IL-12表达水平变化及其免疫活性对病毒性心肌炎的影响

目的 探讨在小鼠急性病毒性心肌炎（VM）发病过程中白细胞介素12（IL-12）mRNA表达水平和蛋白浓度变化，及其免疫学活性对心肌炎的影响。方法 135只雄性BALB/c小鼠随机分为正常组（n=25)，心肌炎对照组（n=50),rIL-12组（n=40),Il-12抗体组（n=20)。后3组经腹腔接种柯萨奇病毒（CVB3m)诱发急性心肌炎，rIL-12组于病毒接种后4h皮下注射重组IL-12，10ng/0.1ml，心肌炎组注射等量PBS，均连续用5d(0-4d)。抗体组于0-1d经腹腔注射IL-12中和抗体0.1ng/0.1ml，心肌炎组注射等量PBS，均连续用5d(0-4d)，抗体组于0-1d经腹腔注射IL-12中和抗体0.1mg/0.1ml，共2次，分别于接种后1、3、5、7d各组随机取若干只小鼠采血后处死，留取心脏，脾等标本。结果 小鼠感染CVB3m后，其心肌组织中IL-12mRNA的表达水平增高，同时体内IL-12，IFN-γ的蛋白含量也增高；在投入rIL-12后，IFN-γ的蛋白含量升高更明显，NK细胞活力增强，同时小鼠心肌组织中病毒滴度降低，心肌损害减轻，小鼠生存率提高（分别为66%和85%）；而在IL-12抗体投入组结果则相反，且小鼠生存率降低（50%），但与心炎组相比差异无显著性。结论 在VM早期小鼠体内rIL-12能减轻心肌损害。提高感染小鼠的存活率，起到保护性的作用。     

槲皮素对CVB3诱导的新生小鼠病毒性心肌炎氧化应激损伤和炎性反应的调节

目的：心肌炎是由多种不同的感染因子引起的心脏炎症性病变,会造成致命性伤害,尤其是对年轻人。本文旨在探索槲皮素对柯萨奇B3m病毒(CVB3)诱导的新生小鼠病毒性心肌炎氧化应激损伤和炎性反应的影响。方法：CVB3感染建立急性病毒性心肌炎模型。超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)水平通过商业化试剂盒进行检测。ELISA检测IL-1β、IL-6和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平。蛋白印迹分析TGF-β1、p-NF-κB-P65和TNF-α表达。结果：与正常组相比,CVB3组乳鼠存活率明显降低,心脏重量/体重(HW/BW)比值和血糖浓度明显升高(P<0.05)。槲皮素可抑制CVB3诱导的存活率下降,HW/BW比值和血糖浓度的上升(P<0.05)。与正常组相比,CVB3组SOD水平下降,MDA和LDH水平上升(P<0.05)。槲皮素可减弱CVB3诱导的SOD水平的降低,MDA和LDH水平的升高(P<0.05)。而且,CVB3组乳鼠IL-1β、IL-6和iNOS水平高于正常组(P<0.05)。槲皮素组乳鼠IL-1β、IL-6和iNOS水平低于CVB3组(P<0.05)。与正常组相比,CVB3组TGF-β1、p-NF-κB P65和TNF-α的表达增强(P<0.05)。槲皮素可抑制CVB3诱导的TGF-β1、p-NF-κB P65和TNF-α表达水平的升高(P<0.05)。结论：槲皮素可减轻CVB3诱导的新生小鼠病毒性心肌炎氧化应激损伤和炎症反应。     

心康口服液预防小鼠病毒性心肌炎的实验研究

目的 探讨心康口服液预防小鼠柯萨奇B3病毒性心肌炎的作用。方法 心康口服液预防性用药2d后的小鼠经腹腔感染CVB3,以诱发急性病毒性心肌炎模型,持续用药至20d,观察小鼠于感染不同阶段的心肌组织形态学改变并进行形态定量分析,所得数据用SPSS／PC软件包作统计学处理。结果 心康口服液各剂量组的心脏表面重度病变检出率显著低于病毒对照组（P＜0.01）;心肌组织重度损伤（心肌细胞大片坏死崩解）的检出率均低于病毒组及干扰素组,其中中剂量组与病毒组差异显著（P＜0.01）;心肌平均病变面积、病变面积／全心面积比值第20d时心康组与干扰素组均与病毒组差异显著（P＜0.01）,第5d时心康各剂量组与病毒组差异显著（P＜0.01）。结论 心康口服液预防性给药可保护心肌,减轻心肌损伤及促进损伤心肌恢复,其预防柯萨奇B3病毒性心肌炎的作用类似干扰素。     

