再生障碍性贫血患者骨髓及外周血T、NK细胞膜分子和可溶性分子动态变化

目的研究T淋巴细胞及免疫分子在再生障碍性贫血（AA）致病中的作用及其与临床疗效的相关性。方法应用免疫荧光染色技术和流式细胞仪分析AA骨髓及外周血T淋巴细胞表型,ELISA测定骨髓和外周血白介素-2及其可溶性受体（IL-2,sIL-2R）、可溶性Fas配体（sFas-L）和Flt3配体（FL）的水平。结果（1）AA病人骨髓和外周血CD8+细胞百分率增加,CD4/CD8比例下降;骨髓血CD25+和HLA-DR+细胞百分率增多,急性AA增加尤为显著（P<0.01）;骨髓血中CD16+或CD56+细胞百分率也明显增多（P<0.05）。（2）所有AA患者骨髓及外周血IL-2含量均显著升高,绝大部分患者的sFas-L含量增加,FL水平升高尤为显著,高达正常水平的20倍。IL-2、sFas-L和FL的含量与临床疗效密切相关,经治疗有效的患者骨髓和外周血的IL-2、sFas-L和FL水平明显下降,但FL仍不能降至正常水平。结论T细胞的异常活化,多种免疫分子表达的异常升高,以及产生针对自身造血干/祖细胞的细胞毒效应,是AA造血功能衰竭的主要原因。     

环孢菌素通过FLIP影响再生障碍性贫血患者CD8+T细胞亚群CD28的表达

目的研究共刺激分子CD28在再生障碍性贫血（AA）患者的不同T细胞亚群中的表达变化，及其与凋亡抑制蛋白FLIP的关系。方法取21例AA患者环孢菌素A（CyA）治疗前后的外周血，应用流式细胞仪检测T细胞CIMCD28、CD8CD28的表达；磁珠分选患者治疗前后外周血的CD8^＋T细胞，RT-PCR检测治疗前后FLIP、Caspase-8表达变化；分选获得的治疗前的CD8^＋ T细胞体外经CyA处理后检测其CD28、FLIP、Caspase-8的表达变化。结果AA患者的CD8^＋ CD28^＋ T细胞的比例较正常人显著升高，治疗有效者该亚群的细胞比例在治疗后趋于正常；患者CD8^＋ T细胞的FLIP表达显著上调，但Caspase-8的表达无明显变化；CyA能下调患者CD8^＋T细胞的FLIP的表达。结论AA患者CD8^＋CD28^- T细胞亚群比例升高与FLIP表达增加有关，CyA能抑制FLIP的表达，降低CD8^＋CD28^-T细胞的比例。     

再生障碍性贫血患者外周血T细胞FasL的表达分析

目的 比较分析再生障碍性贫血(AA)患者T细胞上Fas配体(FasL)的表达及其在胞内外的分布情况，观察AAT细胞胞浆FasL的释放特性及细胞毒作用。方法 以正常人“静息”T细胞和人为诱导活化的T淋巴母细胞为参照，采用免疫荧光标记和流式细胞技术，检测FasL在AAT细胞表面及胞浆中的分布；用体外大剂量PHA-过性刺激的方式诱导T细胞胞浆FasL的释放；以Jurkat细胞为靶向，同时辅以单抗阻断及超速离心的方法，观察AAT细胞FasL的释放特性和杀伤效应。结果 AA T细胞表面及胞浆中均有FasL的异常表达，其中胞浆FasL的异常表达尤为显著；高浓度胞浆FasL可在大剂量PHA-过性刺激时迅速向胞外释放；PHA刺激后的AAT细胞培养上清有明显的Jutkat细胞杀伤活性，该效应可被FasL McAb阻断，或经超速离心加以去除。结论 AAT细胞是一种处于预活化状态的细胞，具有与T淋巴母细胞相似的活化特征，含有高浓度、能以细胞外体形式诱导释放、具备完整活性的胞浆FasL是其异常活化的一大特点。     

