生地黄水提液调控Wnt-5 a/ROR2通路对输尿管梗阻大鼠肾纤维化的影响

目的:生地黄水提液调控Wnt-5a/ROR2通路对输尿管梗阻大鼠肾纤维化的影响。方法:将90只无特定病原体级SD大鼠,随机分为对照组(n=15)、模型组(n=15)、盐酸咪哒普利组(n=15)、生地黄水提液低剂量组(n=15)、生地黄水提液中剂量组(n=15)、生地黄水提液高剂量组(n=15),除对照组外,建立大鼠输尿管梗阻模型,造模后盐酸咪哒普利组、生地黄水提液低剂量组、生地黄水提液中剂量组、生地黄水提液高剂量组分别给0.9 g/(kg·d)盐酸咪哒普利和0.8、1.6、3.2 g/(kg·d)生地黄水提液灌胃连续2周,于实验终点确定大鼠肾脏/体重比值,采用苏木精-伊红染色法、HE染色确定各组大鼠肾脏病理水平,Masson染色确定各组大鼠肾脏纤维化水平,Western blot检测确认各组大鼠纤维化生物标志蛋白CollagenⅠ、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)表达水平及Wnt信号通路Wnt-5a、ROR2蛋白表达水平。结果:与对照组相比,模型组大鼠肾脏/体重比值升高,肾脏组织炎性细胞浸润增加,病理损伤增加,纤维化水平上升,纤维化生物标志物Collagen...     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨真武汤改善单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的机制

目的 基于Wntβ-catenin信号通路探讨真武汤改善单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的机制.方法 将30只SD大鼠随机分为空白组、模型组、真武汤组,各10只,成模后真武汤组给予真武汤灌胃14 d,空白组、模型组给予等剂量生理盐水灌胃,观察各组大鼠肾脏组织病理学改变、超氧化物歧化酶(Superoxide dismuta...     

温莪术对单侧输尿管梗阻大鼠的肾保护作用

肾脏纤维化以肾小管间质纤维化和肾小球硬化为特征,是慢性肾脏疾病的最终表现[1],也是肾脏疾病进展的主要的推动力[2-3].现代医学对于肾间质纤维化的治疗措施十分有限,近年来,中医药防治肾纤维化的优势逐渐凸显,成为医学界研究的热点.笔者通过实验研究,证实中药温莪术可延缓单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化,减少尿N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶(NAG)和尿蛋白含量,从而起到肾保护作用.     

复方金钱草颗粒对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的:探讨复方金钱草颗粒对单侧输尿管梗阻(UUO)模型大鼠肾间质纤维化的影响。方法:将20只雄性SD大鼠随机分为对照组与治疗组,建立UUO模型,治疗组每天早、中、晚各给予复方金钱草颗粒1次,1周为1疗程;对照组则给予生理盐水。1周后处死大鼠,处死前留取大鼠的血液,取对侧肾脏行HE染色,观察肾脏组织的病理改变,并用免疫组化的方法检测大鼠肾脏组织中TGF-β1、III型胶原的表达,并检测大鼠血清中血肌酐、血尿酸的变化。结果:治疗组治疗后TGF-β1和III型胶原水平(0.39±0.06 ng/ml、15.3±4.8μg/L)均显著低于对照组(0.81±0.11 ng/ml、61.5±15.8μg/L)。治疗组治疗后尿素氮水平和肌酐水平(6.1±1.1 mmol/L、46.8±9.8μmol/L)均显著低于对照组(13.5±2.6 mmol/L、118.5±26.1μmol/L)。结论:复方金钱草在改善UUO大鼠中肾组织纤维化及改善肾功能有一定作用。     

