脐血造血干细胞库建立及其临床应用

目的 建立脐血造血干细胞库,用于治疗白血病、淋巴瘤、再生障碍性贫血等疾病。方法 采集新生儿脐血,用6％HES离心法分离脐血有核细胞以缩小脐血体积,样本以10％DMSO保存,检测有核细胞数、CD_(34)~+、CFU-GM及HLA,并作病原学捡测。结果 收集590份脐血,合格230份(合格率39％),平均脐血体积(89±20)ml,平均有核细胞数(1.48+0.36)×10~9,分离后有核细胞数(1.25±0.28)×10~9,有核细胞回收率(91+7)％,脐血CD_(34)~+细胞的百分率为(0.37±0.26)％,复苏后CFU-GM回收率为84％,平均每份脐血含CFU-GM(0.9±0.4)×10~6个集落,14％的样本CMV抗体阳性。73人查询,HLA 4个抗原以上相合率为95.7％。至2001年7月,提供3份脐血用于非亲缘脐血移植,1份用于亲缘脐血移植,3例植入,1例排斥。结论 建立脐血库有良好的应用前景。     

脐血干细胞库的建立及其临床应用

目的建立无关供者脐血干细胞库,用于治疗骨髓衰竭、恶性及非恶性血液病、某些遗传病、重型免疫缺陷等疾病的干细胞移植.方法采集足月顺产或剖宫产的新生儿脐血,以羟乙基淀粉分离红细胞,DMSO/LMD冷冻保存.每份脐血常规检测细胞活率、有核细胞计数、祖细胞体外培养、CD34+细胞检测、HLA配型及病原学检测等.结果共采集2318份脐血,合格1240份,合格率为53.5%,合格脐血采集的平均体积(98.3±27.0)ml,分离后脐血有核细胞为(1.2±0.5)×109,回收率为(88.90±9.65)%.脐血细胞存活率为(97.00±2.61)%.CFU-GM数为(5.18±14.35)×105,BFU-E数为(10.35±11.55)×105,CFU-Mix数为(1.03±1.47)×105.脐血分离后CD34+细胞百分率为(0.5±0.32)%,细菌培养阳性4例,4例脐血CMV-IgM阳性.在广州脐血库的172例脐血移植登记患者中,HLA匹配4个位点以上的占91.12%.至2000年5月共提供9份应用于无关供者脐血移植,其中6例植入,植入成功率66.7%.结论脐血库的建立可使脐血能够较好地应用于造血干细胞移植治疗,建立脐血库有良好的应用前景.     

脐血库HLA匹配机率分析

对广州脐血库 1998年以来保存的 30 0 0份脐血和 10 6 0名患者进行回溯分析 ,分析患者在脐血库中搜寻非亲缘脐血的HLA匹配结果 ,以探讨患者找到适于移植的非亲缘脐血的可能性。结果表明 ,6 /6HLA全相合的患者有 119人 (11.2 3% ) ,4 /6以上相合的患者高达 992人 (93.5 8% )。其中 ,分别有 6 1.2 9% ,89.79%的患者可以找到总有核细胞 (TNC)剂量≥ 3.7× 10 7/kg ,≥ 2 .0× 10 7/kg的 4 /6以上HLA相合脐血 ,相应的体重最高者分别为 79kg和 175kg。结论 :脐血库容量在 30 0 0份以上就可以有HLA 93%的匹配率。由于不同体重对脐血TNC数量要求更高 ,广州脐血库能够满足 30 % - 80 %成人患者的需要。在为患者寻找造血干细胞移植非亲缘供者时 ,无论成人或儿童患者 ,在寻找骨髓供者的同时 ,都有必要寻找适宜的脐血供者。     

