δ阿片受体激活对培养心肌细胞生长的影响

目的观测δ阿片受体激活对培养的心肌细胞是否有直接的促生长作用。方法体外培养乳大鼠心肌细胞。结晶紫法和[3H]TdR法测定心肌细胞的增生;流式细胞仪测定细胞周期百分比;Lowry等法测定培养细胞蛋白质含量;倒置显微镜下计数心肌细胞搏动频率。结果δ阿片受体激动剂D-丙(2)-D-亮(5)脑啡肽(DADLE)10 nmol.L-1~10μmol.L-1能浓度依赖性促进细胞增殖,增加细胞蛋白质含量,增加细胞搏动频率;高选择性δ阿片受体拮抗剂纳曲吲哚(naltrindole)10μmol.L-1对DADLE的促进作用有一定的抑制作用。结论δ阿片受体激活对体外培养的心肌细胞生长有促进作用。     

δ阿片受体激活对过氧化氢损伤的心肌细胞的保护作用

目的研究δ阿片受体激活剂D-丙(2)-D-亮-(5)-脑啡肽(DADLE)对过氧化氢(H2O2)损伤的心肌细胞的保护作用及其机制。方法分离乳大鼠心肌细胞,培养48h后分为正常对照、H2O2(200μmol.L-1)、H2O2+DADLE(1μmol.L-1)、H2O2+DADLE+纳曲吲哚(10μmol.L-1)和H2O2+DADLE+U0126(10nmol.L-1)组,继续培养48h。用[3H]TdR掺入法检测心肌细胞增殖反应,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡百分率,乳酸脱氢酶(LDH)活性测定试剂盒测定培养上清LDH活性,硫代巴比妥酸显色法测定细胞内丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性,Western蛋白印迹法检测细胞外信号调节激酶磷酸化(p-ERK)水平。结果①与正常对照组比较,H2O2组心肌细胞[3H]TdR掺入值明显降低,细胞凋亡率升高;培养上清LDH活性和MDA含量明显增加,SOD活性和Ap-ERK/AERK的比值降低。②与H2O2组比较,DADLE可使心肌细胞[3H]TdR掺入值升高,细胞凋亡率下降;培养上清LDH活性和MDA含量降低,SOD活性和Ap-ERK/AERK的比值升高。③分别加入δ阿片受体拮抗剂纳曲吲哚和ERK拮抗剂U0126,DADLE对上述指标的逆转作用被抑制。结论δ阿片受体激活对H2O2损伤的心肌细胞具有保护作用,其机制可能与其增强心肌细胞的抗氧化功能及促进ERK磷酸化有关。     

δ阿片受体信号转导的研究进展

δ阿片受体属G蛋白偶联受体,其配体可抑制细胞内环磷酸腺苷水平和调节电压依赖的钙离子通道和钾离子通道。最近研究还发现,δ阿片受体选择性配体可介导细胞内储存钙的释放,并且调节各种蛋白激酶,本文就δ阿片受体的信号2转导途径的研究进展进行综述。     

δ阿片受体研究新进展

目的综述δ阿片受体研究进展。方法应用功能表达、受体结合、基因定位突变、构建嵌合受体等方法。结果和结论克隆出δ阿片受体,为３７２个氨基酸,属Ｇ蛋白耦联受体,存在７次跨膜结构。δ阿片受体中的天门冬氨酸９５（Ａｓｐ９５）残基和Ａｓｐ１２８残基处于受体结合位点的关键区域。δ阿片受体中的赖氨酸（Ｌｙｓ１０８）残基阻止ＤＡＭＧＯ与δ受体的结合;δ阿片受体的第３个细胞外环决定了δ受体激动剂对δ受体的选择性。δ受体第４跨膜域中的丝氨酸（Ｓｅｒ１７７）被突变可使经典拮抗剂呈现激动剂的性质。     

κ受体激动剂对异丙肾上腺素诱导大鼠乳鼠心肌肥厚的作用机制研究

目的：利用体外培养的大鼠乳鼠心肌细胞,研究异丙肾上腺素（ISO）诱导肥大心肌细胞中κ阿片受体（κ-OR）的作用及其机制。方法：新生大鼠心肌细胞培养,Lowry’s法测心肌细胞的蛋白含量;用消化分离法,利用计算机图像分析系统测心肌细胞的体积;[3H]leucine掺入法测定心肌细胞蛋白的合成,Western blot法测细胞外信号调节激酶（ERK）磷酸化水平。结果：在给予ISO诱导心肌肥大的情况下,ERK通路抑制剂U0126可减少肥大心肌细胞的蛋白质含量、体积、蛋白合成和ERK磷酸化程度;κ-OR激动剂U50,488H（U50）能够减少肥大心肌细胞的蛋白含量、体积和蛋白合成,但与U0126共同作用时（U0126先孵育30min）,其抑制心肌肥大作用一定程度上减小。结论：ISO激活引起ERK磷酸化增加,抑制ERK可以阻断ISO的致肥大作用;κ-OR激活能够抑制ISO所诱导的心肌细胞肥大,其作用机制与ERK相关。     