地龙组分对单侧输尿管梗阻大鼠的保护作用

目的:研究地龙组分对单侧输尿管梗阻大鼠的保护作用。方法:健康雄性Wistar大鼠60只,随机分组:假手术组+模型组+地龙低剂量组+地龙高剂量组。采用单侧输尿管结扎法复制肾间质纤维化大鼠模型,分别于术后2周、4周处死各组的6只大鼠,检测大鼠24 h尿蛋白定量及血肌酐、尿素氮。取梗阻侧肾组织标本,HE染色后光镜下观察肾脏病理改变。结果:地龙治疗组在对应时间点上较模型组梗阻侧肾脏的肿大及积水程度较轻,色泽较红润。在不同的时间点各组大鼠24 h尿蛋白定量无统计学差异(P﹥0.05);地龙治疗组大鼠的BUN、Scr水平在第2、4周时均低于模型组(P0.05);同个时间点,地龙低剂量组大鼠BUN、Scr水平低于地龙高剂量组。3 HE染色结果显示:在对应的时间点,地龙治疗组较模型组肾纤维化程度轻。结论:地龙组分能够改善单侧输尿管梗阻大鼠的肾功,降低血肌酐、尿素氮水平,并改善单侧输尿管梗阻大鼠的肾脏病理。     

益肾活血清利方对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的防治作用

目的探讨依据益肾活血清利法组方对进展性肾间质纤维化的防治作用。方法制备单侧输尿管梗阻大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、益肾活血清利方低剂量组、益肾活血清利方高剂量组、苯那普利组。观察用药21d对大鼠血肌酐、尿素氮,大鼠肾间质病理变化及大鼠肾组织羟脯氨酸含量的影响。结果用药组较模型组对血肌酐、尿素氮,大鼠肾间质病理变化及大鼠肾组织羟脯氨酸含量的作用均有显著差异,其中中药高剂量组优于苯那普利组。结论益肾活血清利方对肾间质纤维化具有良好的防治作用。     

莪术对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的探讨中药莪术对大鼠单侧输尿管梗阻动物模型(UUO)的影响及其可能机制。方法利用单侧输尿管梗阻的方法(UUO)建立大鼠肾间质纤维化的动物模型,并用中药莪术对其治疗,设为中药治疗组,以氯沙坦为西药对照组,采用免疫组化和原位杂交方法观察细胞外基质IV型胶元、α-SMA和TGF-β、NF-Kb、PAI-1的表达。应用医学病理图像分析系统对阳性面积进行统计学分析。结果动物实验莪术治疗组与模型组比较,免疫组化、原位杂交各检测指标统计学上有显著差异(P<0.05);莪术组TGF-β、NF-Kb、α-SMA、COL-Ⅳ、PAI-1mRNA表达明显低于模型组,各项检测结果也有显著差异(P<0.05)。莪术组肾间质原位杂交检测阳性面积表达明显低于模型组,有显著差异。结论莪术可能通过抑制与纤维化关系最密切的细胞因子如TGFβ1,核因子NF-Kb来抑制成纤维细胞活性,阻止MyoFb的出现,以及通过下调PAI-1来调节纤溶系统平衡,抑制细胞外基质合成,促进其降解等机制延缓肾间质纤维化。     

保元排毒丸对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏Wnt/β-catenin 信号通路的影响

目的：观察保元排毒丸对单侧输尿管梗阻（Unilateral Ureteral Obstruction UUO）模型大鼠肾脏病理的影响及对Wnt/β-catenin信号转导通路的调控。方法：48只健康清洁级雄性SD大鼠,随机分为假手术组、UUO组、厄贝沙坦组（12.5g·kg-1/天）、保元排毒丸低、中、高剂量组（1.25g·kg-1/天、2.5g·kg-1/天、5.0g·kg-1/天）,每组8只;除假手术组只分离输尿管不结扎外其余均制备右侧输尿管梗阻肾纤维化模型,造模第二天开始予相应的药物灌胃,假手术组和UUO组给予自由进食和生理盐水灌胃,共灌14天。末次灌胃24小时后取右肾进行HE 染色观察肾脏病理改变,Masson 染色观察肾组织胶原沉积情况;Western Blot 法测肾组织E-cadherin、Collagen I、β-Catenin表达水平;Real-time PCR检测Wnt4、β-catenin mRNA表达。结果：与假手术组比较,UUO组和各给药组肾小管、肾间质病变重、肾纤维化重（P＜0.01）;与UUO组比较,保元排毒丸低、中、高剂量组和厄贝沙坦组肾小管、肾间质病变明显减轻、肾纤维化减轻（P＜0.01）;UUO组E-cadherin表达较保元排毒丸各剂量组、厄贝沙坦组和假手术组明显减少（P＜0.01）;保元排毒丸各剂量组和厄贝沙坦组Collagen I、β-Catenin表达明显少于UUO组（P＜0.01）;UUO组Wnt4、β-catenin mRNA表达明显高于假手术组（P＜0.01）,保元排毒丸各剂量组和厄贝沙坦组Wnt4、β-catenin mRNA表达明显低于UUO组（P＜0.01）。结论：保元排毒丸有改善肾脏纤维化的作用,其机理可能与调控Wnt/β-catenin信号转导通路有关。     

