军团菌实验室快速诊断技术的建立

目的　建立军团菌实验室快速诊断的检验方法。方法　在标本进行预处理的基础上采用自行研制的干燥培养基培养细菌并结合玻片凝集结果来分离、鉴定军团菌。结果　使用本方法后环境标本的军团菌阳性分离率提高至３８ ％ 以上。结论　本方法简便快速阳性分离率高而准确。     

应用简化和定量方法从空调冷却水中培养分离军团菌

目的：建立简便技术并用于调研该地区空调冷却水中军团菌的分布等。方法：用简单法配制军团菌培养基;以爆缸取代CO2培养箱;仅依据菌落形态的符合和在血琼脂上不生长初判军团菌,并用简式作定量。结果：应用简化和定量的方法于1997年7月至1999年6月,从上海市卢湾区6类建筑物47个定点的371侏空调冷却水样中,检出了185件军团菌,出率达49．875,其中地铁站达69．36％。结论了简化的军团菌培养分离和定量法,以此法在历经3年较系统的定点调研中,检出率达49．87％,非常显著地高于国内已发表的资料而与国外相近,其中地铁站却水的军团菌检出率和菌量均最高,故其传播军团病的危险性应引起注意。     

军团菌KatB毒力基因聚合酶链反应检测技术的建立及应用

为建立军团菌KatB毒力基因聚合酶链反应(PCR)检测方法 ,根据GenBanK公布的嗜肺军团菌核苷酸序列合成军团菌毒力基因KatB的特异引物,采用PCR方法 对2005-2007年天津市中央空调冷却塔分离的嗜肺军团菌、杜氏军团菌、博氏军团菌、长滩军团菌等菌株进行了军团菌毒力基因KaLB的检测.结果 显示,本室分离的16株致病军团菌中有9株嗜肺军团菌和1株杜氏军团菌扩增出了2.7 kb的KatB基因片段,其余菌株未扩增出该基因片段.本研究成功建立了军团菌毒力基因KatB的PCR检测方法 ,为军团菌的毒力研究奠定了基础.     

嗜肺军团菌荧光定量PCR法的建立和初步应用

目的建立嗜肺军团菌特异、快速检测方法,探讨南京地区公共场所环境水样嗜肺军团菌污染状况。方法根据嗜肺军团菌的mip基因保守序列设计引物和探针,通过对嗜肺军团菌标准株ATCC33152、嗜肺军团菌南京分离株及大肠埃希菌ATCC25922、鼠伤寒沙门菌ATCC14028、福氏2a志贺菌ATCC12022进行检测,验证该方法的特异性。并应用该法对南京地区某商场、宾馆、办公楼、医院共计13家的中央空调系统的冷却水、淋浴水和景观水共计88份环境水样进行了PCR检测及军团菌的分离培养。结果该法对嗜肺军团菌有特异性扩增曲线,而对其他细菌无阳性扩增曲线。88份水样中荧光定量PCR方法检测出28份阳性,阳性率为31.8%;传统培养方法分离出17株军团菌,分离率为19.3%。结论本文建立的荧光定量PCR检测方法具有良好的特异性,可用于环境水中军团菌污染状况调查。南京地区中央空调冷却水中检出率最高,存在发生军团菌病的可能,应引起足够重视。     

军团菌双重PCR检测方法的建立及应用

目的建立双重PCR以检出环境水体中的军团菌。方法设计2对引物,分别扩增军团菌的5SrRNA和Mip基因,扩增片段长各为10 4bp和996bp。结果该方法检测军团菌的灵敏度为5 8×102 cfu/ml, 6株标准嗜肺军团菌均扩增出104bp和996bp两条带, 4株非嗜肺军团菌均扩增出104bp条带, 4株非军团菌无条带;检测71份环境水样, 5份出现2条条带, 2份可见104bp条带,阳性率为7 0%。结论该方法快速、灵敏、特异,为水体中的嗜肺军团菌检测提供了有效方法。     

