金丝桃苷保护大鼠脑缺血再灌注损伤的机制研究

目的 探究金丝桃苷（hyperoside，Hyp）对脑缺血再灌注大鼠脑组织的保护作用及相关机制。方法 采用线栓法建立大脑中动脉闭塞/再灌注（middle cerebral artery occlusion/reperfusion，MCAO/R）大鼠模型，分成假手术组、模型组、Hyp低、中、高剂量组（30，60，120 mg·kg^-1）。持续给药14 d后，采用Zea Longa法对大鼠进行神经功能评分，并测定脑含水量。TTC染色法测定大鼠脑梗死体积，ELISA检测炎症相关因子，HE染色观察大脑海马CA1区神经元病理形态，TUNEL染色观察大鼠脑组织细胞凋亡程度，Western blotting检测TLR4和COX-2以及凋亡相关蛋白的表达。结果 Hyp干预能够显著改善MCAO/R大鼠Zea Longa评分（P<0.05），减少脑含水量和脑梗死体积，显著降低炎症因子（TNF-α、IL-1β、IL-6、ICAM-1以及VCAM-1）的表达（P<0.05或P<0.01），并且有效改善海马CA1区神经元的病理学改变和凋亡情况，显著抑制TLR4、COX-2、NF-kB、caspase-3、caspase-9以及Bax蛋白的表达（P<0.05或P<0.01），上调Bcl-2蛋白的表达（P<0.05）。结论 Hyp对脑缺血再灌注损伤的保护作用与抗炎、抗凋亡以及抑制TLR4/COX-2信号通路有关。     

栀子苷对肝脏缺血再灌注损伤大鼠炎症反应、氧化应激和PI3K/Akt信号通路的影响

目的 探讨栀子苷对肝脏缺血再灌注损伤大鼠炎症反应、氧化应激和PI3K/Akt信号通路的影响。方法 将SD大鼠分为对照组、模型组和栀子苷5、10 mg/kg组,每组各10只。对照组、模型组大鼠ip溶剂橄榄油10 mg/kg,栀子苷5、10 mg/kg组大鼠ip栀子苷5、10 mg/kg,连续7 d,最后一次注射药物后进行肝缺血再灌注损伤建模处理。检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素、直接胆红素以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β水平;测定肝组织丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;观察肝组织病理学变化和细胞凋亡;检测肝组织凋亡相关因子Bcl-2、Bax mRNA表达及p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3、Caspase-3蛋白表达。结果 与模型组相比,栀子苷5、10 mg/kg组血清ALT、AST、总胆红素、直接胆红素水平、TNF-α、TGF-β、IL-6、IL-1β、MDA和iNOS水平、肝组织凋亡细胞比例、Bax mRNA、蛋白表达和cleaved Caspase-3/Caspase-3显著降低(P<0.05),GSH、SOD水平、Bcl-2 mRNA和蛋白表达、p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt显著升高(P<0.05),且栀子苷10 mg/kg组作用效果更明显(P<0.05)。结论 栀子苷能够改善大鼠肝功能,减轻氧化应激、炎症反应和细胞凋亡,其作用机制可能是通过激活PI3K/Akt信号通路实现的。     

延龄草苷对脂多糖刺激的小胶质细胞炎症抑制作用

目的 探讨延龄草苷（trillin）对小胶质细胞（BV-2）的炎性激活的抑制作用。方法 不同浓度的延龄草苷孵育0.5 h,然后用脂多糖进行刺激,培养24 h后收集上清,Greiss法检测NO浓度;CCK-8检测延龄草苷对小胶质细胞活力的影响;Elisa检测肿瘤坏死因子（TNF-α）的浓度;实时定量PCR（RT-PCR）检测TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS、COX-1、COX-2基因的表达。结果 在不影响细胞活力的前提下,延龄草苷能明显抑制NO的释放,同时能抑制激活诱导细胞死亡,能明显抑制TNF-α的产生,能明显抑制TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS、COX-2 mRNA的表达,但是不能抑制COX-1 mRNA的表达。结论 延龄草苷可以抑制LPS诱导的小胶质细胞的炎性激活,抑制炎性基因的表达。     

