不同机械指数诊断超声联合微泡对裸鼠胰腺癌移植瘤化疗的影响

目的探讨不同机械指数(MI)诊断超声联合微泡对裸鼠人胰腺癌荷瘤模型肿瘤局部血流及化疗药物浓度的影响。方法经裸鼠双侧后腿注射肿瘤细胞,建立裸鼠人胰腺癌荷瘤模型33只,随机分为A、B、C组,行超声造影、化疗药物注射及超声辐照/假照。随机选取荷瘤裸鼠一侧后腿为治疗侧(超声辐照),另一侧为对照侧(超声假照)。辐照/假照前后均行超声造影,获得时间-强度曲线,峰值强度(PI)及AUC。于超声辐照/假照前经尾静脉注射阿霉素(DOX),并于超声辐照/假照过程中实时推注微泡;A、B、C组治疗侧超声辐照的MI分别为0.3、0.7、1.1。超声辐照/假照后,行DOX药物浓度检测及组织病理检查。并于超声辐照/假照前,测定不同MI对应的峰值负压范围。结果 A组治疗侧DOX药物浓度明显高于对照侧[(1.45±0.53)μg/g vs(1.07±0.46)μg/g;t=-5.163,P=0.001]。B组及C组中,治疗侧与对照侧药物浓度差异均无统计学意义(Z=-0.297、-0.357,P=0.766、0.721)。超声造影定量分析显示,除B组对照侧PI、B组及C组对照侧AUC外,超声辐照/假照后各组中治疗侧及对照侧均较超声辐照/假照前PI均升高、AUC均增大(P均0.05)。各组对照侧与治疗侧肿瘤组织病理表现相似,未见明显出血及细胞肿胀。MI为0.3(A组)、0.7(B组)、1.1(C组)时,对应的实测峰值负压范围分别为0.81～0.83MPa、0.96～1.32 MPa和2.29～2.53 MPa。结论 MI为0.3的诊断超声联合微泡可增强肿瘤局部血流灌注,促进人胰腺癌荷瘤裸鼠肿瘤局部化疗药物释放。     

超声靶向微泡破裂增强恩度凝胶抑制裸鼠乳腺癌移植瘤血管生成

目的探讨超声靶向微泡破裂对瘤体内注射恩度凝胶抑制裸鼠乳腺癌移植瘤血管生成作用的影响。方法制备载恩度的PLGA-PEG-PLGA温度敏感型凝胶,检测恩度凝胶体外释放及超声辐照对药物释放的影响;建立荷人乳腺癌裸鼠移植瘤模型,分为模型组、恩度凝胶瘤体内注射组、超声靶向微泡破裂组、恩度凝胶联合超声靶向微泡破裂组,每7天治疗1次,连续3次后行肿瘤CEUS,测定肿瘤组织微血管密度,评价各种处理对肿瘤血管生成的抑制作用。结果恩度凝胶在体外平稳释放约1周,超声辐照可提高恩度凝胶的释放速率;恩度凝胶瘤体内注射联合超声靶向微泡破裂处理具有明显的抑制肿瘤血管生成作用,肿瘤CEUS峰值强度及微血管密度均明显低于模型组及恩度凝胶治疗组(P0.05)。结论超声靶向微泡破裂可阻断荷人乳腺癌裸鼠移植瘤微循环,并有效控制恩度凝胶的药物释放速率,使之释放更多药物作用于血管内皮细胞,具有明显的抑制肿瘤血管生成作用。     

