B7基因修饰的肿瘤细胞诱导抗大肠癌主动免疫

目的：研究Ｂ７基因修饰的肿瘤细胞诱导抗大肠癌ＣＴＬ的活化。方法：采用电击法将Ｂ７基因导入小鼠大肠癌细胞ＣＭＴ９３,Ｇ４１８筛选阳性克隆,免疫组化显示Ｂ７分子有高效表达,Ｂ７,ＣＭＴ９３（ＣＭＴ９３－Ｂ７）接种于Ｃ５７ＢＬ／６小鼠背部皮下,其致瘤性显著下降,ＣＭＴ９３－Ｂ７致敏的小鼠对野生型瘤细胞具有免疫保护作用;用ＣＭＴ９３和ＣＭＴ９３－Ｂ７细胞分别经腹腔免疫小鼠,得到腹腔浸润淋巴细胞及致敏脾细胞     

外源性FasL基因诱导肺癌细胞Caspase-3的表达及凋亡

目的 :研究FasL基因转染肺癌细胞中Caspase 3的表达及与细胞凋亡的关系。方法 :RT PCR、流式细胞术和免疫组化检测Caspase 3在FasL基因转染的A 5 49/FasL细胞中的表达 ,流式细胞术、原位末端标记 (TUNEL)检测细胞凋亡。结果 :Caspase 3在A 5 49母系细胞中低水平表达 ,转基因后的A 5 49/FasL细胞的Caspase 3的表达和活性显著升高 ,P <0 0 1。同时肺癌细胞凋亡率升高( 4 4 0 8%vs 18 15 % ,P <0 0 1)。凋亡率与Caspase 3的活性呈明显正相关关系 ,r =0 64 7,P <0 0 1。肿瘤细胞中的凋亡与其Caspase 3 的表达有明显的关系。结论 :Caspase 3在肺癌发生中起重要作用 ,FasL基因转染的肺癌细胞的凋亡与其Caspase 3的表达增加有密切关系     

B7-1基因转染骨肉瘤细胞诱导抗骨肉瘤主动免疫的实验研究

目的:探讨B7-1基因转染骨肉瘤细胞能否诱导抗骨肉瘤主动免疫作用。方法:利用脂质体将B7-1真核表达载体pcDNA3-B7-1和空载体pcDNA3分别导入骨肉瘤细胞株LM8中,G418筛选出阳性克隆(分别命名为LM8/B7-1和LM8/pcDNA3),通过RT-PCR、Western blot和流式细胞仪检测B7-1基因与蛋白的表达;通过软琼脂克隆形成实验观察转基因细胞株LM8/B7-1的体外增殖能力;用LM8、LM8/B7-1和LM8/pcDNA3分别经腹腔免疫小鼠,得到腹腔浸润淋巴细胞和致敏脾细胞,MTT法检测其体外杀伤活力;将LM8、LM8/B7-1和LM8/pcDNA3细胞分别接种到C3H雄性小鼠前腋下,观察其致瘤能力;观察LM8/B7-1致敏的小鼠对骨肉瘤细胞LM8是否具有免疫保护作用。结果:B7-1基因在转基因细胞LM8/B7-1中能得到高表达;LM8/B7-1体外增殖能力与LM8和LM8/pcDNA3无明显差异(P>0.05);LM8/B7-1诱导的CTL的杀伤活力显著高于LM8和LM8/pcDNA3诱导的CTL对相同靶细胞的杀伤活力,LM8/B7-1诱导的CTL对LM8/B7-1的杀伤活力也明显高于对LM8和LM8/pcDNA3的杀伤活力(P<0.05);LM8/B7-1致瘤能力较LM8和LM8/pcDNA3细胞明显下降(P<0.01);LM8/B7-1致敏的小鼠对骨肉瘤细胞LM8具有免疫保护作用。结论:B7-1基因转染骨肉瘤细胞能诱导抗骨肉瘤主动免疫作用,为利用B7-1基因进行骨肉瘤免疫基因治疗提供了实验依据。     

