Toll 样受体信号转导通路与急性肺损伤的研究进展

急性肺损伤(ALI)是由感染性和非感染性的炎症刺激因子启动的细胞内“瀑布式”反应所产生的,是一种具有高发病率和死亡率的急性炎症性疾病,其进一步发展将演变为急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。ALI作为一种复杂的临床综合征,发病率和病死率很高,目前发病机制仍不完全明确,大量研究表明细胞因子的过度表达及其相互作用是发生ALI的根本原因。Toll样受体(TLRs)是一类在先天免疫系统中起重要作用并参与炎症过程的跨膜蛋白,可识别外源性病原体或细胞损伤。近年来研究发现,TLRs在调节ALI后的炎症和修复机制方面扮演着重要的角色,是一个潜在的治疗靶点。本文将就TLRs在急性肺损伤中的研究进展作一综述。     

急性心肌梗死猝死者心肌细胞hsf1和HSP70改变的意义

目的探讨急性心肌梗死猝死者梗死区心肌细胞内热休克转录因子1（hsfl）和热休克蛋白70（HSP70）改变的临床意义。方法分别用RT-PCR和免疫组化法检测（IHC）18例急性心肌梗死猝死者（研究组）和15例心脏正常因车祸快速死亡者（对照组）心肌细胞中hsfl和HSP70基因的mRNA和蛋白表达量。结果急性心肌梗死猝死者心肌细胞hsfl和HSP70的mRNA表达量都显著高于正常对照组（P〈0.01），且hsfl和HSP70mRNA的表达量之间呈显著的正相关关系（P〈0．001）。急性心肌梗死猝死者心肌细胞hsfl和HSP70蛋白在细胞浆和细胞核表达较对照组显著增强（P〈0.001），其中hsfl蛋白主要在心肌细胞核内表达，HSP70蛋白主要在心肌细胞浆内表达。结论急性心肌梗死猝死者心肌细胞内hsfl和HSPT0可能共同参与了急性心肌梗死的病理生理过程．这一过程可能是热休克反应的另一调节途径。     

肿瘤坏死因子在急性肺损伤发病机制中的作用

急性肺损伤（ＡＬＩ）的发病机制中存在多个致病环节，本文综述了肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）在各个环节中的作用，为防治ＡＬＩ提供了新的思路和前景。     

Shh、Gli1在脂多糖致小鼠急性肺损伤中的表达及与NF-κB的关系

目的 探讨Sonic hedgehog(SHH)信号通路中Shh、Gli1及核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)在脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤中的表达变化。方法 脂多糖腹腔注射复制小鼠急性肺损伤模型,实验动物随机分为实验组(脂多糖5 mg/kg)和对照组。分别于给药后6、12、24 h取肺组织,观察肺组织病理改变、肺湿干重比值(W/D)、RT-PCR和Western blot检测Shh、Gli1的m RNA和蛋白表达,Western blot检测NF-κB的蛋白表达。结果 实验组肺组织病理损伤评分及W/D比值明显高于对照组(P<0.05)。Shh的m RNA表达水平在各时间点均高于对照组(P<0.05),且与时间呈正相关(P<0.01)。6 h时Gli1的m RNA表达水平与对照组无明显差异(P>0.05),12、24 h时明显高于对照组(P<0.01),且与时间呈正相关(P<0.01)。与对照组相比,实验组6、12、24 h时Shh、Gli1的蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),且与时间呈正相关(P<0.01)。NF-κB的蛋白表达在各时间点均明显高于对照组(P<0.05)。结论 脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤中Shh、Gli1表达上调可能是脂多糖通过调控NF-κB来实现的。     