超声辐照微泡介导双自杀基因转染对裸鼠乳腺癌杀伤作用的在体研究

目的：探讨超声辐照微泡介导CD/TK双自杀基因质粒转染对在体乳腺癌的杀伤效应。 方法：用人乳腺癌MCF-7细胞建立裸鼠移植瘤模型后,将荷瘤裸鼠随机分为对照组、质粒组、超声辐照组、超声辐照微泡组,每组5只。对照组仅给予CD与TK相应的前药（5-氟胞嘧啶与更昔洛韦）;质粒组注射质粒（含CD/TK基因）与前药;超声辐照组注射质粒与前药,并予超声辐照;超声辐照微泡组注射靶向超声造影剂（质粒与微泡混合物）与前药,并予超声辐照。实验期间记录裸鼠肿瘤生长情况;处理结束后5 d,剥除肿瘤,计算各组的抑瘤率;用倒置荧光显微镜观察目的基因瘤内转染情况,计算基因转染效率;RT-PCR法检测目的基因的表达;免疫组化法计数肿瘤的微血管密度（MVD）。 结果：与对照组比较,质粒组肿瘤的生长无统计学差异（P>0.05）,而超声辐照组与超声辐照微泡组肿瘤生长被明显抑制（均P<0.05）,质粒组、超声辐照组、超声辐照微泡组的抑瘤率分别为3.72%、21.40%、47.13%。质粒组、超声辐照组、超声辐照微泡组基因转染效率分别为0.78%、2.81%、23.87%,后者转染效率明显高于前两组（均P<0.05）。超声辐照组与超声辐照微泡组肿瘤组织中均出现CD/TK基因阳性片段,而对照组与质粒组的肿瘤组织中未见。超声辐照组与超声辐照微泡组肿瘤组织MVD计数均明显低于对照组,且超声辐照微泡组低于超声辐照组（均P<0.05）,质粒组MVD计数与对照组无统计学差异（P>0.05）。 结论：超声辐照微泡介导的双自杀基因系统能有效提高基因转染效率与表达,从而增强对肿瘤生长和肿瘤微血管的生成的抑制作用。     

超声联合微泡介导肝癌靶向治疗的研究进展

随着超声影像技术的不断发展和造影剂制备工艺的不断改进,超声造影剂正在从诊断领域向治疗领域拓展。作为一种新的药物和基因载体,造影剂受到广泛关注,同时其在增强超声介导疾病治疗方面也显示出一定优势。本文就造影剂联合超声辐照介导肝癌靶向治疗的研究进展进行综述。     

超声微泡携靶向基因治疗肝癌的研究进展

目前肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,有着较高的发病率和病死率。随着超声造影技术与分子生物学的不断发展,超声微泡造影剂携带基因治疗肿瘤是当前的研究的热点,为肿瘤治疗带来了新的希望。超声靶向击破技术为肝癌基因治疗方面提供了一种强有效的非病毒途径,具有广泛的应用潜力。现将超声微泡联合基因靶向治疗肝癌的研究现状作一综述。     

超声介导载药微泡靶向治疗肿瘤的研究进展

超声介导载药微泡靶向药物释放（UTMD）是一种新兴的靶向给药方法,以声学微泡包裹药物后,经局部超声辐照,可实现缓释及靶向给药的双重作用。同时,超声辐照可促进组织细胞内吞作用并产生声孔作用,在不破坏细胞的情况下增加靶组织对药物的摄取。UTMD为治疗肿瘤等疾病提供了一种安全且可有效减少全身不良反应的给药方法。本文对UTMD应用于肿瘤治疗的作用机制、研究及应用进展进行综述。     

载多西紫杉醇脂质微泡联合超声靶向微泡破裂对兔VX2肝癌微血管的作用

目的探讨载多西紫杉醇脂质微泡（DLLM）联合超声靶向微泡破裂（UTMD）对兔VX2肝癌微血管的抑制作用。方法建立60只兔VX2肝癌动物模型,将其随机分为6组（n=10）：单纯药物组（Doc组）、单纯载药微泡组（DLLM组）、药物＋超声组（Doc＋US组）、单纯微泡＋超声组（PLM＋US组）、载药微泡＋超声组（DLLM＋US组）及对照组,比较各组动物肿瘤组织的血管密度（MVD）、CD34及VEGF的表达。结果处理后DLLM＋US组的CD34表达水平低于其他各组,MVD明显降低,与其他各组相比差异有统计学意义（P〈0.01）;DLLM＋US组的VEGF表达水平明显低于其他各组（P〈0.01）。结论 DLLM联合UTMD能抑制兔VX2肝癌的微血管生成,从而抑制兔VX2肝癌的生长。     

超声靶向微泡破裂介导EGFP质粒转染肝癌细胞的研究

目的探讨超声靶向微泡破裂(Ultrasound Targeted Microbubble Destruction,UTMD)介导EGFP质粒转染肝癌细胞株HepG2的有效性、安全性并优化超声辐照参数。方法体外培养HepG2细胞,在不同治疗超声的声强、占空比和辐照时间作用下,观察pEGFP-N3质粒在HepG2细胞中的转染。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白在HepG2细胞中的表达,流式细胞仪检测细胞的转染率,MTT法检测细胞活性。结果在超声声强为2 w/cm2、占空比为20%、照射时间为60 s时,HepG2细胞的7转染率最高,达到11.53%±2.15%,且细胞生存率大于85%。结论 UTMD是一种有效的基因转染方法,不同的超声转染参数对细胞活力和基因传输效率有较大影响,对其进行优化后可减少细胞损伤,增强基因转染。     

