大鼠实验性肝癌发生中卵圆细胞的变化

目的：探讨卵圆细胞在大鼠肝癌发生、发展过程中的作用．方法：60只SD大鼠随机分为对照组(n=12)和实验组(n=48)．用化学致癌剂3’-甲基-4-二甲基氨偶氮苯(3’-Me-DAB)诱发大鼠肝癌,通过免疫组织化学、RT-PCR,Western blot技术对大鼠诱癌过程(4,8,12,16,20,24 wk)中肝组织内卵圆细胞及p53基因表达的变化进行动态的检测．结果：诱癌4wk,大鼠肝门管区及坏死区内均见大量卵圆细胞,这些细胞呈OV-6染色阳性．诱癌16wk,肝组织内可见癌结节形成,癌结节内外均可见有卵圆细胞聚集,部分增生的卵圆细胞P53阳性反应,二者的分布区域基本一致．诱癌20wk后大鼠肝癌组织内的p53 mRNA(F =4．78,P＜0．05),P53蛋白水平均显著升高(F= 2．46．P＜0．05)．结论：卵圆细胞贯穿了大鼠受化学诱癌剂作用后发生肝癌的全过程,与肝癌的发生有着密切的联系；其机制可能与p53基因的突变有关．     

肝卵圆细胞分子标志物的研究进展

肝干细胞是一类具有自我更新与增殖分化能力的细胞,能产生表现型与基因型和自己完全相同的子细胞.起源于前肠内胚层,在胚胎发育过程中以肝细胞的形式存在,在成年哺乳动物肝中以小卵圆细胞存在,表现为核大而胞质小并具有特殊的细胞标记.正常情况下这类细胞处于静止期,增生分裂非常慢.当切除或药物损伤后,这类细胞开始活化增生,迅速从静止期进入增殖期.近年来的研究已经证实,肝卵圆细胞在肝细胞严重受损和分裂增生受抑制时呈现出向肝细胞和胆管上皮细胞双向分化的潜能,是一种肝脏的干细胞,目前已经成为热点.肝卵圆细胞不仅在急慢性肝功能不良、晚期肝硬化等肝脏病变,在胰腺病变引起的糖尿病等疾病研究中也开始引起兴趣.但如何发现和获得肝卵圆细胞始终是解决此类问题的关键.本文就肝卵圆细胞的分子标志物的研究进展作一综述.     

大鼠肝卵圆细胞的分离培养及脾内移植研究

目的 观察肝卵圆细胞在同种异体大鼠脾内移植的演变结果,为肝干细胞移植治疗临床肝功能衰竭提供实验依据。方法 采用改进的梯度离心法分离肝卵圆细胞,体外培养鉴定后移植入2/3肝切除的同种异体大鼠脾脏内。结果 每只模型大鼠肝脏中可分离获得约1.69×10~5/ml肝卵圆细胞。体外培养的肝卵圆细胞呈现上皮细胞的生长特点,对OV6、细胞角蛋白19及甲胎蛋白染色呈阳性反应,对白细胞共同抗原染色呈阴性反应。肝卵圆细胞植入异体大鼠脾脏内可形成岛屿状肝组织结构,形成“肝化脾”。结论 大鼠肝卵圆细胞具有肝干细胞的生物学特征,在一定条件下可分化为肝细胞及胆管上皮细胞。     

肝卵圆细胞与肝脏疾病

肝卵圆细胞(Ｈｅｐａｔｉｃｏｖａｌｃｅｌｌ,ＨＯＣ)是在慢性肝病患者的肝脏中出现的一种具有多分化潜能的原始细胞,可分化为过渡细胞小肝细胞和成熟肝细胞,也可向胆管细胞分化[１,２]。ＨＯＣ参与了肝组织的再生,与肝肿瘤的发生有密切的关系。下面就ＨＯＣ与慢性肝病和肝肿瘤的关系作一综述。     

大鼠肝卵圆细胞增殖过程中基质细胞衍生因子-1及其受体CXCR4的表达

近年来,有研究表明基质细胞衍生因子1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)和其受体CXCR4(SDF-1/CXCR4)轴在干细胞的增殖分化中起至关重要的作用[1].本研究采用2-乙酰氨基芴联合部分肝脏切除术(AAF/PH)成功诱导肝卵圆细胞增殖,同时给AAF/PH模型大鼠注射CXCR4特异性抑制剂AMD3100,通过检测SDF 1和其受体CXCR4在卵圆细胞增殖过程中表达的变化情况,进一步研究SDF-1/CXCR4轴在肝卵圆细胞增殖过程中的作用.     

