液中的精子密度、精子活率、(a+b)级精子活力百分率、精液中白细胞数量.结果 不育症组精浆TA和T浓度均明显低于生育组(P均<0.01);不育症组精浆FSH和LH浓度均明显高于生育组(P均<0.05).在不育症组中,随着精液中精子数量的递减,TA水平亦呈现明显的逐渐下降趋势;精浆中TA与T浓度之间存在明显的相关性(P<0.01),.与FSH和LH浓度之间无相关性(P>0.05);精子活力、活率正常组精浆TA均高于不良组(P<0.01);WBC精液组精浆TA高于非WBC精液组(P<0.05).结论 精浆TA水平与精子数量和质量存在一定的相关性,同时与精子发育密切相关的睾酮浓度有协同促进作用,端粒酶在人类生殖发育中发挥着重要作用.检测精浆TA水平对于进一步了解、预防和治疗某些病理状态下所致的生殖能力低下有重要意义.     

胰腺癌组织中端粒酶活性的表达

目的　探讨端粒酶活性与胰腺癌之间的关系 ,评价其作为胰腺癌诊断新的肿瘤标志物的可能性。方法　采用重复片段扩增SYBRGreen染色法 ,对 42例胰腺癌癌患者癌组织及其癌旁组织的端粒酶活性进行检测。结果　胰腺癌组织中端粒酶阳性率为 80 .9% (3 4/4 2 ) ,而在癌旁组织中仅 7.1% (3 /4 2 )表达端粒酶活性 ,胰腺癌组织端粒酶活性显著高于癌旁组织 (P <0 .0 0 1)。端粒酶活性的表达与胰腺癌组织的肿瘤大小、淋巴结转移、病理学临床分期及分化程度相关。结论端粒酶活性是特异性较强的恶性肿瘤分子标志物 ,其检测有可能成为胰腺癌诊断和预后判断的有效指标     

前列腺癌组织中端粒酶hTRT基因表达及意义

目的 探讨前列腺癌组织中端粒酶hTRT基因的表达及意义。方法 应用原位分子杂交技术,对47例前列腺癌（PCa)、21例良性前列腺增生（BPH）和10例正常前列醇（NP）组织中微粒酶hTRT基因进行检测和定位,并运用图像分析系统对hTRT表达水平与PCa分化程度的相关性进行研究。结果 端粒酶hTRT基因在PCa中表达阳性率为93．6％,表达强度与肿瘤细胞的分化程度显著相关：未分化腺癌＞低分化腺癌＞中分化腺癌＞高分化腺癌;癌旁组织中hTRT基因表达率为8．5％,在肿瘤组织和癌旁组强中差别有极显著性意义（P＜0．01）。端粒酶hTRT基因表达水平与肿瘤细胞的分布定位一致,NP组织及BPH组织中端粒酶hTRT基因表达均为阴性。结论 原位杂交检测端粒酶hTRT基因对PCa细胞水平的定位诊断具有重要意义,端粒酶hTRT有可能成为PCa诊断有新标志物及治疗新靶点。     

端粒酶活性及其结构基因在人脑胶质瘤中的表达

目的 研究分析端粒酶活性及相关结构基因在不同级别脑胶质瘤中的表达,探讨端粒酶与脑胶质瘤的相关性及其临床意义。方法 采集40例脑胶质瘤手术切除标本、4例正常脑组织,通过半定量端粒重复序列扩增（TRAP）－银染方法检测端粒酶活性水平;通过半定量逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）检测端粒酶相关结构基因hTR、TP1、hTRT的 mRNA表达水平,结果 在40例胶质瘤标本的33例（82.5%)中检测出端粒酶活性,而在正常脑组织中无端粒酶活性的表达,不同级别脑胶质瘤之间端粒酶活性水平差异有显著性,脑胶质瘤粒酶活性水平与hTRT基因的表达呈显著正相关,而与TP1、hTR 的表达无显著相关。结论 端粒酶活性可以作为脑胶质瘤的恶性标记之一,hTRT基因是一个端粒酶的正调控结构基因,hTRT的表达与细胞永生化和恶性肿瘤形成过程中的端粒酶的激活机制有关,hTR基因是端粒酶活性必须的组分,但不影响端粒酶活性的高低。     