军团菌5SrRNA聚合酶链反应方法的建立及应用

建立5SrRNA基因检测军团菌的多聚酶链反应方法,扩增参考菌株的染色体DNA(L.Pneumophila1～14、L.bozemanni、L.dumoffii、L.longbeachae、L.micdadei、L.jordanis),均可检出104bp的基因片段,敏感性为8.52*10²cfu/ml(平均值);而扩增9株非军团菌均为阴性。对模似血标本的检测,其敏感性可达10³cfu/ml.检测17例血标本,阳性率为58.8%(10/17),与血清学检测和临床诊断治疗结果相符合。结果表明该方法敏感、特异、快速、简便。     

军团菌16SrRNA聚合酶链反应方法的建立及应用

建立了１６ＳｒＲＮＡ基因检测军团菌的多聚酶链反应方法。扩增参考菌株染色体ＤＮＡ（Ｌ．Ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ１～１４、Ｌ．ｂｏｚｅｍａｎｎｉ、Ｌ．ｄｕｍｏｆｉ、Ｌ．ｌｏｎｇｂｅａｃｈａｅ、Ｌ．ｍｉｃｄａｄｅｉ、Ｌ．ｊｏｒｄａｎｉｓ）,均可检出出３８６ｂｐ的基因片段,敏感性为１０３ｃｆｕ／ｍｌ（平均值）;而扩增９株非军团菌均为阴性。对模拟血标本的检测,其敏感性可达１０２ｃｆｕ／ｍｌ。应用本检测系统检测了２４例临床标本,包括１９份血、５份胸水,阳性率为７０．８％（１７／２４）。与血清学检测和临床诊断治疗结果相符合。上述结果表明该方法敏感、特异、快速、简便。     

军团菌多重PCR检测方法的建立

1989年starbachuth首次报道了应用PCR检测嗜肺军团菌［1］。因PCR技术具有简便、快速、敏感和特异的特点，所以人们非常看重这一新的生物学技术在检测军团菌方面上的应用。此后，一些研究者应用PCR技术分别检测和鉴定了不同标本中军团菌［2-5］，发现普通PCR技术只能在属水平或某一种水平上检测和鉴定，而军团菌属中各种、型之间致病性不同，且可有单型感染，亦可多型混合感染。在军团菌检测中，特别是流行病学调查，传染源追踪及疫情处理时，不仅要检测出是否为军团菌，而且应明确鉴别出种、型，用普通PCR检测技术无法实现。本文初试…     

香港海鸥形菌检验技术的建立与应用

目的:建立香港海鸥形菌(Laribacter hongkongensis,LH)的社区获得性胃肠炎患者及淡水鱼类标本采样、运输、培养、分离及鉴定方法。方法:于2005年~2006年,采集社区获得性胃肠炎患者及淡水鱼类新鲜粪样,分别接种SS、XLD、CCDA、TCBS、MacConkey琼脂(MA)以及改良头孢哌酮MacConkey琼脂(CMA)等6种培养基,对典型的菌落,进行常规生化试验,凡氧化酶、触酶试验阳性以及三糖铁试验阴性的菌株,采用特异性PCR检测确诊。结果:社区获得性胃肠炎患者的LH检出率为0.53%(4/759);淡水鱼类草鱼、鲢鱼与鲈鱼的阳性率分别为9.30%、8.33%和5.88%。结论:本文建立的LH表型与基因型诊断技术适合于LH的诊断;当前LH缺乏血清学诊断,发展LH的PCR诊断方法具有现实意义。     