两份脐血联合移植治疗成人慢性粒细胞性白血病一例

为了探讨两份非亲缘供者脐血联合移植治疗成人血液系恶性肿瘤患者的造血重建及移植相关性并发症 ,对 1例成人慢性粒细胞性白血病患者进行两份非亲缘供者脐血联合移植。预处理采用白消安 /环磷酰胺 (Bu/Cy)方案。移植物抗宿主病 (GVHD)的预防采用霉酚酸酯 (MMF)联合环孢霉素 (CsA)和短程氨甲喋呤 (MTX )方案。移植总单个核细胞数为 4.63× 10 7/kg ,CD3 4 + 细胞数为 8.3 4× 10 5 /kg。采用PCR法测定患者外周血细胞短串重复序列 (STR)获取植入证据。结果表明 :患者于移植后 2 3天外周血中性粒细胞绝对值 >0 .5× 10 9/L ,移植后 3 3天外周血血小板 >2 0× 10 9/L ,移植后 47天血小板 >50× 10 9/L。移植后 ,患者Ph染色体转阴性 ,bcr/abl融合基因阴性。移植后 3 1天 ,46天及 71天查外周血STR显示其中 1份脐血完全植入。患者于移植后 13天出现Ⅱ度急性GVHD ,经治疗后消失。结论 :脐血联合移植可用于成人恶性血液病的治疗 ,多份脐血联合移植可能是解决单个核细胞数偏低问题的途径之一     

混合脐血成人移植定量监测植入状态的实验研究

为了定量监测和研究双份异基因脐血用于成人白血病患者移植后两份脐血的植入状态、嵌合体类型、供者细胞相对数量的动态变化及演变规律 ,采用荧光标记复合扩增短串联重复 (STR)位点嵌合体定量检测技术 ,对 1例急性髓细胞白血病成人患者移植两份 (脐血 1有核细胞数为 2 .5× 10 7/kg ,脐血 2有核细胞数为 1.5 3× 10 7/kg)HLA各 1个位点不相合的异基因脐血前后的序列血样进行 9个STR位点的检测 ;利用供、受者之间的差异位点定性判断脐血是否植入以及嵌合体类型 ;而后根据 377XLDNA测序仪上荧光扫描后两供者差异基因检出峰的峰面积计算脐血植入后患者体内两份脐血的细胞相对数量 ,定量分析供体细胞植入程度及演变规律 ;并与采用HLA差异基因对植入状态的分析结果进行对比。结果表明 :移植后 15天两份脐血同时植入 ,植入状态为完全双份供者嵌合体 ,患者体内脐血 1的相对细胞数量占 5 1.3% ,脐血 2占 4 8.7% ;30天时脐血 1嵌合体细胞上升为 70 .0 % ,脐血2嵌合体细胞下降为 30 .0 %。 5 2天时只检测到脐血 1的基因 ,植入状态转为完全单份供者嵌合体 ,有核细胞数少的一份脐血被排斥 ,有核细胞数多的一份长期植入。结论 :荧光标记复合扩增STR嵌合体定量检测可精确地描述两份脐血的植入程度及变化过程 ,为临床脐     

脐血浆刺激造血活性研究

目的　研究脐血浆刺激造血活性。方法　检测脐血浆的造血因子水平及其扩增外周造血干细胞 (PBSC)作用和刺激生成CFU GM、CFU Mix、BFU E作用。结果　① 33例脐血浆中 4例检测出GM CSF ,2 0例检测到IL 3和IL 6 ,33例检测到EPO ,各细胞因子之间不具相关性 ;②液体培养 6d后 ,脐血浆组有核细胞数为 (1.0 8± 0 .2 0 )× 10 6/ml,胎牛血清 (FCS)组为 (0 .72± 0 .0 5 )× 10 6/ml,脐血浆对体外培养维持PBSC活细胞数明显优于FCS(P <0 .0 5 ) ,但无明显扩增作用 (P >0 .0 5 ) ;甲基纤维素半固体培养PBSC 14d时 ,脐血浆组集落数为 (13± 11)× 10 5,而FCS组集落数为 0 ,二者比较有显著差别 (P <0 .0 1)。结论　脐血浆含有多种造血因子 ,其刺激造血活性与IL 3浓度成正相关 ,但与IL 6和EPO的相关性则较小。     

