实时定量PCR分析脂肪酸合酶在口腔鳞癌中的表达

目的利用实时定量PCR(RT-PCR)相对定量脂肪酸合酶(FAS)在口腔鳞癌、癌周以及正常口腔组织中的表达情况。方法切取口腔鳞癌患者新鲜手术标本的癌组织、癌周组织及正常组织,将组织切剪成碎块,提取细胞总RNA,经寡聚脱氧胸腺嘧啶逆转录,实时定量PCR扩增,针对内参照GAPDH基因相对定量FAS的表达,比较FAS在3种组织中的表达。结果 FAS在癌组织中高表达,19例患者癌组织中的FAS mRNA表达水平皆高于正常组织,最高达16倍Go<0．001)。13例癌旁组织表达水平较正常组织高Go<0．001)。结论 口腔鳞癌组织和正常组织中的FAS表达有显著差异。实时定量PCR方法简便、快速、高效,并能相对定量内源性脂肪酸合酶在口腔鳞癌组织中的表达。     

A pilot study of fatty acid metabolism in oral squamous cell carcinoma

This study was undertaken to determine the characteristics of fatty acid synthesis in squamous carcinoma cells and to assess the possibility of exploiting this synthesis pathway in anticancer therapy. Incorporation of [(3)H]acetate into total lipids of the TCA-83 squamous carcinoma cell line and normal gingival fibroblasts was measured. The effects of cerulenin, a specific, potent, noncompetitive inhibitor of fatty acid synthase (FAS), on growth of TCA-83 cells and normal gingival fibroblasts was determined by the MTT method, and the effect of cerulenin on apoptosis was determined by electrophoresis of cellular DNA. Incorporation of [(3)H]acetate into total lipids was significantly higher in TCA-83 cells (68 +/- 12.7 cpm per 2 x 10(5) cells) than in normal gingival fibroblasts (13 +/- 4.2 cpm per 2 x 10(5) cells; P = 0.011). Cerulenin inhibited TCA-83 cell growth in a dose-dependent manner, even at 2.5 microg/ml, a concentration at which normal gingival fibroblasts were not inhibited. After exposure to cerulenin, TCA-83 cells showed typical apoptotic DNA ladders. These results indicate that cerulenin exerts selective cytotoxic effects on squamous carcinoma cells and can induce their apoptosis. These findings suggest that targeting of fatty acid synthesis may be useful in the treatment of squamous cell carcinomas.     

实时荧光定量PCR法检测口腔鳞状细胞癌组织和癌旁组织中幽门螺杆菌核酸

目的了解口腔鳞状细胞癌（OSCC）组织和癌旁组织中幽门螺杆菌（Hp）的感染情况。探讨Hp与OSCC发生、发展的相关性。 方法采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测37例OSCC患者的癌组织和癌旁组织和32例正常口腔黏膜组织中的Hp核酸,并对实时荧光定量PCR阳性产物进行DNA测序分析。 结果37例OSCC患者的癌组织和癌旁组织中Hp核酸阳性9例（24.32%）,正常口腔黏膜组织均为阴性,两者差异有统计学意义（χ²= 6.935,P= 0.008）。在9例Hp核酸阳性的OSCC患者样本中,有8例癌旁组织检出Hp核酸,2例癌组织检出Hp核酸,差异有统计学意义（P= 0.015）。 结论部分OSCC组织和癌旁组织存在Hp感染,是否与OSCC的发生、发展存在相关性需进一步研究。     

口腔鳞癌组织中Ki-67和p53蛋白的表达

目的 探讨口腔鳞癌组织中Ki-67和p53蛋白的表达及其与临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学S-P法对10例正常口腔黏膜组织、16例口腔白斑（OLK）组织、48例口腔鳞癌（OSCC）组织中的Ki-67和p53蛋白表达进行检测,结合患者临床病理资料进行分析,使用SPSS17.0 软件包对数据进行统计学处理。结果Ki-67蛋白在正常口腔黏膜组织、口腔白斑和口腔鳞癌组织中的阳性表达率分别为30.0%、56.3%和79.2%;p53的阳性表达率分别为0.0%、43.8%和70.8%,Ki-67和p53在正常黏膜组与口腔白斑和口腔鳞癌组差异均具有显著性（P<0.05）;Ki67蛋白在口腔鳞癌组织中的表达与肿瘤的临床分期、分化程度、有无淋巴结转移有关（P<0.05）,p53蛋白的表达与肿瘤的分化程度有关(P<0.05);Ki-67和p53蛋白在口腔鳞癌组织中的表达呈正相关（P<0.05）。结论Ki-67和p53蛋白在口腔鳞癌组织中高表达,可能在口腔鳞癌的发生、发展过程中起着重要作用。     

