聚合酶链反应技术检测胸水中结核菌的研究

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测人型结核菌ＤＮＡ，其敏感性为１００ｆｇ。在特异性实验中，仅人型、牛型结核菌及卡介苗出现２４０ｂｐ扩增带，其他所试细菌均未出现扩增带。４２例结核性胸水ＰＣＲ法、培养、涂片结核菌阳性率分别为３８．１％、４．８％、０，癌性胸水三种方法均阴性。结果表明，用ＰＣＲ技术检测胸水中结核菌较传统的方法具有快速、敏感、特异的优点，对胸水的鉴别诊断具有重要意义。     

PCR技术检测胸腹水中结核杆菌

采用ＰＣＲ技术对５６份临床胸腹水标本进行结核菌ＤＮＡ检测。结果；２０例肝硬变，肝癌，肾病等非结核性胸腹水ＴＢ－ＤＮＡ均呈阴性，而３６例临床已确诊为结核性胸膜炎，结核性腹膜炎的腹水中ＴＢ－ＤＮＡ阳性率为６９．４４％，且可在当天完成人武部实验。     

PCR结核菌检测对肺部炎症病例的临床意义

采取ＰＣＲ技术，结核抗体ＥＬＩＳＡ法，痰涂片三种方法，对８９例肺部发症病灶患者进行结核菌检测，阳性率分别为４２．６％，２８．１％，１０％，三者间均有显著性差异，提示临床常规进行ＰＣＲ结核菌检测，将有利于防止结核病的漏诊。     

PCR检测胸水中结核分枝杆菌DNA的临床意义

应用聚合酶链反应(PCR)对82例胸腔积液患者的胸水进行结核分枝杆菌(MTB)DNA检测,并与胸水涂片抗酸染色结果进行比较 。结果显示82例胸水的MTB-DNA PCR总阳性率为48.8％,其中53例结核性胸水的PCR和涂片检测结果分别为75.5％和5.7％(P<0.01);29例非结核性胸水的涂片结果均为阴性,但2例(6.9％)出现PCR阳性结果。PCR检测的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为75.5％、93.1％、95.2％和67.5％。结果表明,PCR检测胸水标本中的MTB具有快速、敏感、特异等优点。对影响PCR检测结果的某些因素进行了讨论。     

聚合酶链反应(PCR)检测结核菌DNA的价值

利用聚合酶链反应(PCR)检测46例结核性胸膜炎和33例癌性胸腔积液中的结核菌DNA,并同时与胸水涂片、结核菌培养、胸膜活检结果进行比较,结果显示其敏感性为82.6％,特异性为93.9％。表明PCR具有快速、早期、敏感、特异和无需培养等优点。在结核性与癌性胸腔积液的鉴别诊断中具有很高的实用价值。     

PCR检测浆膜腔积液中结核菌的结果分析

结核菌脱氧核糖核酸的聚合酶链反应技术检测浆膜腔积液具有快速、高灵敏、高特异、重复性好等优点，为临床诊断结核感染提供了良好的方法；癌肿病人ＴＢ ＤＮＡ ＰＣＲ阳性者，应注意是否存在结核的亚临床感染。     

大理州87例结核杆菌耐药监测结果分析

目的分析大理州结核杆菌培养药敏结果,了解肺结核病耐药情况及相关影响因素,为进一步完善耐药结核病控制策略提供决策依据。方法由县疾控中心对涂阳肺结核患者作痰标本采样、培养及流行病学调查调,由省疾控中心统一做药敏试验。结果获完整资料87人份,有耐药标本32人份,总耐药率为36.78%。其中:初治涂阳65份,耐药18份,初始耐药率27.69%,复治涂阳22份,耐药14份,获得性耐药率63.64%。结论大理州肺结核初始耐药率位于全国13.0%～42.1%的中位水平,获得性耐药率达全国27.5%～67.5%的高位水平。切实加强肺结核耐药监测、强化耐药病例治疗对国家防制结核病规划具有重要意义。     