CVB3诱导的病毒性心肌炎小鼠模型中CD4~+T细胞亚群格局及其作用

本研究主要关注BALB/c小鼠感染柯萨奇病毒B3型(CVB3)后CD4+T细胞亚群格局的变化及其对病毒性心肌炎发病的贡献度。CVB3腹腔感染小鼠后第7d,通过小鼠体重下降率、心肌损伤血清学指标肌酸激酶(CK)活性以及心肌组织病理学改变等多项指标证实小鼠心肌炎模型的成功建立。经Real-time PCR检测感染第7d脾脏CD4+T细胞亚群主要细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17A、IL-17F及转录因子Foxp3表达情况;以流式细胞术检测了CD4+T细胞各亚群比例,并通过多元线性回归分析法评估了各T细胞亚群对病毒性心肌炎发病的影响。结果显示,与对照组相比,CVB3感染小鼠脾脏IL-17A、IL-17F、IFN-γ表达均显著上升(分别约为12、8.5、5倍),而IL-4和Foxp3表达无明显变化。CVB3感染小鼠脾脏中CD4+IL-17+Th17细胞的上调幅度最为明显,约2.75倍,其次为IFN-γ+Th1细胞,上调约2.27倍,而Th2和Treg细胞无明显变化。进一步统计学分析显示,Th17对病毒性心肌炎发病的贡献度最高(1.808),Th1次之,贡献度为1.581,而Th2和Treg对病毒性心肌炎发病无显著影响,提示CD4+T细胞亚群格局变化与病毒性心肌炎发病密切相关,其中以Th17对心肌炎发病的贡献度尤为显著。     

巨细胞病毒感染对小鼠心肌组织TH1/TH2类细胞因子及其特异性转录因子T-bet/GATA-3表达的影响

目的动态观测MCMV感染对小鼠心肌组织TH1/TH2类细胞因子及其特异性转录因子T-bet／GATA-3表达的影响。方法建立小鼠巨细胞病毒感染心肌炎模型。观察小鼠血清删浓度变化，心肌组织病理损害和心肌组织细胞因子IFN-γ、IL-4表达水平以及脾组织中转录因子T-bet、GATA-3表达强度。结果心肌组织病理积分和血清cTnI浓度在MCMV感染后第3天增高，第7天达高峰，第14天仍维持较高水平；IFN-γ在MCMV感染第3天时表达迅速增高达到峰值，随后下降，第14天基本下落至正常水平；IL-4在MCMV感染第5天表达迅速增高达到峰值，随后下降，在第14天又升高；MCMV感染第3天转录因子T-bet蛋白表达达峰值，随后逐渐降低，到第14天时降低更为显著。转录因子GATA-3在MCMV感染第7天时表达明显增强，第14天时增强更为显著。结论MCMV感染通过上调GATA-3转录因子和叫表达，下调T-bet转录因子和IFN-γ表达，导致TH1/TH2平衡失调，表现为TH2细胞优势应答状态，使心肌损害加重。这可能是CMV感染致宿主特异性细胞免疫功能降低并造成组织损伤的机制之一。     

