吲哚美辛对结肠癌细胞CDK2、CDK4、P21WAF1/CIP1、Bcl-2及Bax蛋白表达的影响

目的：非甾体类抗类药通过环氧合酶途径是抑制肿瘤的机制之一，是否还有其他途径抑制细胞增殖及诱导凋亡。探讨吲哚美辛抗肿瘤的作用机制。为其临床应用实验依据。方法：不同浓度的吲哚美辛作用于结肠癌细胞株HCT116细胞24h，通过Western蛋白印迹技术检测CDK2、CDK4、p21s^WAF1/CIP1、Bcl-2及Bax蛋白表达。结果：吲哚美辛降低细胞周期素依赖蛋白激酶CDK2、CDK4及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达上，上调细胞周期依赖蛋白激酶抑制剂p21s^WAF1/CIP1蛋白，而对促凋亡蛋白Bax的表达无影响。结论：吲哚美辛通过降低CDK2、CDK4、Bcl-2蛋白，上调p21s^WAF1/CIP1的表达来抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡。     

顺铂对胃癌细胞Bax和Bcl-2表达的影响

目的通过研究顺铂对人胃癌BGC-823细胞Bax和Bcl-2的影响,探讨顺铂对人胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制。方法用化疗药物顺铂以不同浓度、不同时间处理对数期生长的人胃癌BGC-823细胞,采用MTT法检测顺铂对BGC-823细胞增殖抑制率的影响,采用免疫印迹和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测Bax及Bcl-2蛋白和mRNA的表达。结果顺铂对人胃癌细胞BGC-823生长增殖具有明显抑制作用,其效应成浓度和时间依赖性（P〈0．05）。不同浓度的顺铂处理BGC-823细胞24小时后,Bax蛋白和mRNA水平成浓度依赖性增加（P〈0．05）,而Bcl-2蛋白和mRNA水平成浓度依赖性减少。结论经顺铂处理的人胃癌BGC一823细胞,不论是在转录水平还是在翻译水平均上调了Bax的表达,同时使Bcl-2表达下调,此途径可能为顺铂所诱导肿瘤细胞凋亡的机制之一。     

藤梨根提取物抑制肺癌A549细胞增殖作用机制研究

目的观察藤梨根乙酸乙酯提取物（RAE）对肺癌A549细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养肺癌A549细胞,分别给予不同浓度的RAE进行干预,流式细胞术检测用药后A549细胞凋亡率变化,免疫组化SP法检侧细胞Bcl-2、Bax蛋白表达变化,RT—PCR法检测细胞Bcl-2、Bax mRNA表达,激光共聚焦显微技术测定细胞胞内Ca^2＋浓度变化。结果各治疗组给予RAE作用后细胞凋亡率明显增加,并存在时相性和量效依赖性;用药后A549细胞Bcl-2蛋白和mRNA表达降低,而Bax蛋白和mRNA表达上调,细胞内Ca^2＋浓度明显升高,与对照组比较均有显著统计学差异（P均〈0．01）,亦存在时相性和量效依赖性。结论RAE可明显诱导肺癌A549细胞凋亡,其机制可能与降低其Bcl-2蛋白和mRNA表达、上调Bax蛋白和mRNA表达、升高细胞内Ca^2＋浓度有关。     

牛蒡子苷元对肝癌SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨

目的观察牛蒡子苷元（ARG）对肝癌SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法将不同浓度的ARG作用于SMMC-7721细胞,并设不加ARG对照组。MTT法测算细胞增殖抑制率、流式细胞术检测细胞周期及凋亡率,RT-PCR法检测细胞中的Bcl-2 mRNA。结果与对照组比较,随ARG浓度增加,SMMC-7721细胞增殖率逐渐降低（P均〈0.05）,G0/G1期细胞比例显著增加（P均〈0.05）,G2、M、S期细胞比例减少（P均〈0.05）;随ARG浓度增加、作用时间延长,SMMC-7721细胞凋亡率显著增加（P均〈0.05）,Bcl-2 mRNA表达量减少（P均〈0.05）。结论 ARG可明显抑制SMMC-7721细胞增殖并诱导其凋亡;可能与ARG下调细胞中Bcl-2基因的表达有关。     