肝卵圆细胞——肝干细胞研究进展

<正>近年来对干细胞的研究不断深入,人们发现成年肝组织内存在具有干细胞特性的细胞,在特定环境因素作用下可向肝细胞和胆管细胞分化,甚至可向肝癌细胞方向分化,该细胞被称为肝卵圆细胞或肝前体细胞,是具有一定共性的干细胞群体,与其分化的上下游细胞难以区分,本文就     

肝卵圆细胞活化对二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化的影响

目的观察肝卵圆细胞（HOC）活化在实验性大鼠肝纤维化中的作用。方法应用二甲基亚硝胺复制大鼠肝纤维化模型,分别应用迷走神经肝支切断术和化学性肝交感神经阻断术阻断自主神经。Mallory染色观察肝纤维化水平,免疫组化观察HOC活化水平。结果 HOC活化增强组肝纤维化水平显著降低,血清透明质酸（HA）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、层黏连蛋白（LN）水平显著降低,HOC活化与肝纤维化水平呈负相关。结论交感神经抑制术引起的HOC活化水平增高能够抑制二甲基亚硝胺诱发的肝纤维化。     

肝卵圆细胞调控机制研究进展

肝卵圆细胞是一类存在于成年肝脏、具有自我更新和多向分化潜能的肝干细胞。当肝脏发生严重损伤且肝细胞再生障碍时,卵圆细胞被激活并大量增殖,参与肝脏损伤的修复与重建。肝卵圆细胞增殖分化是多因素作用的结果。现就肝卵圆细胞的定位、来源及调控机制的研究进展作一概述。     

大鼠肝卵圆样细胞恶性转化过程中的基因表达谱分析

目的 分析肝卵圆细胞恶性转化过程中基因表达谱的改变,探讨差异基因的意义.方法 经直接致癌剂N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍启动的大鼠肝卵圆细胞样WB-F344暴露于过氧化氢,每周1次,重复21次诱发其恶性转化.通过形态学、遗传学和软琼脂克隆形成等实验验证细胞的转化.并应用四甲基偶氮唑盐法检测转化细胞的增殖能力.采用大鼠癌通路发现者功能芯片比较恶性转化过程中正常对照(WB),WB-5(过氧化氢刺激5次),WB-21(过氧化氢刺激21次)3组细胞基因表达的差异. 结果 转化的细胞获得了异倍体核型,具有非停泊依赖生长特性.电镜下转化细胞的细胞器增多,出现缝隙连接和微绒毛等结构.基因表达谱分析显示共有21个基因差异表达,主要参与调节细胞增殖、凋亡、细胞黏附运动等,其中连续上调的有pten,连续下调的有cdknla,而先上调再下调的基因有myc、fos、casp-8等. 结论细胞增殖和凋亡的异常在卵圆细胞恶性转化过程中起重要作用,而cdknla、pten、myc、fos等基因可能是起关键作用的分子.     

ABC转运蛋白在大鼠肝脏卵圆细胞中的表达

目的研究ABC转运蛋白基因家族的三个主要成员MDR1、MRP1和Bcrp1基因在大鼠肝脏卵圆细胞中的表达及意义。方法建立大鼠2-乙酰氨基芴／三分之二肝切除模型，两步胶原酶灌注结合Percoll密度梯度离心分离大鼠肝脏卯圆细胞和肝细胞，采用免疫组织化学染色检测大鼠肝脏组织中MDR1、MRP1、Bcrp1转运蛋白的表达；采用荧光定量PCR方法检测MDR1、MRP1和Bcrp1基因mRNA在卵圆细胞和肝细胞中的表达水平。结果免疫组织化学染色显示大鼠肝脏组织中MDR1表达位于门静脉区附近，呈放射状分布，Bcrp1表达定位在细胞膜上。大鼠肝脏卵圆细胞MDR1、MRP1和Bcrp1基因mRNA的表达水平分别是肝细胞的9倍、1．5倍和13．8倍。结论卵圆细胞表达高水平的ABC转运蛋白，后者参与卵圆细胞免受外源性化学物质损伤的自我保护机制。     

大鼠肝卵圆细胞增殖模型的建立与优化

目的 建立大鼠肝卵圆细胞增殖模型，并观察2-乙酰氨基芴（2-acetaminofluorene,AAF)剂量与模型动物肝卵圆细胞增殖程度间的关系。方法 选择体重150g左右的雄性Wistar大鼠，通过胃管灌喂AAF，每日1次，连续4d，第5日行三分之二肝切除（手术当日不灌喂AAF），第6日继续灌喂，连续1周。AAF剂量分别按2.5、5、10、20mg/kg给予，对照组给予生理盐水灌喂。各组手术后复隔2-3d分别取3只大鼠肝组织作常规组织学观察及免疫组织化学染色。结果 对照组大鼠肝组织内未见到肝卵圆细胞，2.5mg/kg剂量组及5mg/kg剂量组仅见少量肝卵圆细胞增生，而10、15、20mg/kg三个剂量组肝组织内均见明显的肝卵圆细胞增殖反应；肝卵圆细胞胞浆细胞角蛋白19（CK19）、OV6及波形蛋白染色均呈阳性，胞核增殖细胞抗源染色呈阳性。结论 AAF剂量为10-20mg/kg时可获得满意的大鼠肝卵圆细胞增殖模型。     