硫酸化修饰对玄参多糖抗炎活性的影响

目的 比较研究玄参多糖经硫酸化修饰前后其抗炎活性的变化及机制。方法 ♂ ICR小鼠经腹腔注射脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）建立急性炎症反应模型，分别给予玄参多糖和硫酸化玄参多糖进行药物干预，以阿司匹林作为阳性对照，运用Real time RT-PCR检测肝脏组织白介素-6（interleukin-6，IL-6）、白介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）的mRNA表达，运用ELISA检测血清中的IL-6、IL-1β、MCP-1和TNF-α的蛋白表达，运用Western blotting法检测肝脏组织中核因子κB（nuclear factor-kappaB，NF-κB）、phospho-NF-κB的表达水平。结果 硫酸化玄参多糖和玄参多糖均可显著抑制LPS诱导的IL-6、IL-1β、MCP-1和TNF-α mRNA和蛋白表达增加，玄参多糖经硫酸化修饰后，其抗炎活性显著增强，其作用机制可能与调控NF-κB信号转导通路活化有关。结论 硫酸化修饰可显著提高玄参多糖的抗炎活性，具有更好的应用前景，为玄参的开发应用提供了理论基础。     

萝卜硫素抑制幽门螺杆菌诱导胃黏膜上皮细胞NLRP3炎症小体活化的研究

目的 研究萝卜硫素（sulforaphane，SFP）对幽门螺杆菌感染的胃黏膜上皮GES-1细胞线粒体和氧化应激损伤及NLRP3炎症小体活化的影响。方法 SFP （100 ng·mL^-1）预处理GES-1细胞12 h，然后10⁹CFU·mL^-1的幽门螺杆菌感染细胞6 h；CCK8检测细胞活力，qRT-PCR分析PGC1α、COX-4、NRF1、TFAM、SOD1和HO-1 mRNA表达水平，Western blotting检测NLRP3、CASP1 p20、CASP1 p10、pro-IL-1β和IL-1β蛋白表达水平，并对GES-1细胞线粒体膜电位、氧耗量和ROS水平进行检测。结果 幽门螺杆菌感染可明显诱导NLRP3、CASP1 p20、CASP1 p10、IL-1β蛋白和PGC1α、COX-4、NRF1 mRNA表达，促使氧消耗量和ROS水平增高，而细胞活力、SOD1、HO-1、TFAM mRNA表达和线粒体膜电位降低（P<0.05）；SFP处理后能明显抑制NLRP3、IL-1β蛋白和PGC1α、COX-4、NRF1 mRNA表达，降低氧消耗量和ROS水平，而细胞活力、SOD1、HO-1、TFAM mRNA表达和线粒体膜电位增高（P<0.05）；另外，ROS抑制剂NAC也能显著抑制NLRP3炎症小体和IL-1β表达水平。结论 SFP可通过降低线粒体损伤和ROS水平改善幽门螺杆菌感染诱导GES-1细胞炎症反应。     

Notch信号通路对骨性关节炎软骨细胞凋亡的实验研究

目的 探究Notch信号通路对IL-1β诱导软骨细胞凋亡的调控作用。方法 采用C28/I2软骨细胞系进行培养，利用IL-1β诱导细胞凋亡，通过Ad-NICD感染实现NICD的过表达，通过si-NICD转染实现NICD的沉默。采用Real-time PCR和Western blot技术检测过表达和沉默的效果，并评估Caspase-3和Caspase-9的mRNA和蛋白表达水平。结果 在MOI=100的si-NICD转染条件下，NICD的沉默效果最佳；与Ad-NC组相比，Ad-NICD组的Caspase-3和Caspase-9的mRNA及蛋白表达水平上调(P<0.05);与siRNA-NC组相比，siRNA-NICD组的Caspase-3和Caspase-9的mRNA及蛋白表达水平下调(P<0.05)。结论 激活Notch通路可以抑制IL-1β诱导的C28/I2软骨细胞凋亡，而阻遏Notch通路则能促进软骨细胞凋亡。     

