中电导钙激动钾离子通道在原发性肝癌中的表达及其意义

目的：探讨中电导钙激动钾离子通道（SK4）在原发性肝细胞癌（HCC）中的表达情况及意义。 方法：收集46例HCC患者手术标本的HCC组织与癌旁组织。用免疫组化法检测两种组织中SK4与血管内皮细胞生长因子（VEGF）在的表达,分析HCC组织中SK4与VEGF表达的相关性;用real-time PCR法检测两种组织中SK4 mRNA的表达,并分析SK4 mRNA表达与HCC临床病理因素的关系。用Western blot法检测两种组织中SK4蛋白的表达。 结果：免疫组化结果显示,肝癌组织中SK4和VEGF的阳性表达率均明显高于癌旁组织（均P<0.05）,且在HCC组织中SK4和VEGF阳性表达呈正相关（r=0.364,P<0.05）;real-time PCR结果显示,HCC组织中SK4 mRNA表达水平较癌旁组织明显上调（P<0.05）,且SK4 mRNA的高表达与肿瘤低分化及门静脉癌栓有关（均P<0.05）;Western blot结果显示,SK4蛋白在HCC细胞膜的表达明显高于癌旁肝细胞,但两者胞质SK4水平无明显差异。 结论：SK4在HCC组织中表达增高,其可能通过上调VEGF的表达等途径促进HCC细胞的侵袭转移。

     

趋化因子受体在肝癌细胞中的表达及其意义

目的 观察趋化因子受体(CCR1 CCR7 CXCB3 CXCR4)在人肝癌细胞系(Hep3BHepG2 HLE和HLF)的表达,并探讨其作用机制.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、细胞免疫组织化学、流式细胞仪测定趋化因子受体在肝癌细胞表面的表达,通过肝癌细胞Hep3B体外侵袭实验即重组大鼠巨噬细胞激动蛋白(CCL3)-1对Hep3B细胞穿透人工重组基底膜能力的影响来检测趋化因子受体在肝癌侵袭转移时所起的作用,并通过激光共聚焦显微镜观察趋化因子受体在肝癌细胞侵袭转移过程中的作用机制.结果 通过RT-PCR,流式细胞术可检测到CCR1 mR-NA及蛋白在肝癌细胞中表达,免疫组织化学显示CCR1在肝癌细胞包膜和胞质内都有表达.细胞侵袭实验提示Hep3B在CCL3的刺激下,实验组Hep-3B细胞通过基底膜的数量(213±12)多于对照组细胞通过基底膜的数量(102±11),差异有统计学意义(P<0.01).运用激光共聚焦检测到实验组胞内钙离子的浓度增加到.结论 肝癌细胞系(Hep3B HepG2 HLE和HLF)的表面的表达CCRl,且CCR1在肝癌细胞侵袭转移中发挥重要的作用,其作用机制与细胞内钙离子浓度有很关.     

miR-22启动子区域的遗传变异与HBV相关肝癌发病风险的关系

目的：探讨微小RNA 22（miR-22）启动子区域的遗传变异与中国人群乙型肝炎病毒（HBV）相关肝癌易感性的关系。方法：采用病例-对照方法,收集1 020例确诊的乙型肝炎病毒（HBV）阳性HCC患者（病例组）和1 046例健康对照个体（对照组）静脉血标本。用TaqMan等位基因分型方法对miR-22启动子区域多态位点rs6502892（C→T）和rs721576（A→G）进行基因型检测,结合研究对象的基本资料,应用Logistic回归法分析不同基因型与HBV相关肝癌发病风险的关系。结果：rs6502892的基因型分布在病例组与对照组间差异有统计学意义（P=0.018）,而rs721576的基因型的分布在两组间差异无统计学意义（P>0.05）。与rs6502892野生型（CC）比较,rs6502892突变基因型（CT/TT）的HBV相关肝癌的发病风险明显增加（调整后OR=1.23,95% CI=1.02~1.47,P=0.029）。进一步的分层分析表明,rs6502892突变基因型（CT/TT）的危险效应在52岁以下年龄组、女性、吸烟者和饮酒者中更明显（均P<0.05）;而rs721576突变基因型（AG/GG）在男性和非吸烟者中HBV相关肝癌的发病风险降低（均P<0.05）。结论：miR-22 rs6502892突变基因型（CT/TT）增加中国人群HBV相关肝癌的发病风险,而rs721576突变基因型（AG/GG）降低男性和非吸烟者患HBV相关肝癌的风险。这一结论有待进一步的关联研究以及功能学研究的证实。

     

