三种醛类化合物-DNA加合特性的研究

目的 探讨甲醛、乙醛和丙烯醛对DNA的损伤机制.方法 采用体外测试系统,应用高效液相色谱法(HPLC)对甲醛、乙醛、丙烯醛及其在人体内的代谢产物甲酸、乙酸、羟丙基巯基尿酸与4种单脱氧核苷酸的加合反应进行研究.结果 经HPLC分离检测,甲醛、醋醛与脱氧鸟苷酸发生加合反应,而丙烯醛、甲酸、醋酸和羟丙基巯基尿酸难以与脱氧鸟苷酸发生加合反应或加合物产量过低,初步确定了甲醛、乙醛与4种单脱氧核苷酸结合的优势反应核苷酸.结论 甲醛、乙醛能够与DNA的脱氧鸟苷酸结合而体现遗传特性.     

VitC对二甲基甲酰胺致人肝细胞DNA损伤的保护作用

目的探讨二甲基甲酰胺(DMF)致人肝细胞DNA的损伤情况及不同剂量VitC的干预作用。方法取正常成人肝细胞DMF染毒,DMF剂量为1.56、6.25、25、100 mmol/L、同时设阴性组与H2O2阳性组;100mmol/L DMF染毒后VitC的干预剂量为0.025、0.05、0.10、0.25mmol/L,应用单细胞凝胶电泳技术观察肝细胞DNA的损伤。结果同一处理时间组内各DMF染毒组与阴性对照组间MTL值与MTM值差异均有统计学意义(P0.05)。不同剂量DMF处理肝细胞后,随着染毒剂量增加MTL值亦增加,最大MTL值出现于100mmol/LDMF组。各染毒组MTL值与MTM值与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论高浓度DMF能引起肝细胞DNA损伤,小剂量VitC对DMF致肝细胞DNA损伤具有明显的拮抗作用。     

乙二醛致大鼠淋巴细胞DNA损伤的实验研究

予大鼠腹腔注射不同剂量（12．5、25．0和50．0mg／kg）的乙二醛后16h采血,分离淋巴细胞,做单细胞凝胶电泳实验。另分离正常大鼠淋巴细胞,加入不同浓度（0、0．25、0．50和1．00mmol／L）的乙二醛孵育1h,做单细胞凝胶电泳实验。结果显示,（1）大鼠腹腔注射25．0和50．0mg／kg的乙二醛,淋巴细胞拖尾率与彗尾长均明显高于对照组（P〈0．05）;各剂量组间比较,差异有显著性（P〈0．05）。（2）体外染毒0．50和1．00mmol／L乙二醛,大鼠淋巴细胞拖尾率与彗尾长均高于对照组,且各剂量组间差异有显著性（P〈0．05）。提示腹腔注射25．0和50．0mg／kg及体外染毒0,50和1．00mmol／L乙二醛可致大鼠淋巴细胞DNA损伤,且随着染毒剂量增加,DNA损伤加重。     

CS2诱导人淋巴细胞DNA损伤的再研究

目的应用SCGE方法检测CS2体外染毒对人外周血淋巴细胞DNA损伤,探求损伤的剂量-效应关系.方法将未处理的人外周血淋巴细胞作为阴性对照组,用50μmol/L H2O2染毒的人外周血淋巴细胞作为阳性对照组,将不同浓度CS2染毒的人外周血淋巴细胞设为7个剂量组进行SCGE实验.结果只有2500μmol/L组及阳性对照组淋巴细胞存活率与对照组比较出现统计学差异(χ2=11.77,17.14;P=0.000,0.001).不同CS2染毒组及阳性对照组与阴性对照组比较,除250μmol/L组外,其余各染毒组淋巴细胞DNA损伤加重,表现在彗头直径变小,彗尾长度增加.DNA拖尾率在较低染毒剂量组逐渐增高,出现一定剂量-效应关系,较高剂量组(1000μmol/L以上)未见有随剂量增加拖尾率增加的趋势.结论CS2体外染毒对细胞存活影响不大;低剂量表现有淋巴细胞DNA损伤的剂量-效应关系;较高剂量染毒虽有较严重损伤,但损伤未表现出明显剂量-效应关系.     