δ阿片受体激活对依赖于PKC路径的血清饥饿诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用

目的探讨δ阿片受体激活对血清饥饿诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用及机制。方法新生大鼠心肌细胞分为对照、模型、D-丙(2)-D-亮(5)脑啡肽DADLE 0.1μmol.L-1;DADLE 0.1μmol.L-1+naltrindole(δ阿片受体拮抗剂)10μmol.L-1、DADLE 0.1μmol.L-1+GF109203X 10μmol.L-1、DADLE 0.1μmol.L-1+staurosporine 1μmol.L-1组;分组给药48 h后,MTT法检测细胞存活率;流式细胞仪测心肌细胞的凋亡指数;流式细胞仪检测细胞周期。Western blot法检测心肌细胞的胞质内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)表达及蛋白激酶C(PKC)的表达。结果δ阿片受体激动剂DADLE能明显抑制由血清饥饿引起的心肌细胞的凋亡,表现为细胞存活率升高,凋亡率下降,G0/G1百分比降低,G2/M百分比增加;caspase-3蛋白表达明显下降;PKC蛋白表达明显升高;加入naltrindole可以阻断DA-DLE对心肌细胞凋亡的抑制作用,加入GF109203X和stau-rosporine可明显拮抗DADLE抑制由血清饥饿引起的心肌细胞的凋亡的作用,表现为细胞存活率降低,凋亡率升高;G0/G1百分比增加,G2/M百分比降低;caspase-3的蛋白表达明显升高;PKC表达明显降低。结论δ阿片受体激活后通过活化PKC通路抑制血清饥饿所致的心肌细胞凋亡。     

吗啡对μ阿片受体介导的ERK磷酸化的影响

目的：利用表达μ阿片受体的中国仓鼠卵巢细胞,研究吗啡急慢性处理下对细胞外信号调节激酶（ ERK）磷酸化的影响。方法免疫印迹检测磷酸化ERK水平,获取1 h急性处理的ERK磷酸化变化时程和36 h慢性处理以及纳洛酮催促下的ERK磷酸化变化。结果1μmol·L-1吗啡可以快速诱导ERK磷酸化水平短暂升高,5 min时达峰（ P〈0.01）,吗啡诱导的ERK磷酸化水平升高具有显著的浓度依赖性。10μmol·L-1吗啡慢性处理36 h后ERK磷酸化水平与对照组比较,差异无统计学意义,但纳洛酮急性催促5或10 min均导致ERK磷酸化显著下降（与对照比较,P〈0.01）。结论吗啡急慢性刺激下以及纳洛酮催促下ERK磷酸化表现出不同的变化形式,提示μ阿片受体介导下ERK相关的信号通路发生了代偿。     

δ阿片受体转激活EGFR发挥神经保护作用的机制研究

目的研究δ阿片受体(δOR)激动剂DADLE对大脑中动脉栓塞/再灌注大鼠发挥神经保护作用的机制。方法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型模拟缺血性卒中,侧脑室埋管单侧注射给予δOR激动剂DADLE(5 nmol·L~(-1)10μL),检测运动功能行为学评分和脑缺血面积,并利用Western印迹、qPCR、ELISA、免疫组化等方法检测EGFR及其下游信号分子Akt和ERK的激活程度和蛋白转录、表达水平变化。结果DADLE能够明显减少缺血性卒中模型鼠的脑缺血面积(TTC染色:对照组缺血面积29.25%,DADLE组缺血面积减至14.22%,P<0.001),并明显改善缺血/再灌注引起的半侧肢体运动障碍(Garcia行为学评分:对照组得分5.67,DADLE组得分11.67,P<0.001);同时,缺血/再灌注后24-72 h,EGFR磷酸化程度显著性升高5.31倍,下游信号分子Akt、ERK的磷酸化程度分别显著性升高1.95和3.12倍,且EGFR的mRNA表达量在24 h时间点增加5.88倍(P<0.05),蛋白表达量增加3.27倍(P<0.05)。EGFR阻断剂AG1478和金属蛋白酶MMP抑制剂GM6001可剂量依赖性阻断该作用。结论 DADLE可以通过转激活EGFR的通路,激活下游信号,改善缺血性卒中所引起的大脑缺血及运动障碍,发挥神经保护作用。     

