载脂蛋白E外显子4基因多态性与Alzheimer‘s病

探讨了载脂蛋白Ｅ（ａｐｏＥ）外显子４基因多态性与Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ‘ｓ病的关系。应用聚合酶链反应扩增ａｐｏＥ外显子４基因片段，对扩增片段用ＨｈａⅠ酶切消化后进行基因分型，并用ＤＮＡ测序技术对分型结果予以证实，Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ病组与年龄匹配对照组在ａｐｏＥ外显子４ε３／４基因型频率和ε４等位基因频率分布上的差异有显著性（ｘ＾２＝８．９１，Ｐ〈０．０５，Ｘ＾２＝９．４９，Ｐ〈０．０１），Ａｌｚｈ     

人β3-肾上腺素能受体基因第64位密码子突变频率的检测

目的建立一种简便、准确、实用的人β３－肾上腺素能受体基因第６４位密码子突变频率的检测方法。方法应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）特异性扩增β３－肾上腺素能受体基因含编码６４位氨基酸的基因序列，扩增产物用限制性内切酶ＢｓｔＯＩ酶切，聚丙烯酰胺凝胶电泳后，观察酶切位点的限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）图谱。结果运用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法检测了１７４名汉族人β３－肾上腺素能受体基因第６４位密码子点突变，其中野生型纯合子频率为６９．５％，杂合子频率为２７．６％，突变型纯合子频率为２．９％。突变等位基因频率为０．１７。结论该方法简便、快速、准确，适合于一般实验室检测及大规模的人群调查。     

载脂蛋白E基因多态性检测技术的对比性研究

目的建立并比较载脂蛋白Ｅ（ＡｐｏＥ）基因多态性检测技术,为ＡｐｏＥ基因分型提供良好的方法。方法应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）和ＰＣＲ单链构象多态性（ＳＳＣＰ）检测技术对１１０例患者及相同人数的正常人进行ＡｐｏＥ基因型检测和分析。结果应用ＲＦＬＰ、ＳＳＣＰ技术测得正常对照组：ε２／２（０,０．０２０）,ε３／３（０．７００,０．７６０）,ε４／４（０,０．０４０）,ε２／３（０．１００,０．０６０）,ε２／４（０,０．０２０）,ε３／４（０．２００,０．１００）,ε２（０．０５０,０．０６０）,ε３（０．８５０,０．８４０）,ε４（０．１００,０．１００）。经χ２检验,ＡｐｏＥ基因型频率和等位基因频率的差异无显著意义（Ｐ＞０．０５）。上两种检测技术与既往两种检测技术（ＩＥＦ,ＷｅｓｔｅｒｐＢｌｏｔｉｎｇ）的结果经χ２检验,其ＡｐｏＥ等位基因频率的差异也无显著意义（Ｐ＞０．０５）,均符合中国汉族人ＡｐｏＥ基因频率分布。结论ＰＣＲＲＦＬＰ方法是一种稳定可靠的ＡｐｏＥ基因多态性分析方法,多重ＰＣＲＳＳＣＰ技术更加简便有效,使ＡｐｏＥ基因多态性的研究更加完善。     

HCV感染基因型病毒复制程度与肝病关系的研究

采用限制性内切酶Ｓａｕ３Ａｌ和ＨａｅⅢ对５４例ＲＴ－ＰＣＲ法ＨＣＶＲＮＡ阳性的５＇ＮＣ区扩增产物进行酶切分型；ＰＣＲ滴定法半定量分析ＨＣＶＲＮＡ含量。结果显示４种酶切类型：ＨＣＶⅠ型感染３．７％（２／５４），ＨＣＶⅡ型感染７７．８％（４２／５４），ＨＣＶⅢ、Ⅳ型感染１１．１％（６／５４），ＨＣＶⅠ、Ⅱ／Ⅲ、Ⅳ型混合感染７．４％（４／５４），ＨＣＶⅡ型感染阳性率在ＡＨ、ＣＡＨ、ＬＣ三组间无显著差异（     

HpaⅡ—PCR检测小儿急性白血病降钙素基因高度甲基化

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合ＨｐａⅡ限制性内切酶消化法（ＨｐａⅡ－ＰＣＲ）检测５８例急性白血病（ＡＬ）患儿降钙素（ＣＴ）基因的甲基化状态。病例组待检细胞ＤＮＡ经ＨｐａⅡ消化后，再用两对ＣＴ基因特异性引物作ＰＣＲ扩增，分别产生长度为５６６ｂｐ和１．４ｋｂ特异片段。急性淋巴细胞白血病阳性率７１．４％（２５／３５），急性非淋巴细胞白血病７８．２％（１８／２３）。敏感性达１０－３。证明ＣＴ基因５′高度甲基化是白血病细胞克隆的特异标志。本课题受卫生部、四川省人民医院出国人员基金资助     