无关供者脐血造血干细胞移植治疗一例成人重型再生障碍性贫血

目的　研究无关供者脐血造血干细胞移植 (unrelatedallo CBSCT)治疗成人重型再生障碍性贫血 (再障 )。方法　用HLA配型 6个位点全相合无关供者allo CBSCT治疗 1例成人重型再障患者。脐血由广州市脐血库提供 ,输入的单个核细胞 (MNC)数为 1.89× 10 7/kg(按患者体重 6 0kg计 ) ,CD34 阳性细胞占 0 .0 0 9,CFU GM为 1.8× 10 4 /kg。预处理方案由环磷酰胺 (CTX)和抗淋巴细胞球蛋白 (ALG)组成 ,CTX总用量为 6 0mg/kg;ALG按 12 0mg/kg给予。用甲氨蝶呤 (MTX)和环孢菌素A(CsA)预防移植物抗宿主病 (GVHD) ,CsA用至 8个月逐渐减量停药。结果　输入脐血后白细胞最低值为 0 .6× 10 9/L ,血小板最低值为 12 .0× 10 9/L ,中性粒细胞于移植后第 10天大于 0 .5× 10 9/L ,血小板于移植后第 2 0天大于 5 0 0× 10 9/L。移植后 8个月时出现皮肤局限性GVHD。微卫星法DNA指纹图示稳定的供、受体混合嵌合状态 ,但迄今ABO血型仍为受者型。结论　此例为国内首例采用allo CBSCT治疗成人重型再障 ,并获得成功 ,脐血造血干细胞已长期植入。     

HLA-B位点不合两份脐血混合移植植入状态的动态观察

目的动态观察分析两份HLA不全相合异基因混合脐血移植后的植入状态。方法一例成人急性髓细胞白血病患者采用了两份HLA-B位点不全相合非血缘脐血移植(脐血1有核细胞数为2.5×107/kg,脐血2有核细胞数为1.53×107/kg),对其移植前、移植后15天、30天、52天和69天的外周血进行HLA及STR基因两种遗传学标记物的检测。采用PCR-SSP基因分型试剂盒对HLA-B位点进行差异分析,用“ProfilerPlus”及“Cofiler”试剂盒检测15个STR位点,对移植前后的检测结果进行对比分析。结果HLA及STR检测均显示移植后15天、30天基因型为完全两份脐血的嵌合型,移植后52天、69天只表达脐血1的基因型。结论两份脐血移植初期可同时植入,而后其中有核细胞数高的一份脐血可长期植入。HLA及STR基因作为植入证据为临床脐血混合应用及治疗提供了直接的实验依据。     

HLA 2个位点不合同胞脐血移植治疗1例重型β地中海贫血

造血干细胞移植是目前治疗重型β地中海贫血最有效手段。本研究是国内第一次运用新的预处理和GVHD防治方案进行了HLA 2个位点不合同胞脐血移植 ,并成功地治疗 1例重型β地中海贫血患儿。男性病例 ,3.4岁 ,体重14kg,生后 6个月诊断为重型β地中海贫血 (HbA11.7% ,HbA2 1.7% ,HbF 86 .6 % ,基因突变型为CD17,A→T IVS II 6 5 4 ,C→T) ,其母再次怀孕 5个月时行产前诊断和HLA配型 ,胎儿为杂合子 17 N ,HLA 2个位点与患儿不合。收集脐血12 0毫升 ,有核细胞 1.830× 10 9,CFU GM 16 .6 5 3× 10 5,CD34+ 细胞 3.11× 10 6 。预处理方案 :大剂量输血 ,连续静脉注射去铁胺 ,马利兰 16mg kg +环磷酰胺 2 0 0mg kg +抗胸腺细胞球蛋白 90mg kg加用羟基脲 30mg (kg·d)× 33,氟哒拉宾2 0mg (m2 ·d)× 3。输入有核细胞 12 .0 6× 10 7 kg,CFU GM 1.0 98× 10 5 kg ,CD34+ 细胞 2 .0 4× 10 6 kg。GVHD预防 :环孢菌素A +骁悉 (MMF)。结果表明 ,移植后 15天出现Ⅰ度急性GVHD ,第 17天中性粒细胞 >0 .5× 10 9 L ,第 5 0天血小板 >5 0× 10 9 L ,第 80天后血红蛋白≥ 12 .5g L ,停止输血。移植后 6 0天和 2 0 0天作HLA分型及地中海贫血基因检测 ,HLA分型与脐血一致 ,基因突变型已由重型地中海贫血纯合子转变为与供者     