单侧输尿管梗阻模型肾纤维化的中医药研究进展

肾纤维化是各种慢性肾脏病进展导致肾功能损害的共同病理过程。单侧输尿管梗阻是研究肾纤维化的经典动物实验模型。实验研究显示中药抗肾纤维化效果确切。现将近2年以来中医药对单侧输尿管梗阻肾纤维化的研究作一综述。     

中医药治疗单侧输尿管梗阻肾纤维化的实验研究进展

中医药治疗慢性肾功能衰竭(CRF)的研究越来越多,且取得了确切疗效,普遍认为有广阔发展前景。而肾间质纤维化(RIF)是肾脏多种疾病发展至终末期肾功能衰竭的共同通路。抑制肾间质纤维化是治疗慢性肾衰的关键。     

金匮肾气丸对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的:探讨金匮肾气丸对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾间质纤维化的影响。方法:将30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型对照组、吡非尼酮组(100μg/g)、金匮肾气丸低剂量组(1.0g/kg)、金匮肾气丸高剂量组(2 g/kg),每组6只。建立UUO大鼠肾纤维化模型,造模结束即灌胃给药,各药物组灌胃相应药物,假手术组和模型对照组灌胃质量分数为5 g/L羧甲基纤维素钠,1 d 1次,连续14 d。末次给药后24 h,处死大鼠,取左侧肾组织。固定制片,采用苏木素-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)和马松三色染色法(masson-trichrome staining,Masson)观察肾组织病理学改变,采用免疫组织化学法检测Ⅲ型胶原、肌动蛋白α(alpha smooth muscle actin,α-SMA)和上皮钙黏素在肾组织的蛋白表达,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测Ⅲ型胶原、α-SMA和上皮钙黏素在肾组织的信使核糖核酸(mRNA)水平。结果:与模型对照组对比,金匮肾气丸组大鼠的肾间质损...     

黄芪对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的:动态观察黄芪(AM)对单侧输尿管梗阻(UUO)所致大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响,初步探讨其抗纤维化分子作用机制.方法:SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、UUO组和UUO AM治疗组(AM组).在造模后7、14天处死动物,观察肾脏病理改变.采用免疫组化方法检测肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)和胶原Ⅰ(col Ⅰ)表达.用实时荧光定量RT-PCR检测大鼠α-SMA mRNA表达量.用Westemblot检测大鼠α-SMA蛋白表达量.结果:与假手术组相比,UUO术后大鼠肾脏病理损害进行性加重,α-SMA、FN和col Ⅰ表达显著增高(P<0.05);AM治疗后可明显减轻UUO大鼠肾组织的肾小管损伤及肾间质纤维化,使UUO大鼠肾组织中高表达的α-SMA、FN和col Ⅰ明显降低(P<0.05).结论:黄芪可能通过抑制肾小管上皮细胞转分化,减轻和改善UUO大鼠肾间质纤维化.     

补肾活血方对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中HGFmRNA表达变化的影响

目的：建立肾间质纤维化大鼠模型，动态观察模型大鼠肾功能、肾组织中HGFmRNA的表达变化及补肾活血方对其影响，探讨补肾活血方治疗慢性肾功能衰竭的可能作用机制。方法：将大鼠随机分为假手术组、模型组、洛汀新组、补肾活血方高剂量组、补肾活血方低剂量组，除假手术组外其余大鼠采用单侧输尿管梗阻的方法建立肾间质纤维化大鼠模型；分别于UUO术后3、7、14、21、28d观察造模大鼠血肌酐、尿素氮的动态变化；采用RT-PCR法，观察造模大鼠肾组织中肝细胞生长因子（HGF）mRNA的表达变化及补肾活血方对其影响。结果：与假手术组比较，造模大鼠血清肌酐、尿素氮浓度呈进行性增高，P〈0．05或P〈0．01；HGFmRNA表达于UUO术后第3天开始增加，于第14天达高峰，P〈0．05或P〈0.01，随后随时间延长表达逐渐渐弱。与模型组比较，各给药组大鼠肾功能改善，P〈0．05或P〈0．01；各时间点HGFmRNA的表达呈不同程度增加，P〈0．05或P〈0．01。结论：补肾活血方可以改善肾间质纤维化大鼠肾功能；可以提高肾组织中HGFmRNA的表达，防治肾间质纤维化。     