短发夹状RNA对胃癌细胞株血管内皮生长因子mRNA表达的影响

RNA干扰已成为当前肿瘤基因治疗的新策略，我们设计了针对血管内皮生长因子（VEGF）短发夹RNA（shRNA），观察其对人胃癌细胞血管VEGF表达的影响。     

高强度聚焦超声联合纳米微泡造影剂对兔VX2乳腺移植瘤辐照效果的影响

目的观察高强度聚焦超声（HIFU）联合纳米微泡对兔VX2乳腺移植瘤辐照效果的影响。方法制备纳米微泡,于光镜、电镜下观测微泡的大小、形态、分布及稳定性。采用Zeta SIZIER 3000电位仪测定微泡的粒径、电位。60只健康纯种雌性新西兰白兔,麻醉后种植VX2肿瘤于双侧乳腺组织内。2周后,选取乳腺区肿瘤组织直径大小为10mm的兔进行实验,随机分为实验组（HIFU＋纳米微泡）和对照组（HIFU＋磷酸盐缓冲液）,辐照剂量150 W,辐照时间5s,记录HIFU辐照前后灰阶变化,辐照后行HE染色观察坏死区域大小,并进行统计学分析。结果成功制备纳米微泡,其理化性质稳定,粒径大小合理,电位均衡。实验组靶区平均灰度差明显高于对照组（P〈0.05）。HE染色示实验组发生凝固性坏死范围明显大于对照组（P〈0.001）。结论纳米微泡能明显增强的损伤效果。     

RNA干扰靶向抑制胃癌细胞血管内皮生长因子C表达的实验研究

目的 构建针对血管内皮生长因子C（VEGF-C）的RNA干扰质粒表达载体pSIH1-H1-copGFP,并评价其转染胃癌细胞后对VEGF-C表达的抑制作用.方法 设计并合成针对VEGF-C基因mRNA序列的3条短发夹RNA及1条阴性对照序列,克隆到pSIH1-H1-copGFP载体,重组构建RNA干扰质粒,并将其转染胃癌细胞（SGC7901）,采用RT-PCR分析转染后VEGF-C基因的表达情况.结果 重组构建pSIH1-H1-copGFP载体经双酶切及插入片断序列分析,表明其成功插入设计位点,并且序列完全一致.3种siRNA质粒表达载体的转染效率均为60%～70%,对VEGF-C mRNA表达的抑制率分别为35.4%、33.8%和81.5%.结论 RNA干扰质粒表达载体介导对VEGF-C基因的RNA干扰可明显抑制胃癌细胞中VEGF-C的表达,可能成为抑制胃癌淋巴管生成的一种有效手段.     

Effect of ketoprofen in topical formulation on vascular endothelial growth factor expression and tumor growth in nude mice with osteosarcoma.

OST cells, a low metastatic cell line established from human osteosarcoma, were inoculated under the periosteum of the ossa cranii of nude mice. Four weeks later, tumors were percutaneously treated for an additional 4 weeks with a patch containing either placebo or ketoprofen (KP). In the placebo group, OST cells formed osteoid and invaded the cranial bone. Tumor mass weighed 3.54 g. Approximately 85% of cells within the tumor expressed proliferating cell nuclear antigen (PCNA), indicating that they were proliferating with a high mitotic activity. Many feeder vessels were located within the tumor. The majority of tumor cells expressed intensely vascular endothelial growth factor (VEGF). In the KP group, invasion of OST cells into the cranial bone was suppressed and the tumor mass was 47% of that of the placebo group. Approximately 65% of cells within the tumor were PCNA-negative, indicating that their growth was arrested. There were considerably fewer feeder vessels within the tumor in the KP group than in the placebo group. Only a small number of cells expressed VEGF. Based on these findings, we concluded that topical administration of KP to nude mice with osteosarcoma inhibited VEGF expression, reduced the development of feeder vessels for supply of nutrients and oxygen, and suppressed tumor growth.     