聚合酶链反应对肺结核的诊断价值

我们应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，检测临床诊断肺结核菌ＤＮＡ，同时检痰涂片及痰培养结核菌。结果ＰＣＲ的阳性率为７４．３０％，痰涂片阳性率为２．０８％，痰培养的阳性率为７．７０％。经统计学处理，前者均高于二者，Ｐ均＜０．００１。说明ＰＣＲ技术可快速高效检测肺结核病人结核菌的ＤＮＡ。     

肺泡灌洗液联合肺组织PCR方法检测结核杆菌DNA对肺结核早期诊断的意义

目的探讨肺泡灌洗液（BALF）联合肺组织聚合酶链反应（PCR）方法检测结核杆菌DNA对肺结核早期诊断的意义。方法对104例结核杆菌痰阳性和确诊肺结核的痰菌阴性患者经纤维支气管镜采集BALF及活检肺组织进行石蜡包埋,对标本采用PCR方法检测结核杆菌DNA。结果 104例患者BALF中PCR检测结核杆菌DNA阳性92例,阳性率为88.46%;肺组织石蜡包埋检测结核杆菌DNA阳性98例,阳性率为94.23%。两组阳性率比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 BALF联合肺组织PCR方法检测结核杆菌DNA有较高的敏感性及特异性,对肺结核病的早期诊断有重要临床意义。     

PCR法与荧光定量PCR法在人巨细胞病毒检测中的作用比较

目的 比较常规PCR法与荧光定量RCR（RQ-PCR）法在人巨细胞病毒（HCMV）检测中的作用,寻找更适合于HCMV检测的方法。方法 构建携带CMV-DNA的标准质粒,利用常规PCR技术及FQ-PCR技术分别对不同稀释度的标准质粒进行检测。结果 FQ-PCR法对HCMV,标准质粒检测的灵敏度及线性范围均显著高于常规RCR法。结论 RCP法比常规PCR法更适合HCMV病毒的检测。     

肾移植术后巨细胞病毒和结核杆菌感染情况分析

目的分析肾移植术后巨细胞病毒和结核杆菌感染情况。方法165倒肾移植受者术后应用免疫抑制刺后,采用免疫细胞化学法测定外周血白细胞巨细胞病毒pp65抗原,用荧光定量PCR检测患者结核杆茼DNA。结果165例肾移植爱者中,102例（61．7％）术后发生巨细胞病毒感染,白细胞中巨细胞病毒阳性细胞数明显高于术前。3例（1．7％）术后受者检测出结核杆菌DNA。结论肾移植术后由于免疫抑制刺的应用,易发生感染并发症,因此在治疗过程中应注重病原学监测,以降低移植受者感染率。     

猴D型反转录病毒巢式PCR检测方法的建立

目的建立SRV-1巢式PCR检测方法并进行初步应用。方法针对SRV-1env基因的保守区序列,设计特异性引物,以感染SRV-1 Raji细胞提取出的含有前病毒DNA的基因组DNA为模板,进行巢式PCR反应。扩增产物测序后与GenBank报道的序列进行同源比对。将DNA样本进行10倍梯度稀释,以检测巢式PCR反应的灵敏度。使用该方法对正常Raji细胞以及感染SIV、STLV的外周血淋巴细胞DNA样本进行扩增,检测该方法的特异性。用建立的巢式PCR方法检测40份储存猴血标本。结果使用巢式PCR扩增出的特异片段经测序分析,结果证实与GenBank报道的序列一致。所建立的巢式PCR检测法检测限度可达1.5×10-3ng/μL,而且方法特异。用此方法检测40份猴血标本,未检测到阳性标本。结论初步建立SRV-1的巢式PCR检测方法,该方法灵敏、特异,为SRV-1的检测提供了一个快速、有效的手段。     