Intrahepatic transplantation of hepatic oval cells for fulminant hepatic failure in rats

AIM： To evaluate the effect of intrahepatic transplantation of hepatic oval cells （HOC） on fulminant hepatic failure （FHF） in rats.
METHODS： HOC obtained from rats were labeled with green fluocescent protein （GFP） or 5, 6- carboxyfluorescein diacetate succinmidyl ester （CFDASE）. Cell fluorescence was observed under fluorescent microscope at 6, 24, 48 and 72 h after labeling. CFDA- SE labeled HOC （5 × 10^6 cells each rat） were injected into livers of rats with FHF induced by D-galactosamine. Serum albumin （ALB）, alanine aminotransferase （ALT）, aspartate aminotransferase （AST） and total bilirubin （TBil） levels were measured at different time points. Liver function of rats was examined on days 3, 7, 14 and 21 after HOC transplantation.
RESULTS： The positive rate of GFP and CFDA-SE labeled HOC was 10% and 90%, respectively, with no significant change in cell viabilities. The survival rate was higher in HOC transplantation group than in control group, especially 48 （9/15 vs 6/15） and 72 h （9/15 vs 4/15） after HOC transplantation. The serum ALT, AST and TBil levels were decreased while the serum AIb level was increased after HOC transplantation. Fluorescence became faded and diffused in liver tissues, suggesting that proliferation and differentiation occur in transplanted HOC.
CONCLUSION： CFDA-SE is superior to GFP in labeling HOC, although fluorescence intensity is decreased progressively with cell division. HOC transplantation can improve the liver function and increase the survival rate of recipients.     

Thy1.1阳性肝脏卵圆细胞在大鼠肝硬化形成与消减过程中的动态表达

目的 肝脏卵圆细胞（HOC）在二甲基亚硝胺（DMN）致大鼠肝硬化形成与消减过程中表达的动态变化，探讨其病理生理意义。方法 应用DMN腹腔注射（4周12次）制备大鼠肝硬化模型，分别于造模后3d、2、4周及终止造模后2、4周处死大鼠取肝组织，进行常规组织学观察，透射电镜下观察HOC超微结构，免疫组织化学和western blot方法检测Thy1．1的表达变化，应用图像分析法对所标记的HOC进行半定量测定以及光镜下计数细胞数量。结果 DMN造模4周大鼠已形成典型的肝硬化；终止造模后2周时肝组织病变较造模4周时有所减轻，终止造模后4周时炎症明显减轻并以不完全纤维间隔为主。Thy1．1阳性染色细胞正常大鼠肝组织未见到，造模后3d时可见微量表达，2周时呈散在分布，4周时明显增多，见于纤维间隔周围，终止造模后2周、即第6周时阳性染色显著强于造模4周，大量出现于汇管区，8周时较6周有所减少，表达量基本与4周时相等。阳性染色图像分析、光镜下阳染细胞计数及western blot三者的结果呈一致性。Western blot结果与免疫组织化学观察结果也具一致性。电镜下显示HOC具有形态小，核以卯圆型为主，高的核／浆比例等特点。结论 Thy1．1阳性的HOC可能与肝硬化的消减或逆转有关。     