再生障碍性贫血患者淋巴细胞表型变化

目的：研究再生障碍性贫血（AA）患者骨髓（BM）及外周血（PB）淋巴细胞及其活化相关分子的表达及临床意义。方法：采用单色和双色免疫荧光标记法，流式细胞仪分析AA患者的BM和PB中淋巴细胞膜分子的表达。结果：AA患者BM和BP中CD8^ 细胞增加，CD4／CD8比例下降，BM在CD25^ 细胞和HLA－DR^ 细胞增多，急性AA增加尤为显著（P＜0．01），BM中CD16^ 或CD56^ 细胞也明显增多（P＜0．05），双标记分析提示T细胞主要为CD8^ 细胞：急性AA患者CD8^ -CD25^ 细胞显著增多（P＜0．01），AA患者BM中淋巴细胞活化相关分子表达增多，尤其4－1BB^ ,CD95L^ 和CD40L＋细胞显著增多（P＜0．01），结论：AA患者BM中淋巴细胞活化相关膜分子增多，是AA免疫功能异常及最终导致造血功能衰竭的原因之一。     

重型再生障碍性贫血患者骨髓T细胞克隆的初步研究

目的建立源于重型再生障碍性贫血(重型再障)患者骨髓的T淋巴细胞克隆,以便研究该病的发病机理.方法用免疫分选法分别从1名初诊重型再障患者及对照的骨髓中富集CD34+和CD3+细胞.将CD3+细胞作反应细胞、照射过CD34+细胞作刺激细胞,进行14d单向自身混合淋巴细胞培养.对活细胞作有限稀释和单个细胞分孔接种,与含IL-2和PHA-P的饲养细胞体系共培养.观察挑选细胞生长孔,计算接种率,用泊松(Poisson)分布初步判断单个细胞分离过程成功与否.而后将阳性孔细胞作转孔培养,定期用饲养抚育刺激、常规用IL-2支持增殖以扩大各克隆的数量.用SABC-P免疫细胞化学染色法,初步鉴定各克隆CD4/CD8抗原表型.结果自身混合淋巴细胞培养后的活细胞数,病例为4×103,对照为65.单细胞分离接种培养后,对照组的细胞生长孔数为0;而病例组的培养板上,共有11孔发生细胞增殖,相应的实际接种率是2.1%,未超出Poisson理论接种率值范围(＜26%),判明平均每个增生孔的细胞克隆前体数不大于1.这11个克隆中,9个呈CD4单阳性表型,阳性为98%;2个为CD8单阳性表型,阳性率为98%.结论从1例重型再障患者骨髓中分离出了11株T淋巴细胞克隆.进一步鉴定分析这些克隆的表型和特异性,以及探讨其Th1(Tc1)/(Th2)(Tc2)效应类型等功能表现,对研究重型再障的免疫学机理具有积极的意义.     

慢性再生障碍性贫血患者CD28共刺激分子及Fas的表达

再生障碍性贫(ap]astic anemia,AA)简称再障,是免疫介导的造血抑制的综合病症,其中又以慢性再生障碍性贫血(chronic aplastic anend8,CAA)患者多见.本文旨在观测CAA患者外周血共刺激分子CD28及Fas(CD95)的表达水平.     

抗T细胞单抗治疗前后再生障碍性贫血患者细胞免疫功能的变化

抗Ｔ细胞单抗治疗前后再生障碍性贫血患者细胞免疫功能的变化马晓星王鲁群①杨道理徐军迟翠芳①（济南军区总医院免疫科，济南２５００３１）中国图书分类号Ｒ５５６．５近年研究表明，Ｔ淋巴细胞及其相关细胞因子在造血调控中发挥重要作用。本研究分析了抗Ｔ细胞单抗（Ｍ...     

再生障碍性贫血患者Fas+/CD8+细胞减少

再生障碍性贫血(aplstic anemia,aa)是一组以全血细胞减少和骨髓低增生为特征的综合征,其确切的发病机制尚未明确,但免疫异常特别是T淋巴细胞数量和功能的异常在发病中的作用却越来越受到重视。在正常的免疫反应中,淋巴细胞会在不同的阶段全部死亡,而Fas／FasL系统在T淋巴细胞的清除过程中发挥着主导性作用。     