载脂蛋白E PCR—RFLP分型的建立和评价

采用聚合酶链反应－限制性片段长度的多态性（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ－ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｈｔｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）分析ａｐｏＥ的多态性，通过在引物５′端增加一段寡核苷酸，降低了扩增用二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）的浓度，高效地扩增目标基因。运用限制性内切酶ＨｈａＩ内切编码精氨酸的核苷酸顺序ＧＣＧＣ，不能切割编码半胱氨酸的核苷酸顺序ＧＴＧ     

应用CPR检测载脂蛋白E表型

为探讨壮族人群载脂蛋白（ａｐｏＥ）基因与冠心病之间的内在联系，应用ＰＣＲ方法检测１５８例壮族健康人群和５３例临床确诊的壮族冠心病患者ａｐｏＥ表型和等位基因频率分布，结果健康人群等位基因频率分布是ε０．１０８，ε０．８１３，ε０．０７９，冠心病组为ε０．０７６、ε０．７９２、ε０．１３２。冠心病患者中Ｅ４／３频率明显高于健康人群（Ｐ〈０．０１），提示ε４可能是冠心病的遗传易患因子。     

胆固醇酯转运蛋白基因15显子D442G突变的检测

应用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性分析（ＰＣＲ－ＲＥＬＰ）的方法检测１１０例脑动脉粥样硬化患者胆固醇酯转运蛋白（ＣＥＴＰ）基因１５外显子Ｄ４２Ｇ错义突变。首先用聚合酶链反应行异性扩增包含人ＣＥＴＰ基因１５外显子第１５０６位碱基的基因序列，扩增产和用限制性内切酶ＭｓｐⅠ酶切，聚丙烯酰胺凝胶电泳后分析结果。１１０例脑动脉粥样硬化患者中发现４例杂俣突变。突变率３．６％，与对照组４％比较无明显差异。该     

载脂蛋白E基因型分型方法

目的建立载脂蛋白Ｅ基因型分型聚合酶链反应限制性片段长度多态性方法。方法用特异的探针对氨基酸１１２和１５８多形基因区基因组的ＤＮＡ扩增，产物用ＨｈａⅠ酶消化，其片段在４％琼脂糖凝胶分离。结果经消化的载脂蛋白Ｅ片段在琼脂糖上，ε２／ε２为９１、８３、３８ｂｐ，ε３／ε３为９１、４８、３８ｂｐ，ε４／ε４为７２、４８、３８ｂｐ，ε２／ε３为９１、８３、４８、３８ｂｐ，ε２／ε４为９１、８３、７２、４８、３８ｂｐ，ε３／ε４为９１、７２、４８、３８ｂｐ。３００名献血员其载脂蛋白Ｅ基因分布频率分别为ε２／ε２０％，ε３／ε３７４％，ε４／ε４０％，ε２／ε３１６％，ε２／ε４２％，ε３／ε４８％。结论以聚合酶链反应限制性片段长度多态性方法进行载脂蛋白Ｅ基因型分型，具有清晰、简便、快速等优点     

骨髓增生异常综合征降钙素基因甲基化的定量研究

目的：探讨降钙素（ＣＴ）基因高甲基化能否作为骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）向白血病转化的分子标志。方法：采用设有内、外参照的多聚酶链反应（ＰＣＲ），结合限制性内切酶和激光扫描技术，检测２７例ＭＤＳ和６例由ＭＤＳ转化的急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）患者骨髓细胞的ＣＴ基因５′端甲基化率（ＣＴＭＲ）。结果：ＭＤＳ患者ＣＴＭＲ为３３．６５％±２３．３７％，显著高于对照组（８．０１％±４．２５％，Ｐ＜０．００１），其中ＲＡＥＢｔ组显著高于对照组和ＲＡ组，已随访３～１０年的ＲＡ患者５例均在正常范围，且无白血病转化。９例ＲＡＥＢｔ的ＣＴＭＲ均＞３０％，随访８例中７例于２个月内转化为ＡＭＬ。结论：ＣＴＭＲ对早期预测ＭＤＳ向白血病转化可能是一个有用的指标。