成人双份非亲缘脐血联合移植护理一例报告

脐血造血干细胞移植 (CBSCT)是目前根治小儿白血病、恶性肿瘤及再生障碍性贫血最有效的方法之一。但移植成功与否与造血干细胞的有核细胞数密切相关。成人由于体重偏重导致一份脐血有核细胞数不足 ,而双份脐血联合移植是解决单份脐血有核细胞数偏低问题的途径之一。我院于 2 0 0 2年1月通过HLA(人类白细胞抗原 )配型 ,对一例成人慢性髓细胞性白血病 (CML)患者施行了双份脐血联合移植并获成功 ,现将体会浅谈如下。1　病例资料患者女性 ,2 9岁 ,体重 4 9kg ,身高 1 5 7cm ,血型“B” ,确诊“CML” ,骨髓象示慢性期。 2 0 0 2年 1月经全…     

Cord blood banking and transplantation at the Mexican Institute of Social Security: the first 5 years

BACKGROUND: In January 2005, the Cord Blood Bank (CBB) at the Mexican Institute of Social Security initiated activities. Herein, we describe the experience generated during this period (January 1, 2005‐December 31, 2009). STUDY DESIGN AND METHODS: Good manufacturing practices and standard operating procedures were used to address donor selection, as well as umbilical cord blood (UCB) collection, processing, and cryopreservation. Based mainly on HLA and nucleated cell content, specific UCB units were thawed, processed, and released for transplantation. RESULTS: A total of 589 UCB units were stored, representing 54% of the total number of units collected. Forty‐eight units (8.14% of the stored units) were released for transplantation of 36 patients. Twenty‐six patients (72% of cases) corresponded to patients with acute leukemia, five (14%) to patients with marrow failure, and the rest (five; 14%) to patients with hemoglobinopathies and other syndromes. The median number of nucleated cells infused per patient was 6.71 × 10⁷/kg and the median number of CD34+ cells was 4.8 × 10⁵/kg. Current engraftment data indicate that engraftment occurred in 56%, and no engraftment in 44%, of cases. Engraftment was more frequent (59%) in patients that received more than 3 × 10⁷ total nucleated cells (TNCs)/kg body weight, than in those receiving fewer than 3 × 10⁷ TNCs/kg (40%). Myeloid engraftment was observed 7 to 54 days posttransplant (median, 23 days), whereas platelet engraftment was detected on Days 12 to 87 posttransplant (median, 38 days). To date, the disease‐free survival rate was 41% and the overall survival was 47%, with survival periods of 126 to 1654 days. CONCLUSION: Although the experience presented herein is still limited and the period of analysis is still short, the results obtained during these 5 years are encouraging.     

32例儿童非亲缘脐血移植临床研究

本研究对山东省脐血造血干细胞库2001年8月至2004年6月所提供32例儿童无血缘脐血移植(URCBT)进行回顾性分析,观察非血缘脐血造血干细胞移植(UCBT)的疗效及并发症。常规进行脐血的收集、分离、保存、检测、冻融和输注。用PCR-SSO、PCR-SSP、SBT技术检测HLA-A、B、DR。结果表明32例患血液系统疾病儿童,中位年龄8(2-15)岁;中位体重31.5(14-55)kg,其中急性淋巴细胞白血病(ALL)13例,均为高危型;急性髓系白血病(AML)9例,包括M11例,M24例,M43例,M51例;慢性髓系白血病(CML)2例;重型再生障碍性贫血(SAA)3例;急性混合性白血病(HAL)3例;非何杰金氏淋巴瘤2例。供受者HLA全相合为10例,1个位点不相合为16例,2个位点不相合为6例。供受者ABO血型相合12例,不相合20例。输入有核细胞(TNC)5.57(2.16-12.3)×107/kg,CD34+细胞1.78(0.85-5.92)×105/kg。采用以环磷酰胺(Cy)和全身照射(TBI)为主的Cy/TBI预处理方案4例,以白消安(Bu)和环磷酰胺(Cy)为主的Bu/Cy预处理方案21例,其他方案预处理7例。GVHD预防采用以环孢菌素A为主的方案。结果表明32例患者20例(62.5%)白细胞达到植入标准,ANC≥0.5×109/L的中位时间17(9-38)天;Plt≥20×109/L中位时间42(18-102)天。Ⅱ-Ⅳ度和Ⅲ-Ⅳ度急性GVHD累计发生率分别为35%和15%。1年总生存率59.4%,2年总生存率40.6%。结论HLA相合及1-2个位点不合异基因脐血造血干细胞移植是可行的,尤其在治疗儿童血液病方面具有应用前景。     