虫草益肾方对肾纤维化大鼠Hippo信号通路表达的影响

目的 研究虫草益肾方对单侧输尿管梗阻(UUO)模型大鼠的治疗效果,并探讨其分子机制.方法 将40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、咪达普利组及虫草益肾方组,每组10只.其中,模型组、咪达普利组和虫草益肾方组采用UUO法制备肾间质纤维化(RIF)模型.每日分别灌服生理盐水、咪达普利水溶液及虫草益肾方水煎液,持续灌胃14...     

羊栖菜对UUO大鼠肾间质纤维化的影响

目的:观察羊栖菜对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾脏病变的影响。方法:建立UUO大鼠模型,用羊栖菜治疗3周,观察大鼠血肌酐、尿素氮、肾重、相对肾重,同时作病理学检查,并计算肾间质相对容量(Vv)。结果:UUO大鼠出现肾功能损害,病理显示出现明显的肾小管间质纤维化,羊栖菜治疗对肾功能减退有轻度抑制作用,能减少肾间质相对容量。结论:羊栖菜可能具有一定的抗肾间质纤维化作用。     

活血祛瘀方对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质细胞外基质的调节

目的:通过研究中药复方活血祛瘀方对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)及肝细胞生长因子(HGF)表达的影响,探讨其对细胞外基质(ECM)的调节机制。方法:建立大鼠UUO模型,48只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、代文组、活血祛瘀方组,于治疗4周后取梗阻侧肾组织,免疫组织化学染色观察α-SMA、FN、PAI-1及HGF的阳性染色表达,并进行半定量分析。结果:与假手术组相比,模型组大鼠α-SMA、FN、PAI-1阳性表达显著升高(P<0.01)。与模型组相比,活血祛瘀方组肾间质α-SMA、FN及PAI-1阳性表达显著下调(P<0.01),而HGF阳性表达则显著上调(P<0.01)。结论:活血祛瘀方可抑制肾组织α-SMA、FN及PAI-1过度表达,诱导HGF高表达,从而减少ECM的过度聚集,这可能是活血祛瘀方抗肾间质纤维化的作用机制之一。     

加味溺毒清合剂对单侧输尿管结扎大鼠肾间质纤维化的影响

目的探讨加味溺毒清合剂治疗单侧输尿管结扎大鼠肾间质纤维化的机制。方法 SD雄性大鼠50只,除假手术组10只外,其余大鼠建立单侧输尿管结扎模型。造模后大鼠随机分为模型组、厄贝沙坦组、中药低剂量组、中药高剂量组,每组10只。分别采取相应的干预措施。检测尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG酶)、尿β_2微球蛋白(β_2-MG)、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)及肾组织中的转化生长因子β_1(TGF-β_1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,并检查肾脏病理。结果 (1)尿β_2-MG含量:各组比较差异无统计学意义(P0.05)。(2)尿NAG酶含量:14 d、28 d时模型组、中药低剂量组、中药高剂量组与假手术组比较均增高,差异有统计学意义(P0.05);28 d时中药高剂量组与模型组比较明显减低,差异有统计学意义(P0.05)。(3)血Scr水平:15 d时中药高剂量组与模型组、厄贝沙坦组比较降低并差异有统计学意义(P0.05);29 d时,中药高剂量组与模型组比较,血Scr含量降低,差异有统计学意义(P0.05);(4)血BUN水平:中药高剂量组与厄贝沙坦组比较,血BUN含量降低,差异有统计学意义(P0.05)。29 d时,各组血BUN含量差异均无统计学意义(P0.05)。(5)肾组织α-SMA、TGF-β_1表达:与假手术组比较,厄贝沙坦组、中药低剂量组、中药高剂量组、模型组差异有统计学意义(P0.05);与模型组比较,厄贝沙坦组、中药低剂量组、中药高剂量组差异均有统计学意义(P0.05)。结论加味溺毒清合剂能够降低尿NAG酶,同时通过抑制肾组织中α-SMA及TGF-β_1表达,从而减轻肾间质纤维化的程度。     

