恒冷切片箱对固定后组织的冷冻切片技术

恒冷切片箱是冷冻切片机中最先进 ,最精密的一种。它用途广泛 ,日前常用于组织化学特别是酶组织化学、免疫组织化学、临床病理切片快速诊断、以及一些组织学教学标本的制作。以往一般都是用新鲜组织直接行冷冻切片 ,虽简易方便 ,速度快 ,但新鲜组织经冷冻 ,组织细胞内常形成冰晶 ,造成一定程度的损伤 ,影响结构的完整性 (图 1) ,尤其在免疫组织化学研究中 ,很容易使组织结构不清 ,抗原定位不精确 ,影响了观察和结果[1、2 ] ,笔者经过多年摸索和实践 ,采用组织先固定后行冷冻切片 ,并将固定组织经鸡蛋白甘油浸渍处理 ,克服了组织细胞冰晶的形…     

比较三种不同固定液对淋巴结冷冻切片染色质量的影响

<正>淋巴结活检的主要作用是对恶性肿瘤淋巴转移进行分级,明确肿瘤转移的具体范围,减少不必要的手术及术后并发症^[1]。术中冷冻切片能在较短时间内获得淋巴结的病理诊断结果,对手术治疗方式和手术范围具有较高的指导作用,因此越来越受到临床医师的青睐。淋巴结组织由于其细胞丰富,质地较脆,外围常有脂肪包绕,在日常冷冻切片工作中较难获取高质量切片。     

固定液对冷冻切片质量的影响

冷冻切片是借助低温冷冻将手术切除的组织块快速冷冻达到一定硬度进行切片的一种方法。高质量的冷冻切片对确保术中病理诊断的准确性、科学性具有极其重要的作用,从而降低术中诊断的风险。固定是冷冻切片的关键,本文选取几种常用的固定液,通过HE染色后观察各自固定效果对染色结果的影响,从而筛选出一种最佳的固定液。     

介绍一种冷冻切片快速染色方法

制作优质的冷冻切片,以缩短染色时间、提高染色细胞的核浆清晰度最为重要。我们试将苏木精。伊红按比例配成混合液使整个染色过程在1min内完成,且不必经过盐酸乙醇分化,染色鲜艳而稳定,现介绍如下。1材料和方法1．1染液配制（1）冷冻固定液：85％乙醇85ml,4％甲醛10ml,冰醋酸5ml。（2）苏木精伊红混合染色液：沉淀酸化伊红Y乙醇应用液1份,哈雷苏木精液3份混合供染色用。1．2切片制作取手术新鲜组织置恒冷式切片机载物台上,－20℃冷冻后6μm切片,玻片附贴切片后即刻用冷冻固定液固定10S,水稍洗,滴加苏木精伊红混合染色液至液体覆…     

用已固定组织制作冷冻切片体会

经福尔马林固定的组织不能直接做冷冻切片 ,为此作者经过反复试验 ,探索出一种利用液氮快速冷冻制作冷冻切片的方法 ,取得了满意的效果 ,现介绍如下。1　材料和方法　　经常规福尔马林固定 1～ 2天的外检和动物标本 (骨和含钙组织除外 ) ;低温恒冷切片机、ＯＣＴ包埋剂、包埋托、涂有防脱片胶的载玻片、液氮一罐。将福尔马林固定的组织常规取材 ,用滤纸吸干周围水分 ,置包埋托上加ＯＣＴ包埋剂 ,入液氮 3～ 5ｍｉｎ后取出 ,置于冷冻切片机冷冻台上片刻 ,修切组织 ,切片 ,吹干 ,不需固定 ,直接ＨＥ染色。2　体会　　组织从液氮中取出不宜立即…     

改良固定法对冷冻组织石蜡切片的影响效果观察

正冷冻切片技术已广泛应用于术中病理诊断,高质量的冷冻切片技术对确保术中病理诊断的可靠性至关重要~([1-2])。目前,国内外对于术中冷冻制片的研究较多,有关冷冻后组织处理的研究较少。冷冻后组织行常规制片常常会出现形态学失真性改变,这是临床病理工作中普遍性难题~([3])。作者发现冷冻后的组织经常规10%中性福尔马林固定24 h左右或更长时间后制片,易发生组织收缩过度,细胞间或组织间     

不同包埋剂对冷冻切片质量的影响

冷冻切片是保证术中病理诊断和进行科学研究的重要手段,切片质量的好坏直接影响快速诊断的效果及科研的可靠性[1,2].影响冷冻切片质量因素较多,冷冻包埋剂是重要影响因素之一.     