半套式PCR检测军团菌方法的建立及应用

目的建立检测军团菌的分子生物学方法。方法采用常规PCR对军团菌属16SrRNA编码区域和嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强子(mip)基因编码区域进行扩增,同时采用半套式PCR对常规PCR的扩增结果进行确证。结果采用常规PCR对军团菌属16SrRNA编码区域进行扩增,5种军团菌(包括3种嗜肺军团菌)扩增产物均可见654bp的特异性扩增带,非军团菌菌株PCR结果为阴性,采用半套式PCR对常规PCR扩增产物进行验证,扩增产物均可见430bp扩增带;同时采用常规PCR对嗜肺军团菌mip基因编码区域进行扩增,3种嗜肺军团菌扩增产物均可见649bp扩增带,非嗜肺军团菌菌株均为阴性,采用半套式PCR对常规PCR扩增产物进行验证,3种嗜肺军团菌扩增产物均可见399bp扩增带。敏感性为10CFU/ml.并且应用此方法成功检测环境水样中分离的疑似军团菌菌株。结论半套式PCR经济、简便、快速、敏感、特异,为军团菌的早期检测、环境监测、控制暴发流行提供了有效手段。     

军团菌双重荧光定量PCR检测方法的建立与应用

目的建立一种特异、快速、敏感,同时能区分嗜肺和非嗜肺军团菌的荧光定量PCR方法,用于检测临床和环境样品。方法利用军团菌属特异性23S rRNA基因和嗜肺军团菌种mip基因的保守序列,设计引物和TaqMan探针。提取嗜肺军团菌标准菌株(LP1)DNA,分别构建2个含有目的基因的标准质粒作为阳性模板。优化荧光PCR反应条件和反应体系,对方法的特异性、敏感性、重复性进行评价。并对环境水样及80份临床痰样进行检测。结果该方法检测灵敏度达10标准质粒拷贝数/反应,具有高度特异性、稳定性。整个过程约需2 h。对35份环境水样进行检测,检出3株嗜肺军团菌和3株非嗜肺军团菌,所有水样经传统分离培养法和普通PCR法检测均显示为阴性。对临床80份随机痰液标本进行检测,2份嗜肺军团菌阳性。结论 TaqMan探针荧光定量PCR双管检测是一种可同时区分嗜肺与非嗜肺军团菌的特异、敏感、稳定的方法,可用于基层医院对环境标本及临床痰样的检测。     

临床检验质量控制预测值模型的建立和应用

临床检验质量控制预测值模型的建立和应用卫生部临床检验中心王治国临床检验统计质量控制方法的选择或设计应该考虑所监测测定方法的误差发生率。如果测定方法稳定时，则此方法除了本身固有的随机误差外，不受任何其他分析误差的影响，这时使用简单的控制规则和较少的控制...     

军团菌检测技术的研究进展

探索适宜的军团菌检测技术,无论是针对军团菌病人作早期的诊断治疗,还是开展军团菌的流行病调查都具有重要的意义。分离培养法是军团病早期诊断的"金标准";免疫学检测法简便、快速,多用于回顾性调查;而分子生物学检测法是当今军团菌检测的发展趋势。     

建立实验中心促进检验技术发展

随着我国卫生事业的改革深化和医疗仪器设备的不断更新换代 ,医疗设备的购置、管理、使用 ,专业人才的培养和学科的发展已成为医院及有关部门面临的新课题。长期以来 ,我院各科室的实验室均处于分散状态 ,规模小 ,设备简陋 ,而医院的资金有限 ,不能及时更新设备 ,致使检验技术不能满足“三级甲等”医院的发展要求。因此 ,要想把握当代医学科技信息新动向 ,顺应现代临床检验学的发展趋势 ,就必须建立医院实验中心 ,充分利用有限资金 ,合理集中引进先进设备 ,加强管理 ,培养高素质的专业人才 ,大力发展临床检验技术。一、集中设备 ,统一管理 ,…     

军团菌快速检测方法的建立及其在国境口岸的应用

目的:建立适合口岸出入境大厅及其他公共设施中央空调水的分子生物学检测方法,以实现中央空调水的快速检测,提高检测速度及灵敏度。方法:根据军团菌核酸序列多重比对结果设计并合成实时荧光PCR的引物和探针,分别对军团菌16SrDNA和Mip基因相应片段进行扩增;建立快速、特异的军团菌分子快速检测新方法,并将该方法应用于对口岸中央空调水进行快速检测。结果:本研究以16SrDNA目标序列检测结果判断样本中是否存在军团菌,以Mip目标序列检测样本中是否存在嗜肺军团菌;本研究的方法快速、特异,能在2 h内完成对空调水样的检测。结论:本方法大大提高了军团菌的检测速度,提高了检测灵敏度,非常适合应用于中央空调水的快速检测。     