Survivin在肝癌中的表达和意义及其与血管内皮生长因子的相关性

目的　检测肝细胞癌中凋亡抑制蛋白Survivin的表达 ,研究其与肝癌临床特征的关系 ;同时研究Survivin与血管内皮生长因子 (VEGF)表达的相关性 ,探讨Survivin在肝细胞癌发生发展及转移中的作用及机制。方法　采用免疫组织化学技术和蛋白印迹技术 ,检测 3 8例肝癌组织及癌旁非癌组织中Survivin和VEGF蛋白的表达。结果　 3 8例肝癌组织中 2 3例表达Survivin蛋白 ,其中 18例VEGF表达阳性 ,5例VEGF表达呈阴性或弱阳性 ;15例不表达Survivin蛋白者VEGF的表达 3例阳性 ,12例阴性或弱阳性。而在癌周非癌组织未检测到Survivin蛋白的表达。Survivin的表达与肝癌的发病年龄、性别、肿瘤大小、分化程度无关 (均为P >0 .0 5 ) ,而与肝癌的转移有关 (P <0 .0 5 )。结论　Survivin在肝细胞癌中的表达能促进肝癌的发生发展 ,并可能通过上调VEGF的表达而促进肝癌转移。     

血管紧张素Ⅱ诱导VEGF mRNA在人肝癌细胞中的表达

目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人肝癌HepG2细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响。方法体外培养人肝癌HepG2细胞,采用不同浓度的AngⅡ进行处理,收集处理后不同时点的细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量法,分别检测AngⅡ处理前后HepG2细胞VEGFmRNA的表达;同时利用MTT法检测AngⅡ对HepG2细胞增殖的影响。结果AngⅡ能刺激HepG2细胞增殖,并增强VEGFmRNA的表达(P0.05)。这种作用呈浓度-时间依赖效应,当AngⅡ浓度为10-7mol/L,时间为60h时,这种作用达到最高值,且此作用可被AngⅡ1型受体(AT1R)拮抗剂所阻断。结论AngⅡ可以通过AT1R诱导人肝癌细胞VEGFmRNA的表达,对肝癌的生长及转移可能起到一定的促进作用。     

放射线敏感性自杀基因的构建及其在肝癌细胞中的表达

目的　利用可被放射线激活而转录的早期生长反应基因 1 (Egr 1 )启动子驱动单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (tk)在肝癌细胞中高效表达。方法　构建以Egr 1为启动子 ,以tk为目的基因的重组质粒 pET ,经脂质体介导转染人肝癌细胞株SMMC 772 1 ,经G41 8抗性筛选、分别以 0、5、7.5、1 0、1 5、2 0Gy剂量γ射线照射、逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)半定量分析、比较tk基因的mRNA表达。结果　转染后的肝癌细胞株经射线照射后其tkmRNA的表达较未照射组 (55 .2±7.2 )有明显提高 ,以 1 5Gy最为显著 (1 1 7.2± 1 1 .1 ,P <0 .0 0 1 )。结论　经γ射线照射后 ,可被放射线转录激活的Egr 1启动子可引起tk基因在肝癌细胞中高效表达 ,从而为肝癌的基因 放射治疗的实验研究打下坚实的基础     

血管内皮生长因子-C及其受体在肾细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨肾细胞癌组织中血管内皮生长因子-C(VEGF-C)及其受体(VEGFR-3)的表达水平及其与肿瘤临床、病理因素间的关系。方法采用免疫组织化学方法测定54例肾细胞癌和20例正常肾脏组织中VEGF-C和VEGFR-3蛋白表达水平,观察VEGF-C和VEGFR-3的表达与肿瘤分级、肿瘤分期、淋巴管浸润或淋巴结转移间的相关性。结果肾细胞癌组织中VEGF-C和VEGFR-3蛋白表达水平显著高于正常肾脏组织,两者间差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤分级、肿瘤分期与VEGF-C和VEGFR-3蛋白的表达强度存在相关性(RR=0.83;0.78)。在伴有淋巴管转移浸润或淋巴结转移的病例中,其VEGF-C和VEGFR-3蛋白的表达明显升高(P<0.05)。结论通过检测肿瘤组织VEGF-C/VEGFR-3的表达情况,有助于了解肾细胞癌的淋巴管浸润和淋巴结转移的倾向,可能对临床治疗术式选择以及术后辅助治疗选择具有指导意义。     