双醋瑞因对IL-1β诱导软骨细胞损伤的保护作用

目的 探讨双醋瑞因对白介素-1β(IL-1β)诱导软骨细胞损伤的保护作用。方法 通过Ⅱ型胶原酶消化SD大鼠软骨,获得软骨细胞,10 ng·L^-1 IL-1β诱导软骨损伤48 h的同时,1,10,100 μmol·L^-1双醋瑞因也干预48 h。MTT法检测双醋瑞因对IL-1β诱导的骨关节炎软骨细胞活力的修复作用;Griess法检测IL-1β诱导的骨关节炎软骨细胞上清NO水平;Western blot分析炎症因子环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2),核因子-κB (NF-κB)信号通路相关蛋白p65,pp65的含量变化。结果 MTT法显示双醋瑞因(1,10,100 μmol·L^-1)可改善IL-1β诱导的大鼠软骨细胞的活力,且呈现剂量依赖关系。Griess法检测结果表明双醋瑞因能抑制IL-1β诱导的骨关节炎软骨细胞上清NO含量上升。Western blot结果显示双醋瑞因能抑制IL-1β诱导的骨关节炎软骨细胞炎症因子COX-2含量上升;并且抑制核因子p65磷酸化。结论 双醋瑞因能够抑制IL-1β诱导的软骨细胞炎症,可能是通过NF-κB信号通路来实现的。     

基于Nrf2/HO-1信号通路研究橄榄苦苷的体外抗炎作用

目的 探讨橄榄苦苷对脂多糖（LPS）诱导的小鼠腹腔巨噬细胞（RAW264.7）炎症的保护作用及机制。方法 MTT法检测橄榄苦苷（0、10、20、40 μmol/L）对RAW264.7细胞活性的影响;用橄榄苦苷（10、20、40 μmol/L）预处理细胞1 h后,LPS诱导炎症模型,Griess试剂检测细胞内Nitrite释放;Western blotting方法检测细胞iNOS、COX-2、Nrf2、Keap-1、HO-1、NQO1蛋白表达水平;流式细胞仪检测细胞内NO、ROS、Ca²⁺的水平;荧光显微镜检测线粒体膜电位（MMP）水平;ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）的释放。结果 与模型组比较,橄榄苦苷组Nitrite释放水平显著降低（P<0.05、0.01、0.001）,iNOS、COX-2蛋白的表达显著降低（P<0.001）,NO的产生显著减少（P<0.05、0.01）;TNF-α、IL-6的释放受到显著抑制（P<0.001）;Ca²⁺释放受到显著抑制（P<0.01）;ROS生成受到显著抑制（P<0.01）;JC-1单体降低,恢复聚合物状态（红色荧光变多）,MMP稳定性增强;Keap1蛋白表达显著降低, Nrf2、HO-1、NQO1蛋白的表达均显著升高（P<0.05、0.01、0.001）。结论 橄榄苦苷对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症具有抑制作用,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路相关。     

白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ对炎性巨噬细胞细胞因子表达的影响

摘 要 目的：通过诱导构建 M1 型巨噬细胞模型研究研究白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ对细胞因子表达的调节作用。方法: 使用硫代乙醇酸钠诱导大鼠产生炎性巨噬细胞,然后采用差速贴壁法纯化所得的大鼠腹腔炎性巨噬细胞,通过流式测定巨噬细胞标记抗原（ED1）表达来鉴定巨噬细胞。分别使用白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ刺激巨噬细胞24h后, ELISA法检培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、致炎因子(IL-1β)和白细胞介素6(IL 6)细胞因子的表达变化,收集细胞提取RNA,通过RT PCR的方法测定炎性巨噬细胞表达精氨酸酶（Arginase 1）、诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）以及IL-1β、趋化因子（CCL22）、转化生长因子（TGF β）的变化。结果: 纯化培养的大鼠炎性巨噬细胞表达ED1,白术内酯Ⅰ、Ⅲ能够使其炎性巨噬细胞Arginase 1、CCL22、TGF β表达水平升高（P<0.05）,iNOS、IL-1β的表达水平降低（P<0.05）;白术内酯Ⅰ、Ⅲ对巨噬细胞产生炎症因子中TNF-α、IL-1β、IL 6具有显著的抑制作用（P<0.05）,白术内酯Ⅱ对炎性巨噬细胞因子表达不明显。结论: 白术内酯Ⅰ、Ⅲ够使促进炎性巨噬细胞细胞因子表达发生显著变化,具有抗炎活性,但白术内酯Ⅱ变化不明显。     