硫化氢对柯萨奇病毒感染的病毒性心肌炎小鼠的保护作用

目的研究硫化氢对柯萨奇病毒B3（Coxsachievirus B3, CVB3）感染的病毒性心肌炎小鼠的保护作用以及胱硫醚γ-裂解酶（ CSE）/硫化氢（ H2 S）通路在其体内的表达情况。方法将110只5周龄的雄性BALB/c小鼠随机分为4组：正常对照组、病毒性心肌炎组、硫氢化钠（外源性H2 S供体）组和DL-炔丙基甘氨酸（ PAG,CSE不可逆抑制剂）组。以腹腔注射CVB3建立急性病毒性心肌炎模型,接种当天记为第0天,24 h后每组每日经腹腔分别注射相应干预药物。分别于接种后第4天和第10天从各组随机抽取10只处死,留取血清和心肌标本。观察心肌炎症病理改变,酶联免疫吸附法检测H2 S及IL-6、TNF-α等炎症因子含量,逆转录-聚合酶链反应法检测心肌组织CVB3、CSE的mRNA表达水平,免疫组化及蛋白质印迹法定性、定量检测CSE蛋白水平表达。结果与正常对照组比较,病毒性心肌炎组血清和组织H2 S浓度、CSE mRNA、CSE蛋白水平表达均明显下调,给予NaHS干预可明显上调H2 S水平,减轻心肌损伤、减轻炎症细胞浸润以及间质水肿,对病毒CVB3 mRNA的表达有抑制作用,而给予PAG干预,可明显抑制H2 S和CSE表达,加重心肌损伤、炎症细胞浸润及间质水肿,促进CVB3 mRNA的复制。结论在病毒性心肌炎中,CSE/H2 S通路表达明显受到抑制,给予PAG干预可明显抑制该通路的表达,加重心肌损伤,促进病毒复制,外源性供给硫化氢可对感染心肌起到保护作用,且可抑制病毒复制。     

依那普利对CVB3诱导的病毒性心肌炎小鼠的保护作用

目的探讨依那普利对CVB3诱导的病毒性心肌炎小鼠的保护作用。方法将小鼠分为对照组、病毒性心肌炎模型组、依那普利10 mg/kg组、依那普利20 mg/kg组,每组8只。103半数感染量CVB3病毒溶于0.1 ml磷酸缓冲液,腹腔注射构建病毒性心肌炎小鼠模型。对照组小鼠腹腔注射等量生理盐水。依那普利10 mg/kg组和依那普利20 mg/kg组小鼠每天分别灌胃10、20 mg/kg的依那普利。7 d后处死小鼠,收集血液,全自动生化仪检测血清中乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)的含量;苏木伊红染色观察心肌组织病理变化;使用试剂盒检测心肌组织中谷胱甘肽过氧化物(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量;酶联免疫吸附实验检测心肌组织中炎症因子的含量;蛋白质印迹检测心肌组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、p-p65、Toll样受体4(TLR4)以及Nrf2通路相关蛋白的表达水平。结果与对照组相比,病毒性心肌炎模型组血清中LDH、AST、CK-MB的含量显著升高(P0.01);心肌细胞排列不规则,细胞间出现较大缝隙(P0.01);心肌组织中GST-px、SOD的活性显著降低(P0.01),MDA的含量显著升高(P0.01);白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和γ干扰素(IFN-γ)的含量显著升高(P0.01);iNOS、p-p65、TLR4的表达量显著升高(P0.01),而Nfr2、HO-1、NQO-1的表达水平显著降低(P0.01)。与病毒性心肌炎模型组相比,依那普利10、20 mg/kg组血清中LDH、AST、CK-MB的含量显著降低(P0.01);心肌细胞排列较规则,炎性细胞数量减少(P0.01);心肌组织中GST-px、SOD的活性显著升高(P0.01),MDA的含量显著降低(P0.01);IL-1β、TNF-α和IFN-γ的含量显著降低(P0.01);iNOS、p-p65、TLR4的表达量显著降低(P0.01),而Nfr2、HO-1、NQO-1的表达水平显著升高(P0.01)。结论依那普利能抑制CVB3病毒性心肌炎小鼠的心肌组织氧化应激和炎症反应,减轻心肌组织损伤,对病毒性心肌炎小鼠具有保护作用,其作用机制与TLR4通路的抑制、Nrf2通路的激活有关。     