晚期肺腺癌的内科治疗策略

肺癌是我国最常见的恶性肿瘤,肺癌的发病率和死亡率占我国恶性肿瘤的第1位。非小细胞肺癌（non-small-cell lung cancer,NSCLC）约占所有肺癌的85%,主要的病理组织学亚型为腺癌、鳞状细胞癌和大细胞癌。30年前,鳞癌最为多见,但近年来腺癌的发病率呈进行性上升,是目前肺癌中最多见的类型,约占所有肺癌的40%～60%。     

肺癌的生物治疗

生物治疗是肺癌常规治疗模式的有益补充,是一种比较安全、有前途的治疗手段.肺癌的生物治疗主要包括两方面,即免疫治疗和基因治疗,免疫治疗主要是通过各种手段提高机体对肿瘤主动或被动的免疫杀伤能力;基因治疗是通过对基因水平缺陷的修复或导入、强化某些抗肿瘤基因以达到治疗肿瘤的目的.     

VEGF及其在肺癌抗血管生成中的研究进展

临床研究表明,血管内皮生长因子（VEGF）在肺癌血管生长中起着重要作用。肿瘤生长、浸润和转移都依赖于肿瘤血管的生成,而持续表达的VEGF是肿瘤血管生成和肿瘤进展的关键介导因子,通过阻断VEGF信号来抑制血管新生是肿瘤治疗的重要措施之一。     

低氧诱导下HRE调控HSVtk基因对肺癌细胞的杀伤效应

目的:探讨低氧时HRE诱导增强的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,EGFP)在SPCA1和A549肺癌细胞株中的表达变化,及驱动HSVtk基因对肺癌细胞的杀伤作用。方法:转染细胞低氧处理后24h用流式细胞术测EGFP表达强度,用MTT法测定细胞存活率。结果:转染pDNA.HRE.EGFP质粒的SPCA1和A549细胞低氧组EGFP表达强度分别是对照组的(2.02±0.23)和(2.37±0.24)倍;转染pDNA.HRE.HSVtk质粒的SPCA1和A549细胞低氧GCV组存活率较对照组分别降低(29.9±1.60)%和(42.83±2.57)%,低氧GCV组与对照组相比,细胞存活率显著降低,P<0.01。结论:质粒载体中包含的HRE对低氧敏感,低氧处理后通过诱导下游的HSVtk基因大量表达,使转染细胞对GCV的敏感性增高,而大大增加对SPCA1和A549细胞的杀伤效应。     

凋亡相关基因Fas和FasL在胰腺癌组织中的表达

目的:研究细胞凋亡相关基因Fas和FasL在胰腺癌组织中的表达及意义。方法:采用免疫组织化学技术观察Fas及FasL蛋白的表达,用原位末端标记法检测细胞凋亡。结果:40例胰腺癌中Fas和FasL阳性30例,阳性率76·5%;用于对照的10例癌旁正常胰腺组织中Fas和FasL阳性1例,阳性率10%,Fas和FasL在胰腺癌组织中表达高于对照组,χ2=14·3463,P=0·0002;在正常胰腺组织连续切片中未发现TdT酶标记的DNA3/-OH末端,提示无细胞凋亡;在胰腺癌标本中用TdT酶标记的DNA3/-OH末端分析连续切片表明,大多数癌细胞未发生细胞凋亡,在40例胰腺癌中仅有3例发现约10%的癌细胞凋亡。结论:Fas和FasL参与了大部分胰腺癌的凋亡调变,胰腺癌在发生分化过程中,可能部分获得了逃逸Fas介导的凋亡功能。     