1963份脐血造血干细胞的处理与保存

本研究目的是建立脐血造血干细胞库的标准工作程序。采用自然沉降法加离心法制备脐血的造血干细胞 ,经CD34 细胞计数、集落培养、微生物检测、传染病指标检测、HLA分型后 ,将造血干细胞贮存在液氮中保存。结果表明 :贮存脐带血造血干细胞有核细胞数平均值为 (10 .94± 2 .74 )× 10 8,回收率为 (79.82± 17.76 ) % ,CD34 细胞数平均值为 (5 1.6 2± 30 .5 3)× 10 5。 8份脐带血造血干细胞冰冻 2年后复苏 ,其有核细胞、CD34 细胞、CFU GM回收率分别为 (91.4± 6 .0 ) %、(84 .6± 2 0 .0 ) %、(85 .8± 14 .9) %。结论 :本方法和程序能有效地保存脐带血造血干细胞。     

54例非亲缘脐血造血干细胞移植回顾性分析

本研究对广州市脐血库1998年6月至2003年7月提供的54例非亲缘脐血移植进行回顾性分析,以研究脐血移植的相关影响因素.脐血均采自广州市妇婴医院正常分娩的足月顺产孕妇,脐血分离、冻存、复温方法参照纽约脐血库标准及相关文献;选择脐血的依据是HLA相合程度及有核细胞数量.结果表明1998年6月至2003年7月间,库存脐血3475份,与21家移植中心合作提供脐血99份,治疗患者85例.其中同胞脐血移植11例.对54例非亲缘关系脐血移植病例进行统计分析显示,在54例受者中,恶性病患者43例,占79.6%,非恶性病患者11例,占20.4%,受者中位年龄9.5(1.2-33)岁,中位体重27(10-60)公斤,TNC中位输入量6.82×107/kg,移植后60天植入43例(ANC＞500/μl的中位时间为17天),植入率为79.6%.脐血移植有核细胞重建时间与输入的有核细胞数以及疾病类型相关,同HLA相合程度不相关.急性Ⅲ-Ⅳ度GVHD发生率为21.6%,慢性GVHD发生率为5.4%.6例患者出现自体恢复(11.1%).存活率42.6%.结论非亲缘性脐血造血干细胞移植尤其在治疗小儿白血病方面具有良好的应用前景.     

Cord Blood Banking and Transplantation in China: A Ten Years Experience of a Single Public Bank

Background

Umbilical cord blood (UCB) has successfully used for transplantation to treat hematologic malignancies and genetic diseases. Herein, we describe the experience generated in a single public UCB bank at Zhejiang Province in China.

Methods

Good manufacturing practice and standard operating procedures were used to address donor selection as well as UCB collection, processing, and cryopreservation. Total nucleated cells (TNCs), cellular viability, CD34+ cells, and colony-forming units were determined, and infectious diseases screening test, sterility test, and HLA typing for UCB units were done.

Results

Only 18.51% of all collected UCB units met storage criteria, and 7,056 UCB units were cryopreserved in 10 years. The volume of UCB units was 95.0 ± 22.0 ml. The number of TNCs before and after processing was 13.32 ± 3.63 × 10⁸ and 10.63 ± 2.80 × 10⁸, respectively, and the recovery rate was 80.71 ± 11.26%. 0.4344 ± 0.1874% of the TNCs were CD34+ cells. The CFU-GM was 32.1 ± 28.0 colonies per 1 × 10⁵ nucleated cells. Based mainly on HLA and nucleated cell content, 26 UCB units were released for transplantation.

Conclusions

A public UCB bank was successfully established in China; collection and processing of UCB units should be optimized in order to gain maximum volume and cell count.     