抗Fas的抗体在实验性病毒性心肌炎中作用机制的研究

目的探讨中和型抗Fas的抗体对小鼠柯萨奇病毒性心肌炎的治疗作用及作用机制。方法60只BAIB/c小鼠随机分为4组：1组空白对照组，2组病毒对照组、3组IgG对照组、4组抗Fas抗体治疗组。于接种后第10天每组随机处死小鼠8只，心肌组织切片HE染色了解心肌损伤情况，电镜技术及原位末端标记法（TUNEL）检测心肌细胞凋亡情况，免疫组化方法检测casimse-3的表达，逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）检测心肌组织中easpase-3的mRNA表达。实时定量PCR（RQ-PCR）定量心肌柯萨奇病毒B3（CVB3）mRNA拷贝数。结果（1）病毒对照组可见caspase-3表达和心肌细胞凋亡，且均与心肌病变积分成正相关（r=0．81，P〈0．01；r=0．73，P〈0．05）。（2）抗Fas抗体治疗组小鼠心肌组织病变积分、心肌细胞凋亡率、caspase-3蛋白和mRNA表达及心肌内CVB3 mRNA拷贝数均明显低于病毒对照组（P〈0．05）和IgG对照组（P〈0．05）。结论Fas/FasL途径介导的心肌细胞凋亡参与了病毒性心肌炎的发病过程，凋亡是导致病毒性心肌炎心肌损伤的重要机制之一，抗Fas抗体可降低caspase-3活化和mRNA表达，减少心肌细胞凋亡，降低心肌细胞内病毒复制，使心肌损伤明显减轻。     

三七总皂苷对异丙肾上腺素所致大鼠心肌肥厚和纤维化的影响

目的：研究三七总皂苷（PNS）对异丙肾上腺素所致大鼠心肌肥厚和纤维化的保护作用。方法： 用异丙肾上腺素（ISO）5 mg·kg^-1·d^-1,sc,连续7 d，建立大鼠心肌肥厚和纤维化模型。造模第2 d开始给大鼠腹腔注射PNS 25和50 mg· kg^-1·d^-1,连续14 d，测定全心重量指数（HW/BW）、左心室重量指数（LVW/BW即LVI）；采用试剂盒用分光光度法检测左心室心肌组织中羟脯氨酸（Hyp）、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）含量和超氧化物歧化酶（SOD）、谷光苷肽过氧化酶（GSH-Px）、一氧化氮合酶（NOS）活性；用放免分析法检测左心室心肌组织中血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）含量。结果： ISO模型组大鼠的HW/BW、LVI、左心室HyP、AngⅡ、MDA含量和诱生型NOS(iNOS)活性显著高于生理盐水对照组，SOD、GSH-Px及结构型NOS(cNOS)活性和NO含量明显比生理盐水对照组低；PNS治疗组左心室心肌组织中NO含量、cNOS 、SOD和GSH-Px活性明显高于ISO模型组；MDA和AngⅡ含量及iNOS活性和心脏重量指数比ISO模型组低。结论： PNS有抗心肌肥厚和纤维化作用，该作用与清除氧自由基及升高NO含量有关。     

冬虫夏草提取液对实验性病毒性心肌炎小鼠免疫功能的影响

目的了解早期应用冬虫夏草提取液(CSAE)治疗对病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌病变、血清IFN-γ水平及脾脏T细胞亚群的影响。方法100只成年雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照组(CG)、感染组(IG)和CSAE治疗组(CTG)。IG及CTG小鼠腹腔感染柯萨奇病毒B3(CVB3),于感染CVB3后第7天和第14天,计算小鼠的生存率,然后并分批处死,观察心肌组织的病理变化及用ELISA法检测血清IFN-γ的水平。用流式细胞术分析脾脏中CD3 、CD4 、CD8 T细胞的百分率。结果与CG组相比较,IG小鼠血清IFN-γ的水平及脾脏中各T细胞亚群的百分率均降低;而CD4 /CD8 T细胞的比例升高。CTG小鼠的心肌炎症坏死较轻,感染病毒后14d的存活率为85%,显著高于IG的55%(P<0.05)。血清IFN-γ的水平及脾脏中CD3 、CD8 T细胞的百分率显著高于IG组。CTG小鼠脾脏中各T细胞亚群的百分率及CD4 /CD8 T细胞的比例与CG组无显著差异。结论CSAE可诱导VMC小鼠IFN-γ产生并调节细胞免疫功能,对VMC有一定的治疗作用。     

