西尼罗病毒与乙脑病毒免疫交叉反应的实验研究

为明确西尼罗病毒(WNV)与乙型脑炎病毒(JEV)的免疫交叉反应,本文分别用WNV全抗原与JE减毒活疫苗免疫小鼠,采用间接免疫荧光试验检测血清中2种病毒IgG抗体水平及其交叉反应情况。结果表明:WNV组在第4次免疫后的14天和35天出现2个高峰,平均效价分别为6088和4305;JEV组第4次免疫后,小鼠血清JEV抗体呈现缓慢上升的趋势。无论是在WNV全抗原免疫小鼠血清中还是在JE减毒活疫苗免疫小鼠血清中,同一血清对WNV抗原和JEV抗原均有反应,且抗体效价差异有显著性。在抗WNV抗体阳性血清中,两者交叉反应相对较强,在抗JEV抗体阳性血清中,两者交叉反应较弱。WNV与JEV存在一定交叉反应,但是否有交叉保护作用则需要中和试验等进一步证实。     

免疫球蛋白制品靶抗体谱、效价水平与交叉反应的实验研究

目的：研究免疫球蛋白制品靶抗体谱、效价水平与交叉反应。方法：采用水痘病毒、巨细胞病毒、Ⅰ与Ⅱ单纯疱疹病毒、狂犬病毒、破伤风类毒素IgGELISA试剂盒及乙肝病毒表面抗原RIA试剂盒分别检测水痘、巨细胞、狂犬、乙肝、破伤风5种特免球蛋白及肌注、静注免疫球蛋白中所含靶抗体效价。结果：由疫苗免疫献血员制备的狂犬、破伤风与乙肝人免疫球蛋白有较高的特异性抗体效价,由筛选高效价血浆制备的巨细胞病毒人免疫球蛋白与其它免疫球蛋白比较,其特异性抗体效价差距较小,人群中也普遍存在水痘病毒与单纯疱疹Ⅰ型病毒感染,其强度较巨细胞病毒弱、较单纯疱疹Ⅱ型病毒强。结论：免疫球蛋白受试品均能检测到7种抗原的靶抗体,其抗体效价水平与主动、被动免疫有关,水痘疫苗能诱导出高效价的抗巨细胞病毒交叉反应抗体,肌注与静注IgG之间存在值得注意的抗体效价差别。     

人乳头瘤病毒L2氨基端蛋白的同源性及其交叉反应特性研究

目的 研究人乳头瘤病毒(HPV)次要衣壳蛋白(L2)在临床常见HPV感染型别中的同源性及其交叉反应特性.方法 采用生物信息学方法对临床常见HPV感染型别中的L2氨基酸序列进行比对,发现其氨基端1～200序列具有高度同源性.采用PCR法从宫颈癌患者组织DNA中扩增HPV16 L2(1～200)肽段的碱基序列,将其克隆至原核表达载体PGEX-4T-1得到重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2(1～200).将测序鉴定正确的重组质粒转入E.coli BL21(DF3)中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定;进一步通过Western blot检测HPV16L2(1～200)融合蛋白与HPV6、11、16和18型DNA检测阳性临床患者血清的特异性结合能力;以镍螯合亲和层析柱(Ni-NTA Agarose)纯化的HPV16 L2(1～200)融合蛋白作为包被抗原,采用间接ELISA法对98例尖锐湿疣患者、135例宫颈癌患者及96例健康对照者血清进行特异性血清IgG抗体检测.结果 在HPV6、11、18、35等14个临床常见型别中,与HPV16 L2的1～200间的氨基酸序列比较,同源性达到52.7%～74.3%;成功构建了含有HPV16 L2(1～200)的重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2(1～200),含有HPV16 L2(1～200)的融合蛋白在原核表达体系中呈高效表达,表达量占总蛋白的22.6%;表达产物的相对分子质量(Mr)约49×103,与预期Mr相符;以HPV6、11、16和18 DNA阳性患者血清为一抗进行Western blot分析,结果显示,在Mr约49×103处出现特异性条带.ELISA结果显示,尖锐湿疣组、宫颈癌组患者血清及健康对照者血清抗体均值分别为0.753±0.262、0.756±0.274和0.178±0.157,阳性率分别为89.8%、88.9%和9.4%.三组间血清抗体均值及阳性率比较差异均具有统计学意义(P均＜0.001),而尖锐湿疣组和宫颈癌组间的血清抗体均值比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 HPV L2 N端1～200氨基酸序列具有高度同源性,并在HPV6、11、16和18型别间具有交叉反应.     

与宫颈癌相关的人乳头瘤病毒的持续感染与免疫逃逸

人乳头瘤病毒是宫颈癌的病原体。机体的免疫应答不能清除上皮细胞内整合感染的乳头瘤病毒，该病毒持续感染是宫颈癌发生的原因。免疫逃逸是病毒自身因素和机体免疫因素综合的结果。病毒隐匿、病毒癌蛋白、细胞因子、粘附分子等参与病毒的免疫逃逸。     

与宫颈癌相关的人乳头瘤病毒的持续感染与免疫逃逸

人乳头瘤病毒是宫颈癌的病原体.机体的免疫应答不能清除上皮细胞内整合感染的乳头瘤病毒,该病毒持续感染是宫颈癌发生的原因.免疫逃逸是病毒自身因素和机体免疫因素综合的结果.病毒隐匿、病毒癌蛋白、细胞因子、粘附分子等参与病毒的免疫逃逸.     

人乳头状瘤病毒(HPV)16L1病毒样颗粒蛋白与HPV16L1基因联合免疫的体液免疫反应及其抗体的体外中和实验

目的用含有编码人乳头状瘤病毒(HPV)16L1和HPV16L1病毒样颗粒(VLP)蛋白联合免疫小鼠,与用HPV16L1重组表达质粒比较,观察VLP蛋白免疫对免疫小鼠产生抗体的增强作用,以及抗体的体外中和作用,寻找研制HPV16感染的预防性疫苗的有效途径。方法将c57BL／6小鼠,随机分为4组：Ⅰ组：pcDNA-L1(100μl/鼠),Ⅱ组：pcDNA—L1(70μl/鼠) HPV16K1 VLP,Ⅲ组：pcDNA3.1(100μl/鼠)空质粒,Ⅳ组：PBS缓冲液。质粒免疫3次,间隔3周。ELISA法检测其血清抗体,红细胞凝集实验和HPV16病毒样颗粒结合抑制实验体外检测抗体的中和活性。结果pcDNA-L1 HPV16L1 VLP较pcDNA—L1免疫组,3次免疫后的抗体水平均增高,尤其以第2次和第3次免疫后的抗体水平增加更显著。pcDNA—L1 HPV16L1 VLP联合免疫组血清的抑制活性高于pcDNA—L1免疫组,且．He[a细胞结合抑制实验染色呈阴性。结论HPV16L1 VLP联合免疫可以增加目的抗原的中和抗体产生,可能是HPV16有效预防性疫苗研制的更有希望的策略。