DLL4和血管内皮生长因子在肝细胞癌的表达及其在肿瘤血管生成的作用

目的 探讨Delta样配体(DLL4)及血管内皮生长因子(VEGF)在肝细胞癌中的表达及其与血管生成的关系.方法 免疫组织化学法检测75例肝细胞癌(HCC)中DLL4和VEGF的表达,用CD34进行微血管内皮细胞染色,计算微血管密度(MVD),分析其相关性.结果 DLL4和VEGF表达在HCC组明显高于肝硬化组和正常肝组(P＜0.01),与HCC的临床病理学分级相关(P＜0.01),HCC组中的CD34表达与DLL4的表达呈明显负相关(P＜0.05,r=-0.778);与VEGF的表达呈明显正相关(P＜0.05,r=0.747),32例共表达DLL4和VECF蛋白者,其平均微血管数(19.70±5.82)个/HP,明显高于非共表达组(7.60±2.12)个/HP(P＜0.01).结论 DLL4、VEGF在肝细胞癌血管生成中可能起重要作用.     

靶向CXCR1基因的shRNA真核表达质粒的构建及鉴定

目的：构建靶向化学趋化因子受体1（CXCR1）的短发夹小干扰RNA（shRNA）质粒表达载体。方法：针对人CXCR1基因的mRNA序列,按RNA干扰靶位点的设计原则,设计并构建靶向CXCR1基因的3个shRNA质粒表达载体和1个阴性对照质粒表达载体,经酶切和测序确认构建成功后,转染胃癌细胞MKN45,RT-PCR和Western blot检测CXCR1 mRNA和蛋白的表达。结果：经酶切和测序证实,3个靶向CXCR1基因的shRNA真核表达质粒均构建成功;与未转染和转染阴性对照质粒的MKN45细胞比较,转染3种shRNA质粒的MKN45细胞,CXCR1 mRNA和蛋白水平均明显下调（均P<0.05）。结论：靶向CXCR1基因的shRNA真核表达质粒的成功构建,为进一步研究CXCR1在胃癌中的功能和实验性靶向治疗提供了初步的基础。

     

CD95、JNK1、JNK2和c-Jun在肝细胞癌中的表达及意义

目的探讨CD95和JUK因子在肝细胞癌组织中的表达及生物学意义。方法采用免疫组化方法检测CD95、JNK1、JNK2和c-Jun蛋白在58例肝癌组织及其对应的癌旁肝组织中的表达水平。结合肝癌临床病理指标分析相关性。结果 CD95、JNK1、JNK2和c-Jun蛋白在癌旁肝组织中的阳性表达率为74.1%(43/58)、72.4%(42/58)、67.2%(39/58)、79.3%(46/58),高于在癌组织中的阳性表达率25.9%(15/58)、27.6%(16/58)、32.8%(19/58)20.7%(12/58),差异均具有统计学意义(P0.05);CD95蛋白的表达与JNK1(r=0.693,P=0.013)、JNK2(r=0.357,P=0.007)和c-Jun(r=0.670,P=0.021)蛋白的表达呈正相关。CD95、JNK1、JNK2和c-Jun蛋白表达水平和肝癌分化程度呈负相关(分别为r=-0.516,P=0.003;r=-0.364,P=0.006;r=-0.383,P=0.004;r=-0.508,P=0.003)。与性别、年龄、结节数目和有无肝硬化无关(P0.05)。结论 CD95蛋白肝癌组织中的表达下调,通过下游重要信号传导分子JNK1、JNK2和c-Jun的表达,导致肝癌细胞增殖和免疫逃逸是肝癌发生发展的重要分子机制。     

CoCl2模拟缺氧环境下肝癌细胞生物钟基因表达的变化

目的：观察氯化钴（CoCl2）模拟缺氧环境下肝癌细胞生物钟基因表达的变化。 方法：以不同浓度（0,50,100,200 μmol/L）的CoCl2处理肝癌细胞系Huh7细胞24 h后,用Western blot检测细胞中缺氧诱导因子1α（HIF-1α）的蛋白表达,real-time PCR检测细胞中生物钟基因CLOCK、BMAL1、Per1、Per2、Per3、Cry1、Cry2、CKIε的mRNA表达。 结果：Western blot结果显示,未处理Huh7细胞（0 μmol/L CoCl2）无HIF-1α表达,而各浓度的CoCl2处理后,Huh7细胞出现明显的HIF-1α的蛋白表达,且表达水平随CoCl2浓度增加而升高。real-time PCR结果显示,CoCl2处理后的Huh7细胞中Bmal1、Per1、Cry2的mRNA水平明显上调,而CLOCK、Cry1、Per2、Per3、CKIε的mRNA水平明显下调,且均呈CoCl2浓度依赖性（均P<0.05）。 结论：缺氧微环境可能是引起肝癌细胞生物钟基因表达异常的原因之一。