苯乙烯及7,8-氧化苯乙烯对人淋巴细胞DNA分子加合作用的定性分析

为了探讨苯乙烯对机体的化学损伤机制，在国内外现有研究的基础上，我们采用体外细胞染毒方式，对苯乙烯及其活性中间代谢产物SO与健康成人外周血淋巴细胞DNA的加合作用进行了研究。     

二氯甲烷遗传毒性的体外实验研究

[目的]探讨二氯甲烷(DCM)对DNA的损伤作用。[方法]应用吸收光谱移动法观察不同浓度的DCM(2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0μg/μl)与小牛胸腺DNA的加合作用;应用溴乙锭荧光法对不同浓度的DCM(每30μgDNA分别为200、300、400、500、600、700μg)引起的DNA交联作用。[结果]加入2.0~7.0μg/μl的DCM后,DNA的紫外最大吸收峰普遍发生长移(与阴性对照组比较,P<0.05),而且存在剂量-反应关系;每30μg小牛胸腺DNA用200~700μg的DCM直接染毒,DNA交联率由5.53%上升至17.63%,并且具有一定的剂量-反应关系(r=0.979,P<0.05)。[结论]表明DCM能够与小牛胸腺DNA发生加合作用和交联生成作用。     

液态甲醛对HepG_2细胞增殖影响及DNA损伤效应

为探讨液态甲醛致HepG2细胞增殖的抑制情况和DNA损伤效应,以HepG2细胞作为试验材料,甲醛染毒浓度分别为0(对照)、200、400、800、1600μmol/L。采用MTT试验检测甲醛暴露24h对HepG2细胞的抑制率,并计算半数致死浓度(IC50)。采用彗星试验检测甲醛暴露12h对HepG2细胞的DNA损伤效应。结果显示,200、400、800、1600μmol/L甲醛染毒组细胞抑制率分别为38.03%,46.01%,50.28%,73.65%,具剂量依赖性,IC50为484.59μmol/L。彗星试验结果显示,与对照组比较,200、400、800μmol/L甲醛染毒组彗星细胞率和彗星细胞尾长均较高,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。随着甲醛染毒剂量的增高,彗星细胞率及彗星细胞尾长均先升高后降低,且在400μmol/L甲醛染毒组达到峰值。此外,1600μmol/L甲醛染毒组彗星细胞率和尾长与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。表明甲醛暴露对HepG2细胞的抑制具浓度依赖性。低浓度甲醛主要引起细胞DNA分子断裂,高浓度甲醛主要引起细胞DNA发生交联。     

Joint Toxicity of Sodium Sulfite and Formaldehyde on the Expression of p53 Protein of HL-7702 Cells