体内阻断胰腺癌细胞FasL表达抑制肿瘤细胞免疫反击的初步研究

目的:探讨体内抑制胰腺癌细胞表面的FasL表达,能否抑制胰腺癌细胞对免疫系统的反击作用。方法:反义核酸技术扩增C57BL/6小鼠FasL mRNA 35~371位点核苷酸序列互补的cDNA片断,构建pBlast质粒后,转染人Panc-1胰腺癌细胞株,蛋白质印迹观察细胞株FasL蛋白表达的变化,ELISA法检测培养上清可溶性FasL水平。将细胞注射到C57BL/6小鼠胰腺包膜下,观测瘤体的直径变化,免疫组化观测肿瘤组织内浸润淋巴细胞的数量。结果:在稳定转染编码反义FasL cDNA的质粒后,胰腺癌细胞表面的FasL表达明显下调;其FasL蛋白表达下降了80%;FasL表达下调对体外生长的胰腺癌细胞无明显影响,但能减少同系免疫活性鼠体内肿瘤的发展。转染了质检DNA的胰腺癌细胞接种组瘤体的平均直径为1.53 mm,而未转染质检DNA的胰腺癌细胞接种组为2.98 mm,两组比较差异有统计学意义,P<0.01。与未来转染组相比,转染组CD45 TIL细胞数量明显增多,是未转染组的3.23倍,P<0.01。结论:胰腺癌细胞表面FasL表达的下调,能在体内增加免疫系统的抗肿瘤能力,从而为"肿瘤反击"促进肿瘤细胞浸润的学说提供了有力的证据。     

Anti-tumor immunity induced by Interleukin-12 gene therapy in a metastatic model of breast cancer is mediated by natural killer cells

An intrahepatic tumor model for metastatic breast cancer was generated in syngeneic mice by direct inoculation of JC cells, a murine mammary adenocarcinoma cell line. Intratumoral administration of a recombinant adenoviral vector expressing the murine Interleukin-12 (ADV-mIL-12) resulted in significant reduction in the tumor volume compared to control vector. Tumor regression was also evident on histopathologic analysis of the liver, where inflammatory changes as opposed to nuclear atypia predominated after IL-12 vector treatment. There was a significant prolongation in the long term survival of IL-12 treated animals, with complete tumor rejection in 40% of the animals. In vivo depletion studies using specific monoclonal antibodies against the various lymphocyte subsets showed a significant reduction in long term survival after natural killer (NK) cell depletion. This suggests that the NK cell is a critical effector in the antitumor effect mediated by IL-12. These results strongly support the potential role of gene mediated cytokine therapy for the treatment of metastatic breastcancer.     

拓扑替康诱导卵巢癌细胞自噬的实验研究

目的:检测拓扑替康(TPT)对卵巢癌OVCAR3细胞的增殖抑制作用,观察TPT诱导OVCAR3细胞自噬现象,初步探讨其发生的可能机制。方法:采用不同浓度的TPT处理卵巢癌OVCAR3细胞,MTT法测定TPT对OVCAR3细胞增殖的抑制作用,吖啶橙(AO)染色观察酸性小体(AVO)形成,MDC荧光染色检测自噬囊泡。免疫印迹法检测TPT对OVCAR3细胞LC3-Ⅱ和Beclin1蛋白的影响。结果:TPT对OVCAR3细胞生长有显著的抑制作用,且此作用呈明显的剂量依赖性,IC50为0.057μg/mL。TPT可诱导OVCAR3细胞产生AVO。MDC荧光染色显示,TPT可诱导OVCAR3细胞产生自噬囊泡。采用0.05μg/mL TPT处理OVCAR3细胞24h后,免疫印迹法显示,随着时间的推移LC3-Ⅱ和Beclin1蛋白水平表达个逐渐增加,提示TPT诱导的OVCAR3细胞自噬可能与Bec-lin1蛋白有关。结论:TPT对OVCAR3细胞有显著的抑制作用,TPT可以诱导OVCAR3细胞发生自噬,TPT诱导OVCAR3细胞自噬可能与Beclin1蛋白上调有关。     