     

VEGF-C反义核酸对结直肠癌LoVo细胞体内生长的影响

目的：探讨VEGF-C反义核酸对结直肠癌LoVo细胞体内生长的影响。方法：20只裸鼠随机均分为实验组与对照组,实验组接种转染反义VEGF-C核酸的LoVo细胞,而对照组接种转染空白质粒的LoVo细胞。观察两组肿瘤的生长情况,21 d后处死动物取移植瘤标本,用免疫组化法检测移植瘤组织中的微淋巴管密度（MLD）和微血管密度（MVD）。结果： 两组的成瘤率均为100%;实验组与对照组接种14 d后的肿瘤体积分别为（382.0±152.8）mm3和（454.2±148.7）mm3,21 d后为（745.0±250.9）mm3和（1 574.4±506.2）mm3,差异均有统计学意义（均P<0.05）;实验组肿瘤组织中MLD与MVD计数均较对照组明显减少[（11.75±2.22）/0.72 mm2 vs. （28.50±2.65）/0.72mm2,（47.75±2.99）/0.72 mm2 vs. （53.73±3.50）/0.72 mm2]（均P<0.05）。结论：转染VEGF-C反义核酸可抑制结直肠癌LoVo细胞移植瘤在裸鼠的体内生长,并抑制移植瘤淋巴管与血管的生成。

     

原发性肝癌中Numb和VEGF的表达及临床意义

目的：探讨Numb和VEGF在原发性肝细胞癌（HCC）中的表达及其意义。
　　方法：免疫组化法检测60例HCC患者癌组织与癌旁组织,以及27例肝外伤与肝血管瘤患者正常肝组织中Numb与VEGF的表达,分析两者表达与HCC患者临床病理因素以及预后的关系。
　　结果：与正常肝组织及癌旁组织比较,HCC组织中Numb阳性表达率明显降低,而VEGF的阳性表达率明显升高（均P<0.05）,且在HCC组织中两者表达呈负相关（r=-0.5248,P=0.01）;Numb与VEGF的表达均与患者TNM分期、Edmondson分级、门脉癌栓及包膜有无有关（均P<0.05）;Numb阴性表达患者的总的生存期明显短于阳性表达者,而VEGF情况则相反（均P<0.05）。
　　结论：在HCC组织中,Numb表达下调,而VEGF表达上调,且两者之间的消长可能与HCC的侵袭性及不良预后密切相关。     

microRNA 在肝细胞癌发生发展和诊治中的作用

microRNA（miRNA）是一类高度保守的内源性非编码小分子单链RNA,通过与靶mRNA完全或部分互补结合,导致其裂解或转录后翻译抑制,调控基因表达,参与细胞增殖、分化、凋亡等多个重要生物学过程,同时具有癌基因和抑癌基因的作用。近年来研究发现,miRNA在肝细胞癌（HCC）的发生发展和诊治中起重要作用。笔者就该领域的研究现状作一综述。

     

精准肝切除与常规肝切除对肝癌患者T细胞亚群变化影响的比较

目的:比较精准肝切除与常规肝切除对肝癌患者T细胞亚群变化的影响。方法:将47例肝癌患者随机分为两组,分别行精准肝切除术(精准肝切除组,26例)和常规肝切除术(常规肝切除组,21例)。比较两组主要临床指标,及手术前后外周血CD3~+、CD4~+、CD8~+及CD4~+/CD8~+水平。结果:与常规肝切除组比较,精准肝切除组手术时间延长,但失血量少、住院时间短、术后胆汁漏与腹腔出血发生率低(均P0.05);精准肝切除组术后肝功能指标的变化优于常规肝切除组(均P0.05)。术后7 d,两组CD3~+、CD4~+及CD4~+/CD8~+水平均较术前明显下降,但精准肝切除组下降程度明显小于常规肝切除组(均P0.05),两组CD8~+水平均较术前略有升高(均P0.05);术后14 d,两组各T细胞亚群均恢复至术前水平。结论:精准肝切除在术后免疫功能的保护方面优于常规肝切除,从而有利于肝癌患者肝脏功能的恢复。     