目的 研究亚硫酸钠与甲醛联合染毒对人正常二倍体肝细胞株(HL-7702细胞)的毒性作用及对肝细胞内抑癌基因p53蛋白表达的影响.方法 分别加入终浓度为0(阴性对照),0.156、0.625、2.5 mmol/L亚硫酸钠,0.02、0.1、0.5、2.5、12.5 mmol/L甲醛以及0.1 mmol/L甲醛+0.156、0.625、2.5 mmol/L亚硫酸钠进行染毒24 h,采用MTT试验检测肝细胞的活性.分别加入终浓度为0(阴性对照)、0.039、0.156、0.625、2.5 mmol/L亚硫酸钠,0.02、0.1、0.5、2.5、12.5mmol/L甲醛,10 mmol/L甲醛+0.039、0.156、0.625、2.5 mmol/L亚硫酸钠以及0.1 mmol/L甲醛+0.039、0.156、0.625、2.5mmol/L亚硫酸钠进行染毒24h,采用蛋白杂交法(Western blot)检测肝细胞内p53蛋白的表达水平.结果 与阴性对照组比较,2.5 mmol/L亚硫酸钠及0.1～12.5 mmol/L甲醛单独染毒肝细胞的活性均明显降低(P＜0.05),且肝细胞活性均随着染毒浓度的升高而下降;0.1 mmol/L甲醛+不同浓度亚硫酸钠联合染毒肝细胞的活性均高于0.1 mmol/L甲醛单独染毒组(P＜0.05),且0.1 mmol/L甲醛+2.5 mmol/L亚硫酸钠联合染毒组肝细胞活性也明显高于2.5 mmol/L亚硫酸钠单独染毒组(P＜0.05).各浓度亚硫酸钠单独染毒对肝细胞内p53表达水平无明显影响,而0.5～12.5 mmol/L甲醛单独染毒可引起肝细胞内p53表达水平明显下降(P＜0.05);10 mmol/L甲醛+不同浓度亚硫酸钠联合染毒肝细胞内p53蛋白表达水平均低于阴性对照组和10 mmol/L甲醛单独染毒组及相同剂量亚硫酸钠单独染毒组(P＜0.05);而0.1 mmol/L甲醛+不同浓度亚硫酸钠联合染毒肝细胞内p53蛋白的表达水平与阴性对照组比较,均无明显变化.结论 亚硫酸钠和甲醛联合染毒对肝细胞活性的抑制作用有所减弱.较高浓度(10mmol/L)甲醛可抑制肝细胞内p53蛋白的表达水平,亚硫酸钠可加强这种抑制作用.     

亚硫酸钠和甲醛联合染毒对人正常二倍体肝细胞活力及p53蛋白表达的影响

目的研究亚硫酸钠与甲醛联合染毒对人正常二倍体肝细胞株(HL-7702细胞)的毒性作用及对肝细胞内抑癌基因p53蛋白表达的影响。方法分别加入终浓度为0(阴性对照),0.156、0.625、2.5 mmol/L亚硫酸钠,0.02、0.1、0.5、2.5、12.5 mmol/L甲醛以及0.1 mmol/L甲醛+0.156、0.625、2.5 mmol/L亚硫酸钠进行染毒24 h,采用MTT试验检测肝细胞的活性。分别加入终浓度为0(阴性对照)、0.039、0.156、0.625、2.5 mmol/L亚硫酸钠,0.02、0.1、0.5、2.5、12.5mmol/L甲醛,10 mmol/L甲醛+0.039、0.156、0.625、2.5 mmol/L亚硫酸钠以及0.1 mmol/L甲醛+0.039、0.156、0.625、2.5mmol/L亚硫酸钠进行染毒24 h,采用蛋白杂交法(Western blot)检测肝细胞内p53蛋白的表达水平。结果与阴性对照组比较,2.5 mmol/L亚硫酸钠及0.1～12.5 mmol/L甲醛单独染毒肝细胞的活性均明显降低(P<0.05),且肝细胞活性均随着染毒浓度的升高而下降;0.1 mmol/L甲醛+不同浓度亚硫酸钠联合染毒肝细胞的活性均高于0.1 mmol/L甲醛单独染毒组(P<0.05),且0.1 mmol/L甲醛+2.5 mmol/L亚硫酸钠联合染毒组肝细胞活性也明显高于2.5 mmol/L亚硫酸钠单独染毒组(P<0.05)。各浓度亚硫酸钠单独染毒对肝细胞内p53表达水平无明显影响,而0.5～12.5 mmol/L甲醛单独染毒可引起肝细胞内p53表达水平明显下降(P<0.05);10 mmol/L甲醛+不同浓度亚硫酸钠联合染毒肝细胞内p53蛋白表达水平均低于阴性对照组和10 mmol/L甲醛单独染毒组及相同剂量亚硫酸钠单独染毒组(P<0.05);而0.1 mmol/L甲醛+不同浓度亚硫酸钠联合染毒肝细胞内p53蛋白的表达水平与阴性对照组比较,均无明显变化。结论亚硫酸钠和甲醛联合染毒对肝细胞活性的抑制作用有所减弱。较高浓度(10 mmol/L)甲醛可抑制肝细胞内p53蛋白的表达水平,亚硫酸钠可加强这种抑制作用。     