PTTG和bFGF在口腔鳞癌中的表达及意义

目的：探讨垂体肿瘤转化基因（pituitary tumor transforming gene，PTFG）和碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）在口腔鳞癌中的表达及相互关系，研究它们的表达与肿瘤临床病理指标的联系。方法：应用SP染色法检测PTTG蛋白和bFGF在55例口腔鳞癌组织、10例正常口腔黏膜组织中的阳性率。结果：在口腔鳞癌中PTTG和bFGF的阳性表达率分别为78．2％和67．3％，其阳性率及表达等级均显著高于正常对照组（P〈0．05）。PTTG在中一低分化组和有淋巴结转移组中的表达显著高于高分化组和无淋巴结转移组（P〈0．05）。PTTG表达与bFGF表达成等级正相关（r=0．382，P〈0．05）。结论：PTFG或bFGF与口腔鳞癌生物学行为及预后有密切关系，二者的联合检测，有助于口腔鳞癌恶性程度和预后的判断。     

Endogenous fatty acid synthesis in squamous cell carcinomas of the oral cavity

We measured the synthesis of endogenous fatty acids in oral squamous cell carcinoma, its adjacent tissue, and normal oral tissues that were collected fresh from surgical specimens. The tissues were minced in Roswell Park Memorial Institute Medium 1640 (RPMI 1640) and incubated in [1(2)-(14)C] acetic acid, sodium salt ((14)CH(3)(14)CO(2)Na). Total lipids were then extracted and(14)C was measured by scintillation counter. We found that incorporation of(14)C in the total lipids of squamous cell carcinoma was significantly higher than in the other tissues.     

口腔鳞癌中VEGF-C的表达及与颈淋巴转移的关系

目的：检测口腔鳞癌（OSCC）中血管内皮生长因子-C（VEGF-C）的表达,以探讨VEGF-C与OSCC淋巴转移的关系及其临床意义。方法：应用免疫组织化学染色（S-P法）检测40例OSCC组织及14例正常口腔黏膜组织中VEGF-C的表达情况。结果：45.0%的OSCC组织中可见VEGF-C表达,在正常口腔黏膜中无表达;22例伴淋巴结转移的OSCC组织中,68.2%有VEGF-C表达,18例不伴有淋巴结转移者,16.7%有VEGF-C表达,两组之间差异有统计学意义（P〈0.01）;16.7%的Ⅰ～Ⅱ期OSCC有VEGF-C表达,57.1%的Ⅲ～Ⅳ期OSCC有VEGF-C表达,两者之间差异有统计学意义（P〈0.05）;与肿瘤的部位、年龄及性别无关（P〉0.05）。结论：VEGF-C在OSCC组织中表达明显上调,并与淋巴管生成、颈淋巴结转移及TNM分期等临床病理生物学行为有关,提示VEGF-C可能在OSCC的生长及转移中起重要作用。     

Survivin在口腔鳞癌组织中的表达及其与COX-2相关性研究

目的:探讨凋亡抑制基因Survivin在口腔鳞癌组织中的表达及其与COX-2表达的相关性。方法:运用S-P免疫组化技术,检测Survivin和COX-2蛋白在50例口腔鳞癌组织、10例正常口腔黏膜组织中的阳性率。结果:Survivin蛋白在10例正常口腔黏膜组织中呈阴性,而在50例口腔鳞癌组织中有42例阳性,占84%,差异有极显著性差异(P<0.01),COX-2蛋白在口腔鳞癌组织中的阳性率为86%(43/50)。Survivin蛋白阳性率与年龄和性别不相关,而与COX-2蛋白阳性呈正相关(P<0.05)。Survivin蛋白在低分化癌组织中的表达比在高分化癌中高,但在统计学上无明显差异性。结论:肿瘤组织中Survivin蛋白的高阳性表达对口腔鳞癌的发生发展起重要作用;COX-2蛋白在口腔鳞癌组织中也有高阳性表达,并与Survivin有相关性。两者可能存在共同的激活机制,从而抑制口腔鳞癌细胞的凋亡。     