双氢青蒿素通过抑制炎症反应在血管重塑中的作用机制研究

目的 探究双氢青蒿素通过抑制炎症反应对血管重塑的抑制作用。方法 采用贴块法培养小鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells，VSMCs)，以TNF-α诱导建立体外平滑肌细胞增殖模型，通过手术剥夺动脉方式建立小鼠股动脉损伤模型，并采用双氢青蒿素干预细胞及股动脉损伤小鼠。采用CCK-8法检测细胞增殖；H&E染色评价股动脉组织病理变化情况并测量中膜厚度；ELISA法检测细胞中IL-1β、TNF-α、IL-6、CCR8及小鼠股动脉组织中IL-1β、TNF-α、IL-6、TGF-β1的含量；免疫组织化学法检测股动脉组织NF-κB p65、CCR8表达；qRT-PCR分析细胞及股动脉组织中IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8、CCR8、NF-κB p65、TGF-β1、MCP-1 mRNA表达；Western blotting分析细胞及股动脉组织中IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-8、p-NF-κB p65、NF-κB p65、CCR8、TGF-β1、MCP-1蛋白表达。结果 在TNF-α诱导的VSMCs增殖及股动脉损伤小鼠模型中，VSMCs增殖及TNF-α、IL-6含量明显升高，IL-1β、IL-6、IL-8 mRNA表达明显升高，IL-6、CCR8、NF-κB p65蛋白表达明显升高(P<0.05或P<0.01)；双氢青蒿素可明显降低TNF-α诱导的VSMCs中IL-1β、IL-8 mRNA及股动脉损伤小鼠IL-1β mRNA表达和IL-1β、p-NF-κB p65蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论 双氢青蒿素能降低血管炎症，延缓损伤血管的重塑，表明其为经皮冠状动脉介入治疗(如支架植入)的潜在治疗药物。     

血管活性肠肽对肺泡巨噬细胞M1/M2型极化及相关细胞因子的影响

目的 观察血管活性肠肽（vasoactive intestinal peptide，VIP）对肺泡巨噬细胞（alveolar macrophages，AM） M1/M2极化和相关细胞因子的影响。方法 分别采用脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）联合γ-干扰素（interferon-γ，IFN-γ）、白细胞介素-4（interleukin 4，IL-4）联合白细胞介素-13（interleukin 13，IL-13）诱导AM M1/M2型极化，后用10^-8~10^-6 mol·L^-1 VIP干预极化的AM，免疫荧光双标法测定M1型AM标记物CD86和促炎因子白细胞介素-6（interleukin 6，IL-6）的共表达，M2型AM标记物CD206和抗炎因子白细胞介素-10（interleukin 10，IL-10）的共表达；ELISA检测细胞上清中IL-6、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、IL-10、精氨酸酶-1（arginase-1，Arg-1）的表达，RT-PCR检测巨噬细胞表面标记物CD86、CD206和巨噬细胞相关因子IL-6、TNF-α、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）、IL-10、Arg-1、几丁质酶-3样蛋白3（chitinase 3-like 3，Ym1）的表达。结果 经LPS联合IFN-γ、IL-4联合IL-13诱导后，AM分别向M1/M2型极化，与M1型相关的促炎因子IL-6、TNF-α、iNOS和与M2型相关的抗炎因子IL-10、Arg-1、Ym1的激活和释放明显高于未经诱导的正常组（P<0.05）；不同浓度VIP （10^-8~10^-6 mol·L^-1）的干预，均可下调M1型AM和相关炎症因子IL-6、TNF-α、iNOS的活性和表达（P<0.05）；上调M2型AM和相关抗炎因子IL-10、Arg-1、Ym1的活性和表达（P<0.05）。结论 VIP可抑制AM M1型极化，减少炎症因子IL-6、TNF-α、iNOS的激活和释放；促进AM M2型极化，提高抗炎因子IL-10、Arg-1、Ym1的激活和释放，提示VIP在肺内炎症时可能通过调控AM M1/M2型极化，抑制炎症反应，对肺组织起保护性作用。     