人脐血及骨髓淋巴细胞免疫表型的比较及其意义

为比较脐血和骨髓淋巴细胞及祖细胞分化抗原，通过流式细胞术（FCM）双标法对38份脐血及10份骨髓免疫细胞表型进行了分析研究。研究发现：（1）脐血及骨髓淋巴细胞中均测到稚淋巴细胞（CD3^-CD4^ )，且前中含量较多，但脐血细胞毒T细胞含量（CTL，CD3^ CD16^ 56^ )低于骨髓；（2）脐血中NK细胞（CD3^-CD16^ 56^ )比例高于骨髓；（3）脐血有核细胞中CD34^ 细胞的比值接近于骨髓，但脐血CD34^ 细胞中髓系祖细胞（CD34^ CD13^ ,CD34^ HLA-DR^ )及淋巴系祖细胞（CD34^ CD19^ )含量均低于骨髓，结论：（1）脐血免疫细胞具有不成熟性，这估计是脐血移植后GVHD程度轻的主要原因；（2）脐血淋巴细胞中NK细胞含量较高，推测脐血移植后移植物抗白血病效应（GVL）并不会降低；（3）脐血CD34^ 细胞中髓系祖细胞及淋巴系祖细胞比例均低于骨髓，可能是脐血移植后造血及免疫重建速度较慢的原因之一。     

Wash-out of DMSO does not improve the speed of engraftment of cord blood transplantation: follow-up of 46 adult patients with units shipped from a single cord blood bank

BACKGROUND: Prolonged periods of marrow hypoplasia have been a problem in cord blood transplantation. DMSO is thought to produce osmotic shock to the progenitors when the thawed cells are infused into the patients. To solve this problem, a 2x dilution method originally developed in the New York Blood Center showed earlier myeloid engraftment,1 although follow-up clinical studies have not performed. STUDY DESIGN AND METHODS: To clarify the influence of the removal of DMSO by this method on the speed of engraftment in unrelated cord blood transplantation, 46 adult patients with cord blood units processed by the Tokyo Cord Blood Bank from September 1998 to March 31, 2002 were studied. Twenty-four patients received 2.6 +/- 0.71 x 10(7) nucleated cells per kg without washing (nonwashed group), while 22 patients were received 2.7 +/- 0.52 x 10(7) nucleated cells per kg after 2x dilution washing (washed group). RESULTS: The cumulative incidence of engraftment was not significantly different between the two groups. Median neutrophil recovery (>/=5 x 10(9)/L) in the nonwashed and washed groups was 26 and 25 days, respectively, and the median platelet recovery (>/=20 x 10(9)/L) in patients with myeloid engraftment was 44 and 40 days, respectively (NS). On the other hand, the doses of CFCs and CD34+ cells showed the influence on myeloid and platelet recovery. CONCLUSION: A 2x dilution after thawing cord blood did not result in the improvement of myeloid engraftment speed.     

3438例山东汉族脐血供者HLA-DRB1等位基因频率的分布特点

为研究山东汉族人群DRB1基因的分布特征，探讨中国广大地区甚至世界其它人种利用山东脐血供者进行造血干细胞移植的可能性，应用PCR-SSP方法对山东地区3438例无血缘关系的汉族健康新生儿脐血进行了HLA-DRB1低分辨等位基因的分布调查。结果显示：在山东汉族人群中前5位高频率等位基因依次为DRB1*15(0.1817)，*07(0.1369)，*09(0.1221)，*04(0.1084)和*12(0.1038)，低频率的等位基因是DRB1*0302／0303(0.0003)，*10(0.0151)，*16(0.0262)和*01(0.0322)。通过山东汉族人群与相关文献中其它人种和不同地域的汉族人群的比较分析显示：没有任何1个DRB1等位基因是某一人种或民族所特有的，但DRB1基因在不同种族的人群中有其各自独特的人群分布特征，并且在不同地域的同一民族人群中亦有其独特的地理分布特征。结论：北方人在山东脐血库中最容易寻找到DR等位基因相合的异基因脐血供者。中国南方人和日本人在山东也完全可能寻找到DR等位基因相合的异基因脐血供者，其机率较北方人稍低。白种人甚至非裔美国人均有可能在山东脐血库中寻找到DR位点低分辨等位基因相匹配的异基因脐血造血干细胞。