C—末端截短δ阿片受体的结合特征

目的：研究δ阿片受体Ｃ－末端在受体结合配体的亲和力及选择性中的作用。方法：在中国苍鼠卵巢细胞（ＣＨＯ细胞）中分别稳定表达Ｃ末端截短３１个氨基酸残基及野生型δ阿片受体，用受体结合分析法研究了表达产物与配体的结合特征，结果：表达得到典型突变受体克隆ＣＨＯ－Ｔ及野生型受体克隆ＣＨＯ－Ｗ，ＣＨＯ－Ｔ结合（＾３Ｈ）ｄｉｐｒｅｎｏｒｐｈｉｎｅ（Ｄｉｐ）及（＾３Ｈ）（Ｄ－Ａｌａ＾２，Ｄ－Ｌｅｕ＾５）ｅｎｋｅｐｈ     

δ阿片受体激动剂DPDPE和TIPP不同的通过转激活表皮生长因子受体激活ERK的机制研究

G蛋白偶联受体(GPCR)可通过多种信号途径激活ERK。其中通过转激活酪氨酸受体是GPCR激活ERK的重要途径之一。我们以前的研究发现阿片受体激动剂DPDPE,TIPP和吗啡能够通过不同的信号途径激活ERK。本研究探讨这些阿片受体激动剂不同的激活ERK是否与它们不同的转激活受体酪氨酸激酶有关及其转激活相关的机制。本研究发现DPDPE,TIPP和吗啡对δ阿片受体转移激活表皮生长因子受体(EGFR)的作用上存在不同的调节效应,发现TIPP和吗啡激动δ阿片受体可引起对EGFR的转移激活,而DPDPE则不能;TIPP和吗啡激动δ阿片受体引起对EGFR的转移激活过程中有PKCδ的参与;GRK磷酸化δ阿片受体的位点丝氨酸363突变可以使原本不引起转移激活的激动剂DPDPE,引起转移激活作用;并且,RNA干扰β-arrestin可以影响EGF刺激EGFR引起的磷酸化ERK信号,故β-arres-tin可能参与转移激活作用。本课题的研究对于深入探索δ阿片受体信号转导的机制有重要的意义。     

阿片受体参与缺血后处理心肌保护作用

近年来,阿片受体在心肌缺血后处理的保护作用得到广泛关注,本文就阿片受体在心肌缺血后处理过程中作用及可能机制做简要综述。     

丹参酮IIA磺酸钠对血管紧张素II诱导的心肌肥大及p-ERK表达的影响

目的:观察丹参酮IIA磺酸钠(STS)对血管紧张素II(Ang II)诱导的心肌肥大及p-ERK表达的影响。方法:培养新生大鼠心肌细胞,考马斯亮蓝法测定心肌细胞蛋白含量、[3H]-亮氨酸掺入法测定蛋白合成速率作为心肌肥大指标;用West-ern-blot测定p-ERK表达。结果:STS能显著降低Ang II诱导的心肌细胞总蛋白含量、蛋白合成速率上升,同时对p-ERK表达具有剂量、时间依赖性抑制作用。结论:STS可以抑制Ang II诱导的心肌肥大,机制与抑制p-ERK表达有关。     

μ和δ阿片样受体在自发高血压大鼠和正常血压WKY大鼠中枢神经系统中的分布(英文)

目的:比较自发高血压大鼠(SHR)和对照组WKY大鼠中枢神经系统中阿片受体亚型的分布。方法:用放射自显影法,选用~3H-OMF,~3H-U69593分别标记μ和κ受体,用遮盖法以~3H-etorphine标记δ受体。结果:δ受体密度在SHR下丘脑、中央灰质高于WKY,μ受体密度在SHR杏仁基底外侧核、僵核、孤束核低于WKY,κ受体密度没能检测出。结论:阿片受体亚型不同分布与SHR的血压有关,并且δ受体对高血压的维持作用大于μ受体。     