CC趋化因子7和趋化因子受体7在口腔白斑及口腔鳞癌组织中的表达及意义

目的 :探讨CC趋化因子7在口腔白斑组织中的表达及意义。方法 :选取2011-03—2014-03期间,在我院口腔科治疗的口腔白斑患者43例,口腔鳞癌患者41例,以及正常口腔黏膜组织46份,利用免疫组化法对不同组织中CCL7和CCR7蛋白表达情况进行检测。结果 :CCL7蛋白在口腔白斑组织中的表达低于口腔鳞癌组织,而高于正常黏膜组织,差异有统计学意义(P<0.05);CCR7蛋白在口腔白斑组织中表达低于口腔鳞癌组织,而高于和正常黏膜组织,差异有统计学意义(P<0.05);Spearman相关分析显示,口腔白斑组织中CCL7蛋白和CCR7蛋白表达呈正相关(r=0.594,P<0.05)。结论:CCL7和CCR7蛋白表达均表现出从口腔正常黏膜组织到口腔白斑到口腔鳞癌逐渐升高的趋势,且二者呈正相关,可能参与了口腔白斑癌变过程。     

Fatty acid composition of clinically healthy and malignant oral epithelium

The fatty acid composition of epithelium from clinically healthy oral mucosa and or oral squamous cell carcinoma was analyzed by gas/liquid chromatography following extraction using a modified Folch technique and conversion of fatty acids to methyl esters. There were significant reductions in the relative proportions of palmitoleic and oleic acids and elevation of the relative proportions of palmitic, steric and arachidonic acids in samples from squamous cell carcinoma. These differences could reflect changes in cell membranes and/or fatty acid metabolism. Further studies are required to assess their functional, diagnostic and prognostic significance.     

B7-H3在口腔鳞癌细胞中的表达及其意义

目的：研究B7-H3在口腔鳞癌组织和正常口腔黏膜组织中的表达差异,以及B7-H3对口腔鳞癌细胞生物学的影响。方法：RT-qPCR、免疫组化检测B7-H3在口腔鳞癌组织和正常口腔黏膜组织的表达差异;构建B7-H3腺病毒表达载体,感染人舌鳞癌细胞Tca8113,CCK-8、PI染色流式细胞仪检测B7-H3高表达对Tca8113细胞增殖和细胞周期的影响。采用SPSS11.0软件包对数据进行统计学处理。结果：RT-qPCR结果显示,口腔鳞癌组织B7-H3 mRNA表达为3.021±0.2310,显著高于正常口腔黏膜组织（0.6002±0.1010）;与对照组比较,10、50、100感染复数组在作用24h呈现促进细胞增殖作用,S期细胞比例显著增加,72h时增殖作用最强（P〈0.05）;与感染复数1组比较,同时间段50、100组促细胞增殖作用和S期细胞比例显著增加（P〈0.05）,50与100组比较无显著差异（P〉0.05）。结论：口腔鳞癌组织B7-H3mRNA和蛋白表达显著高于正常口腔黏膜组织;B7-H3高表达,可促进口腔鳞癌细胞增殖。     

诱导型一氧化氮合酶在口腔黏膜癌前病变——白斑中的表达及意义

目的　探讨口腔黏膜癌前病变 (口腔白斑 )及口腔鳞癌的发生、发展过程中诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)的表达及意义。方法　应用免疫组化法对 10例正常口腔黏膜、30例口腔白斑、10例口腔鳞癌分别检测iNOS的表达。结果　iNOS在正常口腔黏膜、口腔白斑、口腔鳞癌的表达阳性率分别为 0、6 6 .7%、80 .0 % ,各组间差异均有非常显著性 (P <0 .0 1)。结论　由iNOS诱导产生的一氧化氮 (NO)可能在口腔鳞癌的发生、发展中起着重要作用。     

口腔鳞癌组织中Survivin的表达与血管生成的关系

目的 :观察口腔鳞癌组织中Survivin的表达及其与微血管密度 (microvesseldensity ,MVD)的关系 ,探讨Survivin对口腔鳞癌血管生成的作用及意义。方法 :收集口腔鳞癌标本 42例 ,其中有淋巴结转移者 14例 ,正常口腔黏膜组织 10例 ,用免疫组化染色法探测Survivin和CD3 4 的表达情况并计数微血管密度 (MVD)。结果 :正常口腔黏膜均未见Survivin表达 ,口腔鳞癌中Survivin表达阳性率为 80 .95 % ( 3 4/4 2 )。口腔鳞癌中MVD显著高于正常组织 ,且随病理分化不良而增高 (P <0 .0 5 ) ,有淋巴结转移组MVD显著高于无淋巴结转移组 (P <0 .0 5 ) ,Survivin表达阳性组中MVD明显高于Survivin表达阴性组 (P <0 .0 5 ) ,Survivin的表达与MVD呈正相关 (P <0 .0 5 )。结论 :Survivin在口腔鳞癌组织中的高度表达在口腔鳞癌发生发展中起重要作用 ,并与其血管生成和淋巴结转移有关     