亚砷酸对肝癌BEL-7402细胞增殖、凋亡及其Bcl-2表达的影响

目的探讨亚砷酸（AA）对人肝癌BEL-7402细胞增殖、凋亡及其Bcl-2表达的影响。方法采用MTT比色法检测从作用后的BEL-7402细胞增殖抑制率,流式细胞术检测BEL-7402细胞周期及凋亡细胞,HE染色法观察凋亡细胞的形态,RT-PCR检测BEL．7402细胞的Bcl-2 mRNA,免疫组化法检测细胞的Bcl-2蛋白。结果1．0—8．0μmol／L的AA可使BEL-7402细胞增殖抑制率上升,能诱导BEL-7402细胞凋亡并阻滞细胞周期于S、G2／M期,呈剂量依赖性;8．0μmol／L的AA作用BEL-7402细胞48h后,细胞呈现明显的凋亡形态改变,其Bcl-2 mRNA及蛋白表达明显减弱。结论AA体外有抑制BEL-7402细胞增殖及诱导凋亡的作用,且呈时间、剂量依赖性,其作用机制可能与降低其Bcl-2表达有关。     

IGF-1对MC3T3-E1细胞凋亡及凋亡调控蛋白Bax、Bcl-2表达的影响

目的 探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对小鼠前成骨样MC3T3-E1细胞凋亡基因相关蛋白Bax／Bcl-2表达的影响。方法 MC3T3-E1细胞分组培养，应用4个浓度的IGF-1（1ng／mL、10ng／mL、30ng／mL、50ng／mL）干预24h。观察MC3T3-E1细胞动态生长状况：流式细胞技术检测细胞凋亡率；免疫组织化学法检测凋亡蛋白Pax／Bcl-2的表达水平。结果 与正常血清对照组相比，无血清对照组MC3T3-E1细胞凋亡率增加（P〈0．05）；与无血清组相比，IGF-1组MC3T3-E1细胞凋亡率降低（P〈0．05），Bax表达减弱（P〈0．05），Bcl-2表达增强（P〈0．05）；各浓度组间比较，（1～50）ng／mL浓度范围内MC3T3-E1细胞凋亡率随IGF-1浓度加大而逐渐降低（P〈0．05），Bax表达逐渐减弱（P〈0．05），50ng／mL浓度组Bcl-2表达明显增强（P〈0．01），Bcl-2／Bax灰度比与细胞凋亡率呈显著正相关（r=0.917，P〈0．01）。结论 一定浓度的IGF-1同时调节Bax和Bcl-2表达，抑制无血清培养诱导的细胞凋亡。并存在剂量依赖性效应。     

吲哚美辛与埃罗替尼对胰腺癌细胞生长的协同抑制作用

背景：目前胰腺癌药物化疗疗效不佳。既往研究提示环氧合酶（COX）-2和表皮生长因子受体（EGFR）信号途径均参与了胰腺癌的发生、发展，COX-2抑制剂和EGFR抑制剂联用对胰腺癌的生长可能具有协同抑制作用。目的：观察COX-2抑制剂吲哚美辛与EGFR酪氨酸激酶抑制剂埃罗替尼对胰腺癌细胞生长的协同抑制作用。方法：以甲基噻唑基四唑（MTT）比色法检测胰腺癌细胞株BxPC-3的增殖情况，以流式细胞分析和原位末端标记（TUNEL）法观察用药前后细胞凋亡和细胞周期的变化，以逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）观察用药前后细胞中COX-2、EGFR以及凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Bcl-xL、Bak mRNA表达的变化。结果：BxPC-3细胞中可观察到COX-2和EGFRmRNA表达．吲哚美辛和埃罗替尼单用均可下调COX-2和EGFRmRNA的表达，两者联用时下调作用更明显。吲哚美辛和埃罗替尼单用均可抑制BxPC-3细胞增殖，促进细胞凋亡，诱导细胞周期阻滞于G0／G1期，减少抗凋亡基因Bcl-2、Bcl-xL的表达，轻微上调促凋亡基因Bax的表达，两者联用对细胞生长的抑制作用增强。结论：吲哚美辛和埃罗替尼均可抑制COX-2和EGFR的表达，下调Bcl-2／Bax比值，两者联用对胰腺癌细胞生长具有协同抑制作用。     