CD28/B7信号在再生障碍性贫血T淋巴细胞异常活化中的作用

目的 通过淋巴细胞输注诱导自身免疫性再生障碍性贫血动物模型,探讨CD28/B7信号在淋巴细胞异常活化中的作用及可能机制.方法 将来自父本的淋巴细胞悬液(40×106个几左右)通过尾静脉注入CBYB6 F1代受鼠体内,采用CFDA-SE标记法跟踪淋巴细胞在体内的分布,尾静脉注射CD80和CD86阻断性单克隆抗体(单抗),不同时段检测受体小鼠外周血象的变化,病理切片观察骨髓及主要脏器的变化.将骨髓造血细胞与淋巴结淋巴细胞进行共培养,通过计数造血细胞的集落形成数来观察不同数量淋巴结淋巴细胞对骨髓造血细胞的影响.体外测试不同浓度环孢菌素A(cyclosporine A,CsA)对骨髓造血细胞的影响.结果 输注淋巴细胞后可诱导受体小鼠在第5天出现骨髓衰竭的表现,主要是白细胞、血红蛋白、血小板下降,21 d左右受体鼠出现死亡.不同时间段受体小鼠主要脏器冰冻切片显示荧光标记的淋巴细胞主要分布在骨髓组织中;病理切片显示有骨髓组织的破坏.同时注射CD80及CD86阻断性单抗的受体鼠同样出现上述表现;体外集落形成试验证实B6淋巴结淋巴细胞数量和F1造血细胞为5:1时,红系集落形成单位(CFU-E)和粒细胞集落形成单位(CFU-G)集落形成数目与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05);将比例提高至10:1,CFU-E集落形成数目明显减少(P<0.05);至50:1时,则可完全抑制CFU-E集落的形成,CFU-E和CFU-G集落形成数日的减少呈现淋巴细胞剂量依赖性,加入CsA可显著提高CFU-E和CFU-G形成率.结论 通过模型证实T细胞在再生障碍性贫血的发生过程中起重要作用,仅通过阻断CD28/B7信号并不能阻断T淋巴细胞的异常活化.     

再生障碍性贫血患者外周血CD4~＋CD25~＋调节性T细胞及Foxp3的变化及临床意义

目的:探讨再生障碍性贫血(AA)患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞(Tress)及Foxp3的表达及临床意义.方法:25例AA病人,其中含非重型再障(nSAA)18例、重型再障(SAA)7例,采用四色流式细胞检测技术分析从患者外周血单个核细胞(PBMC)中CD4+T细胞、CD4+CD25+/CD4+、CD4+CD25high/CD4+T细胞百分比及绝对计数,并进一步分析AA患者PBMC的CD4++CD25+、CD4+CD25low及CD4+CD25highT细胞中Foxp3+T细胞的百分比,同时利用RT-PCR方法检测PBMC中Foxp3mRNA表达水平,并与29例正常对照组的上述指标进行比较.结果:与正常对照组相比,SAA患者及nSAA患者PBMC中CDM+T细胞、CD4+CD25+/CD4+、CD4+CD25high/CD4+百分比及绝对计数减低(P<0.05),并且SAA组明显低于nSAA组(P<0.001);从患者CD+CD25+、CD4+CD25low及CD4+CD25highT细胞中Foxp3的表达较正常对照组减低(P<0.05);AA患者PBMC中Foxp3 mRNA表达水平与正常对照组没有明显差别(P>0.05).结论:CD4+CD25+调节性T细胞减低可能与从的发病有关,SAA的Treg表达低于nSAA,为其作为从病情变化的判断指标提供进一步的依据.     

再生障碍性贫血患者外周血T细胞亚群和T细胞受体表达水平及其 …

采用流式细胞仪及间接免疫荧光法检测３０例再生障碍性贫血患者外周血中Ｔ细胞亚群及Ｔ细胞表面受体表达水平，并与健康对照组相比，结果表明：７０％再障患者存在ＣＤ４／ＣＤ８比例倒置及ＣＤ８＾＋％异常增高；５０％再障患者外周血γ－δＴ细胞亚群及其在Ｔ淋巴细胞总体中所占比例均显著增高；而αβＴ细胞亚群及ＴｉｒＡ＾＋细胞百分率与正常对照组相比无显著性差异。提示：半数以上再障患者外周血中存在异常增多的γδＴ细胞及     

ConA激活的小鼠T细胞CD69表达动力学的体内外研究

目的 为明确ＣＤ６９体内外表达动力学并进一步探讨其作用。方法 ＣｏｎＡ体内外刺激小鼠Ｔ细胞后,选取不同时间点,流式细胞仪观察Ｔ细胞ＣＥ６９表达率。结果ＣｏｎＡ刺激后２ｈＣＤ６９即有明显表达,６～８ｈ达到峰值,ＣＤ８＾＝与ＣＤ８＾＋Ｔ细胞相比无明显差异。体外条件对ＣＤ６９的表达有显著的影响。结论 结果提示ＣＤ８＾－和ＣＤ８＾＋Ｔ细胞的活化均需要ＣＤ６９的参与,Ｔ细胞可能在活化早期一过性高表达ＣＤ６９     