谷氨酰胺代谢对巨噬细胞表型极化的调控作用研究

目的 探讨谷氨酰胺代谢对巨噬细胞表型极化的调控作用。方法 以原代巨噬细胞为模型，分别采用添加谷氨酰胺、剥夺谷氨酰胺、谷氨酰胺酶抑制剂方法处理巨噬细胞，RT-qPCR检测巨噬细胞表型M1标志物如IL-12、IL-6、IL-1β、iNOS、M2标志物如Arg1、Chil3、Mrc1 mRNA表达水平。结果 谷氨酰胺剥夺显著促进巨噬细胞M1标志物IL-12、IL-6、IL-1β、iNOS表达增加，谷氨酰胺酶抑制剂显著抑制巨噬细胞M2型标志物Arg1、Chil3、Mrc1表达，促进巨噬细胞M1型标志物IL-1β、iNOS基因水平表达。结论 谷氨酰胺代谢可促进巨噬细胞M2极化。     

独活寄生汤含药血清通过调控SOX6对体外软骨细胞表型的影响

目的 研究大鼠独活寄生汤含药血清对体外软骨细胞表型稳定性,SOX6及培养基中细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达的影响。方法 取大鼠股骨头软骨帽,提取软骨细胞,并在体外单层传代培养。培养体系为含高、中、低浓度的独活寄生汤含药血清及生理盐水血清,通过免疫组织化学分析软骨细胞表型Ⅱ型胶原的变化及SOX6表达分布,通过Westernblot及ELISA检测SOX6、Collagen Ⅱ、Aggrecan及IL-1β、IL-6、TNF-α表达的变化。结果 不同浓度的独活寄生汤含药血清均可对体外培养的软骨细胞产生增殖促进作用,并能增加Ⅱ型胶原稳定其软骨表型;其中以中浓度最为显著（P<0.01）;与生理盐水血清组相比,独活寄生汤含药血清可以增加SOX6在细胞核的分布,而且能抑制培养基中细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达水平。结论 独活寄生汤含药血清可以上调体外软骨细胞SOX6及抑制炎症因子的表达以稳定软骨细胞的表型。     