大鼠颊黏膜鳞状细胞癌单克隆细胞系Rca-B的建立及其生物学特性研究

目的：建立大鼠颊黏膜鳞癌单克隆细胞系，并观察其生物学特性，为口腔癌的研究提供大鼠来源的恶性肿瘤细胞系、移植瘤和转移动物模型。方法：将4-硝基喹啉-1-氧化物诱发的SD大鼠颊黏膜鳞癌组织标本进行体外传代培养，利用有限稀释法获得单克隆细胞。光学和电子显微镜观察该细胞的形态变化，细胞计数和四唑盐比色法观察细胞的增殖能力，染色体分析确定细胞核型特点，流式细胞仪检测其细胞周期；动物实验观察细胞裸鼠皮下接种成瘤率及实验性肺转移能力。结果：成功得到单克隆细胞系，细胞形态和生物学观察结果表明，该细胞系符合鳞癌细胞的基本特征，65代细胞群体倍增时间为25．44h，平板克隆形成率为56．30％。细胞周期分布S期占20．13％；染色体为四倍体核型。角质蛋白和波形蛋白免疫组织化学染色均为阳性。细胞系裸鼠皮下接种成瘤为16／16；细胞系行裸鼠尾静脉注射后，其实验性肺转移为10／10；该单克隆细胞系SD大鼠同种异体皮下接种不能成瘤。结论：成功建立SD大鼠颊黏膜鳞癌细胞系Rca—B，细胞系具有高转移鳞癌细胞的典型生物学特征；该细胞系是研究口腔鳞癌分子发生机制和防治策略的又一理想模型。     

牛蒡苷元对人口腔鳞癌裸鼠移植瘤生长及VEGF蛋白表达的影响

目的观察牛蒡苷元对口腔鳞癌的抑制作用,并探讨其可能的作用机制。方法应用免疫组织化学法检测32例口腔鳞癌及20例癌旁组织中VEGF蛋白的表达情况;制备人口腔鳞癌细胞株HSC-3裸鼠移植瘤模型,牛蒡苷元处理后,检测移植瘤生长情况及移植瘤组织中VEGF蛋白的表达情况。采用SPSS 16.0软件包对数据进行单因素方差分析。结果与癌旁组织相比,口腔鳞癌组织中VEGF蛋白的免疫组织化学染色的总积分显著增高（P<0.001）;经牛蒡苷元处理后,人口腔鳞癌裸鼠移植瘤体积增长趋势显著放缓（P<0.05）,观察终点移植瘤组织重量显著下降（P<0.05）,且牛蒡苷元高剂量组较牛蒡苷元低剂量组更为明显（P<0.05）;与模型组相比,牛蒡苷元处理组VEGF蛋白染色的吸光度值显著下降（P<0.05）,高剂量组较低剂量组下降更加显著（P<0.05）。结论牛蒡苷元可以剂量依赖性方式抑制口腔鳞癌增殖,该作用可能与抑制VEGF蛋白的表达有关。     

血清饥饿和低氧对口腔鳞癌细胞系血管内皮生长因子表达的影响

目的：探讨血清饥饿和低氧对体外培养的口腔鳞癌细胞系血管内皮生长因子（VEGF）表达的调节。方法：采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测血清饥饿和缺氧条件下口腔鳞癌TSCCa细胞系和颈淋巴转移癌GNM细胞系中VEGF mRNA表达情况，同时用酶联免疫吸附实验（ELISA）的方法定量测定了2细胞系中VEGF的活性变化。结果：RT—PCR结果显示GNM细胞VEGFmRNA表达水平均较TSCCa细胞高（P〈0．05），血清饥饿和低氧处理时在TSCCa细胞和GNM细胞中VEGF mRNA均有明显的增加，以TSCCa细胞系中VEGF mRNA增加的尤为明显。低氧处理4h时，VEGF的活性便显著增加，8h时达到最高。GNM细胞中VEGF增加至2倍，而TSCCa细胞中VEGF增加至6倍。血清饥饿组在TSCCa细胞中VEGF的活性增加至4倍，明显高于GNM细胞中的2倍。结论：血清饥饿和低氧能显著上调口腔鳞癌细胞VEGF的表达和活性，可能在口腔鳞癌血管形成中起重要作用。     