色素上皮细胞衍生因子在膀胱癌旁黏膜及膀胱癌中的表达及其临床意义

目的 研究色素上皮细胞衍生因子(pigment epithelium derived factor,PEDF)在膀胱癌旁黏膜及膀胱中的表达变化及其意义.方法 收集在本院确诊为膀胱癌并且接受手术治疗患者的膀胱癌组织及癌旁组织,采用RT-PCR检测组织水平PEDF的mRNA表达差异,Western Blot及免疫组化IHC检测不同临床分期膀胱癌组织中PEDF的蛋白水平,并且比较了其同VEGF、MMP-2、MMP-9、MMP-12的相对表达.通过临床收集相应生理参数数据,分析PEDF同不同临床生理参数的相关性.结果 PEDF在膀胱癌旁黏膜中的表达水平无论是mRNA水平还是蛋白水平均显著高于膀胱癌组织(P＜0.05),并且临床Ⅰ期和Ⅱ期的膀胱癌组织中PEDF的表达水平显著高于Ⅲ期、Ⅳ期(P＜0.05),相关性分析表明,PEDF的阳性率同膀胱癌临床分期、淋巴结转移显著相关(P＜0.05),同其他生理参数无显著相关性(P＞0.05).结论 PEDF的表达差异同膀胱癌的发生和发展可能存在一定的相关性,具有一定的临床意义.     

二氢杨梅素对肝癌细胞黏附、侵袭及迁移的抑制作用及机制

目的：研究二氢杨梅素（DHM）对肝癌细胞黏附、侵袭和迁移能力的影响及其可能机制。 方法：用不同浓度DHM处理肝癌MHCC97L细胞后,分别检测细胞的黏附能力、迁移与侵袭能力,以及E-cadherin、MMP-2、MMP-9和VEGF蛋白表达。 结果：与空白对照细胞比较,DHM处理后的MHCC97L细胞黏附力明显降低、侵袭与迁移力明显减弱（均P<0.05）;E-cadherin表达明显上调,而MMP-9、VEGF蛋白表达明显下调的水平（均P<0.05）,但MMP-2蛋白的表达无明显改变（均P>0.05）。 结论：DHM可能通过调控E-cadherin、MMP-9和VEGF蛋白的表达抑制肝癌细胞的黏附、迁移和侵袭。     

驱动蛋白家族成员15在肝癌中的表达及意义

目的:探究驱动蛋白家族成员15(KIF15)在肝癌中的表达以及与肝癌生物学行为的关系。方法:利用TCGA数据分析不同临床情况肝癌患者KIF15表达及其对肝癌患者生存率的影响。观察肝癌SMMC-7721细胞的KIF15表达下调后,增殖能力、细胞周期及侵袭能力的变化。结果:数据库分析结果显示,肝癌患者的TNM或T分期越高,KIF15相对表达量越高(均P0.05);KIF15高表达肝癌患者生存率明显低于KIF15低表达肝癌患者(P0.05)。SMMC-7721细胞转染siKIF15后,细胞增殖活性明显降低、细胞G_0/G_1期阻滞明显增加、细胞侵袭能力明显减弱。结论:KIF15的表达于肝癌的进展密切相关,其作用机制可能与促进肝癌细胞增殖和侵袭有关。     

原发性肝癌及其癌旁组织生长激素受体的表达及意义

目的　通过了解原发性肝癌及其癌旁组织的表达情况 ,初步探讨重组人生长激素(rhGH)在肝癌患者中的适用问题。方法　采用放射配体法对 3 2例原发性肝癌 (HCC)组织及其癌旁组织进行生长激素受体 (GHR)的检测 ,并以 6例正常肝组织作为对照 ;肝组织GHR的受体最大结合量 (RT)和平衡解离常数 (Kd)采用Scatchard法计算 ;并分析肝癌GHR受体结合容量 (RT)值与肝癌临床病理特点之间的关系。结果　在 2 8例HCC组织与 3 2例癌旁组织检测到GHR的存在 ,RT 在有GHR表达的肝癌为 ( 18.43 0 0± 4.163 3 )fmol·mg-1·protein ,平衡解离常数 (Kd)为( 0 .64 3 2± 0 .1961)nmol/L ,癌旁组织GHR的RT 值为 ( 3 2 .744 1± 3 .5 10 6)fmol·mg-1protein ,Kd为 ( 0 .610 9± 0 .110 5 )nmol/L ,同正常肝组织相比 ,肝癌与癌旁组织GHR的RT 值均降低 (P <0 .0 5 ) ,而肝癌组织GHR的RT 又低于癌旁组织 ,但三者之间Kd 差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;肝癌组织GHR的RT 值与肿瘤大小、患者临床分期的延迟呈负相关 ,而与肿瘤分化程度、患者年龄、是否合并肝硬化无关 ;有 4例肝癌组织未检测到GHR存在。结论　大多数原发性肝癌组织及其癌旁组织均表达GHR ,在它们受体功能未明的情况下 ,rhGH在肝癌患者中的使用可能需慎重。