吲哚美辛对β淀粉样蛋白1-42诱发BV-2细胞产生炎性介质的抑制作用

目的研究吲哚美辛对β淀粉样蛋白1-42（Aβ1-42）刺激小胶质细胞释放炎性介质一氧化氮（NO）及白细胞介素-1β（IL-1β）的抑制作用。方法应用高度纯化的BV-2小胶质细胞作为体外小胶质细胞模型，应用不同浓度吲哚美辛（10^-9，10^-8，10^-7，10^-6，10^-5mol／L）与20μmol／LAβ1—42单独或同时培养12h，测定细胞上清NO及IL，1β含量；RT—PCR法测定BV-2细胞iNOSmRNA及IL-1βmRNA的表达。结果吲哚美辛单独作用对BV-2细胞产生NO、IL-1β及iNOSmRNA、IL-1βmRNA表达无明显作用。Aβl—42可以刺激BV-2细胞产生NO及IL-1β，并增加iNOSmRNA及IL-1βmRNA表达，这种作用均可被吲哚美辛所抑制，在吲哚美辛浓度为10^-7～10^-5mol／L时抑制作用较为明显。结论在体外吲哚美辛可以降低Aβ1—42介导的BV-2细胞iNOSmRNA及IL-1βmRNA表达，从而减少NO及IL-1β的产生，上述抑制作用可能参与了吲哚美辛在阿尔茨海默病治疗中的神经元保护机制。     

Ad-Gax转染对缺氧性大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡及其相关基因表达的影响

目的观察Gax基因转染对缺氧性肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）凋亡及其相关基因表达的影响。方法腺病毒介导Gax转染体外原代培养的PASMCs。透射电镜观察细胞凋亡形态;原位细胞凋亡检测法观察Ad-Gax转染前后在常氧和缺氧处理2h,6h、12h、24h、48h大鼠PASMCs凋亡情况;免疫细胞化学法测PASMCsBcl-2、Bax蛋白表达。结果透射电镜观察到Ad-Gax转染后PASMCs产生凋亡现象。未转染缺氧刺激前后,均无或可见极少量的阳性细胞;Ad-Gax转染后,如无缺氧刺激,也无或仅可见少量的阳性细胞,予缺氧刺激后,阳性细胞显著增多,尤其在转染后24～48h更明显。转染组常氧、缺氧2h,6h、12h、24h、48h细胞凋亡百分率均显著高于未转染组（P〈0．01）。Ad-Gax转染前,与常氧时比较,缺氧刺激PASMCs后,Bax蛋白表达略为升高但无统计学意义;而Bcl-2蛋白表达显著升高,差异有统计学意义（P〈0．05）。Ad-Gax转染PASMCs后,缺氧刺激使Bcl-2蛋白表达显著降低（P〈0．01）,Bax蛋白表达显著增高（P〈0．01）。转染组细胞凋亡率与Bcl-2／Bax比值呈负相关（r=-0．53,P〈0．01）。结论Ad-Gax转染可诱导缺氧性PASMCs凋亡,其机制可能是通过上调Bax蛋白和下调Bcl-2蛋白的表达,尤其是通过降低Bcl-2／Bax比值实现的。     