大肠癌肝转移肿瘤中端粒酶活性和p16基因纯合缺失

目的 研究人大肠癌肝转移肿瘤中端粒酶活性和p16基因纯合缺失及其临床意义。方法 采用TRAP银染方法和半定量多重PCR检测24例大肠癌转移肿瘤组织中端粒酶活性及p16基因的纯合缺失情况,并结合临床病理参数,进行统计学分析。结果 本组24例大肠癌肝转移肿瘤组织中检测到19例端粒酶阳性,阳性率为79．2％。端粒酶活性与转移瘤大小、肝内转移灶数目、分化程度、HBsAg以及是否伴有纤维化无关。在24例转移瘤组织中有9例标本中检测到p16基因的缺失,阳性率为37．5％,p16基因的失与端粒酶活性相关。结论 大肠癌肝转移肿瘤中端粒酶活性和p16基因异常对阐明大肠癌转移的生物学行为有重要的意义。     

甲状腺病变组织中端粒酶活性的测定及其意义

目的 了解几种常见甲状腺病变组织中端粒酶活性的区别。方法 用端粒重复序列扩增法测定19例甲状腺癌、15例甲状腺癌癌旁组织、21例甲状腺腺瘤、17例结节性甲状腺肿及13例正常甲状腺组织端粒酶的活性。结果 94．74％（18／19）的甲状腺癌表达端粒酶活性,与癌旁组织（6．67％）、甲状腺腺瘤（4．67％）、结节性甲状腺肿（0％）及正常甲状腺组织（0％）比较,差异均有显著性意义（P＜0．0001）。结论 端粒酶是甲状腺癌定性的良好标志物,且在甲状腺病变的鉴别诊断中具有重要意义。     

大肠癌患者粪便标本的端粒酶活性研究

目的 探讨通过粪便途径筛查大肠癌的可行性和新方法。方法 应用聚合酶链端粒重复扩增（PCR－TRAP）银染技术,研究了43例大肠癌患者粪便中脱落细胞的端粒酶活性表达。结果 62．8％的大肠癌患者粪便标本中有端粒酶阳性表达。患者粪便标本中端粒酶阳性表达与其大肠癌Dukes分期、淋巴结转移和癌肿部位未见显著相关（P＞0．05）。1例结肠腺瘤患者粪便标本端粒酶表达阳性,其腺瘤组织也存在端粒酶活性表达。粪便端粒酶检测的敏感性、特异性和阳性预测值分别为62．8％、95．7％和96．4％。结论 PCR－TRAP银染检测大肠癌患者粪便脱落细胞的端粒酶活性表达为改善大肠癌筛查方法和大肠癌诊断作了新的尝试。     

乳腺癌中端粒酶活性半定量及其与病理学指标的关系

目的　探讨乳腺癌中端粒酶 (TLMA)活性表达及其与病理学指标的关系。方法　运用银染端粒重复序列扩增法 (SS TRAP)检测了 5 2例乳腺癌组织中TLMA活性 ,并与癌旁、良性及正常乳腺组织进行对照 ,其结果予以半定量。结果　乳腺癌组TLMA阳性表达率为 90 .3 8% ,明显高于癌旁、良性及正常组 ( 2 8.85 %、3 1.2 5 %、0 ,P均 <0 .0 1)。Radit分析结果显示 ,乳腺癌中TL MA的表达与病理类型、临床分期、肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移状况明显相关 (P <0 .0 5 ) ,而与患者病程、年龄因素无关 (P >0 .0 5 )。结论　半定量SS TRAP法是一种简便易行、敏感特异的TLMA活性检测方法 ;TLMA的激活可能发生在乳腺癌的早期阶段 ,并在其发生发展过程中起重要作用。     

人端粒酶逆转录酶基因在骨巨细胞瘤组织的表达及其临床意义

目的 观察骨巨细胞瘤组织中人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的表达,并探讨其临床意义.方法 选择我院2008年1月至2011年12月病理科保存的标本,标本中骨巨细胞瘤84例、骨质增生骨组织32例、异位骨化组织28例,对照组为正常骨组织20例;采用原位分子杂交技术检测和定位标本中的端粒酶hTERT基因,并用图像分析系统分析其表达水平.、结果 端粒酶hTERT基因在骨巨细胞瘤组织中的表达阳性率为46.4％(39/84),表达强度与骨巨细胞瘤的分化程度明显相关(P＜0.05),表达水平与肿瘤细胞的分布定位一致;端粒酶hTERT基因在骨质增生、异位骨化和正常骨组织中的表达均为阴性.结论 骨巨细胞瘤组织的恶化可能与端粒酶hTERT基因相关.     