c-fos调控p16/CyclinD1信号途径并促进口腔鳞状细胞癌增殖和迁移

目的:探讨c-fos对口腔鳞状细胞癌增殖和迁移的影响及作用机制.方法:免疫组化法分别检测口腔鳞状细胞癌组织标本和正常口腔黏膜组织标本(n=60)中的CyclinD1、p16和c-fos.根据不同处理将HN6和SCC9细胞分为空白对照组、siRNA-scramble组、siRNA-c-fos组.检测各组细胞中CyclinD1和p16 mRNA和蛋白表达量的变化,以及细胞增殖和迁移能力的变化.结果:与正常组比较,病例组中c-fos和CyclinD1表达增加,p16表达降低;与空白对照组相比,siRNA-c-fos组HN6和SCC9细胞中CyclinD1表达显著降低,p16表达明显上升,细胞的增殖能力和迁移能力都显著下降.结论:c-fos可以通过p16/CyclinD1信号途径增强口腔鳞状细胞癌增殖和迁移.     

Nav1.6在口腔黏膜白斑及口腔鳞癌中的表达

目的:探讨钠离子通道Nav1.6在口腔黏膜白斑及口腔鳞癌中的表达及意义.方法:采用免疫组化SP法及Westernblot法检测Nav1.6在口腔正常组织(21例)、白斑(32例)及口腔鳞癌组织(63例)中的表达情况.结果:免疫组化检测,Nav1.6在正常组、口腔白斑组以及癌症组中的阳性表达率分别为6.25％、40％、76.74％;Nav1.6的表达与口腔鳞癌的病理分期有关.Western blot检测,正常组、口腔白斑组、癌症组中Nav1.6的蛋白表达量分别为:0.469±0.015、0.545±0.016、0.848 ±0.020(P ＜0.05).结论:Nav1.6在口腔黏膜癌前病变及口腔鳞状细胞癌的发生和发展中可能起到了一定的作用.     

层粘连蛋白在口腔疣状癌中表达的研究

目的:研究层粘连蛋白(Laminin,LN)在口腔疣状癌中的表达,探讨其在口腔疣状癌发生发展中的作用。方法:取15例口腔疣状癌、10例正常口腔黏膜、20例口腔鳞癌(高、低分化鳞癌各10例),应用免疫组织化学SP法检测上述标本中LN的表达和分布。结果:口腔疣状癌组织中层粘连蛋白阳性表达率为40%,明显高于高分化鳞癌(20%)和低分化鳞癌(0%);口腔疣状癌、高分化鳞癌、低分化鳞癌组织中层粘连蛋白的表达均低于正常口腔黏膜组织(100%)。结论:层粘连蛋白可能在口腔疣状癌的浸润与转移过程中起重要作用。     

幽门螺杆菌感染与口腔扁平苔藓和鳞状细胞癌相关性的初步探讨

目的研究正常口腔黏膜、口腔扁平苔藓（OLP）和口腔鳞状细胞癌（OSCC）中幽门螺杆菌（Hmylori）感染情况及其与p53蛋白和p16蛋白表达的关系．探讨H．pylori感染与OLP和OSCC的相关性。方法OLP标本23例、OSCC标本50例和正常口腔黏膜标本10例,采用免疫组化sP法检测其H．pylori的感染、p53蛋白、p16蛋白的表达．应用SPSS13．0软件包对结果进行卡方分析检验．单因素方差分析和线性回归检验分析。结果正常口腔黏膜组织组、0LP组及0SCC组中H．pylori阳性率分别为0、47．8％和48．0％,正常口腔黏膜组与OLP组和OSCC组间差异有统计学意义（X2=7．17．P=0.013;X^2=8．00,P=0．004）;OLP标本中H．pylor／阳性组和阴性组p53蛋白表达率分别为45．5％和16．7％,p16蛋白表达率为分别36．4％和66．7％,组间差异有统计学意义（X^2=3．86,P=0．043：X^2=3．89,P=0．048）;OSCC标本中H.pylori阳性组和阴性组p53蛋白表达率分别为91．7％和84．6％,p16蛋白表达率为分别20．8％和30．8％,组间差异无统计学意义（X^2=0．58,P=0．669;x2=0．65,P=0．526）。结论H．pylori感染与OLP和OSCC存在一定的相关性。H．pytori感染在OLP和OSCC发生、发展中的作用有待于进一步研究。