不同组织冷冻切片的体会

随着医疗技术的发展,各临床科室对术中冷冻的要求也随之提高,除常规的明确病变性质外,保乳手术切缘、宫颈癌前病变锥切手术、甲状腺清扫淋巴结、手术断端等,都需要通过冷冻切片的快速诊断确定手术范围及治疗方案.这就要求我们技术人员在较短的时间内根据不同组织制出高质量的切片.由于组织不同对冷冻的时间、温度、切片厚度、染色等要求也不同,我们通过多年的经验,总结出一些提高冷冻切片质量、缩短冷冻制片时间的可行方法,现报告如下.     

5种固定液对淋巴结冷冻切片HE及免疫组化染色效果的影响

正淋巴结组织纤维成分少,淋巴细胞丰富,往往还附有较多的脂肪组织,在制片过程中容易出现裂纹、细胞核皱缩、染色模糊甚至是脱片等,如需改善应严格控制冷冻的温度和时间,挑选渗透力强、固定作用强的固定液。本文通过对固定液配方的探索,着重与病理医师交流制片的方法与经验,以提高淋巴结组织冷冻切片优良率。1 材料与方法1.1 材料选取2019年1～3月我院手术室送检淋巴结组织标本30例,其中乳腺前哨淋巴结12例,中央组淋巴结14例,其它淋巴结     

二甲苯脱脂在快速冷冻切片染色中的应用

带有脂肪的组织如用改良固定液快速冷冻制片过程中往往会造成背景模糊、脱水不彻底的现象,影响染色及切片质量,给诊断带来困难,甚至引起严重的不良后果。本文介绍快速冷冻制片过程中染色前加热用二甲苯脱脂,可获得满意效果的体会。     

酵素水溶液在冷冻切片染色分化中的应用

冷冻切片是保证术中病理诊断和进行科学研究的重要手段,切片质量的好坏直接影响快速诊断的结果及科研的可靠性。影响冷冻切片质量的因素很多,分化液是其中之一。酵素又称为酶,具有催化、净化等作用,现今在生产、生活中广泛应用,如清洗、灭菌、净化、美容、减肥等。有关其在病理切片制作中的应用尚未尝试。作者在不同组织冷冻切片染色中利用酵素水溶液分化,以期探索出提高切片染色清晰度、对比度,优化冷冻切片质量的方法。     

Lillie-Mayer苏木精在冷冻切片快速进行性染色中应用

恒温冷冻切片是用于术中快速病理诊断的主要制片技术,除了要求技术人员有熟练的操作技能外,更重要的是要求在制作程序及苏木精染液的配制和使用方法上做出有效的选择,才能达到最佳的染色效果.Lillie-Mayer苏木精染液是一种从英国引进的改良配方,应用于冷冻切片的快速进行性染色,全程染色约90 s完成,该方法简化了盐酸乙醇分化的程序,节省了分化和返蓝中所消耗的时间,避免了盐酸乙醇酸化后引起的部分组织脱落掉片的现象.现将我科多年来在冷冻切片的快速染色方法及Lillie-Mayer苏木精染液的配制方法介绍如下.     

病理冷冻切片制作质量的探讨

目的 探讨病理冷冻切片制作的质量.方法 严格规范操作取材、切片、固定、染色、封片等制片过程中的各个环节,对制片质量进行观察.结果 经光镜观察切片,切片组织切面完整,厚薄均匀,效果良好,所制切片色彩鲜艳,对比清晰.结论 只有严格规范地做好制片中各个环节的技术操作,才能避免冷冻切片制作中出现各种常见问题,提高冷冻切片质量,为临床医师决定手术方式、范围,缩短手术时间,确定进一步治疗方案,提供可靠的诊断依据,对临床治疗具有重要意义.     