铅致人淋巴细胞DNA双链断裂作用的人群调查和体外试验

目的 用γH2AX识别抗体流式细胞术研究铅暴露致人体外周血淋巴细胞DNA双链断裂(DSBs)作用.方法 选取某蓄电池厂工人36人为铅接触组,其中高浓度组15人,低浓度组21人;同时选择厂外无职业性铅接触70人为对照组,取外周静脉血提取淋巴细胞,利用流式细胞术检测γH2AX,分析淋巴细胞中DNA DSBs水平;不同剂量、时间下醋酸铅染毒健康人外周血淋巴细胞,利用流式细胞术检测γH2AX,分析淋巴细胞中DNA DSBs水平.结果 高浓度铅接触组DNA损伤率和平均荧光强度分别为41.76％±28.57％、9.90±3.35,低浓度铅接触组分别为33.18％±30.64％、9.39±4.83,均高于对照组(分别为0.28％±0.28％、6.95±2.93),差异均有统计学意义(P＜0.05).体外试验结果显示,染毒1和2h时,除62.5 μmol/L外,125.0、250.0、500.0 μmol/L醋酸铅染毒组DNA损伤率与阴性对照组的差异均有统计学意义(P＜0.01).随着染毒剂量的增高,DNA损伤率呈现先增高后降低的趋势.结论 铅可致人淋巴细胞DNA DSBs,流式细胞术检测γH2AX是一种值得运用于检测大样本DNA DSBs水平的方法.     

用紫外光谱法检测三种醛类化合物与DNA的结合

为探讨甲醛,乙醛和丙烯酸对ＤＮＡ损伤机制。应用紫外光谱对甲醛,乙醛,丙烯三种醛类化合物引起的ＤＮＡ的加合反应,及与四种单核苷酸作用的情况进行了研究。结果表明：甲醛、乙醛的引起小牛胸膜ＤＮＡ的第二个最大吸收峰长波方向位移;同时也被步确定了甲醛,乙醛和四种单核苷酸结合的优势反应核苷酸。     

Leucine and its catabolites alter mitogen-stimulated DNA synthesis by bovine lymphocytes.

This study determined effects of leucine and its catabolites on in vitro, mitogen-stimulated DNA synthesis by bovine lymphocytes. Cultures grown in leucine-free or leucine-replete (0.4 mmol/L leucine) medium were supplemented with 0-10.0 mmol/L leucine or individual catabolites. Leucine at greater than or equal to 0.08 mmol/L was necessary for normal DNA synthesis by mitogen-stimulated bovine lymphocytes. beta-Hydroxy-beta-methylbutyrate (HMB) and beta-hydroxy-beta-methylglutarate (HMG) had minimal effect on unresponsiveness of mitogen-stimulated bovine lymphocytes in leucine-free medium; however, alpha-ketoisocaproate (KIC) at 0.4 and 2.0 mmol/L partially or completely restored DNA synthesis. In leucine-replete medium, 0.016-0.4 mmol/L KIC and 0.016-2.0 mmol/L HMB and HMG did not affect DNA synthesis. At 2.0 and 10.0 mmol/L, KIC inhibited (P less than 0.01) DNA synthesis, whereas HMB and HMG at 10.0 mmol/L enhanced (P less than 0.01) DNA synthesis. Overall, these results suggest that leucine is necessary for mitogen-induced DNA synthesis by bovine lymphocytes, and that this requirement for leucine can be partially met by KIC. When leucine was not limiting, KIC, HMB and HMG at concentrations that might occur in vivo did not alter lymphocyte DNA synthesis in vitro.     