青天葵甲醇提取物通过ERK通路抑制人肝癌细胞增殖并诱导其凋亡

目的 研究青天葵甲醇提取物（Nervilia fordii methanol extracts，NFME）体外对人肝癌SMMC7721和HepG2细胞的凋亡作用及其作用机制。方法 紫外-可见分光光度法测定青天葵中总黄酮和总多酚的含量；MTT法检测不同浓度（0，0.25，0.5，1，1.5，2 mg·mL^-1）NFME处理24 h对SMMC7721、HepG2和LO2细胞生长抑制率的影响；克隆形成试验观察NFME对SMMC7721和HepG2细胞克隆形成率的影响；Hoechst凋亡染色观察NFME对SMMC7721细胞凋亡的影响；流式细胞术检测NFME对SMMC7721细胞凋亡和细胞周期的影响；Western blotting测试NFME作用下caspase3、PARP、ERK1/2和c-Raf蛋白磷酸化水平的变化。结果 NFME中总多酚含量为（4.25±0.46）mg·g^-1，总黄酮含量为（4.72±0.13）mg·g^-1；MTT试验结果显示，与对照组相比，在给药24 h时0.5 mg·mL^-1的NFME就能抑制SMMC7721和HepG2细胞的增殖（P<0.001）；克隆形成试验表明，0.125 mg·mL^-1的NFME能够抑制SMMC7721和HepG2细胞集落的形成（P<0.001）；Hoechst凋亡染色观察到0.25 mg·mL^-1的NFME作用24 h能够观察到SMMC7721细胞发生凋亡（P<0.05）；流式细胞试验结果证实0.5 mg·mL^-1的NFME能够诱导SMMC7721细胞的凋亡（P<0.01），凋亡率14.43%，阻滞细胞周期于S期；Western blotting结果表明NFME能使SMMC7721细胞中caspase3发生剪切，随着给药浓度增加其剪切作用越明显（P<0.05），活化的caspase3剪切下游PARP的表达；同时NFME能够降低SMMC7721细胞中ERK1/2和c-Raf蛋白的磷酸化水平（P<0.05）。结论 NFME能抑制人肝癌SMMC7721和HepG2细胞的活性并诱导其发生凋亡，其作用机制可能与抑制ERK信号通路从而诱导细胞凋亡有关。     

丁苯酞对糖氧剥夺条件下人脑微血管内皮细胞炎症反应的调节作用

目的 研究丁苯酞调节糖氧剥夺（oxygen-glucose deprivation,OGD）条件下人脑微血管内皮细胞（human brainmicrovascular endothelial cells,HBMEC）炎症反应的机制。方法 采用OGD方法处理HBMEC,将细胞分为对照组、模型组和丁苯酞低、中、高剂量组。其中对照组为正常培养的HBMEC,模型组为OGD处理的细胞,低剂量组为OGD+5 μmol·L^-1的丁苯酞,中剂量组为OGD+10 μmol·L^-1的丁苯酞,高剂量组为OGD+20 μmol·L^-1的丁苯酞。采用流式细胞术检测细胞凋亡水平,CCK-8法检测细胞活力的变化,Western-Blot法检测细胞中HMGB1、TLR4、NF-κB （p-P65）、caspase-1和procaspase-1的表达水平,免疫酶联法检测上清中白细胞介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）,白细胞介素6（IL-6）的分泌水平。实时荧光定量PCR检测HMGB1、TLR4、NF-κB（P65）、caspase-1、IL-1β的mRNA表达。结果 OGD处理可以诱导HBMEC活力下调和HBMEC细胞凋亡,且具有时间依赖性,相比对照组具有显著性差异（P<0.05）;而丁苯酞干预后,HBMEC细胞活力比模型组显著上调（P<0.05）,细胞凋亡率比模型组显著下降（P<0.05）。OGD处理可以导致HBMEC中HMGB1-TLR4-NF-κB信号的激活,诱导炎症因子caspase-1、IL-1β的表达上调,相比对照组具有显著性差异（P<0.05）;而丁苯酞干预可以显著下调HMGB1-TLR4-NF-κB信号的表达,下调caspase-1、IL-1β的表达。结论 丁苯酞可能通过抑制HMGB1-TLR4-NF-κB信号的表达调节OGD下HBMEC细胞炎症反应。     