瞬时转染HBx基因到人正常胆管上皮细胞并观测其对hTERTmRNA的表达影响

目的通过研究HBx基因转染到人正常胆管上皮(HBECs)后对人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的转录调节作用，以阐明HBV感染在胆管癌发生中的作用机制。方法瞬时转染HBx基因到体外培养的HBECs，同时转染含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的克隆载体以判定转染率；RT-PCR分析转染后HBECs内hTERT mRNA的表达变化；并通过细胞免疫组化技术了解转染细胞内HBx蛋白的表达。结果经EGFP判定的转染率约为15％；未经转染或转染空载体的HBECs不表达hTERT mRNA，而转染HBx基因的HBECs可表达明显的hTERT mRNA；只有在转染了HBx基因的HBECs可检测到HBx蛋白表达。结论HBx基因转染能激活hTERT mRNA的转录表达，这种顺式调节作用可能是胆管上皮增殖、分化并恶化的主要机制。     

hTERT启动子调控的腺病毒载体的构建及在前列腺癌细胞中的表达

目的　构建人端粒酶逆转录酶 (hTERT )启动子调控的表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的腺病毒系统 ,并研究其在前列腺癌细胞株PC 3中的表达。方法　构建带有hTERT启动子的腺病毒穿梭载体pDC3 15 Tp EGFP ,细胞重组技术获得腺病毒AdhTERT EGFP ,体外转染PC 3及人胚肺成纤维细胞株MRC 5 ,通过RT PCR和倒置荧光显微镜分别在mRNA和蛋白质水平检测EGFP的表达。带有小鼠巨细胞病毒 (mCMV)启动子的腺病毒Ad EGFP作为阳性对照。结果　成功构建出腺病毒AdhTERT EGFP ,滴度为 4.2× 10 9空斑形成单位 (pfu) /ml,分别转染PC 3和MRC 5 ,前者表达EGFP的阳性细胞数为 (66.4% 3 .3 ) % ,而后者不表达EGFP(P <0 .0 1) ;对照病毒Ad EGFP在PC 3和MRC 5中分别有 (88.1± 2 .2 ) %及 (89.2± 3 .1) %的细胞表达EGFP ,两者表达量差异无统计学意义。结论　该腺病毒系统中hTERT启动子调控下游基因可选择性地在前列腺肿瘤细胞中表达 ,在正常细胞中不表达 ,具有明显的靶向性。     

人端粒酶逆转录酶启动子调控的重组腺病毒的构建及其在膀胱癌细胞中的表达

目的构建人端粒酶逆转录酶（hTERT）启动子调控的表达增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的腺病毒系统，观察其在膀胱癌细胞中的表达。方法构建带有hTERT启动子的腺病毒穿梭载体pDC315-Tp—EGFP，细胞重组技术获得腺病毒Ad-hTERT-EGFP，按感染复数（MOI）100体外转染膀胱癌细胞株253J及人胚肺成纤维细胞株MRC-5，通过倒置荧光显微镜和Rt—PCR分别检测EGFP的表达。带有小鼠巨细胞病毒（mCMV）启动子的腺病毒Ad-EGFP作为阳性对照。结果成功构建出重组腺病毒Ad-hTERT-EGFP，滴度为3．8×10^10空斑形成单位（pfu）／ml，Ad—hTERT-EG-FP感染的253J细胞中，（85．2±3．3）％发出明亮的绿色荧光；而其感染的MRC-5细胞未产生绿色荧光（P〈0．01）；对照病毒Ad-EGFP在253J和MRC-5中分别有（87．1±2．2）％及（92．5±3．1）％的细胞可见到绿色荧光。RT-PCR检测显示：253J细胞转染Ad-hTERT-EGFP、Ad-EGFP后及MRC-5细胞转染Ad-EGFP后均有EGFP基因表达；而MRC-5细胞转染Ad-hTERT-EGFP后未见EGFP基因表达。结论该腺病毒系统中hTERT启动子调控下游基因可选择性地在膀胱肿瘤细胞中表达，在正常细胞中不表达，具有明显的靶向性。     