肌酐校正—碱性硼氢化钾还原法测定尿液中的汞

目的:研究肌酐较正—碱性硼氢化钾还原—冷原子吸收光谱法测定汞的方法。方法:尿样以硼氢化钾还原,在253.7 nm波长下,读取最大峰值。根据标准系列峰值与浓度的线性关系,经肌酐较正计算样品中汞的浓度。结果:尿汞在2.0～180μg/L的范围内,检测浓度与峰值呈直线相关关系,回归方程Y=2.86×103x+16.9,最低检出浓度为2.0μg/L,精密度0.377%～1.82%,回收率91.1%～104.0%,尿汞浓度须经肌酐较正。结论:方法快速简便,精密准确,适用于大批量样品的现场分析。     

高效液相色谱法同时测定染发剂中13种染料

目的:建立染发剂中13种染料的HPLC测定方法。方法:样品经乙醇-水超声提取后,过滤后进样检测。以磷酸盐缓冲液-乙腈为流动相梯度洗脱,流速1 m l/m in,检测波长为203 nm。结果:在给定浓度范围内各染料的峰面积与浓度具有良好的线性关系。平均回收率为96.2%~112.3%,相对标准偏差为0.39%~9.87%(n=6)。结论:本方法可同时测定染发剂中13种染料。     

丙烯醛对DNA分子的损伤作用

目的 通过研究丙烯醛对DNA分子的损伤,探讨丙烯醛的遗传毒性效应及其分子机制。方法 应用单细胞凝胶电泳技术检测丙烯醛引起的DNA断裂、DNA交联以及DNA．蛋白质交联;应用液相色谱．电化学法研究丙烯醛致DNA分子产生氧化损伤标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)。结果 丙烯醛可诱导人外周血淋巴细胞DNA发生链断裂,但不引起DNA-DNA、DNA-蛋白质交联;丙烯醛与小牛胸腺DNA的体外作用较弱,但在铁离子介导下对DNA的氧化能力增强。可产生一定量的8-OHdG加合物;动物实验表明丙烯醛诱导大鼠肺组织DNA氧化损伤生成少量8-OHdG。结论 丙烯醛具有直接的遗传毒性效应,产生自由基造成DNA氧化损伤是其遗传毒性效应的主要途径。     

New spectrophotometric method for the quantitative determination of melamine using Mannich reaction

The objective of this study was to develop a spectrophotometric method for the quantitative determination of melamine. The method was based on the complexation of melamine with a mixture of formaldehyde and chemicals including a ketone group, as described by the Mannich reaction. The complex was determined by spectrophotometric absorption measurement as it is characterized by specific spectroscopic properties that are related to the chromophore of the ketone compounds. Uranine was tested as a ketone compound. The UV spectrum of the complex presented a maximum of absorption at 214 nm. An internal standard was added to quantify the melamine. The method was tested to determine the level of melamine in food, using a contaminated fish sample from China. The recovery value was 97% and the limit of detection was 0.063 μg/mL.     