环氧合酶-2抑制剂对结肠癌细胞株的体外研究

目的 观察选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂对COX-2高表达的结肠癌细胞株HT-29增殖和凋亡的影响，明确以COX2为靶点治疗结肠癌的作用途径以及与COX-2活性、表达水平的相关关系。方法 将选择性COX-2抑制剂NS-398作用于结肠癌细胞系HT29，运用MTT法检测细胞增殖状态。流式细胞仪观察NS-398对细胞凋亡的影响。进一步用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测药物作用前后HT-29中COX-2mRNA表达。ELISA法测定前列腺素E2（PGE2）水平。Western blot检测药物作用前后细胞周期素D1、Bcl-2的表达。结果 结肠癌细胞系HT-29中COX-2 mRNA高表达，NS-398呈时间和剂量依赖性抑制HT-29细胞增殖，促进其凋亡。加入NS-398的HT-29细胞中COX-2mRNA表达水平无明显变化（P〉0．05），PGE2却显著下降（P〈0．01）。72h时空白组与NS-398（75μmol／L）处理组细胞周期素D1、Bcl-2表达水平比值分别为2．21和3．25（P〈0．01），两者表达水平随作用时间延长而下降。结论 选择性COX-2抑制剂NS-398不影响结肠癌细胞COX-2 mRNA表达水平，而与其活性相关（PGE2水平）．可能通过细胞周期素D1、Bcl-2影响结肠癌细胞系HT-29的增殖与凋亡，揭示了COX-2为靶点治疗结肠癌的分子机制。     

ERCP and MRCP--when and why

Since the introduction of endoscopic retrograde cholangiopancreatography (ERCP) in the 1970s, gastroenterologists have a wide spectrum of diagnostic and therapeutic options in the biliopancreatic ductal system at their disposal. With its arrival in the 1990s, magnetic resonance cholangiopancreatography (MRCP) developed as a potent diagnostic tool in biliopancreatic pathology. Currently, MRCP is widely replacing diagnostic ERCP and thereby avoiding complications related to endoscopic technique.We summarize evidence-based data and demonstrate indications and differential indications for MRCP and ERCP in pancreatic disease. Complications related to the procedures and possible medical prevention are discussed. The feasibility of interventional endoscopy in pancreatic disease is reported in detail. The role of gastroenterologists in performing MRCP is outlined on the basis of practical examples.     

Convection and permeation and albumin between plasma and interstitium.

Nonequilibrium thermodynamics is combined with compartmental analysis to interpret albumin sieving and tracer experiments in terms of a permeability-surface product PS (permeation) and a solvent drag reflection coefficient σ_f (convection) for various blood-tissue barriers. The human whole-body albumin data of Lassen, Parving, and Rossing (Lassen, Parving, and Rossing, Microvasc. Res.7, i–iv (1974)), modified for nonliver tissues by Johnson and Levitt (Johnson &; Levitt, Microvasc. Res.9, 141 (1975)) lead to P ～ 1.8 × 10^?8 cm sec^?1 (based on a surface area per unit plasma volume of 700 cm^?1) and to σ_f ～ 0.9, which imply, in agreement with Johnson and Levitt, that permeation is the dominant nonliver blood-tissue transport mechanism for albumin in the normal resting human. Similar values are derived from the dog paw muscle data of Garlick and Renkin (Garlick and Renkin, Amer. J. Physiol.219, 1595–1605 (1970)). The Casley-Smith (Casley-Smith, Microvasc. Res.9, 43–48 (1975)) mechanism of uphill albumin transport is verified as possible. It is tentatively inferred that lymph formation in resting tissue does not result from a small difference between a large fluid (volumetric) filtration and an almost equally large fluid reabsorption, either in the same capillary (Starling) or between different capillaries (Zweifach) (Zweifach, Circ. Res.34, 858–866 (1974)). Rather, reabsorption is negligibly small relative to filtration, and lymph flow is comparable to volumetric filtration.