异鼠李素通过调控TLR4/NF-κB信号通路对高氧诱导大鼠急性肺损伤的保护作用北大核心CSCD

目的:探讨异鼠李素对高氧诱导大鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用及其可能机制。方法:32只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、异鼠李素组、异鼠李素+瑞沙托维组[瑞沙托维(TAK-242)为TLR4特异性抑制剂],每组8只,除正常对照组正常饲养外,其余各组大鼠均置于自制高氧箱中3 d构建ALI模型,模型构建成功后,按照各组给药剂量进行腹腔注射。模型组及正常对照组腹腔注射等体积生理盐水。各组注射用药均为1次/d,连续7 d。采集大鼠腹主动脉血、肺泡灌洗液、肺组织,血气分析仪测定大鼠氧分压(PaO_(2))、二氧化碳分压(PaCO_(2)),烘箱法测定大鼠肺组织湿重/干重(W/D),HE染色观察大鼠肺组织病理学变化,并对其进行肺组织损伤评分,免疫荧光染色法观察各组大鼠肺组织中TLR4表达水平,ELISA检测大鼠肺泡灌洗液中炎症因子水平,Western blot测定大鼠肺组织Toll样受体4/核因子κB(TLR4/NF-κB)通路相关蛋白表达情况。结果:与正常对照组相比,模型组大鼠PaO_(2)值显著降低,PaCO_(2)、W/D值显著升高,肺组织损伤严重,肺损伤评分、肺泡灌洗液中炎症因子水平、肺组织中TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达显著升高;与模型组相比,异鼠李素组及异鼠李素+瑞沙托维组大鼠肺组织损伤得到缓解,PaO_(2)值显著升高,PaCO_(2)、W/D值、肺损伤评分、肺泡灌洗液中炎症因子水平、肺组织中TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达显著降低;与异鼠李素组相比,异鼠李素+瑞沙托维组大鼠肺组织损伤得到改善,PaO_(2)值显著升高,PaCO_(2)、W/D值、肺损伤评分、肺泡灌洗液中炎症因子水平、肺组织中TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达显著降低。结论:异鼠李素能缓解高氧诱导的大鼠ALI,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB通路有关。     

辛伐他汀通过调控HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对内毒素诱导大鼠急性肺损伤的保护作用

目的 探讨辛伐他汀对内毒素诱导的急性肺损伤大鼠保护作用及机制。方法 45只10周龄成年SD雌性大鼠,按随机数字表法平均分为对照组（Control）、急性肺损伤模型组（ALI）和辛伐他汀治疗组（BFTT）,检测支气管灌洗液中总细胞和嗜中性粒细胞数量及肺组织湿/干重量;HE染色观察肺组织病理学改变;ELISA方法检测BALF中IL-1β、IL-6和TNF-α水平以及肺组织中SOD和MDA的水平;Western blot检测肺组织HMGB1、TLR4和NF-κB的表达。结果 辛伐他汀治疗降低ALI大鼠W/D比值、BALF中的嗜中性粒细胞、总细胞数量及MDS活力,升高SOD活力;改善ALI大鼠肺组织病理变化,抑制HMGB1、TLR4和NF-κB蛋白表达。结论辛伐他汀可以抑制内毒素引起的急性肺损伤,该作用可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路有关。     

急性肺损伤小鼠肺内热休克蛋白A12B的表达

目的:观察急性肺损伤(acute lung injury,ALI)小鼠肺内热休克蛋白A12B(heat shock protein A12B,HSPA12B)的表达改变,以及脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对血管内皮细胞HSPA12B表达的影响.方法:采用气管注射LPS(5 mg/kg)复制小鼠ALI动物模型,6 h后取小鼠肺组织,采用real-time PCR和Western印迹检测肺组织内HSPA12B mRNA和蛋白表达.体外研究采用LPS(1μg/mL)诱导人脐静脉内皮细胞炎症反应,real-time PCR和Western印迹检测细胞HSPA12B mRNA和蛋白表达,采用NF-κB信号通路抑制剂PDTC观察LPS诱导HSPA12B表达的可能分子机制.结果:与正常组相比,LPS诱导的ALI小鼠肺组织HSPA12B mRNA和蛋白含量显著增加,同时LPS可时间依赖性地上调人脐静脉内皮细胞HSPA12B mRNA和蛋白表达,而PDTC预处理可部分逆转LPS诱导的HSPA12B mRNA和蛋白上调.结论:ALI小鼠肺内HSPA12B的表达增加,其机制可能与LPS激活NF-κB信号通路有关.     