B7-1基因抑制小鼠前胃癌细胞增殖活性的实验研究

目的 :研究B7 1基因对小鼠前胃癌细胞 (MFC)增殖活性的抑制作用 ,探讨其在肿瘤免疫中的作用。方法 :将B7 1基因转染MFC细胞后 ,用MTT法和流式细胞仪 (FCM )分别测定转染细胞增殖活性的变化 ,并将已转染B7 1的MFC细胞种植到裸鼠皮下 ,研究其对体内成瘤的影响。结果 :转染B7 1基因的MFC细胞增殖活性受到抑制 ,P <0 0 5。结论 :B7 1基因对MFC细胞增殖活性有抑制作用。     

HIFU治疗后肿瘤抗原对树突状细胞的活化及其抗肿瘤效应

目的：探讨HIFU治疗小鼠H22抑制性肝癌后产生的肿瘤抗原对机体抗肿瘤免疫功能增强的机制。方法：正常小鼠骨髓中提取骨髓细胞,在rmIL-4、rmGM-CSF奈件下培养7d,制备小鼠骨髓树突状细胞,用HIFU治疗小鼠移植性肝癌后产生的肿瘤抗原活化树突状细胞,再用活化后的树突状细胞激活T淋巴细胞为细胞毒性T细胞,用MTT法检测CTL在体外特异性杀伤肿瘤靶细胞的能力。结果：B16肿瘤HSP70-肽复合物组和H22肿瘤HSP70-肽复合物组的脾淋巴细胞的增殖率均高于阴性对照组、H22肿瘤粗提物组和HIFU后H22肿瘤粗提物组,P〈0．001;但两组之间差异无统计学意义,P〉0．05。H22肿瘤HSP70-肽复合物组CTL对H22肿瘤细胞的杀伤率为70．0％,明显高于阴性对照组、H22肿瘤粗提物组和HIFU后H22肿瘤粗提物组（P〈0．001）,但对非靶细胞B16肿瘤的杀伤率与上述各组的差异无统计学意义;B16肿瘤HSP70-肽复合物组CTL对B16肿瘤细胞的杀伤率为78．5％,对H22细胞的杀伤率为21．4％,表明CTL对肿瘤细胞的杀伤作用具有特异性。结论：HIFU治疗后坏死肿瘤组织中的HSP70-肽复合物作为肿瘤疫苗,通过活化DC和刺激T淋巴细胞增殖为CTL,发挥特异性抗肿瘤免疫功能。     

GM-CSF gene or B7-1 gene modified murine EL-4 cells vaccine

Since 1990, gene transduced tumor vaccine has been studied. Many articles reported that tumor cells transduced with some cytokine or costimulatory molecule could induce system antitumor immunity[1,2] In this study, EL-4 lymphoma was transduced with recombinant retrovirus containing the murine GM-CSF gene and B7-1 gene, respectively. The effect of gene transduction on antitumor immunity was investigated.MATERIALS AND METHODSMice and Cell Lines Female C57BL/6 mice were bought from …     

Bcap37完全细胞抗原冲击树突状细胞诱导特异性抗乳腺癌免疫实验研究

目的　研究 Bcap37完全细胞抗原冲击树突状细胞 (DC)能否诱导特异性抗肿瘤免疫 ,探索乳腺癌的免疫治疗方法。方法　从人外周血分离单核细胞 ,用 GM- CSF和 IL - 4诱导出 DC,反复冻融制备 Bcap37完全细胞抗原 ,将此抗原冲击的 DC与 T细胞共培养 ,以 7天后分离的 T细胞为效应细胞 ,与肿瘤细胞混合培养 ,MTT法测定对肿瘤细胞的抑制作用。结果　单核细胞经细胞因子诱导 8天 ,形态、表型及功能鉴定为成熟 DC;完全细胞抗原冲击 DC诱导的 T细胞对肿瘤细胞具有明显的抑制作用。结论　 Bcap37完全细胞抗原冲击 DC可有效诱导特异性抗肿瘤免疫