泰泽菌PCR检测方法的建立及初步应用

目的 建立和应用泰泽菌巢式PCR检测方法。方法 参照日本学者Goto检测泰泽菌16S rDNA序列设计的两对引物,对PCR的检测条件进行了改进和优化。结果 巢式PCR反应的外引物能引导扩增出一条625 bp的DNA片段,内引物则能引导扩增出一条196 bp的DNA片段。此625 bp和196 bpDNA片段的大小均与Goto报道的结果完全一致。试验证明196 bp的阳性带为泰泽菌16S rDNA特异性保守片段。通过将泰泽菌阳性肝组织标本经系列稀释的试验表明,该PCR方法的检测灵敏度为2个菌。另外,将阳性对照标本扩增的625 bp DNA片段作核酸序列测定,发现其碱基序列与Goto报道的泰泽菌MSK株及RJ株16S rDNA序列均有99％同源性。结论 根据上述结果,我们应用本方法对普通级小鼠、大鼠、金黄色地鼠肝组织标本各5份、普通级豚鼠肝组织标本10份、沙鼠肝组织标本10份、MHV3感染的小鼠肝组织1份进行了初步检测,结果未发现带菌动物。     

PCR扩增52株钩体23S rRNA基因及其临床应用55例分析

采用犬型钩端螺旋体(以下简称钩体)Moulton株23SrRNA基因273-293位点和376—396位点的引物A和B,即5＇GATCTAATTCGCTGTAGCAGG~(3＇)及~(5＇)ACTTTCACCCTCTAT-GGTCGG~(3＇),对52株钩体进行PCR扩增。结果表明49型50株问号状钩体均发生特异性扩增,而双曲钩体patoc型PatocⅠ株及细螺旋illini型3055株钩体不出现特异性扩增。用引物A和B对1992年从井研、西昌两地收集的早期钩体病患者的早晚期血清进行PCR扩增,结果第一次血清55份(发病后1～5天),PCR阳性51例(92.72％),第二次血清55份(发病后6～60天),PCR阳性41例(74.55％)。由此表明PCR不仅可广泛用于钩体病的临床早期诊断,而且可用于检测不同病程患者血中钩体DNA。     

高GC含量DNA序列PCR扩增的引物设计

目的建立一种高GC含量DNA序列PCR扩增的引物设计方法。方法共设计了15对高GC含量（66.0%~84.0%）DNA序列PCR扩增引物,引物Tm值均≥79.7℃,引物Tm差值（△Tm）均≤1℃。对本研究所设计引物及相关参考文献中部分引物的参数进行统计学分析。另外,基于本研究方法,设计了26对引物,以验证该方法在非高GC含量（35.2%~53.5%）DNA序列PCR扩增中的实用性。结果采用本研究方法,所有15对高GC含量DNA序列均成功扩增;统计结果显示,Tm值和△Tm是影响高GC含量DNA序列扩增的主要因素。结论设计具有较高Tm值和较低△Tm的引物可有效的解决高GC含量DNA序列的PCR扩增问题。另外,在较高的退火温度下,引物或DNA序列的二级结构无法形成。     

66例早期钩体病患者血和尿标本的聚合酶链反应及生物素分子杂交分析

采用国际通用引物Ｇ１Ｇ２对６６例发病在一周内钩体病患者的血和尿标本进行了ＰＣＲ检测及生物素－链霉抗生素蛋白碱性磷酸酶体系标记的重组ＤＮＡ探针杂交分析。结果表明，ＰＣＲ技术结合生物素分子杂交分析，不仅排除了非特异性扩增，增加了可靠性，同时也提高了检测的敏感性（从７１．３％升至８６．１％）；经统计学分析发现早期尿标本的ＰＣＲ检测阳性率与同期血标本的ＰＣＲ检测阳性率没有统计学差别，由于尿标本易于收集和处理，所以对尿标本进行ＰＣＲ检测对钩体病的早期诊断和后期监测更值得重视和推广。