热休克蛋白70与肠道病毒感染

热休克蛋白70 (HSP70)是HSP70家族中的重要成员.HSP70的主要功能是作为分子伴侣参与蛋白质的折叠与修饰.在病毒感染时,HSP70参与机体的抗感染免疫,从而保护细胞.因而研究HSP70与肠道病毒的相互作用具有意义.     

桔梗皂苷D经NF-κB通路抑制炎症及氧化应激反应减轻脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤

目的:探讨桔梗皂苷D对脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤的保护作用及其机制.方法:将42只雄性SPF级SD大鼠随机分为假手术组、桔梗皂苷D对照组、模型组、低剂量桔梗皂苷D组、高剂量桔梗皂苷D组和地塞米松组,每组7只.除假手术组和桔梗皂苷D对照组外,其余各组以气道滴注脂多糖诱导大鼠急性肺损伤模型.观察造模前后大鼠一般情况.造模2...     

丙酮酸乙酯对LPS致急性肺损伤大鼠肺组织NF-κB p65及TNF-α和IL-lβ的影响

目的:观察丙酮酸乙酯(EP)对内毒素性急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织核转录因子-κB(NF-κB)p65表达及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)含量的影响,探讨EP可能的肺保护机制。方法:雄性SD大鼠30只随机分为三组(n均=10):正常对照组,静脉注射与其它二组等量生理盐水;LPS组,静脉注射脂多糖(LPS)5mg/kg复制大鼠ALI模型;EP+LPS组,于静脉注射LPS前1h腹腔内注射EP(40mg/kg)。所有动物于注射LPS或生理盐水后4h颈动脉放血处死,取肺组织用Westernblot测定其NF-κBp65的表达,用ELISA测定其TNF-α和IL-1β的含量。结果:与对照组相比,LPS组、EP+LPS组肺组织NF-κBp65表达增加,肺组织TNF-α和IL-lβ含量升高(P0.05);与LPS组相比,EP+LPS组肺组织NF-κBp65表达降低,肺组织TNF-α和IL-lβ含量降低(P0.05)。结论:EP通过下调大鼠LPS诱导的肺组织NF-κBp65表达,降低了TNF-α和IL-lβ的释放。EP可减轻ALI大鼠肺的炎症反应。     

天然免疫在脊柱关节病发病机制中的作用

天然免疫和获得性免疫是宿主防御过程中不同而又互为补充的两个方面。机体接触致病微生物后即迅速进行识别并产生抵抗病原体入侵的反应。发挥这一功能主要是巨噬细胞、树突状细胞和中性粒细胞。这些天然免疫细胞表达模式识别受体(pat tern recognitionreceptors ,PRR) ,这些受体识别高度保守的病原体相关分子模式(pathogen associatedmolecularpatterns ,PAMP) [1] 。天然和获得性免疫反应之间的联系是通过促炎细胞因子介导的;通过抗原递呈细胞上共刺激分子的上调,确保了T细胞的激活。许多学者认为,细菌感染在脊柱关节病(SpA)的发病中起…     

核因子-κB激活与细胞凋亡在重症急性胰腺炎肺损伤中的作用

目的:探讨重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肺组织中核因子-κB(NF-κB)活化及细胞凋亡与肺损伤的关系.方法:SD大鼠随机分为对照组、SAP组、二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)预处理组.建立各组模型后取肺组织行光镜和电镜下病理观察,免疫组织化学观察NF-κB的表达,TUNEL法观察细胞凋亡情况.结果:对照组细胞结构基本正常,仅极少量NF-κB活化,且只有少量肺泡间质细胞和肺泡上皮细胞凋亡.SAP组可见Ⅱ型肺泡上皮细胞及血管内皮细胞有线粒体肿胀、基膜增宽、核染色质边集、间质水肿、电子密度升高等病理改变.NF-κB表达及细胞凋亡指数均明显升高,并呈动态变化,6h达高峰,NF-κB表达及凋亡细胞主要见于中性粒细胞、单核/巨噬细胞、支气管黏膜上皮细胞、肺泡上皮细胞及部分血管内皮细胞.PDTC预处理组病理改变减轻,NF-κB表达及细胞凋亡指数均明显下降,但仍高于对照组.结论:SAP时肺组织NF-κB活化并通过诱导细胞凋亡参与肺损伤.PDTC可能通过抑制NF-κB活性及细胞凋亡,对肺损伤具有保护作用.     