加味六味地黄汤对大鼠肾间质纤维化的干预机制

【目的】 探讨加味六味地黄汤对大鼠肾间质纤维化的干预机制。【方法】 将120只健康成年SD大鼠随机分为假手术组、模型组、中药组、缬沙坦组等4组,4组组内再按7、14、28 d 3个时间点分组,每组10只。除假手术组,其他组别大鼠均采用结扎输尿管法构建单侧输尿管梗阻模型。假手术组除不结扎输尿管外其他手术步骤均与上述造模方法相同。成功造模后,中药组术后24 h给予加味六味地黄汤2.376 g·kg-1·d-1灌胃,缬沙坦组术后24 h给予缬沙坦30 mg·kg-1·d-1灌胃,假手术组和模型组均在术后 24 h 给予等体积生理盐水灌胃,每日 1 次,直至相应实验时间点处死。采用免疫组织化学法检测肾组织c-myc、纤维连接蛋白（Fn）的表达,蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测肾组织Wnt4、β-连环蛋白（β-catenin）、磷酸化糖原合成激酶 3β（p-GSK-3β）、磷酸化T细胞因子/淋巴增强因子（p-TCF/LEF）的表达。【结果】 与假手术组相同时间点比较,模型组大鼠肾组织Wnt4、β-catenin、p-GSK-3β、p-TCF/LEF、Fn和c-myc蛋白表达水平显著上调,差异均有统计学意义（P <0.01）;与模型组相同时间点比较,中药组和缬沙坦组大鼠肾组织Wnt4、β-catenin、p-GSK-3β、p-LEF/TCF、Fn和c-myc蛋白的表达水平下调,差异均有统计学意义（P < 0.05 或 P < 0.01）,且 2 个治疗组组间比较,差异无统计学意义（P > 0.05）。【结论】 加味六味地黄汤具有抗肾间质纤维化作用,其机制可能与阻断Wnt4/β-catenin信号通路的活化,下调Fn和c-myc蛋白的表达有关。     

芪归益肾方延缓单侧输尿管梗阻小鼠肾脏纤维化进展机制的探讨

目的:利用单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)肾病模型研究芪归益肾方通过调控细胞信号通路TGF-β/Smad/ILK的表达水平影响肾脏纤维化进展的程度。方法:昆明种小鼠32只,随机分为正常组、模型组、贝那普利组和芪归益肾方组,每组8只,除正常组外,其余各组制备UUO肾病模型后分别进行药物干预,第10天处死后取肾组织,分别采用苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠肾组织的病理变化,免疫组化观察小鼠肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1),细胞信号转导分子2(Smad2),Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)和整合素连接激酶(ILK)蛋白的表达,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)检测小鼠肾组织TGF-β1,Col-Ⅰ和ILK mRNA及蛋白的表达情况。结果:与正常组比较,免疫组化结果显示模型组小鼠肾组织TGF-β1,Smad2,Col-Ⅰ,ILK蛋白表达量明显升高,RT-PCR和Western blot检测结果显示小鼠肾组织TGF-β1,Col-Ⅰ和ILK mRNA及蛋白表达明显升高(P0.05),模型组小鼠肾脏纤维化程度较为明显;与模型组比较,贝那普利组和芪归益肾方组治疗后肾脏纤维化程度均有减轻,明显降低小鼠肾组织TGF-β1,Smad2,Col-Ⅰ,ILK蛋白表达,明显降低小鼠肾组织TGF-β1,Col-Ⅰ和ILK mRNA及蛋白的表达(P0.05),其中芪归益肾方治疗组比较贝那普利组效果更为明显(P0.05)。结论:芪归益肾方对于UUO肾病模型的纤维化病变程度具有抑制作用,其作用主要与调控细胞信号通路TGF-β/Smad/ILK表达相关。