卡维地洛对病毒性心肌炎小鼠的保护作用及其机制

目的：观察卡维地洛对病毒性心肌炎小鼠的保护作用并探讨其可能的作用机制。方法：188只清洁级近交系4-6周龄雄性BALB/c小鼠随机分成4组。心肌炎对照组（C组）、美托洛尔干预组（M组）、卡维地洛干预组（K组）各60只,空白对照组（B组）8只作总体对照。观察各组小鼠的心肌组织病理学改变、cTn-I水平及心肌组织磷酸化p38MAPK含量的变化。结果：美托洛尔、卡维地洛干预后,小鼠心肌组织病理改变减轻,cTn-I水平、心肌磷酸化p38MAPK含量均下降,卡维地洛干预后上述指标下降更加显著。结论：卡维地洛可能通过β1、β2肾上腺素能受体双重阻滞作用,抑制p38MAPK通路活化,减轻病毒性心肌炎引起的心肌损伤。     

病毒性心肌炎小鼠心肌中MMP-2和NF-κB的表达

目的:初步探讨基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)p65在柯萨奇病毒B3(CVB3)诱导的小鼠病毒性心肌炎心肌中的表达。方法:6周龄近交系雄性BALB/c小鼠随机分为对照组和病毒性心肌炎组,分别给予0.1 m L PBS和10-5.69TCID50/m L CVB3注射,第4天和第10天各随机取8只小鼠处死并取血和心脏标本。Reed-Muench法测定接种病毒滴度;苏木素伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色后光镜观察心肌组织病理学改变;应用免疫组化法(immunohistochemistry,IHC)检测MMP-2和NF-κB p65在心肌组织表达的分布和含量;用Western blot法检测MMP-2、NF-κB p65和IκBα在心肌组织的表达,用ELISA检测血清TNF-α含量的变化。结果:与对照组相比,免疫组化和Western blot实验结果提示病毒性心肌炎小鼠心肌中MMP-2和NF-κB p65的表达显著升高(P0.05);感染组IκBα的表达呈下降趋势(P0.05);ELISA结果提示血清TNF-α含量在感染组显著升高,差异有统计学显著性(P0.05)。结论:病毒性心肌炎小鼠心肌组织中TNF-α、NF-κB p65和MMP-2表达显著上调,可能通过相关机制参与疾病的发生。     

汉黄芩苷对柯萨奇B3病毒诱导的病毒性心肌炎小鼠炎症反应的影响

目的:探讨汉黄芩苷对柯萨奇B3病毒(CVB3)诱导的病毒性心肌炎小鼠炎症反应的影响及其可能的调控机制。方法:用CVB3感染BALB/c小鼠构建病毒性心肌炎动物模型。取40只BALB/c小鼠将其随机分为4组:正常对照组、CVB3感染的病毒性心肌炎组、CVB3感染后给予汉黄芩苷处理的治疗组以及CVB3感染后同时给予汉黄芩苷和AKT激动剂处理的激动剂组,每组10只。于药物治疗7 d后处死各组小鼠。用HE染色检测前3组小鼠心肌组织内炎症细胞浸润情况。用ELISA检测前3组小鼠血清中白细胞介素1β(IL-1β)和IL-6含量。用Western blot实验检测前3组小鼠心脏组织中炎症因子蛋白表达水平以及AKT/NF-κB通路的活化情况。最后,通过Western blot实验检测全部4组小鼠心肺组织中AKT/NF-κB通路的活化情况。结果:与正常组相比,病毒性心肌炎小鼠心脏组织内存在大量炎症细胞浸润,而汉黄芩苷治疗显著降低CVB3病毒诱导的心脏组织炎症细胞浸润(P<0.05)。CVB3病毒感染后小鼠血清中IL-1β和IL-6含量较正常组显著升高(P<0.05),而给予汉黄芩苷治疗后小鼠血清中IL-1β和IL-6含量较病毒性心肌炎组显著降低(P<0.05)。Western blot检测结果表明,与病毒性心肌炎组相比,汉黄芩苷治疗显著降低心肌组织内炎症因子(IL-1β和IL-6)蛋白表达水平以及AKT和NF-κB蛋白的磷酸化水平(P<0.05);而给予AKT激动剂处理后,汉黄芩苷对NF-κB蛋白磷酸化水平的抑制作用显著减弱(P<0.05),且汉黄芩苷对炎症因子的下调作用也显著受到抑制(P<0.05)。结论:汉黄芩苷可通过调控AKT/NF-κB通路减轻病毒性心肌炎小鼠的炎症反应。     