血管内皮生长因子反义RNA对EC9706人食管癌细胞抑制的作用

目的 观察血管内皮生长因子(VEGF)反义RNA对EC9706人食管癌细胞的抑制作用.方法 用脂质体法将反义VEGFcDNA质粒转染至EC9706人食管癌细胞,用噻唑蓝还原法(MTT法)检测EC9706细胞增殖,免疫组化SABC和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测VEGF蛋白和VEGF mRNA表达水平.流式细胞术检测细胞凋亡和周期分布.并将转基因EC9706细胞接种于BALB/C裸鼠后肢皮下,4周后观察皮下成瘤情况.结果 被反义VEGFcDNA质粒转染的EC9706食管癌细胞有外源性VEGF反义基因的整合及表达,该细胞VEGF mRNA及蛋白的表达水平降低,但细胞生长增殖能力和增殖周期无明显改变,未发生明显凋亡现象;接种裸鼠28 d后,EC9706-wt组、EC9706-A组及EC9706-E组皮下移植瘤的潜伏期分别为(5.8±2.4)、(12.4±3.6)、(5.3±2.2)d,瘤体重量分别为(2.83 ±0.32)、(0.87±0.14)、(2.62 ±0.68)g,EC9706-A组与其他两组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 VEGF反义RNA可抑制EC9706食管癌细胞VEGF表达和裸鼠体内肿瘤生长.     

RNA干扰技术抑制人肺腺癌细胞系A549血管内皮生长因子-165蛋白的表达

目的 观察RNA干扰技术能否有效抑制人肺腺癌细胞系A549血管内皮生长因子(VEGF)-165蛋白的表达.方法 体外合成3条VEGF-165序列特异性双链小RNA(shRNA)及1条阴性对照RNA,应用RNAiFectTMTransfection试剂盒转染细胞.Western blot法检测VEGF-165蛋白的表达,MTT及细胞计数法检测siRNA转染对细胞活性的影响.结果 随时间延长,目的siRNA对VEGF165蛋白表达有不同程度的影响,干扰时间越长,效果越明显.自干扰后24 h起,各组VEGF165蛋白的表达差异有统计学意义(对照组相对灰度为0.96±0.27;干扰组24 h相对灰度为0.81±0.10;48 h:0.52±0.12;72 h:0.36±0.10,P<0.05).噻唑蓝(MTT)比色法检测表明不同浓度siRNA及RNAiFect Reagent对细胞生长均无明显的抑制作用,与对照组之间差异无统计学意义(对照组:0.329±0.013;干扰组为0.329±0.017～0.357±0.042,P>0.05).细胞计数法检测表明不同浓度siRNA及RNAiFect Reagent对细胞生长增殖无明显影响.细胞与对照组之间差异无统计学意义(24 h:对照组1.56±0.11;干扰组1.47±0.12.72 h:对照组4.38±0.38;干扰组4.61±0.41,P>0.05).结论 siRNA可以有效抑制人肺腺癌细胞系A549 VEGF165蛋白的表达.     

血管内皮生长因子反义核糖核酸对人肺癌的抗血管生成作用

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义RNA封闭内源性VEGF表达对人肺癌裸鼠皮下移植瘤血管生成的影响。方法采用30只裸鼠建立人肺癌皮下移植瘤模型,通过原位分子杂交法测定VEGFmRNA、免疫组织化学法测定VEGF表达和微血管密度计数,比较治疗组和空载组、对照组间的差异,研究以脂质体介导VEGF反义cDNA经局部多点注射封闭内源性VEGF表达的抗血管生成作用。结果治疗组肿瘤组织的VEGFmRNA阳性细胞数为(21.83±13.47)个/0.05mm2、VEGF蛋白阳性细胞数(20.76±15.69)个/0.05mm2、微血管密度计数(MVD)为(2.30±1.95)条/0.20mm2,与对照组、空载组的差异均有统计学意义(P<0.01),VEGF反义RNA治疗能够有效的封闭内源性VEGF的生成、使肿瘤组织微血管生成减少,实验结束时瘤体大小与对照组和空载组的差异均有统计学意义(P<0.001)。结论VEGF反义RNA治疗是一种有效的肿瘤抗血管生成基因治疗方法。     

雷帕霉素对人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用

目的 探讨雷帕霉素对人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响及机制.方法 建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型24只,随机分为对照组、RAPA小剂量组(每日1 mg/kg体重)、RAPA大剂量组(每日5 mg/kg体重).用药4周后观察肿瘤体积和重量、肿瘤组织切片行透射电镜检查、荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测肿瘤的血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)mRNA的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定裸鼠血VEGF、MMP-2浓度.结果 与对照组比较,雷帕霉素小剂量组和大剂量组均能抑制肿瘤生长[(0.42±0.17)cm3和(0.38±0.21)cm3比(0.78±0.25)cm3,P＜0.05];VEGF mRNA、MMP-2 mRNA的转录和翻译显著减少(P＜0.01).结论 雷帕霉素可以通过抑制肝癌细胞VEGF和MMP-2的mRNA转录和蛋白表达,抑制肿瘤生长,但不呈剂量依赖性.     