外周血单个核细胞在不同介质中HSP70形成的研究

目的研究外周血单个核细胞（PBMC）在不同介质中热休克蛋白（Heat shock protein HSP）70的表达。方法抽取16例健康志愿者外周血，应用密度梯度法分离单个核细胞，在不同介质中42℃热休克0．5、1h，免疫组化染色测定热休克蛋70的形成。结果PBMC在不同介质中热休克蛋白70形成与空白相比有明显差异（P〈0．01）；在1640培养液和血清中热休克0.5h，热休克蛋白70的表达差异明显（P〈0．01）；在1640培养液中热休克0．5h和1h间无显著差别（P〉0．05）。结论热休克蛋白的形成与介质密切相关，只有当变性蛋白质达到一定的量才能启动热休克蛋白基因的转录、合成。     

PDTC抑制大鼠重症急性胰腺炎肺损伤NF-κB的激活

目的观察重症急性胰腺炎(SAP)大鼠NF-κB在胰、肺组织内的表达情况,探讨其与肺损伤的关系。方法SD大鼠45只,随机分为对照组、SAP组、牛磺胆酸钠(二硫代氨基甲酸吡咯烷pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)预处理组(各组再分为3、6、12h3个亚组,对照组n=3,模型组n=6)。采用5%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射法建立重症胰腺炎模型,预处理组在建立模型前1h腹腔内注PDTC(100mg/kg)。取胰、肺组织行病理观察,免疫组化SP法观察NF-κB表达情况。结果对照组仅少量肺泡间质细胞表达NF-κB;SAP组与PDTC预处理组NF-κB阳性细胞数明显增加(P<0.05),并呈动态变化,6h达高峰,PDTC预处理6h和12h组明显低于SAP组(P<0.05),阳性信号主要位于胰腺腺泡细胞、中性粒细胞、单核/巨噬细胞、支气管黏膜上皮细胞、肺泡上皮细胞胞浆和胞核内。结论PDTC可能通过抑制NF-κB的激活减轻重症急性胰腺炎并发肺损伤。     

缺氧后适应中HSP70对心肌细胞TLR4/NF-κB信号通路及免疫炎性损伤的影响

为探讨缺氧后适应(hypoxic postconditioning, HPC)中热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)对心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation, H/R)损伤的作用及其机制,将H9C2心肌细胞分为4组:对照组(常氧培养10 h)、H/R组(缺氧4 h后复氧6 h)、 HPC组(缺氧4 h后行复氧5 min/缺氧5 min,共3次,再复氧6 h)、HPC+槲皮素(quercetin, Quer)组(缺氧前1 h加50μmol/L的HSP70抑制剂Quer后行HPC)。采用Hoechst 33242染色观察细胞形态变化,FACS检测细胞凋亡情况,Western blotting检测HSP70、TLR4、NF-κB p65、TNF-α、IL-1β、IL-6、B淋巴细胞瘤2基因(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bcl-2-associated X protein, Bax)、Caspase-3蛋白表达水平。结果显示,HPC组HSP70、Bcl-2表达水平较H/R组显著升高(P0.05),TLR4、NF-κB p65、TNF-α、IL-1β、IL-6、Bax、Caspase-3表达水平较H/R组显著下降(P0.05);HPC+Quer组HSP70、Bcl-2表达水平较HPC组显著下降(P0.05),TLR4、NF-κB p65、TNF-α、IL-1β、IL-6、Bax、Caspase-3表达水平较HPC组显著升高(P0.05)。该研究提示,HPC可通过上调HSP70表达抑制TLR4/NF-κB信号通路,减轻H/R诱导的心肌细胞免疫炎症损伤。     