活动期SLE患者T、B淋巴细胞CD69表达的动态观察

系统性红斑狼疮 (ＳＬＥ )是以Ｔ、Ｂ细胞异常活化和病理性自身抗体过量产生为特征的自身免疫性疾病[1 ] 。Ｔ、Ｂ细胞活化产生各种改变 ,ＣＤ69是Ｔ、Ｂ细胞活化最早表达的标志之一。为了解活动期ＳＬＥ患者ＣＤ69在Ｔ、Ｂ细胞活化过程中有什么作用 ,以及在哪个阶段起作用 ,本研究检测了ＣｏｎＡ刺激下活动期ＳＬＥ患者Ｔ、Ｂ细胞ＣＤ69表达动态变化。1　材料与方法1 1　病例选择　 5例活动期ＳＬＥ患者符合 1 982年美国风湿病学会 (ＡＲＡ )修订的ＳＬＥ诊断标准[2 ] ,均为女性 ,平均年龄 40 4岁 ,均为首次发作病人。活动指数判断标准参…     

调节性T细胞及其分泌的细胞因子在再生障碍性贫血中的意义

目的:检测再障患者外周血中T细胞亚群比例及Treg细胞相关的细胞因子分泌水平,探讨其在再障发病中作用。方法:依据临床诊断标准,收集初发再障组、再障造血恢复组、正常对照组的外周血标本,流式细胞学方法检测各组CD4+、CD8+、NK、NKT、Treg细胞的比例,免疫磁珠法分离各组外周血中Treg细胞,并给予刺激培养,24、48小时后收集上清液,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测Treg细胞分泌的细胞因子IL-10、IL-35、TGF-β的表达水平。结果:初发再障组的CD4+,Treg比例与正常对照组和再障造血恢复组相比显著低下;CD8+T细胞比例在再障患者中明显升高,其结果有统计学差异(P<0.05);NK、NKT的细胞与正常对照组比较无明显变化(P>0.05)。分离培养三组人群Treg细胞,ELISA检测结果显示:初发再障患者的IL-10、IL-35、TGF-β表达水平和正常对照组比较明显降低(P<0.05)。结论:T细胞免疫异常是再障发病机制的重要环节,Treg细胞在再障患者恢复造血过程中可能起着正向调控的作用。     

慢性再生障碍性贫血患者间充质干细胞对T细胞的抑制作用

目的比较来源于正常志愿者和慢性再生障碍性贫血(CAA)患者骨髓间充质干细胞(MSCs)免疫抑制作用的区别。方法培养5例正常志愿者和10例CAA患者的骨髓MSCs,比较两组MSCs的形态、细胞表型、细胞因子的表达,通过PHA刺激的T细胞增殖试验、混合淋巴细胞培养和T细胞周期检测比较两组MSCs对T细胞的抑制作用。结果两组MSCs形态、表型基本相同。CAA来源的MSCs对PHA和同种异体抗原诱导的T细胞的抑制作用均低于正常志愿者来源的MSCs,加入正常志愿者的MSCs后有更多的T细胞阻滞在G0/G1期,但CAA来源的MSCs作用较弱。两组MSCs表达的肝细胞生长因子(HGF)和转化生长因子(TGF-β2)无明显区别,但CAA患者的MSCs表达的TGF-β1、3较正常志愿者MSCs表达的明显减少。结论虽然CAA的MSCs在形态、增殖和细胞表型上基本正常,但其对T细胞的抑制作用减弱,在经过免疫抑制剂治疗后仍然存在,其异常是否与CAA的发病机制有关需要进一步研究。     

再生障碍性贫血患者外周血T细胞亚群和T细胞受体表达水平及其意义

采用流式细胞仪及间接免疫荧光法检测30例再生障碍性贫血患者外周血中T细胞亚群及T细胞表面受体表达水平,并与健康对照组相比,结果表明:70％再障患者存在CD4/CD8比例倒置及CD8~+％异常增高;50％再障患者外周血γδ-T细胞亚群及其在T淋巴细胞总体中所占比例均显著增高;而αβT细胞亚群及TirA~+细胞百分率与正常对照组相比无显著性差异。提示:半数以上再障患者外周血中存在异常增多的γδT细胞及Ts细胞亚群。并可通过其直接或间接作用抑制造血,从而导致再障的发生。     