抑癌基因PTEN与人大肠癌转移的相关性研究

目的　探讨抑癌基因PTEN的表达在大肠癌转移侵袭过程中的作用。方法　 (1)应用Nothernblot和免疫组织化学的方法检测 47例大肠癌组织中PTENmRNA和蛋白的表达 ,分析其与大肠癌转移的关系。 (2 )利用Westernblot法检测不同转移潜能的大肠癌细胞系内PTEN蛋白的表达水平 ,说明PTEN蛋白的表达对大肠癌细胞转移潜能的影响。 (3 )用阳离子脂质体作载体 ,将PTEN基因转染大肠癌细胞株LOVO后 ,采用计数细胞悬液加到粘附底物后 2 0和 12 0min的细胞贴壁数用以测定细胞粘附能力 ,采用Costar的浸润小室检测PTEN基因转染前后细胞的浸润能力。结果　 (1)在有淋巴结及远处转移的大肠癌组织中 ,PTENmRNA和蛋白的表达显著低于无转移者 ;(2 )转移潜能高的LOVO细胞PTEN的表达量通过显著低于转移潜能较低的HT 2 9、LS 174T ;(3 )LOVO、转染 pcDNA3 .0 PTEN的细胞 (LOVO/pcDNA3 .0 PTEN )在特异性粘附底物(Laminin)上 2 0min时贴壁率分别为 (18.6± 1.4) %和 (13 .9± 0 .5 ) % (P <0 .0 5 ) ,12 0min时贴壁率分别为 (71.2± 2 .5 ) %和 (5 6.0± 1.6) % (P <0 .0 5 ) ;(4 )采用Costar的浸润小室对LOVO、LOVO/pcDNA3 .0 PTEN细胞的浸润能力分析结果显示 :细胞悬液静置培养 6h后 ,对照细胞LOVO浸润穿透多聚碳膜的细胞数为 (1     

人端粒酶逆转录酶基因转染人髓核细胞的安全性研究

目的评价人端粒酶逆转录酶（humantelomerasereverse transeriptase,hTERT）基因转染对人椎间盘髓核细胞“安全性”的影响．方法将构建好的重组腺相关病毒人端粒酶逆转录酶基因（recombinantadeno—associatedvirusvee—tor—nlediatedhTERTgene,rAAV—hTERT）按感染复数（muhiplieityofinfection,MOI）10^5v．g每细胞转染体外培养二代髓核细胞。没立rAAV—hTERT转染组,AAV空病毒转染组及未转染组;利用RT—PCR及Western—blot检测转染后hTERT基闪的表达;对体外培养120d的细胞进行染色体核型分析;将3组细胞（100μL,3×10^7／mL）分别注入裸鼠腋下检测其成瘤性,以人Hela细胞为阳性成瘤实验对照。结果成功检测出rAAV—hTERT转染髓核细胞后hTERT轼因的表达;G-带核型分析未见染色体结构异常克隆;3组细胞均未观察到裸鼠体内肿瘤形成。结论rAAV—hTERT能成功转染人惟问盘髓核细胞并IF确表达,rAAV—hTERT转染髓核细胞在有限的体外培养过程中是安全的,可为进一步的在体研究提供安伞性证据.     

婴幼儿血管瘤iNOS的表达及其与血管内皮细胞增殖能力的关系

目的研究婴幼儿血管瘤组织中诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的表达,及其与血管内皮细胞增殖能力的关系。方法收集我院2001年1月至2002年5月手术切除的49例血管瘤和29例血管畸形石蜡标本,利用免疫组织化学染色检测其iNOS和Ki-67蛋白的表达。结果49例血管瘤组织中iNOS蛋白的阳性率和Ki-67蛋白的阳性表达指数分别为38%和(10.98±7.93)%,均分别显著高于29例血管畸形组织中的3%和(0.03±0.19)%。增生期血管瘤组Ki-67蛋白的阳性表达指数为(12.67±7.65)%,显著高于消退期血管瘤组的(7.27±7.49)%(P=0.028)。无论是全部78例血管病变还是49例血管瘤,iNOS阳性组的Ki-67蛋白的阳性表达指数均显著高于iNOS阴性组(P<0.05)。结论血管瘤组织中iNOS和Ki-67蛋白的表达均高于血管畸形,而且血管瘤中血管内皮细胞的增殖能力可能与其iNOS阳性率的增高有关。     

端粒酶hTRT基因在睾丸肿瘤组织中的表达及其意义

目的 研究端粒酶hTRT基因在睾丸肿瘤组织的表达及其意义。方法 应用核酸原位杂交技术对51例男性睾丸肿瘤组织和10例正常睾丸组织中端粒酶hTRT基因的表达进行检测和定位，并应用HRIAS－1000高清晰度图像处理对hTRT阳性信号进行图像分析。结果 端粒酶hTRT基因在睾丸肿瘤组织吸极高的表达，其阳性率为92．16％（47／51），端粒酶hTRT基因表达强度与肿瘤细胞的分化程度显著相关，睾丸良性肿瘤与睾丸恶性肿瘤间差异有显著性（P＜0．05）， 在睾丸肿瘤组织和癌旁组织及正常睾丸组织中的表达强度差异有非常显著性（P＜0．01），并且其强阳性表达水平与肿瘤细胞的分布定位一致。结论 端粒酶hTRT有可能成为睾丸肿瘤诊断的新标志物及治疗的新靶点。