黄芪对心肌炎小鼠心肌穿孔素mRNA和CVB3m mRNA表达的影响

目的探讨黄芪注射液治疗小鼠柯萨奇B3(CVB3)病毒性心肌炎(VMC)的疗效及其机制。方法BALB/c小鼠24只腹腔感染柯萨奇病毒B3亲心肌细胞株(CVB3m)后,随机等分为两组:黄芪治疗组(黄芪注射液每天10g/kg腹腔注射)和对照组。实验第8天留取心肌,分别进行心肌病理检查,心肌穿孔素(perforin,PFP)mRNA和CVB3m mRNA逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)分析,并对心肌组织PFP mRNA和CVB3m mRNA表达水平进行相关性分析。结果(1)心肌组织病理改变:黄芪治疗组明显轻于对照组;(2)心肌PFP mRNA表达水平RT-PCR半定量:黄芪治疗组心肌PFP mRNA的表达明显低于对照组(1.10±0.07与1.31±0.12,P<0.01);(3)心肌CVB3m mRNA表达水平RT-PCR半定量:黄芪治疗组心肌CVB3m mRNA表达明显低于对照组(1.07±0.04与1.18±0.02,P<0.01);(4)心肌PFP mRNA水平与CVB3mmRNA水平呈显著正相关(r=0.68,P<0.01)。结论PFP介导的细胞毒性作用在病毒性心肌炎的发病中起重要作用。黄芪对小鼠急性心肌炎模型中心肌组织CVB3m病毒复制有明显的抑制作用,心肌组织中PFP mRNA表达水平与心肌组织CVB3m mRNA的表达水平的变化具有同步性,黄芪对CVB3m诱导的小鼠急性心肌炎模型有显著的治疗作用。     

IL-17在病毒性心肌炎小鼠中的作用

目的:研究IL-17 对病毒性心肌炎小鼠的作用。方法:随机挑选20只野生型BALB/ c 小鼠为对照组,20 只IL-17A-/ -小鼠为IL鄄17A-/ -组,20 只L-17A-/ -小鼠为IL-17 组。每只小鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3(Coxsackie virus B3,CVB3)建立VMC 模型。收集小鼠外周血利用ELISA 法检测血清中IL鄄17 水平,利用流式细胞术检测血清中Th17 细胞水平。CVB3 处理3d 后,对照组和L鄄17A-/ -组腹腔注射100 滋g IgG 抗体,IL-17 组注射100 g IL-17mAb。分别于CVB3 处理第3、7、14 天收集小鼠心肌组织。将小鼠心肌切片并H&E 染色进行病理学检查。检测小鼠心肌组织中病毒滴度。利用酶联免疫吸附法检测心肌组织IL-17、IL-23、IL-6 和TNF 的含量。结果:成功构建病毒性心肌炎小鼠。对第14 天收集的组织进行分析发现, IL-17 组小鼠血清中IL-17 和Th17 水平均显著低于对照组和IL-17-/ - 组。对照组小鼠心肌组织损伤程度明显高于IL-17A-/ - 组和IL-17组,IL-17 小鼠心肌组织损伤程度高于IL-17A-/ -组。对照组病毒滴度高于IL-17A-/ -组和IL-17 组,且随着CVB3 处理时间增加而增加。在补充IL-17 抗体后IL-17 组病毒滴度高于IL-17A-/ -组。在IL-17-/ -组和IL-17 组的IL-17、IL-23、IL-6 和TNF 水平均显著低于对照组。在补充IL-17 抗体后IL-17 组IL-17、IL-23、IL-6 和TNF 水平均显著高于IL-17-/ -组(P<0.05)。结论:IL-17 是参与病毒性心肌炎的重要炎症因子,而IL-17 缺失可保护小鼠心肌免受病毒性心肌炎损伤。     