冷冻切片后甲醛固定石蜡包埋组织DNA质量分析

目的分析冷冻切片后再行甲醛固定、石蜡包埋组织的DNA质量,探讨其在分子病理检测中的应用价值。方法收集已行术中快速冷冻病理诊断的肺腺癌14例,分别提取同一病例冷冻切片后剩余组织蜡块及常规包埋组织蜡块DNA,检测DNA浓度及OD260/OD280值,行内参基因PCR扩增以检测DNA完整性,并以ARMS法行EGFR基因突变检测。结果冷冻切片后固定包埋组织提取DNA浓度及OD260/OD280均值,分别为157.33 ng/μL及1.96,均较常规包埋组织低;所有冷冻后包埋组织提取的DNA均具有100 bp及200 bp的PCR产物,但仅部分能扩增出300 bp及400 bp的PCR产物,DNA完整性稍逊于常规固定包埋组织;冷冻后包埋组织与常规包埋组织EGFR基因突变检测结果完全一致。结论组织冷冻后再行甲醛固定及石蜡包埋,会使得组织DNA进一步降解及片段化,但仍适用于ARMS法的分子病理学检测。     

冷冻切片组织冷冻过度的处理方式

<正>冷冻切片是采用低温冷冻的方法使组织在较短时间变硬切成薄片,其原理是利用物理降温,使组织达到一定的硬度进行切片的方法。冷冻切片需注重温度与切片的关系,温度的变化可影响组织软硬程度,温度升高组织变软,温度降低组织变硬。然而我们在冷冻切片过程中很难精确控制组织冷冻温度,易冷冻过度,切片时组织裂开,甚至变成粉末状,尤其在间质纤维成分较少组织中更为明显,为病理报告的漏、误诊埋下隐患。本文通过对冷冻过度组织采用手捂复温、室温复温和调节样本头温度3种复温方式,旨在找出对冷冻过度组织细胞形态结构影响最小的复温方式。     

冷冻切片结合油红O染色在动脉粥样硬化小鼠模型中的应用

主动脉瓣膜硬化是动脉粥样硬化的标志[1],因此在动脉粥样硬化模型研究中需要通过适当的方法和技术展示小鼠动脉粥样硬化模型的心脏主动脉瓣的含脂量,包括含脂泡沫细胞及其组成的粥样斑块,来判断其粥样化程度.石蜡切片和常规HE染色由于使用乙醇脱水,二甲苯透明,脂质脱失,使得含脂泡沫细胞变成空泡,不利于表现粥样斑块.而冷冻切片避开了乙醇脱水步骤,既能很好地保留含脂泡沫细胞,又能通过油红O将其着色,能很好地展现病灶的特征、状况与粥样化的程度,此外此法还有制作速度快、操作方便的特点,值得在动脉粥样硬化模型研究中推广应用.     

提高卵巢肿瘤冷冻切片质量的体会

在短时间内制作卵巢肿瘤冷冻切片易出现切片不完整、过厚、有刀痕、镜下观察发现冰晶、细胞肿胀变形等现象,常导致诊断困难甚至误诊.为此,我们选择不同性质的卵巢肿瘤进行冷冻制片,探讨最佳的冷冻时间与温度.     

乳腺与子宫组织的恒低温冷冻切片方法探讨

冷冻切片在组织学技术中被广泛应用,特别对临床手术患者术中快速病理诊断意义尤其重要,制作一张优良的冷冻切片是术中快速病理诊断的根本保证.但对一些特殊组织如乳腺、子宫颈等组织,要制作出优良的冷冻切片比较困难.     

微波二次固定提高肿瘤组织冰冻切片及苏木素—伊红染色质量的研究

冰冻切片质量的好坏直接关系到能否准确及时地作出病理诊断,以指导手术治疗方式,近年来,国内外学者对如何提高冻冻切片及染色质量做了大量工作,但仍然存在着组织结构被冰晶破坏,对比染色差,细胞核着色不清晰等缺点,我们应用微波加热固定液对组织块进行预固定,切片后再次固定的“二次固定技术”处理肿瘤组织,获得了比单纯脱脂固定切片更好的效果.1 材料与方法1.1 材料 选用我院1994～1995年外科送检需要急诊冰冻的乳腺、胃、肠、卵巢、甲状腺及脑等处的肿瘤组织,取材2cm×1.5cm×0.5cm数块.YWY781A型医用微波炉为浙江临安爱迪电子仪器厂产品,有8个功率选择开关,最大输出功率为500W.1.2 方法(1)将肿瘤组织分为不处理和处理组,处理组分别用生理盐水,10%甲醛和Bouin液在80℃恒温水浴固定5min,用微波2档(输出功率250W)固定1min.(2)将上述肿瘤组织用恒冷切片机切成5μm厚的冰冻切片数张,贴片稍于后分成不固定组和固定组,固定组分别用酒精-冰醋酸-甲醛固定液(AAF).改良的