姜黄素对大鼠肠缺血再灌注后肠黏膜细胞凋亡及GRP78表达的影响

目的 观察姜黄素对大鼠肠缺血再灌注后肠黏膜细胞凋亡及GRP78表达的影响。方法 30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、姜黄素组。采用无创性动脉夹夹闭肠系膜上动脉1 h后实施再灌注来建立肠缺血再灌注模型,姜黄素组在手术前5 d开始每天按200 mg/kg ig给药1次,假手术组仅分离肠系膜上动脉,不夹闭。采用HE染色观察肠黏膜损伤情况并进行病理评分;TUNEl法观察肠黏膜细胞凋亡情况并计算凋亡指数;Western blotting检测再灌注损伤3 h时肠黏膜GRP78及Caspase-12蛋白表达。结果 模型组肠黏膜损伤严重,绒毛上皮成块脱落,固有层破坏、溃疡,腺体破坏严重;姜黄素组肠黏膜绒毛上皮仅部分脱落,腺体排列紊乱,与模型组比较,病理评分显著降低（P<0.05）;模型组肠黏膜隐窝可见大量凋亡阳性细胞;与模型组比较,姜黄素组肠黏膜隐窝上皮细胞凋亡情况明显减轻,凋亡指数显著下降（P<0.05）;与模型组比较,姜黄素组GRP78蛋白表达量显著增加（P<0.05）,Caspase-12蛋白表达量显著下降（P<0.05）。结论 姜黄素有可能通过上调GRP78表达,减少内质网应激所致肠黏膜细胞凋亡,来减轻肠黏膜的再灌注损伤,达到保护肠黏膜作用。     

基于NLRP3基因研究其调节非酒精性脂肪性肝病小鼠炎症反应的作用机制

目的 利用NLRP3基因敲除小鼠,研究NLRP3基因在调节高脂高果糖饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)小鼠炎症反应方面的作用机制。方法 利用雄性纯合子(NLRP3-/-)小鼠,以高脂高果糖饮食诱导NLRP3基因敲除(knock-out,KO)小鼠和野生型(wild-type,WT)小鼠建立NAFLD模型,分别设为KO高脂高果糖饮食组(KO-HFD组)和WT高脂高果糖饮食组(WT-HFD组),同时设WT组和KO组。通过观察各组小鼠体质量变化,血清和组织样本ALT、AST、TG、TC、MDA、SOD、脂质沉积、细胞凋亡率、IL-1β、IL-18、TNF-α、NF-κB、NLRP3、Caspase-1和ASC等的变化,初步研究NLRP3基因调节NAFLD小鼠炎症反应的作用机制。结果 随时间的推移,各组小鼠体质量逐步增加,但KO-HFD组相比WT-HFD组增加较少;各组血清ALT、AST、TG和TC水平逐步升高,但KO-HFD组相比WT-HFD组增幅较小;各组肝组织MDA水平逐步升高,SOD水平逐步降低,但KO-HFD组相比WT-HFD组变化幅度较小;油红O染色和Tunel切片结果显示,各组肝细胞内脂质沉积和细胞凋亡程度均逐渐增大,但KO-HFD组相比WT-HFD组变化较少;各组血清和肝组织炎症因子IL-1β、IL-18、TNF-α、NF-κB水平升高,但KO-HFD组20周相比WT-HFD组20周变化较少,且差异具有统计学意义;WT-HFD组小鼠肝组织NLRP3炎性小体及相关炎症因子蛋白NLRP3、Caspase-1、ASC、IL-1β和IL-18的表达水平相较KO-HFD组升高;WT-HFD组的NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18的mRNA转录水平逐步升高,而KO-HFD组基本未出现变化。结论 NLRP3基因在NAFLD小鼠模型中可能被激活,导致NLRP3炎性小体相关蛋白表达的增加,促进下游炎症因子的合成和分泌,造成明显的炎症反应和肝脏损伤,进而推动NAFLD疾病的进展。     

姜黄素下调NF-κB信号通路抑制化学缺氧诱导的U87细胞炎症反应

目的 研究姜黄素对化学缺氧所致人源性神经星形胶质瘤细胞系U87炎症反应的影响,并探讨相关分子机制。方法 100 μmol/L CoCl₂处理U87细胞不同时间（1、3、6、12、24 h）,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测炎症因子白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α） mRNA表达变化。100 μmol/L CoCl₂处理U87细胞12 h制备化学缺氧模型,同时给予1、5和10 μmol/L姜黄素处理,对照组（不添加CoCl₂）和模型组给予等体积DMSO;qRTPCR法检测IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达变化;Western Blotting法检测NF-κB/P65蛋白磷酸化水平及核转位。结果 CoCl₂上调U87细胞IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA水平并呈时间相关性,炎症反应在约12 h达到高峰。与模型组比较,姜黄素显著下调炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平,5和10 μmol/L浓度组差异显著（P<0.05）;显著下调p65的磷酸化水平（P<0.05）;导致细胞核内NF-κB/p65蛋白显著减少、细胞质中NF-κB/p65蛋白显著增加（P<0.05）。结论 姜黄素通过下调NF-κB信号通路抑制化学缺氧诱导的U87细胞炎症反应。     