高表达诱导型热休克蛋白70对甲醛所致损伤的体外试验研究

目的 研究诱导型热休克蛋白70(heat shock protein 70,Hsp70)在甲醛所致损伤中的保护作用.方法 人支气管上皮细胞human bronchial epithelium,HBE)转染含有hsp70基因的质粒,以增高Hsp70的表达,转染载体质粒的细胞和正常培养的细胞作为对照,分别为Hsp70高表达组(HBE/hsp70)、转染对照组(HBE/pcDNA)和对照组(HBE),并对3组细胞Hsp70的表达量进行鉴定.HBE/hsp70组和HBE组在接受不同浓度甲醛(0、0.39、1.56、6.25 mmol/L)染毒4 h后,检测各组细胞谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量以及DNA-蛋白质交联(DNA-protein crosslink,DPC).结果 细胞转染含有hsp70基因的质粒后,Hsp70蛋白表达量与HBE组相比增高约80%.HBE/hsp70组GSH含量先增高,在甲醛浓度为0.39和1.56 mmol/L时分别为141.0、119.6 mg/gpro,与HBE组(分别为75.8、56.7 mg/gpro)比较,差异有统计学意义(P<0.01),但当甲醛浓度增高到6.25 mmol/L时,GSH含量降低.而HBE组细胞的GSH含量随着甲醛浓度的增高一直呈下降的趋势.HBE/hsp70组、HBE组细胞MDA含量均随甲醛浓度的升高而增加,且HBE/hsp70组细胞MDA含量一直低于HBE组,在甲醛浓度为1.56 mmol/L时MDA含量为0.088μmol/gpro,与HBE组(0.138 μmol/gpro)相比,差异有统计学意义(P<0.05),甲醛浓度为6.25 mmol/L时,HBE/hsp70组细胞MDA含量为0.140 μmol/gpro,与HBE组(0.289 μmol/gpro)相比,差异有统计学意义(P<0.01).HBE/hsp70组、HBE组细胞DPC百分含量均随甲醛浓度的升高而增加,且HBE/hsp70组一直低于HBE组,在甲醛浓度为0.39 mmol/L时,HBE/hsp70组DPC含量为3.94%,HBE组为6.25%,差异有统计学意义(P<0.01),甲醛浓度为1.56 mmol/L时,HBE/hsp70组DPC含量为11.86%,HBE组为20.89%,差异有统计学意义(P<0.05).结论 Hsp70可降低甲醛对体外支气管上皮细胞造成的损伤.

Abstract：

Objective To investigate the protective role of inducible heat shock protein 70 (Hsp70) against damage induced by formaldehyde. Methods Human bronchial epithelium (HBE) cells were transfected with plasmid harboring hsp70 gene to increase the protein expression level. HBE cells transfected with pcDNA3.1 plasmid were used as transfection control and HBE cells cultured at normal condition served as control. Three groups were marked as HBE/hsp70, HBE/pcDNA and HBE. Hsp70 expression levels of 3 groups were detected. The cells of HBE/hsp70 and HBE groups were exposed to different concentrations of formaldehyde (0,0.39,1.56,6.25 mmol/L) for 4 h. The contents of GSH and MDA were measured, and KC1-SDS method was applied to measure DNA-protein crosslink (DPC). Results Hsp70 level in HBE/hsp70 group increased by 80% compared with HBE group. GSH contents in HBE/hsp70 group significantly increased and were 141.0, 119.6 mg/gpro at 0.39, 1.56 mmol/L, respectively (P<0.01), as compared with HBE group. However, it decreased when formaldehyde concentration increased to 6.25 mmol/L. While GSH content in HBE group remained decreasing. MDA contents in HBE/hsp70 and HBE group increased with formaldehyde. MDA content in HBE/hsp70 was 0.088 μmol/gpro and significantly lower than that (0.138 μmol/gpro) in HBE group (P<0.05) when formaldehyde concentration was 1.56 mmol/L, At the formaldehyde dose of 6.25 mmol/L MDA content in HBE/hsp70 was 0.140 μmol/gpro which was significantly lower than that (0.289 μmol/gpro) in HBE group (P<0.01). DPC% in two groups increased with formaldehyde. At the formaldehyde dose of 0.39 mmol/L, DPC% in HBE/hsp70 group was 3.94% which was significantly lower than that (6.25%) in HBE group (P< 0.01). At the formaldehyde dose of 1.56 mmol/L, DPC% in HBE/hsp70 group was 11.86% which was significantly lower than that (20.89% ) in HBE group (P<0.05). Conclusion Hsp70 can reduce formaldehyde-induced damages in human bronchial epithelium cells in vitro.     

可乐型饮料中咖啡因的测定

目的探讨可乐型饮料中咖啡因含量的检测方法。方法用三氯甲烷提取样品中的咖啡因后,在276.5 nm波长下测其吸光度值,与标准系列比较定量,测定可乐型饮料中咖啡因的含量。结果紫外分光光度法的回收率为96.3%~105.9%,变异系数为3.2%,萃取温度以20~40℃为宜,最大吸收峰在276.5 nm处。结论紫外分光光度法测定可乐型饮料中咖啡因的含量,简单迅速,适合一般实验室应用。