血管内皮生长因子反义寡核苷酸对骨肉瘤细胞的抑制作用

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(ASODN)对骨肉瘤细胞的抑制作用。方法设计合成VEGF ASODN,按不同浓度转染骨肉瘤OS-732细胞,设正义(SODN)和空白对照组进行比较。观察细胞生长状态,Western blot检测VEGF蛋白表达,MTT法测定细胞生长抑制率(IR),流式细胞仪检测细胞凋亡。结果与SODN、对照组比较,ASODN组细胞中VEGF表达显著降低(P<0.05),IR(分别为10μmol/L组34.21%,20μmol/L组39.50%)显著增高(P< 0.05),上述效应呈浓度依赖性;镜下观察ASODN转染细胞代谢衰退,当转染浓度至20μmol/L时,其凋亡率AI值(18.25±0.40)%显著高于对照组(5.20±0.28)%和SODN组[(6.41±0.10)%, P<0.01]。结论ASODN能够特异性封闭骨肉瘤细胞VEGF基因表达;并可抑制细胞增殖,诱导其凋亡。     

RNA干扰沉默c-myc基因对胶质瘤血管内皮生长因子表达的影响

目的 观察c-myc癌基因在体外对胶质瘤细胞血管内皮生子因子(VEGF)表达的影响。方法 构建以c-myc基因为靶向的shRNA干扰质粒pCMYC,同时构建pHK质粒作为阴性对照,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组细胞中c-myc及VEGF mRNA水平的表达变化,采用免疫细胞化学法及Western blot法分别检测3组细胞中c-myc及VEGF蛋白的表达。结果 (1) IN500Δ-pCMYC细胞组c-myc与VEGF mRNA表达降低(0.273±0.028,0.443 ±0.048),与IN500Δ细胞组(1.185±0.145,1.116±0.072)及IN500Δ-pHK细胞组(1.098±0.128、1.208±0.133)比较差异均有统计学意义(P＜0.01)。(2)免疫细胞化学染色结果显示,IN500Δ-pCMYC细胞组c-myc与VEGF阳性细胞表达率均显著降低,为(24.52 ±4.39)％及(23.52±3.44)％,与IN500Δ及IN500Δ-pHK细胞组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。(3)Western blot法检测结果显示IN500Δ-pCMYC细胞中c-myc与VEGF的蛋白表达降低(0.221±0.041、0.284±0.025),与IN500Δ细胞组(1.821±0.191、1.531±0.213)及1N500Δ-pHK细胞组(1.650±0.110、1.820±0.122)比较差异均有统计学意义(P＜0.01)。结论 沉默c-myc基因能够抑制胶质瘤中VEGF的表达,从而降低肿瘤组织内的血管生成。     

血管内皮生长因子C和D在胃癌组织和血清中的表达和意义

目的 探讨VEGF-C和VEGF-D在胃癌组织和血清中的表达及其与淋巴结转移的关系.方法 2005年1月至12月80例胃癌手术患者,48例有区域淋巴结转移,32例无区域淋巴结转移,另设10例胃溃疡患者的正常胃黏膜为对照.ELISA法检测血清VEGF-C和VEGF-D,应用免疫组织化学方法检测正常胃黏膜和胃癌标本VEGF-C、VEGF-D表达情况.结果 胃癌患者血清VEGF-C和VEGF-D明显高于胃溃疡患者(χ2=8.39,P<0.05).胃癌患者血清VEGF-C阳性率受淋巴结转移影响(χ2=7.01,P<0.05).胃癌组织中,VEGF-C、VEGF-D阳性表达率分别为53%(42/80)、63%(50/80),明显高于正常胃黏膜组织(χ2=6.44.6.58,P<0.05),VEGF-C阳性表达率受淋巴结转移影响(χ2=11.25,P<0.05).结论 VEGF-C的表达受胃癌淋巴结转移影响,血清VEGF-C可作为胃癌的标志物,对术前判定淋巴结转移具有一定的临床价值.