小鼠柯萨奇病毒性心肌炎模型的优化

在两种品系小鼠中建立、优化和规范B组3型柯萨奇病毒(CVB3)诱导的病毒性心肌炎小鼠模型。首先以100TCID50-10 000TCID50之间剂量的CVB3Nancy株病毒经腹腔感染易感BALB/c雄性小鼠,通过体重减轻率、死亡率和心脏病理及心肌CK-MB水平,评估建立最佳病毒性心肌炎的最佳剂量;而后摸索了在C57BL/6小鼠建立病毒性心肌炎的CVB3剂量。通过精细比较发现雄性BALB/c小鼠致心肌炎的最佳CVB3病毒滴度数量级在1000TCID50;进一步确定1500TCID50是在雄性BALB/c小鼠中诱导病毒性心肌炎的最佳剂量;C57BL/6小鼠不是易感小鼠,但在1500TCID50CVB3感染下也可诱导轻微可见的病毒性心肌炎,便于在多数基因敲除鼠内的病毒性心肌炎研究。本研究为规范病毒性心肌炎模型的建立、为后续病毒性心肌炎机制的深入研究奠定了重要的基础模型。     

小鼠急性病毒性心肌炎心肌HO-1mRNA及其蛋白表达

目的：探讨小鼠急性病毒性心肌炎（viral myocarditis,VMC）心肌细胞血红素氧合酶-1（heme oxygenase-1, HO-1）基因及其蛋白表达的动态变化。方法:72只清洁级近交系4-6周龄雄性BALB/c小鼠随机分为2组：心肌炎组（V组）40只（腹腔注射 CVB3病毒），实验对照组（C组）32只。于病毒接种后第4 d、8 d、15 d、21 d分别采血后处死小鼠并留取心脏标本。采用免疫组化法和原位杂交法检测心肌HO-1蛋白及mRNA表达，分光光度计法分间接测定COHb含量，光镜及透射电镜观察心肌组织病理及细胞超微结构改变。结果: （1）心肌炎组可见炎症细胞浸润，心肌细胞可见大面积坏死，晚期可见钙化灶形成；电镜下可见肌原纤维溶解断裂，线粒体膜消失，含溶酶体丰富的单核巨噬细胞浸润，对照组小鼠心肌未见上述变化。（2）血COHb含量变化：心肌炎组小鼠血COHb含量在第8 d和第15 d均较对照组明显增高，2组差异显著（0.047±0.005和0.031±0.004；0.076±0.006和0.030±0.005，P<0.01）。（3）血清cTnI含量变化：V组小鼠血清cTnI含量与C组比较除第21d无明显差别外，其余各时点均高于C组，差异有统计学意义，P<0.01。（4）HO-1免疫组化结果：心肌炎组HO-1蛋白均成阳性表达，各时点心肌HO-1平均吸光度值均高于对照组（P<0.01）。 （5）HO-1mRNA原位杂交结果：心肌炎组HO-1mRNA原位杂交染色各时点均呈阳性表达，各时点吸光度值均高于对照组（P<0.01）。结论:病毒性心肌炎可诱导心肌组织HO-1mRNA及其蛋白的表达，可能是受损心肌发挥自我保护作用机制之一。     