Fas抗原在急性再生障碍性贫血患者血清和骨髓CD34^＋细胞中的表达

造血干细胞数量减少和功能异常系再生障碍性贫血（AA）的发病基础,最近体外研究发现,γ-干扰素（IFN-γ）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）可上调介导细胞调亡的膜型Fas（mFas）抗原在骨髓CD34＋细胞膜表面的表达,提示细胞调亡可能参与了AA的发病。AA患者骨髓CD34 细胞是否过度表达mFas抗原,血清中是否存在可溶性Fas（aFas）抗原,国内尚未见报道,本文对此进行了初步探讨。1材料和方法1．1研究对象20例符合急性再生障碍性贫血（AAA）诊断标准的患者。其中男性12例,女性8例,年龄18～48岁,中位年龄29岁,此前均未曾输血。以10例…     

再生障碍性贫血骨髓T淋巴细胞高表达肿瘤坏死因子

由免疫介导的造血功能抑制在再生障碍性贫血 (AA)的发病过程中起重要作用 ,本研究应用流式细胞仪跟踪分析T细胞活化与TNF α释放的相关性 ,并观察其在AA中不同T细胞亚群的变化 ,探讨T细胞极化与AA临床转归的相关性。材料和方法研究对象 :19例经检查符合AA诊断标准的患者进入本研究 ,急性AA 7例 ,其中Ⅰ型 5例 ,Ⅱ型 2例 ;慢性AA 12例 ;女性 8例 ,男性 11例 ,中位数年龄2 3岁 (9～ 5 1岁 ) ,病程 8天～ 11个月。正常对照为年龄相仿的非血液系统疾病正常骨髓标本共 10例。主要试剂 :RPMI 16 40为美国Gibco产品 ,培养板为美国Corning…     

Mtb-Ag活化γδT细胞的扩增及对γδT细胞CD69分子表达的影响

目的 用结核杆菌低分子多肽抗原(Mtb-Ag)激活和扩增γδT细胞,观察γδT细胞表面CD69分子表达的情况.方法 分离获取健康人外周血单个核细胞(PBMC),用Mtb-Ag刺激PBMC,所得细胞用磁珠阳性分选,通过荧光单抗TCR γδPE染色及流式细胞仪检测γδT细胞所占比例.用γδPE/CD69FITC细胞双染检测初次刺激和再次刺激γδT细胞CD69分子的表达情况.结果 新鲜分离的PBMC中γδT细胞的比例仅为(4.9±1.85)％,Mtb-Ag刺激培养10d后升为(69.2±6.57)％,免疫磁珠阳性分选后达(99.3±8.92)％.Mtb-Ag初次刺激γδT细胞,CD69分子的表达24 h达高峰,为75.2％;Mtb-Ag再次刺激γδT细胞,CD69分子的表达6h达高峰,为72％.结论 Mtb-Ag能特异地刺激PBMC中的γδT细胞增殖,Mtb-Ag初次和再次刺激均可特异性活化γδT细胞.     

孕酮对人T淋巴细胞体外活化CD69表达的作用

目的：探讨孕酮（Ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ,Ｐｒｏｇ）及地塞米松（Ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ,Ｄｅｘ）对人外周血Ｔ淋巴细胞体外活化ＣＤ６９表达的作用。方法：以女性健康志愿者（１０名）为研究对象,以蛋白激酶Ｃ的刺激剂佛波醇酯（Ｐｈｏｒｂｏｌ ｅｓｔｅｒ,ＰＤＢ）为Ｔ淋巴细胞的活化剂,采用双荧光染色流式细胞技术。检测ＣＤ３＾＋的Ｔ淋巴细胞表达早期活化表面分子ＣＤ６９的百分率,以观察Ｐｒｏｇ、Ｄｅｘ及Ｐｒｏ０ｇ加上Ｄｅｘ对外周血Ｔ淋巴细胞体外活化的作用。结果：在体外培养条件下,无论单独使用Ｐｒｏｇ还是Ｄｅｘ均地强低剂量ＰＤＢ刺激ＣＤ６９的表达。然而,与单独使用Ｐｒｏｇ或Ｄｅｘ的作用相比。Ｐｒｏｇ加上Ｄｅｘ明显减弱低剂量ＰＤＢ的活化ＣＤ６９的表达。结论：同时使用Ｐｒｏｇ与Ｄｅｘ可明显抑制Ｔ淋巴细胞的体外活化,提示在临床上