HSP72过度表达对脂多糖刺激的巨噬细胞中NF-κB活性的影响

目的研究过度表达的热休克蛋白72(heat shock protein,HSP72)对脂多糖(lipopolysaccha-ride,LPS)刺激的巨噬细胞中NF-κB活性的影响.方法构建pCD-hsp72重组质粒,转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,G418筛选稳定转染hsp72基因的细胞,Western印迹检测转染细胞HSP72的表达水平及LPS刺激后RAW264.7细胞内HSP72的表达水平、LPS刺激后转染细胞中IκBα的含量和胞核中NF-κB的含量的变化.结果构建pCD-hsp72重组质粒并转入巨噬细胞,获得稳定转染hsp72基因的细胞株,LPS刺激细胞内HSP72表达增加;HSP72可通过减少LPS刺激的巨噬细胞中IκBα的降解而抑制NF-κB活性.结论HSP72能抑制LPS激活的巨噬细胞中NF-κB的活化.     

肿瘤坏死因子在急性肺损伤发病机制中的作用

急性肺损伤（ＡｃｕｔｅＬｕｎｇＩｎｊｕｒｙ，ＡＬＩ）的发病机制中存在着多个致病环节，本文综述了肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）在各个环节中的作用，为防治ＡＬＩ提供了新的思路和前景。     

模式识别受体PRRs在急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征发病机制中的作用研究进展

急性肺损伤(ALI)/急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是继发于肺内或全身的炎症反应过程,它由肺泡损伤导致并形成炎症性非心源性的肺水肿.模式识别受体(PRRs)参与先天免疫系统的激活,PRRs可以启动炎症信号级联反应,并释放促炎细胞因子.本综述对PRRs所包括的跨膜受体TLRs、胞质受体RLRs和NLRs以及下游炎症通路N...     

基于Nrf2/ARE信号通路探讨辛伐他汀减轻脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤的作用

目的:探讨辛伐他汀对脂多糖(LPS)诱导的大鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用及其对核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路的调控机制.方法:SD大鼠随机分为4组:正常组、模型组、实验组、阳性对照药地塞米松干预组(DXMS),每组10只,实验组、DXMS组分别腹腔注射1 ml辛伐他汀溶液(5 m...     

地塞米松对急性肺损伤中TREM-1表达的影响

目的　探讨地塞米松（Dexamethasone,Dex）对脂多糖（Lipopolysaccharide, LPS）诱导的急性肺损伤(acute lung injury, ALI)小鼠肺组织中髓样细胞表达的触发受体1（triggering receptor expressed on myeloid cells-1,TREM-1）表达的影响。 方法　以昆明小鼠为研究对象,腹腔注射LPS(10 mg/kg)建立ALI模型,30 min后给予不同浓度的Dex（5、10、20、40 mg/kg）处理6 h;选用Dex(10 mg/kg)处理不同的时间（6、12、24、36 h）。HE染色法观察肺组织病理损伤程度; RT-PCR检测肺组织TREM-1mRNA的表达;ELISA检测小鼠支气管肺泡灌洗液中可溶性TREM-1（sTREM-1）蛋白水平。 结果　Dex可减轻肺病理损伤;Dex呈时间依赖性地下调ALI小鼠肺组织的TREM-1 mRNA的表达,且在6 h即可降低;Dex呈剂量依赖地下调ALI小鼠肺组织中TREM-1 mRNA的表达,并在10 mg/kg时开始降低。Dex可降低ALI小鼠支气管肺泡灌洗液中sTREM-1的蛋白水平。 结论　Dex可呈剂量及时间依赖性下调ALI小鼠肺组织中的TREM-1mRNA的表达,并减少肺内髓样细胞胞膜TREM-1的脱落,提示Dex可能通过调节TREM-1的表达,从而抑制ALI早期的炎症级联反应,参与保护肺组织。