苦参碱对病毒性心肌炎小鼠蛋白激酶B表达的影响

目的 评价苦参碱对柯萨奇B3型病毒（CVB3）感染的病毒性心肌炎（VMC）小鼠心肌组织蛋白激酶B（Akt）表达的影响,以探讨苦参碱保护心肌的作用机制.方法 实验采用雄性Balb/c小鼠连续3 d腹腔注射0.2ml 100TCID50的CVB3的方法制备VMC的动物模型.分为6组：苦参碱每日80 mg/kg、40 mg/kg、20 mg/kg治疗组,利巴韦林组、病毒组及正常对照组.药物于末次注射病毒的60 min后开始,连续腹腔注射10 d,正常组给予同体积的生理盐水.分别于给药后第5天和第10天处死小鼠,应用Tunel标记法检测各组心肌细胞凋亡情况;于给药后第10天应用免疫组化及Western Blot法检测心肌组织磷酸化AktSer-473蛋白的表达.结果 与正常组比较,病毒组心肌组织凋亡明显增加（P＜0.05）;与病毒组比较,苦参碱各剂量组心肌组织凋亡明显减少（P＜0.05）.于给药后第10天,苦参碱每日40 mg/kg组磷酸化AktSer-473蛋白的表达明显上调（P＜0.05）.结论 苦参碱可能通过促进磷酸化AktSer-473蛋白的表达,抑制CVB3感染的VMC小鼠心肌组织凋亡.     

黄芪甲甙改善扩张型心肌病小鼠左室重构与磷酸化p-38MAPK相关性的实验研究

目的：探讨黄芪甲甙对柯萨奇病毒B3（CVB3）扩张型心肌病(DCM)小鼠左室重构的影响及其可能的作用机制。方法:BALB/c小鼠腹腔无菌重复增量接种CVB3建立扩张型心肌病动物模型（n＝30）；感染CVB3 的小鼠以黄芪甲甙（0.6 mg·kg-1·d-1）灌胃作为扩张型心肌病＋黄芪甲甙治疗组（n＝20）；同期腹腔无菌注射等容积不含病毒的EMEM液作为正常对照组（n＝10）。用高频超声心动图测量左室大小及心功能指数，用ELISA技术检测血清I、III型前胶原端肽（PINP、PICP及PIIINP）浓度并计算PICP/PICN比值，苦味酸天狼猩红胶原特异染色和偏光显微镜显像，并辅以图像分析软件计算心肌胶原容积积分（CVF）和I型胶原的含量，分别应用RT-PCR和Western blotting技术检测心肌组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原变化和磷酸化p38MAPK的表达。结果:黄芪甲甙显著提高DCM小鼠的生存率、有效地降低扩大的左室内径及增加心脏功能；组织学和血清学显示DCM小鼠心肌组织胶原沉积明显多于正常对照组，而这种增多的趋势可被黄芪甲甙明显抑制 (P<0.01)；DCM小鼠心肌磷酸化p38MAPK表达高于正常对照组，黄芪甲甙治疗后p38MAPK活性明显低于正常对照组（分别为P<0.01和P<0.05）。结论:黄芪甲甙改善CVB3感染后导致的扩张型心肌病左室重构可能与降低磷酸化p38MAPK活动密切相关。     

B组柯萨奇病毒诱导的细胞焦亡在心肌损伤中的作用

目的利用caspase-1抑制剂抑制焦亡,评价细胞焦亡在B组柯萨奇病毒（Coxsackievirus B,CVB）所致心肌损伤中的作用,确定CVB能否通过诱导细胞焦亡导致心肌炎症。方法Balb/c乳鼠分为四组：对照组、CVB3感染组（腹腔注射CVB3）、1次抑制剂组（CVB3感染乳鼠后注射1次caspase-1抑制剂）和3次抑制剂组（CVB3感染乳鼠后在1、3、5天分3次注射caspase-1抑制剂）,Western blot检测各组乳鼠心肌组织中的caspase-1表达,HE染色观察各组乳鼠心肌组织病理变化。HeLa细胞分为8组,前4组用CVB3感染不同时间,后4组CVB3感染的同时分别加入不同剂量caspase-1抑制剂,检测CVB3病毒蛋白表达量。结果CVB3感染组的乳鼠心肌组织中激活的caspase-1含量增加,与CVB3组相比,注射caspase-1抑制剂的小鼠心肌组织中激活的caspase-1含量明显减少。正常对照组乳鼠心肌细胞组织状态正常,CVB3感染组乳鼠心肌组织大面积变性、坏死,CVB3＋caspase-1抑制剂组乳鼠心肌组织发生病理变化但程度较轻。HeLa细胞中caspase-1与CVB3蛋白含量随caspase-1抑制剂剂量增大而降低。结论抑制细胞焦亡可有效减轻CVB3所致心肌损伤,CVB诱导的焦亡参与心肌致病过程。