基于TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路研究三叶香茶菜含药血清对枯否细胞活化的影响

目的 研究三叶香茶菜含药血清(isodon ternifolius-containing serum，ITS)通过Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)诱导的大鼠原代肝枯否细胞(Kupffer cell，KC)活化的影响。方法 分离培养大鼠原代KC，将LPS诱导的大鼠原代KC分为空白对照组、模型对照组、空白血清组、阳性对照组(秋水仙碱含药血清组)、ITS组、TLR4阻断剂组、TLR4阻断剂+ITS组。MTT法检测不同浓度ITS对KC增殖活性的影响；ELISA法检测KC细胞上清液白介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量；荧光定量聚合应(PCR)、Western blotting和免疫荧光检测KC中TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路中TLR4、核因子κB抑制蛋白α(IκBα)、半胱肽氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、NLRP3 mRNA和TLR4、IκBα、磷酸化IκBα(p-IκBα)、Caspase-1、NLRP3、NF-κBp65蛋白表达情况。结果 与模型对照组相比，各药物组KC上清液中IL-1β、IL-18、TNF-α和IL-6含量，以及细胞中TLR4、IκBα、Caspase-1、NLRP3 mRNA和TLR4、IκBα、p-IκBα、Caspase-1、NLRP3、NF-κBp65蛋白的表达均下调或降低(P<0.05或P<0.01)；与TLR4阻断剂组比较，TLR4阻断剂+ITS组上述多数指标的改善更加明显。结论 三叶香茶菜可能通过下调TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路抑制KC活化，减少炎性因子的表达和释放，从而减轻肝脏炎症损伤。     

湖北金粟兰中倍半萜二聚体化合物（+）-chlorahupetenes B对脂多糖诱导的RAW264.7细胞的抗炎作用

目的 评价湖北金粟兰中倍半萜二聚体化合物（+）-chlorahupetenes B[（+）-CHB]对脂多糖（LPS）诱导的小鼠巨噬细胞（RAW264.7）炎症反应的影响及作用机制。方法 RAW264.7细胞分为对照组（给予等体积DMSO）、模型组（给予等体积DMSO）、地塞米松磷酸钠注射液（Dex,阳性对照,1 μmol·L^-1）组和（+）-CHB低、中、高浓度（5、10、20 μmol·L^-1）组。各组分别加入相应药物孵育细胞1 h,除对照组外,其余组加入LPS （1 μg·mL^-1）诱导24 h造成炎症应答模型。细胞增殖检测法用于评估细胞活力;Griess反应检测一氧化氮（NO）浓度;酶联免疫分析检测炎症细胞因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1β、IL-6的生成;实时荧光定量PCR （qRT-PCR）检测IL-1β、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）、环氧合酶-2（COX-2）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、IL-6和TNF-α mRNA表达;Western blotting检测Toll样受体4（TLR4）、髓样分化因子88（MyD88）、核因子κB （NF-κB） p65、p-NF-κB p65、NLRP3、嘌呤能受体（P2X7）蛋白表达水平。结果 与模型组比较,（+）-CHB减少了梭形细胞数量,使大部分细胞恢复正常形态;显著抑制NO、TNF-α、IL-6、IL-1β生成（P<0.01）,显著降低COX-2、iNOS、IL-6、TNF-α、NLRP3、IL-1β mRNA水平（P<0.05、0.01）;显著降低TLR4、MyD88、NF-κB p65、p-NF-κBp65、NLRP3、P2X7蛋白表达水平（P<0.05、0.01）。结论 （+）-CHB通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路和P2X7/NLRP3/IL-1β炎症小体轴激活缓解LPS诱导的巨噬细胞炎症反应。