肝星状细胞诱导卵圆细胞向成熟肝细胞分化的体外研究

目的 研究肝星状细胞(HSC)在体外培养的卵圆细胞向成熟肝细胞分化过程中所起的作用.方法 (1)将卵圆细胞分别与原代培养的HSC混合共培养(混合共培养组),采用Millicell小室不接触共培养(不接触共培养组),卵圆细胞单独培养作为对照组.在共培养后第7、14、21天观测,采用Western blot和荧光定量PCR检测肝细胞核因子4 α(HNF-4 α)、白蛋白和甲胎蛋白(AFP)、细胞角蛋白19(CK-19)的表达量;(2)电子透射显微镜观察卵圆细胞超微结构的变化;(3)过碘酸希夫染色检测各时间点卵圆细胞内糖原颗粒的含量;(4)酶联免疫吸附法检测各时间点卵圆细胞分泌白蛋白的含量.统计学处理采用重复测量资料的多因素方差分析和LSD-t检验.结果 (1)卵圆细胞第7、14、21天表达HNF-4 α和白蛋白的mRNA的量(相对与共培养之前的表达量的倍数):混合共培养组HNF-4 α分别为(1.9±0.2)倍、(10.7±1.2)倍、(12.0±1.3)倍;白蛋白mRNA的量分别为(5.7±1.6)倍、(110.7±13.7)倍、(173.6±22.3)倍;不接触共培养组HNF-4 α分别为(1.4±0.1)倍、(3.2±0.6)倍、(8.9±1.4)倍;白蛋白mRNA的量分别为(2.9±1.4)倍、(22.3±8.5)倍、(96.3±16.3)倍.共培养组(混合共培养与不接触共培养组)的表达量均高于对照组,LSD-t值分别为32.98,10.08;13.38,7.96; P值均<0.01,差异有统计学意义.第7、14、21天AFP、CK-19的表达量:混合共培养组AFP分别为(1.1±0.2)倍、(0.2±0.0)倍、(0.0±0.0)倍;CK-19分别为(0.2±0.1)倍、(0.0±0.0)倍、(0.0±0.0)倍;不接触共培养组AFP分别为(1.0±0.2)倍、(0.2±0.1)倍、(0.1±0.0)倍;CK-19分别为(0.6±0.1)倍、(0.1±0.0)倍,(0.0±0.0)倍.共培养组(混合共培养与不接触共培养组)的表达量均低于对照组.LSD-t值分别为37.99,34.50;13.59,22.46;P值均<0.01,差异有统计学意义.(2)卵圆细胞共培养后白蛋白分泌量明显增加:混合共培养组:14 d为(15.30±0.09)ng/ml、21 d(20.98±0.12)ng/ml,不接触共培养组14 d为(11.41±0.13)ng/ml,21 d为(15.12±0.17)ng/ml,混合共培养组高于不接触共培养组,LSD-t=251.94,P<0.01,差异有统计学意义.(3)随着共培养时间的延长,卵圆细胞内质网、线粒体和高尔基体等细胞器逐渐丰富,且细胞间形成毛细胆管结构.(4)过碘酸希夫染色显示共培养后卵圆细胞内出现大量红色糖原颗粒.结论 HSC可以诱导卵圆细胞向成熟肝细胞分化,HSC除了通过细胞因子等可溶性因子途径发挥作用外,与卵圆细胞的直接接触也有着重要作用.     

Polo样激酶1基因在大鼠肝再生和肝卵圆细胞增殖中的差异表达

肝脏具有很强的再生能力,当发生轻、中度肝损害时,肝细胞可经增殖和分化等复杂过程完成肝再生;而在肝细胞大量损害或肝细胞增殖能力被抑制时,卵圆细胞可增殖并分化为肝细胞或胆管细胞.然而,目前研究结果已初步证实肝细胞癌的发生也源起于卵圆细胞,其分子机制仍有待深入研究[1-3]. Polo样激酶1(Plk1)属于保守的丝氨酸/苏氨酸激酶家族,在调控细胞周期进程和细胞分裂方面起着十分重要的作用[4-6].研究结果表明,Plk1在肝癌中的表达增强[7-8].我们在前期研究中也发现Plk1基因在肝细胞癌中差异表达[9].但是Plk1在肝卵圆细胞中的表达及其病理意义鲜见报道.本研究以二乙酰胺基芴(2-AAF)为致癌物诱导大鼠肝卵圆细胞增殖,与单纯肝再生组织进行对比分析,探讨Plk1在肝卵圆细胞中的表达及其与癌前状态的关系.     

急性肝损伤大鼠肝卵圆细胞活化增殖的研究

目的　用D-氨基半乳糖 (D-galactosamine ,D-GalN)联合胆总管结扎 (CommonBiliaryDuctLigation ,CBDL)建立大鼠急性肝损伤模型 ,观察肝损伤后再生过程中肝卵圆细胞 (HepaticOvelCell,HOC)的活化和增殖。 方法　雄性SD大鼠 ,胆总管结扎离断术后予腹腔注射D-GalN 2 .0 g/kg ,对照组不做任何处理。处理后第 1、2、3、4、5及 6天 6个时间点测血清肝功能 ,取肝组织分别行苏木精 伊红染色、电镜、免疫组织化学及RT-PCR检测 ,并对符合HOC形态学特征且胞浆OV-6阳性染色的细胞进行计数。结果　肝功能损害以第 2天明显 (P <0 .0 1) ;对照组肝组织内未见HOC ,处理组各时间点均见有不同程度的HOC增殖反应 ,以第 3天HOC计数最多 (P <0 .0 5 ) ;HOC胞质AFP、OV 6染色阳性 ,胞核BrdU染色阳性 ;RT-PCR示模型组CGT mRNA表达明显增多。结论　用D GalN2 .0 g/kg联合CBDL可获得较满意的大鼠HOC增殖模型 ,在急性肝损伤时HOC被活化和不同程度的增殖 ,参与了肝再生过程