小儿军团菌病的快速检验及临床特征

目的:探索快速准确的诊断军团菌感染的方法,了解儿童军团菌感染的临床特点。方法:根据嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强子(m ip)基因建立一种检测嗜肺军团菌(LP)PCR方法,用该方法对65例呼吸系统炎症患儿的痰及咽拭子进行PCR检测,用传统血清学TAT方法检测嗜肺军团菌各型抗体。结果:嗜肺军团菌1~14型均扩增出628 bp的特异性片段,而非嗜肺军团菌LM及肺炎球菌均未见扩增片段;敏感性为2.1 pg/μl的嗜肺军团菌DNA。65例临床标本中6例扩增出628 bp的基因片段,阳性率为9.23%,其中4例应用TAT方法检测Lp抗体也为阳性。此6例患儿临床均为肺炎。结论:①利用嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强子(m ip)基因建立的检测嗜肺军团菌PCR方法特异性高,敏感性强,适用标本范围广,在嗜肺军团菌早期诊断中有一定价值。②在儿科呼吸系统感染性疾病中,存在嗜肺军团菌感染,在本资料中,65例呼吸道感染患儿,PCR方法检出6例,嗜肺军团菌感染阳性率为9.23%,而TAT方法检出4例,阳性率为6.15%。说明PCR方法敏感性高于TAT方法。③嗜肺军团菌感染在临床常表现为以重症肺炎、难治性肺炎为主的全身性感染,临床表现不典型,易误诊、漏诊,应引起儿科医师的警惕与重视。     

临床与环境标本中的军团菌检验方法学

军团菌是引起军团菌病的重要病原体,在世界各地时有暴发流行。我们对军团菌检验方法作了系列实验研究,改进了传统的细菌分离培养和生化试验,建立了聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)酶切分型、巢式PCR、荧光定量PCR、荧光原位杂交、单核苷酸多态性(single-nucleotide polymorphisms, SNP)分析与基因测序分析等系列军团菌分子生物学检测法。为临床与环境卫生的军团菌检验提供了精准、快速、可靠的病原学诊断依据,对预防和控制军团菌病暴发流行具有重要意义。     

分子生物学在军团菌鉴定和分型中的应用

军团菌(Legionella)是一种嗜热怕冷的兼性胞内寄生革兰阴性杆菌,不产芽孢、无荚膜,主要存在于土壤和人工水中,如中央空调系统、温泉浴等地方.目前已经发现58个种,分为70个血清型.军团菌繁殖主要在原生动物及真核生物的巨噬细胞内,通过IVB型毒力分泌系统可分泌150余种蛋白质,这些蛋白能干扰宿主细胞的生长,逃避吞噬溶酶体的杀菌作用,从而建立独特的繁殖方式.     

鼠疫检验技术的概况和PCR在鼠疫检验中的应用

鼠疫是一种自然疫源性烈性传染病 ,其特点是发病急、传播快、病死率高 ,主要通过跳蚤叮咬从染疫宿主动物传播到人 ,还可通过空气飞沫在人与人之间传播。目前鼠疫菌的检验方法主要是按《中华人民共和国传染病法》的四步检验法 ,此法只能从染疫的动物或鼠疫患者分离出鼠疫菌为准 ,且需要的时间较长 .而对于感染早期和恢复期病人以及与鼠疫患者密切接触者则难以做出诊断 ,因此很有必要研究一种快速、准确的检验方法。随着分子生物学的发展 ,PCR的技术逐渐在鼠疫诊断、监测中得到推广和应用。1　我国鼠疫自然疫源地及长期存在的机理　　纪树立…