丹参酮ⅡA磺酸钠对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥大及p-ERK表达的影响

目的：观察丹参酮ⅡA磺酸钠（STS）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌肥大及p-ERK表达的影响。方法：培养新生大鼠心肌细胞，考马斯亮蓝法测定心肌细胞蛋白含量、[H^3]-亮氨酸掺入法测定蛋白合成速率作为心肌肥大指标；用West—ern-blot测定p-ERK表达。结果：STS能显著降低AngⅡ诱导的心肌细胞总蛋白含量、蛋白合成速率上升，同时对p-ERK表达具有剂量、时间依赖性抑制作用。结论：STS可以抑制AngⅡ诱导的心肌肥大，机制与抑制p-ERK表达有关。     

褪黑素对大鼠失血性休克心肌的保护作用及对MEK/ERK通路的影响

目的探讨褪黑素（MT）对大鼠失血性休克心肌的保护作用及其机制。方法将40 只健康成年大鼠随机分为4组，MT干预组采用股动脉放血法制作放血休克模型，并经颈外静脉注射MT（2 mg·kg 1）；溶剂对照组制作放血休克模型并注射含0.5%乙醇的0.9%氯化钠溶液(10 mg·kg 1)；休克模型组制作放血休克模型但不注射任何试剂；假手术对照组进行单纯血管分离。采用ELISA法检测各组大鼠血清TNF α、 ICAM 1含量，免疫沉淀法纯化蛋白并测定ERK活性；Western blot法测定p ERK1/2和p MEK1/2表达。结果MT干预组大鼠休克后TNF α、ICAM 1含量均明显低于溶剂对照组和模型组(均P＜0.01)，ERK活性及p ERK1/2、p MEK1/2表达亦均明显低于溶剂对照组和模型组(均P＜0.01)。结论MT对失血性休克心肌有保护作用，作用机制与下调MEK/ERK通路活性有关。     

阿片受体脱敏作用中G蛋白偶联受体激酶和arrestin的研究进展

临床上,许多病人使用阿片类药物来缓解疼痛,但由于反复或长期使用导致的耐受和依赖而限制其应用。长期使用阿片受体激动剂会导致受体本身适应性变化,称为阿片受体的脱敏(desensitization),包括受体与G蛋白脱偶联、受体内吞和下调[1]。阿片受体的脱敏是其信号途径调节的重要机制,与耐受的形成密切相关。越来越多的研究显示,G蛋白偶联受体激酶(G protein coupled receptor kinases,GRKs)所介导的受体磷酸化,以及β-arrestin的结合与阿片受体脱敏之间具有密切关系,提示了GRKs和arrestin在调节阿片受体脱敏中具有关键性作用。本文综述了GRK…     

ERK信号转导通路在心肌缺血再灌注损伤中的作用

细胞外信号调节激酶(ERK1/2)作为丝裂原活化蛋白激酶家族中一个重要的亚族,在调节细胞的生长、分化、应激以及死亡中起重要作用。大量研究表明,ERK信号通路在体内外心肌缺血/再灌注损伤过程中被激活并发挥了重要作用。激活ERK既可以促进细胞存活,也可以介导细胞损伤,这与细胞种类的不同或缺血/再灌注的程度及时程的不同有关。本文就ERK信号转导通路在心肌缺血再灌注损伤中的作用及其机制作一综述。     

阿片受体激活对培养心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护作用

目的：观察δ阿片受体激活剂D-丙（2）-D-亮（5）脑啡肽（DADLE）对培养心肌细胞缺氧／复氧（H／R）损伤的保护作用。方法：采用培养的SD大鼠乳鼠的心肌细胞，建立H／R损伤模型，检测指标包括：（1）心肌细胞形态；（2）心肌细胞存活率；（3）超氧化物歧化酶（SOD）活性；（4）丙二醛（MDA）含量；（5）乳酸脱氢酶（LDH）活性。结果-模型组缺氧后心肌细胞存活率降低，复氧30min后进一步下降，各个时间点细胞内SOD活性下降，MDA含量升高，LDH活性升高，与正常组比较差异有统计学意义（P〈0．01），复氧60min后各指标逐渐趋于正常状态；DADLE 1μmaol／L组细胞存活率升高，LDH活性降低，MDA含量逐渐趋于正常，SOD活性逐渐回升，表明经DADLE干预后，心肌细胞抗损伤能力加强，发生损伤的程度减轻；δ阿片受体抑制剂纳曲吲哚10μmol／L抑制DADLE的保护作用。结论：DADLE通过δ阿片受体对乳鼠心肌细胞H／R损伤具有保护作用。